Материнская иммунная активация (MIA) является моделью фактора риска аутизма и шизофрении в окружающей среде. Целью данной статьи является предоставление пошаговой процедуры индуцирования MIA у беременных мышей с целью повышения воспроизводимости этой модели.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Индукция материнской иммунной активации у мышей в середине беременности Стадии с вирусными Mimic Poly (I: C)
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Модель материнской иммунной активации (MIA) все больше ценится как модель для грызунов для фактора риска различных психических расстройств окружающей среды. Многочисленные исследования показали, что модель MIA способна показывать лицо, конструкт и прогностическую валидность, которые имеют отношение к аутизму и шизофрении. Для моделирования MIA исследователи часто используют вирусную имитацию полиинозиновой:полицитидиловой кислоты (поли(I:C)) для активации иммунной системы у беременных грызушек. Как правило, потомство от иммуноактивированной матери демонстрирует поведенческие аномалии и физиологические изменения, которые связаны с аутизмом и шизофренией. Тем не менее, поли(I:C) инъекции с различными дозировками и в разные моменты времени могут привести к разным результатам, нарушая развитие мозга на разных стадиях. Здесь мы подробно описываем метод индуцирования МИА путем внутрибрюшинного (в/) введения 20 мг/кг поли(I:C) в середине гестационного эмбрионального периода 12,5 дней (E12,5). Было показано, что этот метод вызывает острую воспалительную реакцию в оси мать-плацента-плод, что в конечном итоге приводит к нарушениям в мозге и поведенческим фенотипам, связанным с аутизмом и шизофренией.
Введение
Понятие материнской иммунной активации (МВД) берет свое начало из эпидемиологических исследований по ассоциации материнской инфекции с аутизмом и шизофренией 1. Из - за отсутствия обнаруживаемых реплицирующихся вирусных патогенов в плаценте или головного мозга плода после материнской вирусной инфекции 2,3, влияние инфекции на потомстве гипотетически быть вызвано активацией материнской иммунной системы , а не самих патогенных микроорганизмов ,
Для выяснения причинно-следственной связи между МВД и психическими расстройствами, инъекции химически синтезированного, вирусный мимической двухцепочечная РНК полиинозиновая: по....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все протоколы были выполнены в соответствии с утверждением Калифорнийского технологического института Institutional животных по уходу и использованию комитета (IACUC).
1. Подготовка к Timed-брачных пар
- Используйте по крайней мере 6 плотин для поведенческих экспериментов и 3 для анализа экспрессии генов.
Примечание: Используйте двойное количество оцениваемых самок мышей, так как только около 50% мышей будет подключен от тайм-спариванию. - Использование самок мышей без предшествующей беременности и в 8-16-недельного возраста.
Примечание: Самки мышей, которые имеют предварительное сексуальное воздействие самц....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Инъекция 20 мг / кг поли (I: С) при E12.5 может вызвать острую воспалительную реакцию у оси мать-плацента-плод и осаждаться хроническое воздействие на развитие мозга и поведенческих фенотипов 12,13. Повышенные уровни провоспалительного цитокина, интерлейкин (IL) -6, является надежным индикатором острого воспалительного ответа после МВД. Время пик для экспрессии гена IL - 6 в плаценте и фетального мозга через 3 ч после поли (I: C) инъекции 12,13.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
МИА индукция в разных временных окнах возмущает различные события развития мозга у грызунов, а следовательно, приводит к различным поведенческим отклонениям и невропатологий в потомстве. Здесь мы описали протокол для индукции MIA у мышей с поли (I: C) инъекции в E12.5. Этот метод индукции МВД приводит к поведенческим, неврологического, иммунологических и желудочно - кишечных нарушений , связанных с аутизмом и шизофренией у потомства 8,10,11,16. Важно отметить, что, поскольку МВД является фактором риска для ок.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Мы хотели бы почтить покойного д-ра Пола Х. Паттерсон за его вклад в прогресс модели МВД, аутизм и шизофрения исследования. Мы признаем Саркис К. Mazmanian за его большую поддержку по этому протоколу; Рубен М. Байон, Иветт Гарсия-Флорес, Карен С. Ленсиони, и Лесли А. Нейман об административной помощи; Али Khoshnan и Ян К. Ко за помощь в съемках фильма; Элейн Ю. Сяо и Наталья Малкова за их советы по MIA индукции; Джеффри С. Cochrane, Хоакин Гутьеррес, Kwan Ф. Ли, Хайме Родригес, Lorena C. Сандоваль, и Натали А. Вердуско для их экспертного животноводства. Эта работа была поддержана NIH Conte Center Award (NIH 5P50MH086383-04, Пола Х. Паттерсон); Аутизм Говорит (# 7670, Пола Х. Паттерсон); ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Полиинозинный– полицитидиловая кислота калийная соль | SIGMA | P9582 | |
| 0,9% натрия хлорид INJ. USP | HOSPIRA | NDC 0409-4888-10 | |
| MONOJECT инсулин сиринаж 3/10 мл 29 г x 1/2" | COVIDIEN | 8881600145 | |
| 50 мл коническая винтовая крышка пробирки | США SCIENTIFIC | 1500-1211 | |
| Nanodrop 1000 спектрофотометр | THERMO SCIENTIFIC | 1000 | |
| Дополнительный стереомикроскоп | Wild Heerbrugg | M5A | Дополнительный |
| щипцы Dumont #5 Размер наконечника Inox 0,10 x 0,06 мм | Roboz | RS-5045 | Дополнительный |
| реагент для стабилизации РНК | позже Qiagen | 76104 | Дополнительный |
| реактив TRIzol | Life Technologies | 15596-026 | необязательный |
| RQ1 Безрназная ДНКаза | Promega | M610A | Дополнительный |
| набор для синтеза кДНК iScript | Bio-Rad | 170-8891 | Опционально |
| FastStart универсальный зеленый мастер-микс SYBR с ROX | Roche | 4913922001 | Опционально |
| ПЦР в реальном времени | ABI | 7300 | Опциональный |
| праймер: Il6 forward | Life Technologies | TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC | Опциональный |
| праймер: Il6 Reverse | Life Technologies | TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC | Опционально |
| : бета-актин форвард | Life Technologies | AGAGGGAAATCGTGCGTGAC | Опционально |
| Грунтовка: бета-актин Reverse | Life Technologies | CAATAGTGATGACCTGGCCGT | Дополнительная |
| оптическая 96-луночная реакционная пластина | MicroAmp Life Technologies | 4306737 | |
| оптическая адгезивная пленка Optionl MicroAmp | Life Technologies | 4311971 | аппарат Optionl |
| EthoVision | Noldus | EthoVision | Optionl |
| SR-LAB (PPI) | San Diego Instruments | SR-LAB | Optionl |
| Marbles | PENN-PLAX | Голубые драгоценные камни мрамор | Optionl |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Salt (DPBS) | Life Technologies | 21600-069 | Optionl |
| Параформальдегид | MACRON | 2621-59 | Optionl |
| Vibratome | Leica | VT1000 S | |
| Optionl Sodium azide | Sigma | S2002 | Optionl |
| Triton x-100 | Sigma | X100 | Optionl |
| Раствор перекиси водорода | Sigma | 18312 | Optionl |
| Goat | serum Vector Laboratories | S-1000 | Optionl |
| Rabbit антикальбиндиновые антитела | Abcam | ab11426 | Optionl |
| Biotinlyated goat anti-rabbit IgGantibody | Vector Laboratories | BA-1000 | Optionl |
| VECTASTAIN ABC Kit | Vector Laboratories | PK-4000 | Optionl |
Ссылки
- Brown, A. S. Epidemiologic studies of exposure to prenatal infection and risk of schizophrenia and autism. Dev Neurobiol. 72 (10), 1272-1276 (2012).
- Fatemi, S. H., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
