Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Индукция материнской иммунной активации у мышей в середине беременности Стадии с вирусными Mimic Poly (I: C)

19.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53643

⸱

25 марта 2016 г.

 ,  , 
1Division of Biology and Biological Engineering, California Institute of Technology, 2Harvard Medical School

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Материнская иммунная активация (MIA) является моделью фактора риска аутизма и шизофрении в окружающей среде. Целью данной статьи является предоставление пошаговой процедуры индуцирования MIA у беременных мышей с целью повышения воспроизводимости этой модели.

Аннотация

Модель материнской иммунной активации (MIA) все больше ценится как модель для грызунов для фактора риска различных психических расстройств окружающей среды. Многочисленные исследования показали, что модель MIA способна показывать лицо, конструкт и прогностическую валидность, которые имеют отношение к аутизму и шизофрении. Для моделирования MIA исследователи часто используют вирусную имитацию полиинозиновой:полицитидиловой кислоты (поли(I:C)) для активации иммунной системы у беременных грызушек. Как правило, потомство от иммуноактивированной матери демонстрирует поведенческие аномалии и физиологические изменения, которые связаны с аутизмом и шизофренией. Тем не менее, поли(I:C) инъекции с различными дозировками и в разные моменты времени могут привести к разным результатам, нарушая развитие мозга на разных стадиях. Здесь мы подробно описываем метод индуцирования МИА путем внутрибрюшинного (в/) введения 20 мг/кг поли(I:C) в середине гестационного эмбрионального периода 12,5 дней (E12,5). Было показано, что этот метод вызывает острую воспалительную реакцию в оси мать-плацента-плод, что в конечном итоге приводит к нарушениям в мозге и поведенческим фенотипам, связанным с аутизмом и шизофренией.

Введение

Понятие материнской иммунной активации (МВД) берет свое начало из эпидемиологических исследований по ассоциации материнской инфекции с аутизмом и шизофренией 1. Из - за отсутствия обнаруживаемых реплицирующихся вирусных патогенов в плаценте или головного мозга плода после материнской вирусной инфекции 2,3, влияние инфекции на потомстве гипотетически быть вызвано активацией материнской иммунной системы , а не самих патогенных микроорганизмов ,

Для выяснения причинно-следственной связи между МВД и психическими расстройствами, инъекции химически синтезированного, вирусный мимической двухцепочечная РНК полиинозиновая: полицитидиловая кислоты (поли (I: C)) в беременных грызунов широко используется в качестве животной модели для МВД 4,5. Поли (I: С) признается Толлем-подобный рецептор 3 (TLR3) и системное введение поли (I: С) индуцирует вирусоподобные острой воспалительной реакции. Одним из механизмов, с помощью которых поли (I: С) прoduces поведенческие аномалии и невропатологий у потомства, вызывая дисбаланс про- и противовоспалительных цитокинов в оси материнской-плацентарного-фетальной 6. Несколько групп приняли модель МВД , чтобы понять этиологию психических расстройств 7, и в связи с различными интересами среди исследовательских групп, различные моменты времени иммунной активации были использованы для достижения различных возмущений на развитие мозга и поведения 7.

Лаборатория Пол Х. Паттерсон из Калифорнийского технологического института принимает стратегию инъекций поли (I: C) в беременных мышей в эмбриональные 12,5 дней (E12.5), который успешно продемонстрировал, что МВД способно вызвать поведенческие, неврологические, и иммунологические изменения у потомства, которые связаны с аутизмом и шизофренией 8-11. Наши предыдущие работы показывают , что МВД потомство отображать поведенческие отклонения (например, социальные impairmenт, дефицит общения, повторяющееся поведение, тревога типа поведения, и латентный дефицит ингибирования 8,10,12), иммунной дисрегуляции и цитокины дисбаланс 8,13,14, изменение экспрессии гена фетального мозга 15, потеря клеток Пуркинье в дольки VII мозжечка 11, изменения синаптических свойств в гиппокампе 9 генов х окружающей среды взаимодействия 13, изменение проницаемости кишечника и кишечную флору композиции 16. Кроме того, терапевтические и профилактические стратегии также разработаны с этой моделью системы 13,16,17. По индукции МВД на E12.5, другие показали , что МВД производит плода активации микроглии и холинергической изменения развития в базальных отделах переднего мозга 18, штамм специфического взаимодействия 19, мозг церебральный синаптосомальных ультраструктурным аномалии, церебральный дыхательной цепи митохондрий гиперфункции abnormalties, понижающей регуляции мозговых молекул синаптосомальных 17 ,депрессивно-как поведение, нарушения в познании и гиппокампа долговременной потенциации (LTP), а также дефицит взрослых гиппокампа нейрогенеза 20.

Здесь мы приводим детальный метод, как индуцировать MIA на E12.5 поли (I: C), а также парадигм, как применить эту модель для изучения этиологии аутизма и шизофрении. Важно отметить , что МВД является фактором риска для различных расстройств , 4 -х , и его результаты чрезвычайно чувствительны к тому времени , и метод индукции, а также земледелии беременных плотин. Таким образом, даже незначительные несоответствия между лабораториями часто приводят к низкой воспроизводимости и / или различных фенотипов в потомстве. Наш метод разработан специально для тех, кто заинтересован в изучении МВД как фактор риска для окружающей среды аутизм и шизофрения, а также подробное описание при условии, поможет исследователям улучшить воспроизводимость своих данных.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все протоколы были выполнены в соответствии с утверждением Калифорнийского технологического института Institutional животных по уходу и использованию комитета (IACUC).

1. Подготовка к Timed-брачных пар

  1. Используйте по крайней мере 6 плотин для поведенческих экспериментов и 3 для анализа экспрессии генов.
    Примечание: Используйте двойное количество оцениваемых самок мышей, так как только около 50% мышей будет подключен от тайм-спариванию.
  2. Использование самок мышей без предшествующей беременности и в 8-16-недельного возраста.
    Примечание: Самки мышей, которые имеют предварительное сексуальное воздействие самцов мышей, но не были беременны, являются приемлемыми.
  3. Дом самки мышей вместе и поместить клетки рядом друг с другом, чтобы синхронизировать их эстрального цикла. Используйте стандартный мышей клетку с высотой более 5,5 дюймов и 75 квадратный дюйм пола в помещении, чтобы корпус 5 взрослых мышей. Добавьте описание каждой самки мыши с помощью ушного удар.

2. Настройка тайм-матИНГ пара

  1. Настройка тайм-ответная 0-2 ч до начала темного цикла. Поместите два самок мышей в каждой клетке. Выньте мышей и взвесить их по отдельности. Регистрируют вес тела каждой самки мыши.
  2. Поместите один самца мыши в каждую клетку с двумя самок мышей. Используйте трио спаривание, чтобы минимизировать отеческую путая эффект.

3. Вагинальный штепсельной вилки Check (E0.5)

  1. Проверьте самок мышей 0-4 ч после окончания цикла темный. Аккуратно поднимите женскую мышь от основания хвоста и позволить мышь, чтобы захватить проволочную сетку, клетку сверху, или клетка край.
  2. Поиск на наличие признаков вагинальной пробки: вагинальный вилка видимая беловатые массы в вагинальное отверстие. Если вилка не очевидна, аккуратно вставьте 200 мкл наконечник пипетки в вагинальное отверстие. Сопротивление от коагуляции подтверждает образование вагинальный штепсельной вилки. Проверьте вагинальный пробку один раз в день.
    Примечание: Вагинальные вилка только признак того, что спаривание произошло, и, следовательно, не гuarantee беременность. Вагинальные вилка может быть трудно определить в некоторых штаммов мышей. Обратитесь за помощью к опытному мышей воспитателя повысить точность идентификации пробки.
  3. Перемещение блокированных мышей в новую клетку и группа их размещения. Определить день вагинального появления пробки как эмбриональное 0,5 дня (E0.5).

4. На E10.5-11.5, Проверить наличие беременности

  1. Осторожно поднимите основание хвоста и позволить мышь, чтобы захватить проволочную сетку, клетку сверху, или клетка край. Обратите внимание на область живота , чтобы проверить на наличие признаков беременности, например, вздутие в брюшной полости (рис 1).
    ПРИМЕЧАНИЕ: признак беременности всегда более очевидна на E11.5, чем на E10.5.
  2. Взвесьте мышей для проверки беременности. Беременной мыши в целом весит около 20% тяжелее на E10.5 и 30% тяжелее по сравнению с E12.5 небеременной мыши (рисунок 2). Одноместный дом беременных мышей в чистых клетках.

5. 20 мг /кг Поли (I: C) Приготовление

  1. Использование по меньшей мере, 6 плотин на группу для поведенческих экспериментов и 3 на группу для анализа экспрессии генов. Подготовьте соответствующее количество поли (I: C) раствором.
  2. Взвесить поли (I: С) порошка в 50 мл коническую пробирку, чтобы получить конечную концентрацию 40 мг / мл. Для того чтобы минимизировать и стандартизировать стресс, вызванный объемом впрыска, вводят по 5 мкл поли (I: С) раствор для каждого грамма веса тела мыши (5 мкл / г, или 5 мл / кг). Для того, чтобы побудить МВД, мы вводим 20 мг поли (I: C) за килограмм.
    Примечание: Концентрация поли (I: С) раствор Необходим (20 мг / кг) / (5 мл / кг) = 4 мг / мл. Поскольку поли (I: C) порошок содержит 10% поли (I: C), нам нужно сделать конечную концентрацию мл поли (4 мг / мл) /0.1= 40 мг / (I: C) раствором.
    ВНИМАНИЕ: Poly (I: C), порошок очень светло. Будьте осторожны, чтобы не потерять какой-либо порошок при передаче от шпателя к конической трубе.
  3. Добавьте соответствующий объем 0,9% раствор хлорида натрия (физиологический раствор) в коническую ваннее и закройте крышку. Растворите порошок, осторожно крученым солевой раствор капельку над поли (I: C) порошка, пока раствор не станет прозрачным. Центрифуга коническую трубку при 800 мкг в течение 1 мин (рис 3C). Фильтр поли (I: C) раствор фильтром 0,22 мкм. Перенести поли (I: C) раствора до 1,5 или 2 мл микроцентрифужных трубки. Необязательно: Используйте спектрофотометр для измерения отношения поли (I: C) 260/280 раствора. Убедитесь , что соотношение между 1.54-1.82 (рисунок 3) , как описано производителем. Примечание: физиологический раствор используется для растворения поли (I: C) порошок и служить в качестве инъекции управления должна быть стерильной и фармацевтического класса.

6. Физиологический раствор или поли (I: C) Раствор для инъекций на E12.5

  1. Взвесьте мыши на шкале и положил его обратно в клетку. Используйте следующую формулу для расчета объема впрыска как для физиологического раствора и поли (I: C) мышей: вес тела (г), умноженных на 5 = нужного объема впрыска (мкл). Используйте 0,3 мл INSULв шприц , чтобы составить расчетный объем физиологического раствора или 20 мг / кг поли (I: C) раствор, например, 150 мкл для 30 г мыши.
  2. Аккуратно поднимите мышь на основании хвоста и разместить его на верхней части клетки. Ручка мыши осторожно, чтобы избежать вмешивающихся эффектов, вызванных стрессом. Вставьте иглу, скос вверх, при температуре около 20 ° по отношению к мыши в центр своих двух верхних сосков (рис 4), и вводят физиологический раствор или поли (I: C) решение. Примечание: Игла должна быть заменена на каждой мыши после инъекции.
  3. Поместите мышь обратно в родную клетку. Поместите клетки в тихом и низкой комнате трафика, чтобы избежать других вмешивающихся эффектов.

7. На следующий день после Poly (I: C) Инъекции (E13.5)

  1. Проверьте вводили мышам на следующее утро. Используйте шкалу для измерения веса тела.
    Примечание: Poly (I: C) вводили беременным мышам, как правило, набирают меньше веса, чем физиологический раствор вводили мышам на следующий день после инъекцпрогиб.
  2. Не беспокоить мышей, пока потомство не родится.

8. Датчик МВД Offspring

  1. Для того, чтобы свести к минимуму смешанное воздействие МВД индукции, следуйте рекомендациям, перечисленные ниже, чтобы оценить использование МВД потомства.
    1. Исключить из пометов недоношенными или с задержкой рождения, или если размер помета меньше 5.
    2. Эвтаназии излишние щенкам от CO 2 , если размер мусора больше , чем 10.

9. Необязательно: Проверьте острой воспалительной реакции После МВД

  1. Жертвуют беременных мышей 3 ч после того, как физиологический раствор или поли (I: C) инъекции с использованием метода, описанного в протоколе комитета по уходу за животными утвержденных учреждения.
    Примечание: цервикальной дислокации часто является предпочтительным , поскольку это сводит к минимуму эффект CO 2 / эвтаназии наркотиков на плотине и эмбриона.
  2. Сбор селезенки от взрослых беременных мышей и изолировать плаценту и плода бюстгальтерв рамках стереомикроскопа.
    1. Для коллекции селезенке, лежал мыши на рассечение пластины и спрей 70% этанола на брюшной области беременных мышей. Используйте пару стерильными ножницами, чтобы сделать вертикальный разрез в центре области живота ниже грудной клетки и через кожу.
    2. Селезенка сидит в левой верхней абдоминальной квадранте. Используйте пинцет, чтобы изолировать селезенки. Раскатайте селезенку на деликатных стеклоочистителей задач для удаления жировой ткани вокруг органа. Собрать примерно 50 мг ткани селезенки и разместить их по отдельности в пробирки Эппендорф с 500 мкл РНК стабилизации буфера или TRIzol для предотвращения деградации нуклеиновой кислоты. Храните образцы при -80 ° C морозильнике до использования.
    3. Для плацента коллекции, аккуратно вытащить рога матки из организма. Поместите рогов матки в чашке Петри заполнены автоклавного фосфатным буферным физиологическим раствором (PBS) и оставьте блюдо на льду. Используйте два пинцета, чтобы разорвать стенки матки и подвергать амниотической мешочка.
      1. Осторожно использовать пинцет, чтобы открыть амниотической мешка без повреждения плаценты и плода. Отделить плаценту от плода и перерезать пуповину как можно ближе к плаценте, насколько это возможно. Удалите амниотической мусор из плаценты. Поместите плаценту индивидуально в пробирки Эппендорф с 500 мкл РНК стабилизируют буфера или TRIzol. Хранить пробу при -80 ° C морозильнике до использования.
    4. Для сбора мозга плода, сохранить плод в РНК не стабилизируются буфер со стадии 9.2.2 до рассечения. Дразнить от пиальных мембрану из желудочка головного мозга с использованием деликатных # 5 щипцов под стереомикроскопа. Осторожно удалите всю мембрану из мозга плода. Поместите эмбриональные мозги индивидуально в пробирки Эппендорф с 500 мкл РНК стабилизируют буфера или TRIzol. Хранить пробу при -80 ° C морозильнике до использования.
  3. Извлечение РНК из ткани и преобразовать РНК в кДНК. Анализ экспрессии гена IL - 6 в кДНК с помощью реального TIME ПЦР.
  4. Извлечение РНК из тканей, следуя изготовления протокола TRIzol. Если ткани сохраняются в буфере стабилизации РНК. Оттепель образца и спином вниз буфер. Передача ткани от кончика к другому Эппендорф с 500 мкл TRIzol и продолжить экстракции РНК.
  5. Используйте спектрофотометр для измерения концентрации, 260/280 и 260/230 отношение РНК. Убедитесь в том, что отношения выше 2,0.
  6. Устранить загрязнение ДНК путем обработанной РНК с ДНКазы I. Mix 1 мкг РНК, 1 мкл 10х реакционного буфера, 1 мкл РНКазы ДНКазы и нуклеазы без воды до конечного объема 10 мкл. Выдержите основной смеси при 37 ° С в течение 30 мин. Добавьте 1 мкл раствора ДНКазы остановки для прекращения реакции. Выдержите смесь при температуре 65 ° С в течение 10 мин.
  7. Обратный транскрибировать РНК в кДНК. Используйте 20 мкл реакции, и до 1 мкг общей РНК на реакцию. Смешайте 4 мкл 5x буфера обратного транскрипции (RT) реакционной смеси, 1 мкл числа оборотовERSE транскриптазы, 11 мкл матричной РНК после лечения с ДНКазы I и 4 мкл нуклеазы без H 2 O , чтобы принять окончательное решение 20 мкл. Программирование тепловых условий Cycler для РТ. Обобщенный условие включают: Шаг 1: 25 ° C в течение 5 мин; Шаг 2: 42 ° С в течение 30 мин; Шаг 3: 85 & deg; С в течение 5 мин; Шаг 4: держать при температуре 4 ° С. Развести кДНК в 5 раз. Для кратковременного хранения, хранить кДНК при 4 ° С. Для длительного хранения, заморозить кДНК при -20 ° С.
  8. Анализ экспрессии гена IL - 6 в кДНК с помощью ПЦР в реальном времени и нормализовать экспрессию гена IL - 6 к бета-актина экспрессии гена.
    1. Сделать мастер смеси для IL6 и бета-актина обнаружения. Используйте 25 мкл реакции, мастер смесь для каждого гена включает в себя 12,5 мкл SYBR Green Mix, 0,5 мкл 10 мкМ прямого праймера, 0,5 мкл 10 мкМ обратного праймера и 6,5 мкл нуклеазы без H 2 O.
    2. Поместите 5 мкл 5x разбавленный кДНК Aт в нижней части скважины оптического 96-луночного реактивную пластину. Пипетка 20 мкл мастер смеси в каждую лунку, чтобы сделать окончательный 25 мкл ПЦР-смеси. Triplicate каждого гена для каждого образца. Уплотнение пластины с помощью оптической клейкой пленки. Спин вниз пластины при 800 мкг в течение 3 мин при 4 ° C Использование стандартной программы в режиме реального времени ПЦР: Шаг 1: 50 ° C в течение 2 мин; Шаг 2: 95 & deg; С в течение 10 мин; Шаг 3: 40 циклов при 95 ° С в течение 15 с и температуре 60 ° С в течение 1 мин. Добавьте дополнительный шаг для кривой диссоциации.

10. Изучить поведенческим отклонениям в МВД взрослых Offspring (необязательно):

  1. Выполните тесты поведения в возрасте 8-12 недель. Изменение клетки постельные принадлежности по крайней мере за 3 дня до начала испытания. Акклиматизироваться мышей в поведенческом комнату тестирования по крайней мере за 30 минут до теста.
  2. Для предымпульсной торможения (PPI), сдерживать мышей в плексигласа цилиндр с пьезоэлектрическим датчиком под ним. Акклиматизироваться мышей ИЦПкамера в течение 5 мин. Выставляют мышей с 6 испытаний 120 дБ белого шума (испуга).
  3. Затем подвергать мышей с рандомизированные смесей 14 исследований фонового шума, 14 испытаний испуга, 14 испытаний предымпульса 5 дБ (5 дБ выше, чем фоновый шум) + испуга (PPI5) и 14 испытаний предымпульса 15 дБ (15 дБ выше чем фоновый шум + испуга (PPI15).
  4. Нормальное реакции испуга в течение первых 6 испытаний 120 испытаний дБ. Нормальное реакции испуга для других отдельных раздражений. Covert значение для предымпульсной ингибированию (испуга - PPI5 или PPI15) / испуга.
  5. Для испытания в открытом грунте, поместите курсор в углу открытой квадратной арены (50 х 50 х 50 см 3). Запись траектории мыши в течение 10 мин через потолок камерой. Определить центр арены как центральной зоны (17 х 17 см 2). Количественная расстояние, записи центра зоны, а время, проведенное в центральной зоне вручную или с помощью программного обеспечения автоматического анализа изображений на основе.
  6. Для испытания погребения мрамор, акклиматизироваться мышь к тестовой клетке с сжимаются 5см глубокой, чистой, осина сосны постельное белье в течение 10 мин. Возвращает мышь, чтобы его homecage. Аккуратно поместите 20 темно-синий 1,5 см стекло диаметр шариков в моде 4 х 5 договоренности. Поместите мышь обратно в испытуемую клетку с шариками в течение 10 мин. Граф мраморов, которые были захоронены в период тестирования 10 мин.

11. Осмотрите мозжечковой невропатологии в МВД взрослых Offspring (необязательно):

  1. Эвтаназии физиологический раствор и MIA для взрослых потомство по анестетика. Заливать мышь с 50 мл PBS и впоследствии 50 мл 4% параформальдегида через сердечно-сосудистую систему.
  2. Удалить мозг тщательно и постфиксную мозг в 4% параформальдегид в течение ночи при 4 ° С. Промыть мозг с PBS три раза и сохранить мозг в PBS с 0,02% азида натрия в 4 ° C холодильнике до использования.
    ВНИМАНИЕ: постфиксами мозг может храниться в PBS с 0,02% дернаНМУ азид в холодильнике до месяца.
  3. Раздел мозг на 50 мкм тонкими ломтиками сагиттальной использованием vibratome. Собирают срезы головного мозга с помощью мягкой щетки пера. Прекратить эндогенной активности пероксидазы инкубации срезов в 0,6% перекиси водорода в течение 30 мин при комнатной температуре.
  4. Инкубируйте разделы в анти-кальбиндин антитела, разведенного в блокирующем буфере (10% козьей сывороткой с 0,1% тритона Х-100 и 0,02% азида натрия в PBS) в течение ночи при комнатной температуре. Затем инкубировать разделы в соответствующие биотинилированные вторичные антитела, разведенного в блокирующем буфере в течение 2 ч при комнатной температуре.
  5. Инкубируйте секций в авидин DH - биотинилированной пероксидазы буфера Н сложного для обнаружения биотина в течение 1 ч при комнатной температуре. Разработка разделов с помощью пероксидазной субстрата для визуализации антигена. Вымойте участки с PBS три раза между шагами. Установите секции на предметные стекла микроскопа. Изображение секции под микроскопом.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Инъекция 20 мг / кг поли (I: С) при E12.5 может вызвать острую воспалительную реакцию у оси мать-плацента-плод и осаждаться хроническое воздействие на развитие мозга и поведенческих фенотипов 12,13. Повышенные уровни провоспалительного цитокина, интерлейкин (IL) -6, является надежным индикатором острого воспалительного ответа после МВД. Время пик для экспрессии гена IL - 6 в плаценте и фетального мозга через 3 ч после поли (I: C) инъекции 12,13.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

МИА индукция в разных временных окнах возмущает различные события развития мозга у грызунов, а следовательно, приводит к различным поведенческим отклонениям и невропатологий в потомстве. Здесь мы описали протокол для индукции MIA у мышей с поли (I: C) инъекции в E12.5. Этот метод индукции МВД приводит к поведенческим, неврологического, иммунологических и желудочно - кишечных нарушений , связанных с аутизмом и шизофренией у потомства 8,10,11,16. Важно отметить, что, поскольку МВД является фактором риска для ок...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы хотели бы почтить покойного д-ра Пола Х. Паттерсон за его вклад в прогресс модели МВД, аутизм и шизофрения исследования. Мы признаем Саркис К. Mazmanian за его большую поддержку по этому протоколу; Рубен М. Байон, Иветт Гарсия-Флорес, Карен С. Ленсиони, и Лесли А. Нейман об административной помощи; Али Khoshnan и Ян К. Ко за помощь в съемках фильма; Элейн Ю. Сяо и Наталья Малкова за их советы по MIA индукции; Джеффри С. Cochrane, Хоакин Гутьеррес, Kwan Ф. Ли, Хайме Родригес, Lorena C. Сандоваль, и Натали А. Вердуско для их экспертного животноводства. Эта работа была поддержана NIH Conte Center Award (NIH 5P50MH086383-04, Пола Х. Паттерсон); Аутизм Говорит (# 7670, Пола Х. Паттерсон); Simons Foundation (# 322839, к Саркис К. Мазманян); NIH Обучение Грант (NIH / NRSA T32GM07616 К.-HC); Калифорнийский технологический институт Летний Бакалавриат Исследования Fellowship (SURF) (в ZY); Amgen Программа Ученых в Калифорнийском технологическом институте (в ZY); и докторантуру фром Национальный научный совет, Тайвань (NSC 101-2917-I-564-039, чтобы W.-LW).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Полиинозинный– полицитидиловая кислота калийная сольSIGMAP9582
0,9% натрия хлорид INJ. USPHOSPIRANDC 0409-4888-10
MONOJECT инсулин сиринаж 3/10 мл 29 г x 1/2"COVIDIEN8881600145
50 мл коническая винтовая крышка пробиркиСША SCIENTIFIC1500-1211
Nanodrop 1000 спектрофотометрTHERMO SCIENTIFIC1000
Дополнительный стереомикроскопWild HeerbruggM5AДополнительный
щипцы Dumont #5 Размер наконечника Inox 0,10 x 0,06 ммRobozRS-5045Дополнительный
реагент для стабилизации РНКпозже Qiagen76104Дополнительный
реактив TRIzolLife Technologies15596-026 необязательный
RQ1 Безрназная ДНКазаPromegaM610AДополнительный
набор для синтеза кДНК iScriptBio-Rad170-8891Опционально
FastStart универсальный зеленый мастер-микс SYBR с ROX Roche4913922001Опционально
ПЦР в реальном времениABI7300Опциональный
праймер: Il6 forwardLife TechnologiesTAGTCCTTCCTACCCCAATTTCCОпциональный
праймер: Il6 ReverseLife TechnologiesTTGGTCCTTAGCCACTCCTTCОпционально
: бета-актин форвардLife TechnologiesAGAGGGAAATCGTGCGTGACОпционально
Грунтовка: бета-актин ReverseLife TechnologiesCAATAGTGATGACCTGGCCGTДополнительная
оптическая 96-луночная реакционная пластинаMicroAmp Life Technologies4306737
оптическая адгезивная пленка Optionl MicroAmp Life Technologies4311971аппарат Optionl
EthoVisionNoldusEthoVisionOptionl
SR-LAB (PPI)San Diego Instruments SR-LABOptionl
MarblesPENN-PLAXГолубые драгоценные камни мраморOptionl
Dulbecco's Phosphate-Buffered Salt (DPBS)Life Technologies21600-069Optionl
ПараформальдегидMACRON2621-59Optionl
VibratomeLeicaVT1000 S
Optionl Sodium azideSigmaS2002Optionl
Triton x-100SigmaX100Optionl
Раствор перекиси водородаSigma18312Optionl
Goatserum Vector LaboratoriesS-1000Optionl
Rabbit антикальбиндиновые антителаAbcamab11426Optionl
Biotinlyated goat anti-rabbit IgGantibodyVector LaboratoriesBA-1000Optionl
VECTASTAIN ABC KitVector LaboratoriesPK-4000Optionl

Ссылки

  1. Brown, A. S. Epidemiologic studies of exposure to prenatal infection and risk of schizophrenia and autism. Dev Neurobiol. 72 (10), 1272-1276 (2012).
  2. Fatemi, S. H., et al. The viral theory of schizophrenia revisited: abnormal placental gene expression and structural changes with lack of evidence for H1N1 viral presence in placentae of infected mice or brains of exposed offspring. Neuropharmacology. 62 (3), 1290-1298 (2012).
  3. Shi, L., Tu, N., Patterson, P. H. Maternal influenza infection is likely to alter fetal brain development indirectly: the virus is not detected in the fetus. Int J Dev Neurosci. 23 (2-3), 299-305 (2005).
  4. Knuesel, I., et al. Maternal immune activation and abnormal brain development across CNS disorders. Nat Rev Neurol. 10 (11), 643-660 (2014).
  5. Meyer, U. Prenatal poly(i:C) exposure and other developmental immune activation models in rodent systems. Biol Psychiatry. 75 (4), 307-315 (2014).
  6. Meyer, U., Feldon, J., Yee, B. K. A review of the fetal brain cytokine imbalance hypothesis of schizophrenia. Schizophr Bull. 35 (5), 959-972 (2009).
  7. Boksa, P. Effects of prenatal infection on brain development and behavior: a review of findings from animal models. Brain Behav Immun. 24 (6), 881-897 (2010).
  8. Hsiao, E. Y., McBride, S. W., Chow, J., Mazmanian, S. K., Patterson, P. H. Modeling an autism risk factor in mice leads to permanent immune dysregulation. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (31), 12776-12781 (2012).
  9. Ito, H. T., Smith, S. E., Hsiao, E., Patterson, P. H. Maternal immune activation alters nonspatial information processing in the hippocampus of the adult offspring. Brain Behav Immun. 24 (6), 930-941 (2010).
  10. Smith, S. E., Li, J., Garbett, K., Mirnics, K., Patterson, P. H. Maternal immune activation alters fetal brain development through interleukin-6. J Neurosci. 27 (40), 10695-10702 (2007).
  11. Shi, L., et al. Activation of the maternal immune system alters cerebellar development in the offspring. Brain Behav Immun. 23 (1), 116-123 (2009).
  12. Hsiao, E. Y., Patterson, P. H. Activation of the maternal immune system induces endocrine changes in the placenta via IL-6. Brain Behav Immun. 25 (4), 604-615 (2011).
  13. Wu, W. L., et al. The interaction between maternal immune activation and alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor in regulating behaviors in the offspring. Brain Behav Immun. , (2015).
  14. Garay, P. A., Hsiao, E. Y., Patterson, P. H., McAllister, A. K. Maternal immune activation causes age- and region-specific changes in brain cytokines in offspring throughout development. Brain Behav Immun. 31, 54-68 (2013).
  15. Garbett, K. A., Hsiao, E. Y., Kalman, S., Patterson, P. H., Mirnics, K. Effects of maternal immune activation on gene expression patterns in the fetal brain. Transl Psychiatry. 2, e98(2012).
  16. Hsiao, E. Y., et al. Microbiota modulate behavioral and physiological abnormalities associated with neurodevelopmental disorders. Cell. 155 (7), 1451-1463 (2013).
  17. Naviaux, R. K., et al. Antipurinergic therapy corrects the autism-like features in the poly(IC) mouse model. PLoS One. 8 (3), e57380(2013).
  18. Pratt, L., Ni, L., Ponzio, N. M., Jonakait, G. M. Maternal inflammation promotes fetal microglial activation and increased cholinergic expression in the fetal basal forebrain: role of interleukin-6. Pediatr Res. 74 (4), 393-401 (2013).
  19. Schwartzer, J. J., et al. Maternal immune activation and strain specific interactions in the development of autism-like behaviors in mice. Transl Psychiatry. 3, e240(2013).
  20. Khan, D., et al. Long-term effects of maternal immune activation on depression-like behavior in the mouse. Transl Psychiatry. 4, e363(2014).
  21. Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species. J Neurosci. 33 (17), 7368-7383 (2013).
  22. Abazyan, B., et al. Prenatal interaction of mutant DISC1 and immune activation produces adult psychopathology. Biol Psychiatry. 68 (12), 1172-1181 (2010).
  23. Meyer, U., et al. Adult behavioral and pharmacological dysfunctions following disruption of the fetal brain balance between pro-inflammatory and IL-10-mediated anti-inflammatory signaling. Mol Psychiatry. 13 (2), 208-221 (2008).
  24. Vuillermot, S., et al. Prenatal immune activation interacts with genetic Nurr1 deficiency in the development of attentional impairments. J Neurosci. 32 (2), 436-451 (2012).
  25. Bechard, A., Nicholson, A., Mason, G. Litter size predicts adult stereotypic behavior in female laboratory mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (4), 407-411 (2012).
  26. Harvey, L., Boksa, P. A stereological comparison of GAD67 and reelin expression in the hippocampal stratum oriens of offspring from two mouse models of maternal inflammation during pregnancy. Neuropharmacology. 62 (4), 1767-1776 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Инъекция Poly(I:C)125 эмбриональный деньвнутрибрюшинная инъекцияопределение вагинальной пробкисинхронизированное спариваниеторможение препульсомтест «открытое поле»тест на закапывание стеклянных шариковэкспрессия гена Il6
Индукция материнской иммунной активации у мышей в середине беременности Стадии с вирусными Mimic Poly (I: C)
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.