Методическая статья

Метод к цели и изолят Airway-иннервирующих сенсорные нейроны у мышей

13K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53917

⸱

19 апреля 2016 г.

 , 
1Department of Cellular & Molecular Physiology, Yale University, 2Department of Anesthesiology, Duke University Medical Center

В этой статье

Краткое содержание

Органоспецифичные сенсорные нейроны трудно идентифицировать. Быстрая синяя трассировка используется для идентификации нодозных нейронов, иннервирующих дыхательные пути для сортировки клеток. Отсортированные нодозные нейроны используются для выделения высококачественной рибонуклеиновой кислоты (РНК) для секвенирования. С помощью этого протокола определяется экспрессия генов специфических нейронов дыхательных путей.

Аннотация

Соматосенсорные нервы трансдукции тепловые, механические, химические и вредные стимулы, вызванные как эндогенных, так и факторов окружающей среды. Клеточные тела этих афферентных нейронов расположены в пределах сенсорных ганглиев. Сенсорных ганглиев иннервируют конкретный орган или часть тела. Например, ганглии задних корешков (DRG) расположены в позвоночнике и расширить процессы по всему телу и конечностям. Тройничного ганглиев расположены в черепе и иннервируют лицо и верхние дыхательные пути. Вагусными афференты в Узловые ганглиев распространяются на протяжении кишечника, сердца и легких. В Узловые нейроны контролируют широкий спектр функций, таких как: частота дыхания, раздражение дыхательных путей и кашель рефлексов. Таким образом, чтобы понять и манипулировать их функции, крайне важно, чтобы идентифицировать и изолировать в дыхательных путях конкретных нейронные субпопуляции. У мышей, дыхательные пути подвергаются флуоресцентного индикаторного красителя, Fast Blue, для ретроградного отслеживании в дыхательных путях специфических нодозного нейронеs. В Узловые ганглиев разобщены и флуоресценции активированных клеток (FAC) сортировка используется для сбора красителей положительных клеток. Далее, высокое качество рибонуклеиновой кислоты (РНК) извлекается из красителя положительных клеток к следующей последовательности поколения. С помощью этого метода дыхательные пути определяется специфическая экспрессия гена нейронный.

Введение

Соматосенсорные нервы трансдукции тепловые, механические, химические и вредные стимулы, вызванные как эндогенных, так и факторов окружающей среды. Клеточные тела этих афферентных нервов расположены в сенсорных ганглиев, таких как спинной корень, невралгии тройничного или нодозного ганглиев. Каждая сенсорная ганглий иннервирует конкретных областей тела и содержит клетки, которые возбуждают отдельные органы и ткани в этом регионе. Например, ганглии задних корешков (DRG) расположены в позвоночнике и расширить процессы по всему телу и конечностям, в то время как тройничный ганглии расположены в черепе, содержащий нейроны, иннервирующие лицо, глаза, мозговые оболочки или верхние дыхательные пути 1, 2. Узловатый ганглии блуждающего нерва находится в области шеи ниже черепа и содержит тела клеток , которые проходят нервные волокна в течение всего желудочно - кишечного тракта, сердца, и нижние дыхательные пути и легкие 3. У человека узловатый ганглий стоит особняком, однако, у мышей он слитс яремной ганглия, который также иннервирует легкие 4. Этот слитый ганглий часто называют яремной / узловатый комплекс, блуждающего ганглий, или просто узловатый ганглий 5. Здесь он упоминается как нодозного ганглия.

Афферентные волокна узловатый передают информацию от внутренностей к ядру одиночного пути (NTS) в стволе головного мозга. Сенсорное вход в этот уникальный ганглии управляет множеством разнообразных функций, таких как кишок 6, частота сердечных сокращений, дыхания 7 8,9, и раздражающих активированные респираторных реакций 10,11. С этим разнообразием функций и иннервируемых органов, крайне важно, чтобы цели и выделить специфические для органа субпопуляций нодозного ганглии с целью изучения отдельных нейронных путей. Однако, учитывая небольшой размер узловатый и ограниченное число нейронов она содержит это не является тривиальной задачей. Каждая мышь узловатый ганглий содержит примерно 5000 нейронов 12в дополнение к обширной популяции поддержки сателлитных клеток. Из 5000 узловатый нейронов, только 3 - 5% иннервируют дыхательные пути. Таким образом, любые функциональные, морфологические или молекулярные изменения в пределах воздушной трассы-иннервирующих нейронов, из-за стимуляции дыхания или патологий, будут потеряны в плотно упакованной нодозного ганглии.

Чтобы решить эту проблему, был разработан метод, чтобы идентифицировать и изолировать нейроны, которые иннервируют дыхательные пути. Дыхательные подвергались воздействию флуоресцентного индикаторного красителя, чтобы идентифицировать последующие нейроны иннервирующих узловатый. Быстрый Синий подхватили нейронов и быстро перемещается к их клеточных тел , где она сохраняется до восьми недель 13 - 15. После идентификации, мягкий, но эффективный, протокол диссоциации был использован для сохранения маркировки красителя и жизнеспособность клеток для люминесцентной активированной клетки (FAC) сортировочный. Отсортированные клетки используются для извлечения высокого качества рибонуклеиновой кислоты (РНК) для определения экспрессии гена или Fили другой вниз по течению молекулярного анализа. Этот протокол обеспечивает полезный и надежный метод для изоляции сенсорных нейронов, иннервирующих ткани интереса.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Процедуры с участием субъектов животных были одобрены Animal Care и использование комитета Institutional (IACUC) из Университета Дьюка с.

1. Интраназальная Администрация Fast синий

Для быстрого Blue, администрировать краситель по крайней мере за 2 дня до эвтаназии мыши. Краска будет сохраняться до восьми недель.

  1. не Обезболить мышь с легкой ингаляционной анестезии (2,5%) до севофлураном дыхания начинает замедляться.
  2. С помощью 200 мкл пипетки с отфильтрованным кончиков медленно привить 40 мкл раствора красителя (0,4 мМ Быстрый синий, 1% диметилсульфоксид, ДМСО, в фосфатном буферном растворе, PBS), в ноздрю, делая паузу время от времени, чтобы обеспечить мышь аспирационных решение (Рисунок 1А).
  3. Держите мышь вертикально, головой вверх, и нежно массировать грудь, чтобы обеспечить краситель распространяется по всей легких.

2. Подготовка к Dissection и день анализа

  1. Приготовьте 10 мл0; Ганглиев диссоциация Solution (Gads) путем комбинирования ингредиентов , как указано в таблице 1.
  2. Выполнение экстракции РНК в выделенной зоне лаборатории. Перед началом эксперимента, чистые поверхности с 70% этанола, 10% хлорной извести и реагента обеззараживания РНКазы. Это включает в себя РНК-центрифугу, любые стойки трубки и пипетки. Убедитесь, что существуют специализированные фильтрующим мундштуком коробки для использования только РНК. Не следует использовать данное оборудование и площадь для подготовки ДНК, так как это будет загрязнять образцы.
  3. Смешайте свежий 70% и 80% этанола с РНКазы без воды. Подготовка 1 мл на образец для использования в экстракции РНК.
Ингредиент Количество
Advanced DMEM / f12 9,5 мл
глутамин 100 мкл
HEPES (10 мМ) 100 мкл
N2 добавка 100 мкл
В27 (без витамина А) 200 мкл
ФРН (50 мкг / мл) 10 мкл

Таблица 1. Реагент Смесь для ганглиев раствора (диссоциации Gads).

3. Процедура Вскрытие

  1. Наполните 1,5 мл пробирки с 500 мкл Gads, по одному для каждого экспериментального образца, один для положительного контроля сортировочного, и один для отрицательного контроля сортировочного. Хранить трубы на льду в течение рассечение.
  2. Рассеките из узловатый ганглий и сделать два частичных сокращений для облегчения диссоциации, а затем положить его в экспериментальном образце трубки. Пожалуйста , обратитесь к следующему протоколу Jove для рассечения нодозного ганглиев 16 и DRG 17.
  3. Dissect и частичным разрезом немеченого ганглии, например, спинальных ганглиях (DRG), для сортировочных элементов управления. Используйте два ганглии для положительного контроля и двух gangliА для отрицательного контроля.
  4. Для того, чтобы получить достаточное количество нейронов узловатый для успешной сортировки, объединить ганглиев из 5 мышей в один экспериментальный образец пробирки, содержащей Gads.

4. Сенсорная Ганглиев диссоциация

  1. Пипетировать из 500 мкл шляется, оставляя ганглиев в трубке. Вымойте ганглии один раз путем добавления 1 мл PBS, ждать ганглии оседают на дно пробирки, затем пипеткой из PBS.
  2. Добавляют 1 мл Gads и 22 мкл переваривания фермента (коллагеназы I / II и смеси протеазы, 2,5 мг / мл в H 2 O) в каждую пробирку.
  3. Добавьте 20 мкл Быстрый синий (5,26 мМ) к положительному выводу контрольной трубки.
  4. Поместите пробирки в блоке водяной бане или нагрева уже при 37 ° C.
    Примечание: Время ганглиев пищеварения зависит от возраста пищеварения фермента. В течение 1 месяца растворения переваривания фермента, переваривают в течение 30 мин, в течение 2 - 6 месяцев переваривать в течение 45 мин. Если фермент составляет более 6 месяцев, дайджест ганглиев пили 60 мин.
  5. Каждые 15 мин сотрясения трубки кратко и вылить их, чтобы обеспечить ганглии покрываются раствором.
  6. В то время как ганглии переваривается, готовят градиенты плотности с использованием раствора частиц (коллоидные частицы диоксида кремния, покрытые поливинилпирролидона).
    1. Смешайте 12% -ный раствор частиц в Gads, 500 мкл на образце.
    2. Смешайте 28% раствор частиц в Gads, 500 мкл на образце.
    3. Медленно и осторожно добавляют 400 мкл 12% -ного раствора плотность на вершине 400 мкл 28% раствора плотностью в свежую 1,5 мл пробирку для каждого образца. Не позволяйте два слоя перемешать. Два различных слоев должны быть видны в трубе; один темнее, чем другие.
  7. В то время как ганглии переваривается, маркировать новые пробирки 1,5 мл сбора для сортировки (один быстрый синий положительный и один быстрый Синий отрицательную туба на сортировочной образца). В зависимости от требований к сортировочных объекте, эти трубки должны иметь съемные крышки таким образом, чтобы не INTERFERе с клеточным сортировщика.
  8. После того, как соответствующее время пищеварения, удалить шляется с пищеварением ферментом и мыть ганглиев дважды 1 мл PBS. Добавить 200 мкл свежей Gads в каждую пробирку.
  9. Используйте 200 мкл пипетки, установите объемом 100 мкл и пипетки ганглии вверх и вниз несколько раз, чтобы разрушить клетки друг от друга. Повторяйте, пока не нетронутым кусочек ткани не видно. Избегайте образования пузырьков в растворе.
  10. Проход диссоциированных клеток через клеточный фильтр 70 мкм.
  11. Добавьте еще 100 мкл Gads к исходной диссоциации трубки, чтобы забрать оставшиеся паразитных клетки слева и пройти дополнительное решение через ячейки фильтра. Используя новый наконечник пипетки, собрать все оставшиеся ячейки, содержащие жидкость, прошедшую через сито и цеплялся к сетке. Конечный объем клеток, суспендированных в Gads составляет 300 мкл.
  12. Тщательно наслаивать 300 мкл клеток в верхней части предварительно приготовленным градиента плотности. Избегайте пузырьков и смешивания Cгезов со слоями плотности.
  13. Центрифуга в течение 10 мин при 2,900 мкг при комнатной температуре.
  14. В то время как клетки находятся в центрифуге, смешать лизирующий буфер (1 мл на экспериментальном образце) следующим образом: 10 мкл 2-меркаптоэтанола в 1 мл Буфера RLT (с использованием набора для экстракции РНК).
    1. Добавьте 300 мкл буфера для лизиса к быстрому Синей положительной пробирку для сбора и 600 мкл к быстрому Синей отрицательной коллекторной трубки (трубки, меченные со стадии 4.7). Этот объем зависит от количества клеток, как ожидается, будут собраны. Для <2000 клеток, добавляют 300 мкл для> 7000 клеток добавляют 600 мкл. Это обеспечит сортировочный жидкость оболочки не приводит к существенному разбавить буфера для лизиса.
  15. После центрифугирования завершена, тщательно удалить и выбросить мкл слой сверху 700. Этот слой содержит большинство остатков клеток, которые в противном случае мешать сортировки клеток.
  16. Добавьте 700 мкл свежей Gads к оставшейся клетки, содержащей раствор и пипеткойт.е вверх и вниз несколько раз перемешать.
  17. Центрифуга в течение 15 мин при 2,900 мкг для осаждения клеток.
  18. В то время как клетки находятся в центрифуге, смешать сортировку Gads (500 мкл на пробу) путем добавления 5 мкл ДНКазы (10 мг / мл) до Gads 1 мл.
  19. После центрифугирования будет сделано, тщательно удалить и уничтожить супернатант, оставляя осадок клеток.
  20. Повторное приостановить осадок клеток в 200 - 300 мкл сортировки шляется с помощью пипетки вверх и вниз с 1000 мкл пипетки равным 200 мкл в несколько раз. Поместите образцы на льду. Клетки теперь готовы быть отсортированы.

5. клеток с возбуждением флуоресценции (FAC) Сортировка

Примечание: Этот раздел требует оперативного знания сортировщика FACS или помощь квалифицированного персонала.

  1. Добавить 1 мкл иодида пропиди (PI) маточного раствора (50 мкг / мл) для каждого образца, чтобы проверить на жизнеспособность клеток. Разделить отрицательный контроль в 2-х трубок, одна с ПИ и без. PI связывается с ДНК только в мертвых клеток. Еслипосле первых родов нет мертвых клеток для мечения, использование PI не требуется.
  2. Транспортные клетки проточной цитометрии инструмента, например., BD FACS AriaII работает программное обеспечение Diva 8, на льду.
  3. Так как размер ячейки является переменной в этой популяции, используют большое сопло (100 мкм) для сортировки. Для того, чтобы уменьшить количество стресса опыта клеток и повышают жизнеспособность клеток используют низкое давление (20 фунтов на квадратный дюйм).
  4. С помощью программного обеспечения сортировщика FACS для настройки графиков анализа, рассеяния вперед, боковое рассеивание (SSC), Fast синий и PI, если это необходимо.
  5. Для того, чтобы повторно приостанавливать клетки, мягко вихрь образца на короткое время перед загрузкой в ​​сортировщика.
  6. Начните с отрицательного контроля, нет Быстрый синий или PI, чтобы установить порог затвора (рис 2A). Это позволит определить количество автофлюоресценции в клеточной популяции. Необязательно: Запустите отрицательный образец с PI, чтобы определить, есть ли популяция мертвых клеток.
  7. Сортировать положительный контрольный образец (в т.ч.ubated с Fast синим), чтобы установить параметры компенсации.
  8. После того, как ворота и параметры установлены, начинают сортировка экспериментальных образцов. Образцы сортируются в подготовленные пробирки для сбора содержащих РНК буфер для лизиса.
  9. Хранить отсортированные образцы на льду до тех пор, сортировки клеток не будет завершена.
  10. Начало стадии экстракции РНК сразу после того, как клетки отсортированный.

6. Экстракция РНК

  1. Вихревые отсортированные клетки в буфере для лизиса в течение 1 мин для гомогенизации.
  2. Добавить 1 объем 70% этанола и смесь с помощью пипетки вверх и вниз несколько раз.
  3. Трансфер до 700 мкл образца в ротационную колонку. Центрифуга в течение 15 сек при 8000 х г. Выбросьте проточные.
    1. Повторить, пока общий объем образца не пропускают через ротационную колонку.
  4. Добавьте 350 мкл буфера RW1 и продолжить процесс очистки РНК, в том числе и на стадии обработки ДНКазой, в соответствии с Protoco производителял для клеток.
  5. После того, как РНК были извлечены, проверки качества РНК с использованием микрожидкостных системы электрофореза в соответствии с техническими требованиями изготовителя.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Используя этот метод, дыхательные пути-иннервирующих нейроны помечены интраназально прививая Fast Blue (Рис . 1А) После двух дней, быстрая Синий меченые клетки появляются в нодозного ганглиев (рис 1C). Эти клетки составляют 3 - 5% от общего нейрональной популяции нодозного ганглиев. Другие ретроградных красители, которые были использованы для этой цели, включают в DII (1,1'-диоктадецил-3,3,3 ', 3'-tetramethylindocarbocyanine ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Этот протокол описывает метод целевому дыхательные пути-иннервирующих нейроны в нодозного ганглии блуждающего нерва. После того, как меченый, ганглиях мягко диссоциированных оптимально сохранить количество клеток и жизнеспособность. Эти нейроны затем КВС сортируются непосредственно в буфере для лизиса и РНК экстрагируют. Значение этого протокола является способность к цели, изолировать и сохранить качество конкретной сенсорной популяции клеток. Экспрессия генов описано в этой небольшой популяции нейронов, и органные спе...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Благодарности

При поддержке NIH грант R01HL105635 к SEJ. Авторы хотели бы поблагодарить Диего В. Бохоркез за технической консультацией. Мы также благодарим Р. Ян Камминг за техническую помощь и выполнение проточной цитометрии на Duke человеческих вакцин Научно-исследовательский институт проточной цитометрии совместно используемых ресурсов фонда (Durham, NC). Проточной цитометрии проводили в биоизоляции лаборатории регионального Дюка, который получил частичную поддержку строительства от Национальных институтов здравоохранения, Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний (UC6-AI058607).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Фаст БлюПолинаука, Инк.17740-2бульон 2 мг/мл в воде
NeuroTrace 530/615 красный краситель NissleLife TechnologiesN21482
Диметилсульфоксид (ДМСО)Fisher ScientificD128-500
Фосфат Дульбекко буферизованный физиологический буфер (PBS) Ca и Mg свободныйGibco14190-144
Advanced DMEM/F12Gibco12634-010
глутамин ( Глутамакс)Gibco35050-061
HEPESGibco15630-080
N2Gibco17502-048
B27 (без витамина А)Gibco12587-010
Фактор роста нервов (NGF)SigmaN6009stock 50 µ г/мл в ферменте PBS/10% FBS
пищеварения, Liberase DH Research GradeRoche5401054001запас 2,5 мг/мл в
растворе водных частиц (Percoll)SigmaP1644-25ML
Нагревательный блокLabNet
70 &m; m клеточное сетчатое фильтрFalcon352350
Абсолютный этанол (200 proof)Fisher ScientificBP2818-500
РНКазный реагент
обеззараживания РНКазы, РНКаза AWAYinvitrogen10328-011
2-меркаптоэтанолVWREM-6010
набор для экстракции РНК, RNeasy Plus Micro KitQiagen74034
DNase Kit, RNase-Free DNase SetQiagen79254
DNaseSigmaD5025-15KUstock 10 мг/мл в 0,15 M NaCl
Propidium IodideSigmaP4170-10MGstock 10 µ г/мл в
системе микрофлюидного электрофореза PBS (TapeStation 2200)Agilent
для для

Ссылки

  1. Manteniotis, S., et al. Comprehensive RNA-Seq Expression Analysis of Sensory Ganglia with a Focus on Ion Channels and GPCRs in Trigeminal Ganglia. PLoS One. 8 (11), 1-30 (2013).
  2. Vandewauw, I., Owsianik, G., Voets, T. Systematic and quantitative mRNA expression analysis of TRP channel genes at the single trigeminal and dorsal root ganglion level in mouse. BMC Neurosci. 14 (1), 21(2013).
  3. Paintal, A. S. Vagal sensory receptors and their reflex effects. Physiol Rev. 53 (1), 159-227 (1973).
  4. Springall, D. R., Cadieux, A., Oliveira, H., Su, H., Royston, D., Polak, J. M. Retrograde tracing shows that CGRP-immunoreactive nerves of rat trachea and lung originate from vagal and dorsal root ganglia. J Auton Nerv Syst. 20 (2), 155-166 (1987).
  5. Ricco, M. M., Kummer, W., Biglari, B., Myers, A. C., Undem, B. J. Interganglionic segregation of distinct vagal afferent fibre phenotypes in guinea-pig airways. J Physiol. 496 (Pt 2), 521-530 (1996).
  6. Zhao, H., Sprunger, L. K., Simasko, S. M. Expression of transient receptor potential channels and two-pore potassium channels in subtypes of vagal afferent neurons in rat. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 298 (2), 212-221 (2010).
  7. Zhuo, H., Ichikawa, H., Helke, C. J. Neurochemistry of the nodose ganglion. Prog Neurobiol. 52 (2), 79-107 (1997).
  8. Chang, R. B., Strochlic, D. E., Williams, E. K., Umans, B. D., Liberles, S. D. Vagal Sensory Neuron Subtypes that Differentially Control Breathing. Cell. 161, 1-12 (2015).
  9. Kaczyńska, K., Szereda-Przestaszewska, M. Nodose ganglia-modulatory effects on respiration. Physiol Res. 62, 227-235 (2013).
  10. Taylor-Clark, T. E., Undem, B. J. Sensing pulmonary oxidative stress by lung vagal afferents. Respir Physiol Neurobiol. 178 (3), 406-413 (2011).
  11. Bautista, D. M., et al. TRPA1 mediates the inflammatory actions of environmental irritants and proalgesic agents. Cell. 124 (6), 1269-1282 (2006).
  12. Ichikawa, H., De Repentigny, Y., Kothary, R., Sugimoto, T. The survival of vagal and glossopharyngeal sensory neurons is dependent upon dystonin. Neuroscience. 137 (2), 531-536 (2006).
  13. Hondoh, A., et al. Distinct expression of cold receptors (TRPM8 and TRPA1) in the rat nodose-petrosal ganglion complex. Brain Res. 1319, 60-69 (2010).
  14. Kummer, W., Fischer, A., Kurkowski, R., Heym, C. The sensory and sympathetic innervation of guinea-pig lung and trachea as studied by retrograde neuronal tracing and double-labelling immunohistochemistry. Neuroscience. 49 (3), 715-737 (1992).
  15. Choi, D., Li, D., Raisman, G. Fluorescent retrograde neuronal tracers that label the rat facial nucleus: A comparison of Fast Blue, Fluoro-ruby, Fluoro-emerald, Fluoro-Gold and DiI. J Neurosci Methods. 117 (2), 167-172 (2002).
  16. Calik, M. W., Radulovacki, M., Carley, D. W. A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat. J Vis Exp. (93), e1-e5 (2014).
  17. Ramachandra, R., McGrew, S., Elmslie, K. Identification of specific sensory neuron populations for study of expressed ion channels. J Vis Exp. (82), e50782(2013).
  18. Yu, X., Hu, Y., Ru, F., Kollarik, M., Undem, B. J., Yu, S. TRPM8 function and expression in vagal sensory neurons and afferent nerves innervating guinea pig esophagus. Am J Physiol - Gastrointest Liver Physiol. 308 (6), 489-496 (2015).
  19. Kwong, K., Lee, L. -Y. PGE(2) sensitizes cultured pulmonary vagal sensory neurons to chemical and electrical stimuli. J Appl Physiol. 93 (4), 1419-1428 (2002).
  20. Joachim, R. A., et al. Stress induces substance P in vagal sensory neurons innervating the mouse airways. Clin Exp Allergy. 36 (8), 1001-1010 (2006).
  21. Kaan, T. K. Y., et al. Systemic blockade of P2X3 and P2X2/3 receptors attenuates bone cancer pain behaviour in rats. Brain. 133 (9), 2549-2564 (2010).
  22. Nakatani, T., Minaki, Y., Kumai, M., Ono, Y. Helt determines GABAergic over glutamatergic neuronal fate by repressing Ngn genes in the developing mesencephalon. Development. 134 (15), 2783-2793 (2007).
  23. Lobo, M. K., Karsten, S. L., Gray, M., Geschwind, D. H., Yang, X. W. FACS-array profiling of striatal projection neuron subtypes in juvenile and adult mouse brains. Nat Neurosci. 9 (3), 443-452 (2006).
  24. Usoskin, D., et al. Unbiased classification of sensory neuron types by large-scale single-cell RNA sequencing. Nat Neurosci. 18, 145-153 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Fast Blue

Похожие статьи