<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Культура и Pattern Recognition Рецептор Стимуляция мыши Кишечные органоидами

Daniel E. Rothschild; Tara Srinivasan; Linette A. Aponte-Santiago; Xiling Shen; Irving C. Allen

doi:10.3791/54033

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

13.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54033

⸱

18 мая 2016 г.

Daniel E. Rothschild¹ , Tara Srinivasan² , Linette A. Aponte-Santiago¹ , Xiling Shen²^,³^,⁴ , Irving C. Allen¹

¹Department of Biomedical Sciences and Pathobiology, Virginia Maryland College of Veterinary Medicine, Virginia Tech, ²Department of Biomedical Engineering, Cornell University, ³School of Electrical and Computer Engineering, Cornell University, ⁴Department of Biomedical Engineering, Duke University

В этой статье

Краткое содержание

Здесь, протокол для сбора, сохранения и лечения тонкого кишечника мыши органоиды патогена связаны молекулярных моделей (PAMPs) и листерий описывается, а также акцент на экспрессию генов и надлежащих методов нормализации для белка.

Аннотация

Первичные кишечные органоиды являются ценным модель системы, которая имеет потенциал, чтобы существенно повлиять на поле через слизистую оболочку иммунология. Тем не менее, сложность в Органоид характеристики роста несут значительные предостережений для исследователя. В частности, закономерности роста каждого отдельного Органоид весьма разнообразны и создают гетерогенную популяцию эпителиальных клеток в культуре. С помощью таких предостережений, общие ткани практики культуры не могут быть просто применены к Органоид системе из-за сложности клеточной структуры. Подсчет и металлизированный исключительно на основе числа клеток, который является общим для индивидуально разделенных клеток, таких как клеточные линии, не является надежным методом органоидов, если не применяется какой-то метод нормализации. Нормализация к общему содержанию белка выполнен комплекс благодаря матрице резидентного белка. Эти характеристики с точки зрения количества клеток, формы и типа клеток следует принимать во внимание при оценке секретируемый CONпалатки от Органоид массы. Этот протокол был сформирован, чтобы наметить простую процедуру для культуры и лечения тонкого кишечника с органоиды микробных патогенов и патогенных микроорганизмов, связанные молекулярных моделей (PAMPs). В нем также подчеркивается методы нормализации, которые должны применяться при анализе белка проводится после такого вызова.

Введение

Способность собирать и культуры первичных органоиды были описаны для тонкой кишки, толстой кишки, поджелудочной железы, печени и головного мозга и захватывающие достижения релевантно для понимания более физиологически представительный явления для тканевой биологии ^1-5. Первые методы , характеризующие культуру и поддержания тонкого кишечника органоидами сообщает Сато и др. Из лаборатории Ганса Clevers ^1. До этого метода, сбора и культуры первичных эпителиальных клеток кишечника оказалась ограниченной и неэффективной в поддержании эпителиальной роста клеток. Методы включали диссоциацию ткани с помощью инкубации с ферментами, такими как ко....