Экс Vivo Живая съемка Метастазы в легких и их микроокружения

Renske J.E. van den Bijgaart; Niwen Kong; Carrie Maynard; Vicki Plaks

doi:10.3791/53741

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Экс Vivo Живая съемка Метастазы в легких и их микроокружения

12.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53741

⸱

3 февраля 2016 г.

Renske J.E. van den Bijgaart^*¹ , Niwen Kong^*¹ , Carrie Maynard¹^,² , Vicki Plaks¹^,³

¹Department of Anatomy, University of California, ²Hubrecht Institute-Royal Dutch Academy of Science and University Medical Center Utrecht, ³Department of Cell and Developmental Biology, Sackler Faculty of Medicine

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Опишем относительно простой метод экс виво живых изображений опухолевых клеток стромы взаимодействий внутри метастазов в легких, используя флуоресцентные репортеров у мышей. Используя спиннинг-диска конфокальной микроскопии, эта методика позволяет визуализировать живых клеток в течение по крайней мере 4 ч и могут быть адаптированы для изучения других воспалительных состояний легких.

Аннотация

Метастазы являются основной причиной для рака, связанных с заболеваемостью и смертностью. Метастазы многоэтапный процесс, и из-за его сложности, точные клеточные и молекулярные процессы, которые регулируют метастатического распространения и роста по-прежнему не удается. Живая изображений позволяет визуализировать динамические и пространственные взаимодействия клеток и их микроокружения. Солидные опухоли обычно метастазируют в легкие. Тем не менее, анатомического расположения легких бросает вызов прижизненной визуализации. Этот протокол обеспечивает относительно простой и быстрый способ экс естественных живых изображений динамических взаимодействий между опухолевыми клетками и окружающей их стромы в метастазов в легких. С помощью этого метода, подвижность раковых клеток, а также взаимодействия между раковыми клетками и клетками стромы в их микросреде могут быть визуализированы в реальном времени в течение нескольких часов. При использовании трансгенных флуоресцентных мышей репортер, флуоресцентный клеточная линия, инъекционный флуоресцентную меткуМолекулы и / или антитела, множественные компоненты микросреды легких могут быть визуализированы, например, кровеносных сосудов и иммунных клеток. Чтобы создать образ различных типов клеток, был использован вращающийся диск конфокальной микроскопии, который позволяет долгосрочное непрерывное изображений с быстрым, четыре цвета захвата изображений. С интервальной фильмы собраны из изображений, собранных в течение нескольких позициях и фокальных плоскостях показать взаимодействие между живой метастатическим и иммунных клеток в течение по крайней мере 4 часа. Эта методика может быть дополнительно использован для тестирования химиотерапию или целевой терапии. Кроме того, этот метод может быть адаптирован для изучения других патологий легких, связанных которые могут повлиять на микросреду легких.

Введение

Самым смертоносным аспектом рака является метастазирование, на долю которого приходится более 90% заболеваемости и смертности, связанных с раком¹. Метастазирование является многоступенчатым процессом, и из-за его сложности точные клеточные и молекулярные механизмы, которые управляют распространением и ростом метастазов, до сих пор неизвестны. Чтобы метастазировать, опухолевые клетки в первичной опухоли должны отделиться от соседних клеток и базальной мембраны, пройти через внеклеточный матрикс, интравазатировать, пройти через кровеносные или лимфатические сосуды, экстравазатировать во вторичном месте и, наконец, выжить и образовать вторичные опухоли. В допо....