Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Поколение Органосохраняющие условных СМИ и приложений для изучения органоспецифической Влияния на рак молочной железы метастатическое поведение

8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54037

⸱

13 июня 2016 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1London Regional Cancer Program, London Health Sciences Centre, 2Department of Anatomy & Cell Biology, Schulich School of Medicine & Dentistry, Western University, 3Department of Biochemistry, Schulich School of Medicine & Dentistry, Western University, 4Department of Oncology, Schulich School of Medicine & Dentistry, Western University, 5Lawson Health Research Institute

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

В этой рукописи описывается модельная система ex vivo, состоящая из органно-обусловленных сред, полученных из лимфатических узлов, костей, легких и мозга мышей. Эта модельная система может быть использована для идентификации и изучения растворимых факторов органного происхождения и их влияния на тропизм органов и метастатическое поведение раковых клеток.

Аннотация

Рак молочной железы преимущественно метастазирует в лимфатические узлы, кости, легкие, мозг и печень у пациентов с раком молочной железы. Предыдущие исследовательские усилия были сосредоточены на выявлении факторов, присущих клеткам рака молочной железы, которые ответственны за этот наблюдаемый метастатический паттерн (называемый органным тропизмом), однако гораздо меньше известно о факторах, присутствующих в конкретных органах, которые способствуют этому процессу. Отчасти это связано с отсутствием модельных систем in vitro, которые точно воспроизводят микроокружение органа. Для решения этой проблемы была создана модельная система ex vivo, которая позволяет изучать растворимые факторы, присутствующие в различных микросредах органов. Эта модель состоит из генерации кондиционированной среды из органов (лимфатических узлов, костей, легких и мозга), выделенных из нормальных атимических обнаженных мышей. Модельная система была проверена путем демонстрации того, что различные клеточные линии рака молочной железы демонстрируют специфическое для клеточных линий и органов злокачественное поведение в ответ на орган-обусловленные среды, что соответствует их метастатическому потенциалу in vivo. Эта модельная система может быть использована для идентификации и оценки специфических органообразующих растворимых факторов, которые могут играть роль в метастатическом поведении молочной железы и других типов раковых клеток, включая влияние на рост, миграцию, стволовое поведение и экспрессию генов, а также для идентификации потенциальных новых терапевтических мишеней для рака. Это первая модельная система ex vivo, которая может быть использована для детального изучения органоспецифического метастатического поведения и оценки роли специфических растворимых факторов органов в управлении процессом метастазирования рака.

Введение

Рак молочной железы является наиболее часто диагностируемых рака у женщин и второе место среди причин , связанных с раком смертей 1. высокий уровень смертности от рака молочной железы является, главным образом, из-за отказа от традиционной терапии для смягчения и ликвидации метастазами; приблизительно 90% случаев смерти от онкологических заболеваний обусловлены метастазирования 2. Понимание основных молекулярных механизмов метастатического каскада имеет первостепенное значение для разработки эффективных терапевтических средств, как в раннем и рака молочной железы на поздней стадии.

Прошлые исследования помогли выяснить многоступенчатый характер метастазирования рака молочной железы , и он выдвинул гипотезу о том , что исход как прогрессии рака и метастазов во многом зависит от взаимодействия между раковыми клетками и принимающей среды 3. Клинические наблюдения показывают , что многие виды рака органа отображения тропизм, то есть., Склонность к метастазированию преимущественно к конкретным organs.In КАНе рака молочной железы, болезни пациента , как правило , распространяется или метастазирует 5 основных сайтов, в том числе кости, легких, лимфатических узлов, печени и головного мозга 4-6. Многие теории были разработаны, чтобы объяснить этот процесс, но лишь немногие из них выдержали испытание временем. Теория Юинга метастазирования, предложенный в 1920-х годах, выдвинул гипотезу thatthe распространение метастаз строго из-за механических факторов; в результате чего опухолевые клетки разносятся по всему телу нормальных определенных закономерностей физиологического кровотока и просто арестовывают в первом капиллярного ложа они сталкиваются с 7. В отличие от 1889 года "семена и почва" гипотеза Стивена Педжета предположил, что дополнительные молекулярные взаимодействия были ответственны за выживание и рост метастазов, в результате чего раковые клетки ( "семена") могут только утвердиться и proliferatein микросреды органов, которые производят соответствующие молекулярные факторы ( "почвы ") 8. Почти столетие спустя, Леонард Вайсс подвзял мета-анализ ранее опубликованных данных аутопсии и подтвердили предсказание Юинга, что многие метастатические опухоли, обнаруженные во время вскрытия были найдены в ожидаемых пропорциях, которые можно было бы ожидать, если метастатической тропизм орган был определен узорами кровотока в одиночку. Тем не менее, в manyinstances были сформированы на определенных участках , то можно было бы ожидать от предложенных механических факторов Юинга 9 меньше или больше метастаз. Эти счета и теории говорят о том, что специфические микросреды органа играют решающую роль в моделях распространения и последующего роста и выживания многих видов рака, включая рак молочной железы.

Прошедшие исследовательские усилия в основном сосредоточены на опухолевых клеток , полученных факторов и их вклад в тропности органов наблюдается в метастазирования рака молочной железы 10-12, однако мало исследований изучены факторы , полученные из микросреды органа , который может обеспечить благоприятную нишу для созданияот метастазов рака молочной железы. Во многом это связано с техническими проблемами изучения компонентов микросреды органа в пробирке.

Настоящая статья описывает всеобъемлющую систему исключая виво модель для изучения влияния растворимых компонентов лимфатических узлов, костей, легких и головного мозга на метастатической поведение клеток рака молочной железы человека. Предыдущие исследования подтверждены этой модельной системе, продемонстрировав , что различные клеточные линии рака молочной железы отображать линии клеток и специфический органоспецифический злокачественную поведение в ответ на орган-кондиционированной среды , что соответствует их в естественных условиях метастатического потенциала 13. Эта система модель может быть использована для выявления и оценки конкретных органов, полученных растворимые факторы, которые могут играть определенную роль в метастатической поведении рака молочной железы и других видов раковых клеток, в том числе факторов, влияющих на рост, миграция, стволовой как поведение и экспрессию генов, а также идентификациипотенциальные новые терапевтические мишени для рака. Это первая система естественных условиях модель ех , которая может быть использована для изучения органоспецифической метастатическое поведение в деталях и оценить роль органов , полученных растворимых факторов в продвижении процесса метастазирования рака.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все исследования на животных были проведены в соответствии с рекомендациями Канадского совета по уходу за животными, в соответствии с протоколами, утвержденными Западного Университета использования животных подкомитета.

1. Выделение органов (легких, мозга, костей, лимфатических узлов)

  1. Подготавливают четыре стерильных 50 мл конические пробирки (по одному для каждого органа должны быть изолированы), содержащий приблизительно 30 мл стерильного фосфатно-солевым буферным раствором (PBS). Предварительно взвешивают каждую пробирку PBS с помощью электронного баланса.
  2. Эвтаназии 6-12 недель старая мышь с помощью CO 2 ингаляции. Мыши должны быть оставлены в камере СО 2 в течение приблизительно 1 - 2 мин или пока мышь перестает двигаться и дышать. Успешное эвтаназии может быть дополнительно подтверждено отсутствие пульса при проверке вручную с помощью пальца. Избегайте шейки дислокации, как этот метод может привести к разрыву кровеносных сосудов шеи, приводящей к сложности удаления подмышечных лимфатических узлов.
    Примечание: Предыдущая работа специально используетсяздоровых самок голых мышей, Hsd: бестимусной Nude- Foxn1 ню 13.
  3. В стерильной капот культуры ткани, поместите курсор на его спине на поролоновую подкладку полистирола, распространение конечности и использовать булавки, чтобы держать их на месте.
  4. С помощью стерильного пинцета и ножниц, перерезал кожи живота на срединной линии на гениталии и разрезают вверх по направлению ко рту. Аккуратно оттяните кожи живота от мышц живота и пин-код на своем месте на пенополистирола площадку.
  5. Найдите подмышечные, плечевой и паховые лимфатические узлы.
    Примечание: Лимфатические узлы обычно окружены жировой тканью. Паховых лимфатических узлов легче всего обнаружить, поскольку они встречаются поверхностно на стыке двух кровеносных сосудов на отстранился кожу живота. Подмышечные и плечевая лимфатические узлы расположены глубже в ткани и требуют нежную маневрирование ткани.
    1. После того как вы расположены лимфатические узлы, не используйте ножницы, чтобы мягко и осторожно разрезал лимфы нетдез от кожи, жира и сосудов и удалить их с помощью мыши. Для того, чтобы подтвердить правильность рассечение, раскатать пинцетом над удаленной ткани. Если жесткий комок существует при прокатке пинцетом над тканью, то лимфоузел, скорее всего, был успешно удален.
    2. Поместите удаленные лимфатические узлы в охлажденный льдом PBS.
  6. С помощью пинцета и ножниц, откройте брюшной полости путем разрезания через открытую брюшную стенку в движении вверх по направлению к грудной клетке. Осторожно прорезать грудины, обнажая грудную полость.
  7. Найдите диафрагму ниже легкие и разрезают диафрагму. Она должна оттянуть ребер из-за напряженности.
  8. Поднимите легкие снизу и перерезали основной ткани в сторону трахеи. Это позволяет легкие быть свободно удалены из грудной полости. Удалить сердце и легкие единым блоком и место в охлажденный льдом PBS. Сердце может быть удалена из легких здесь или как раз перед взвешиванием на шаге 2.
  9. Удалитьбулавки, держа мышь в месте на пенополистирола площадку. Переверните мышь и разрезают кожу нижней части спины на всем пути через дорогу от фланга на фланг.
  10. Используя стерильный кусок марли, чтобы держать туловище мыши, очистить кожу спины мыши над ног и ступней мыши.
  11. Используя тот же кусок стерильной марли, держать нижнюю часть ноги на месте, тщательно сломать голеностопный сустав стопы мыши и очистить кожу над суставом проксимально в сторону коленного сустава.
  12. Используя ножницы, удалите берцовую кость, свободную от коленного сустава и место в охлажденный льдом PBS.
  13. Повторите шаги 1.11) до 1.12) с противоположной конечности.
  14. Использование щипцов, удерживая бедренной кости в месте, срежьте окружающих мышечной ткани с помощью ножниц и удаления бедренной кости, помещая его в охлажденном льдом PBS.
  15. Повторите шаг 1.14) с противоположной конечности.
  16. Используя новый кусок стерильной марли, держать голову мыши на месте. С помощью пинцета и ножниц, аккуратно снять кожу, чтобы выставить SКулл. С помощью ножниц, аккуратно вырезать затылочной череп от верхней центральной в прямой и нисходящей линии, чтобы выставить задний мозг.
  17. Использование щипцов, совка под мозгом по отношению к передней и удалить весь мозг. Поместите мозг в охлажденный льдом PBS.
  18. Повторите 1.1) до 1.17) шагов, по крайней мере, четырех мышей.

2. Орган взвешивания

  1. После выделения органа, взвешивать каждую пробирку, содержащую PBS легких и мозговой ткани с помощью электронного баланса.
  2. Вычислить разность веса путем вычитания веса предварительной изоляции (только PBS), от веса трубы PBS + органов (легких и головного мозга).
  3. Определить количество медиакритериев для ресуспендирования фрагментов тканей из вычисленной разности веса.
    Примечание: легких и ткани головного мозга являются вес нормализуется ресуспендирования в 4: 1 СМИ: соотношение ткани (объем / вес).

3. Генерация Lung- и кондиционированной среды мозгового

  1. В стерильную тпроблема культуры капот, инвертировать PBS пробирки, содержащие легкие или мозг в три раза, чтобы удалить остатки крови из органов и аспирата PBS, содержащих кровь. Повторите со свежим холодным PBS, пока раствор не становится ясно, без признаков крови.
  2. Поместите легкие и мозг в отдельных 60 мм 2 стеклянные чашки Петри. С помощью двух стерильным скальпелем лезвия, фарша легкие или мозги, неоднократно нарезка взад и вперед до тех пор , пока фрагменты ткани примерно ~ 1 мм 3 размера.
  3. фрагменты Ресуспендируют ткани в соответствующем объеме (определено ранее на шаге 2.3) Дульбекко модифицированной среде Игла (DMEM): F12, дополненной 1х концентрированный митоген добавку и пенициллином (50 мкг / мл) / стрептомицин (50 мкг / мл).
  4. Добавить ресуспендировали в легких или ткани головного мозга фрагментов в одну лунку 6-луночного планшета.
  5. Инкубируйте фрагментов тканей в средствах массовой информации в течение 24 ч при температуре 37 ° С и 5% CO 2. После инкубации собирают кондиционированная среда для каждой ткани и Further разбавить, добавив три эквивалентные объемы свежей среды в 50 мл коническую трубку.
  6. Центрифуга при 1000 х г в разбавленном кондиционированной среды для каждого органа при температуре 4 ° С в течение 15 мин для удаления крупного мусора ткани. Сбор средств массовой супернатант и фильтруют через шприцевой фильтр 0,22 мкм.
  7. Бассейн кондиционером средств массовой информации из каждого органа (то есть., Легких с легких и головного мозга с мозгом) из нескольких мышей для учета мыши к мыши изменчивости. Аликвоты и хранят кондиционированная среда при температуре -80 ° С до использования.

4. Генерация костного мозга кондиционированной среды

  1. В стерильной культуре ткани капот, обрезать лишнюю ткань от кости и удалить эпифизов (концевые части) из костей с помощью ножниц.
  2. С помощью 27 ½ G иглы заподлицо костномозговой полости кости, нажав 1 мл PBS, через центр каждой кости. Это позволит вам собрать стромальных клеток костного мозга (СККМ) в свежую пробирку, содержащую PBS.
  3. Центрифуга на 1,000 мкг в течение 5 мин при температуре 4 ° С и промыть BMSC дважды PBS. Ресуспендируют костного мозга стромальные клетки в 20 мл среды роста костей стромальных клеток (DMEM: F12, дополненной 1х концентрированный митоген добавку, пенициллин (50 мкг / мл) / стрептомицин (50 мкг / мл) и 10% фетальной Бовену сыворотки (FBS) ).
  4. Пластина 10 мл ресуспендировали стромальных клеток костного мозга в одной колбе Т75.
    Примечание: Комбинирование и клетки пластины из каждых 2-х мышей в каждой колбе T75; для четырех мышей, два T75 колбах необходимы (приблизительно 1 × 10 7 клеток / колбу).
  5. Выдержите кости стромальные клетки костного мозга в костном стромы средах роста клеток в течение 24 ч при температуре 37 ° С и 5% СО 2. После инкубации удалить жидкость с обеих колбах Т75 и положить в новую колбу Т75, маркировать эту колбу, как "Летун Термос". Добавить свежую кость стромы СМИ роста клеток с предыдущими 2 колбах и инкубировать все 3 колбы при 37 ° С и 5% CO 2.
  6. После того, как клетки достигают примерно 70% сплошности (приблизительно 5 - 7дней) прохождение клетки. Чтобы сделать это, удалить средних и мыть клетки дважды PBS (3 мл каждого мытья). Удалить PBS и добавляют 3 мл трипсина / EDTA раствора, гарантируя, что трипсин покрывает всю поверхность колбы. После того, как клетки отрываться колбу (~ 2 - 3 мин), прекратить трипсином реакцию добавлением 3 мл костного стромальных клеток питательной среды). Центрифуга 900 мкг в течение 5 мин при температуре 4 ° С, отказаться от средств массовой информации и ресуспендирования клеток в 10 мл свежей костной стромы сред роста клеток.
  7. Бассейн клетки из всех колб и проход 1: 5 в трех новых Т75 колбы и инкубируют при температуре 37 ° С и 5% СО 2. После того, как клетки вновь достигнет 70%, повторите шаг 4,6 и бассейн и прохождения все прилипшие клетки во второй раз. Re-пластины все ячейки к четырем T75 колбах и инкубировать 37 ° C и 5% CO 2. Среды для выращивания стромальных клеток костного следует использовать для всех ступеней.
  8. Разрешить клетки достичь слияния, мыть клетки три раза PBS и добавьте кости стромы сбора клеток СМИ (DMEM: F12 СМИ + 1x сосредоточены митоген суpplement + пенициллин (50 мкг / мл) / стрептомицин (50 мкг / мл); 10 мл / T75), убедившись, что этот носитель свободен от FBS. Сбор костного мозга кондиционированная среда 72 ч позже, фильтруют через фильтр 0,22 мкм, бассейн, аликвоты и хранят при -80 ° С до использования.
  9. При желании подтвердить фенотип изолированных клеток стромы костного мозга (BMSC) с использованием антител против мышиного ССС-1, CD105, CD29, CD73 и CD44, с использованием стандартных методов проточной цитометрии , как описано ранее 13.

5. Формирование лимфоузла-кондиционированной среды

  1. В стерильной капот культуры ткани, инвертировать PBS пробирки, содержащей лимфатические узлы три раза, чтобы удалить остатки крови из лимфатических узлов и аспирата кровавый PBS. Повторите со свежим холодным PBS, пока раствор не становится ясно, без признаков крови.
  2. Поместите лимфатические узлы в 60 мм 2 стеклянных чашках Петри. С помощью двух стерильным скальпелем лезвий, фарша лимфатических узлов, неоднократно не нарезая взад и вперед, пока Tissuе фрагменты приблизительно на 1 мм 3 в размере.
  3. В конической трубе, фрагменты ресуспендируют ткани в 10 мл Roswell Park Memorial института 1640 (RPMI 1640) , дополненной пенициллином (50 мкг / мл) / стрептомицин (50 мкг / мл), 5 х 10 -5 М стерильного -меркаптоэтанол ( 1,75 мкл / 500 мл среды) и 10% FBS.
  4. Центрифуга при 900 х г в течение 5 мин при 4 ° С и ресуспендируют все клетки в 30 мл среды. Добавьте 5 мл среды / лунку в 6-луночные планшеты и инкубировали в течение 7 дней при температуре 37 ° С и 5% CO 2.
  5. После 7 дней инкубации, выбросьте носители, мыть прилипшие клетки с 5 мл теплой PBS и добавляют 5 мл свежей средой в каждую лунку. Разрешить клеткам расти до слияния (примерно 5 - 7 дней), Trypsinize, объединить все ячейки, и канал, как описано в шаге 4.6. Re-пластины ячейки на 6-луночный планшет. Повторите этот шаг три раза.
  6. После трех проходов, позволяют клеткам расти до слияния, мыть лунки три раза PBS и добавьте 2 мл / лунку DMEM: F12 + 1xконцентрированная добавка митоген и пенициллин (50 мкг / мл) / стрептомицин (50 мкг / мл), гарантируя, что этот носитель свободен от FBS. Сбор лимфатических узлов с кондиционером СМИ после того, как 72 часа, бассейн, аликвоты и хранить при температуре -80 ° С до использования.
  7. При желании подтвердить фенотип изолированных клеток лимфатических узлов стромальных (LNSC) с использованием антител против CD45 мыши и gp38, с использованием стандартных методов проточной цитометрии , как описано ранее 13.

6. Использование Organ-кондиционированной среды ниже по течению Assays связанных с метастатическое поведение раковых клеток

  1. После того, как орган-кондиционированной среды было сформировано как описано в пунктах 1 - 5, использовать его для выполнения различных вниз по течению клетки и анализы молекулярной биологии с целью определения влияния растворимых органов, полученных факторов на метастатической поведение раковых клеток. Примеры стандартных анализов (описанных в другом месте в литературе) , включают белковые массивы 13, клеточные Анализы роста 13, клеточной миграции анализах 13, tumorsphere образование 14 и RT-PCR 15. Исходные базовые средства массовой информации используются для создания Органосохраняющие кондиционированная среда (то есть, безусловная DMEM:. F12 , дополненной 1х концентрированный митоген добавку и пенициллин (50 мкг / мл) / стрептомицин (50 мкг / мл) следует использовать в качестве отрицательного контроля ,

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Поколение органной кондиционером СМИ

Обзор схема / схема процесса выделения органов и генерации кондиционированной среды представлен на рисунке 1, с представительными фотоизображений процедуры , показанной на рисунке 2. Следует отметить , что , когда этот протокол был первым в стадии разработки, печень была включена в нашем анализе, потому что это общий сайт метастазов рака мо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Метастазы представляет собой сложный процесс, в котором ряд клеточных событий , в конечном счете ответственны за вторжение ткани и отдаленным опухоли учреждения 4,30,31. Модель системы ех естественных условиях , представленные здесь могут быть использованы для изучения два важных аспекта метастатической прогрессии: рак самонаводящиеся клетки или миграции к конкретному органу ( "попасть туда") и роста в этом органе ( "растущей там"). Многие исследования ранее сосредоточены на выявл...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами от Канадского фонда рака молочной железы-регион Онтарио, Канадского фонда инноваций (No 13199) и донорской поддержкой от Джона и Донны Бристоль через Лондонский фонд медицинских наук (в A.L.A.). Студенческая и стипендиальная поддержка предоставлялась в рамках программы стипендий для выпускников Онтарио (провинция Онтарио, для G.M.P. и J.E.C.), Канадской стипендиальной программы для выпускников-магистров (для M.M.P.), Канадских институтов исследований в области здравоохранения (CIHR) - Стратегическая учебная программа (для M.M.P., G.M.P и J.E.C.) и Отдела трансляционных исследований рака молочной железы Памелы Гринуэй-Кольмайер в рамках Лондонской региональной программы по борьбе с раком (для M.M.P. G.M.P., J.E.C. и Y.X.). A.L.A. получает награду CIHR New Investigator Award и награду Early Researcher Award от Министерства исследований и инноваций провинции Онтарио.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
50 мл конические пробиркиThermo Scientific (Nunc)339652Keep sterile
1x Фосфатно-солевой буферThermoFisher Scientific10010-023Keep sterile
Nude мышиHarlan LaboratoriesHsd:Athymic Nude-Foxn1nuПрименение в возрасте 6 - 12 недель
Подушечка из пенополистиролаN/AN/AДля этой цели можно использовать выброшенную крышку (~ 4 x 8 дюймов или больше) контейнера для транспортировки пенополистирола. Стерилизовать, протерев этанолом.
ЩипцыFine Science Tools11050-10Keep sterile
НожницыFine Science Tools14058-11Keep sterile
Марлевые салфеткиFisher Scientific22-246069Keep sterile
60 мм2 стеклянные чашки ПетриSigma-AldrichCLS7016560Keep sterile
Лезвия скальпеляFisher ScientificS95937AСохраняйте стерильность
DMEM:F12Life Technologies21331-020Согрейте в 37 градусов; C водяной баней перед использованием, хранить стерильными 
1x Mito + Serum ExtenderBD Biosciences355006Упоминается в рукописи как «концентрированная добавка митогена». Keep sterile
Penicillin-Streptomycin (10,000 Ед/мл)Life Technologies15140-122Keep sterile
Rosewell Park Memorial Institute 1640 (RPMI 1640)Life Technologies11875-093Warm in 37 ° C водяной баней перед использованием, хранить стерильными 
Фетальная бычья сывороткаSigma-AldrichF1051-500MLKeep sterile
раствор Trypsin/EDTAThermoFisher ScientificR-001-100Теплый в 37 градусов; C водяной баней перед использованием, хранить стерильными 
6-луночные планшеты для культивирования тканейThermo Scientific (Nunc)140675Сохраняйте стерильность
0,22 мкм; m шприцевые фильтрыSigma-AldrichZ359904Keep sterile
T75 tissue culture flaggingThermo Scientific (Nunc)178905Keep steriles
TranswellsSigma-AldrichCLS3464Keep sterile, использование для миграционных анализов
Anti-mouse Sca-1R& D SystemsFAB1226Pиспользование в 10 & микро; l/106 элементы
Anti-mouse CD105R& D SystemsFAB1320Pиспользование на 10 & микро; l/106 клетки
Anti-mouse CD29R& D SystemsFAB2405P-025использование при 10 & микро; l/106 элементы
Anti-mouse CD73R& D SystemsFAB4488Pиспользования при 10 & микро; l/106 элементы
Anti-mouse CD44R& D SystemsMAB6127-SPиспользование при 0,25 &; g/106 клетки
Anti-mouse CD45eBioscience11-0451-81использование при 5 &m; l/106 клетки
Anti-mouse gp38eBioscience12-5381-80использование при 10 &m; l/106 клетки
&бета;-меркаптоэтанол Сигма-ОлдричM6250 Сохраняйте стерильность
Белковые массивыRayBiotech Inc.AAM-BLM-1-2Использование 1 массива для каждого условия среды (включая отрицательный контроль), в трех экземплярах

Ссылки

  1. Canadian Cancer Statistics. Canadian Cancer Society. , Toronto, ON. Available from: www.cancer.ca (2014).
  2. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2015. CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).
  3. Fidler, I. J. The organ microenvironment and cancer metastasis. Differentiation. 70 (9-10), 498-505 (2002).
  4. Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat Rev Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).
  5. Kennecke, H., et al. Metastatic behavior of breast cancer subtypes. J Clin Oncol. 28 (20), 3271-3277 (2010).
  6. Nguyen, D. X., Bos, P. D., Massague, J. Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization. Nat Rev Cancer. 9 (4), 274-284 (2009).
  7. Ewing, J. Neoplastic Diseases: A Treatise on Tumors. Am J Med Sci. 176 (2), 278(1928).
  8. Paget, S. The distribution of secondary growths in cancer of the breast. 1889. Cancer Metastasis Rev. 8 (2), 98-101 (1989).
  9. Weiss, L. Comments on hematogenous metastatic patterns in humans as revealed by autopsy. Clin Exp Metastasis. 10 (3), 191-199 (1992).
  10. Bos, P. D., et al. Genes that mediate breast cancer metastasis to the brain. Nature. 459 (7249), 1005-1009 (2009).
  11. Kang, Y., et al. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer Cell. 3 (6), 537-549 (2003).
  12. Minn, A. J., et al. Genes that mediate breast cancer metastasis to lung. Nature. 436 (7050), 518-524 (2005).
  13. Chu, J. E., et al. Lung-Derived Factors Mediate Breast Cancer Cell Migration through CD44 Receptor-Ligand Interactions in a Novel Ex Vivo System for Analysis of Organ-Specific Soluble Proteins. Neoplasia. 16 (2), 180-IN127 (2014).
  14. Pio, G., Piaseczny, M., Allan, A. The Role of Bone-Derived Osteopontin in the Migration and Stem-Like Behavior of Breast Cancer Cells. AACR. , 2015 (2015).
  15. Deepak, S., et al. Real-Time PCR: Revolutionizing Detection and Expression Analysis of Genes. Curr Genomics. 8 (4), 234-251 (2007).
  16. Hammerschmidt, S. I., et al. Stromal mesenteric lymph node cells are essential for the generation of gut-homing T cells in vivo. J Exp Med. 205 (11), 2483-2490 (2008).
  17. Dominici, M., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).
  18. Baddoo, M., et al. Characterization of mesenchymal stem cells isolated from murine bone marrow by negative selection. J Cell Biochem. 89 (6), 1235-1249 (2003).
  19. Furger, K. A., Menon, R. K., Tuck, A. B., Bramwell, V. H., Chambers, A. F. The functional and clinical roles of osteopontin in cancer and metastasis. Curr Mol Med. 1 (5), 621-632 (2001).
  20. Radisky, E. S., Radisky, D. C. Matrix metalloproteinases as breast cancer drivers and therapeutic targets. Front Biosci (Landmark Ed). 20, 1144-1163 (2015).
  21. Radisky, E. S., Radisky, D. C. Matrix metalloproteinase-induced epithelial-mesenchymal transition in breast cancer. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 15 (2), 201-212 (2010).
  22. Radisky, E. S., Radisky, D. C. Stromal induction of breast cancer: inflammation and invasion. Rev Endocr Metab Disord. 8 (3), 279-287 (2007).
  23. Kakinuma, T., Hwang, S. T. Chemokines, chemokine receptors, and cancer metastasis. J Leukoc Biol. 79 (4), 639-651 (2006).
  24. Zlotnik, A. Chemokines and cancer. Int J Cancer. 119 (9), 2026-2029 (2006).
  25. Schlesinger, M., Bendas, G. Vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1)--an increasing insight into its role in tumorigenicity and metastasis. Int J Cancer. 136 (11), 2504-2514 (2015).
  26. Cook, K. L., Shajahan, A. N., Clarke, R. Autophagy and endocrine resistance in breast cancer. Expert Rev Anticancer Ther. 11 (8), 1283-1294 (2011).
  27. Singh, P., Alex, J. M., Bast, F. Insulin receptor (IR) and insulin-like growth factor receptor 1 (IGF-1R) signaling systems: novel treatment strategies for cancer. Med Oncol. 31 (1), 805(2014).
  28. Lee, S. H., Jeong, D., Han, Y. S., Baek, M. J. Pivotal role of vascular endothelial growth factor pathway in tumor angiogenesis. Ann Surg Treat Res. 89 (1), 1-8 (2015).
  29. Erdmann, R. B., Gartner, J. G., Leonard, W. J., Ellison, C. A. Lack of functional TSLP receptors mitigates Th2 polarization and the establishment and growth of 4T1 primary breast tumours but has different effects on tumour quantities in the lung and brain. Scand J Immunol. 78 (5), 408-418 (2013).
  30. Chambers, A. F., et al. Steps in tumor metastasis: new concepts from intravital videomicroscopy. Cancer Metastasis Rev. 14 (4), 279-301 (1995).
  31. Chiang, A. C., Massague, J. Molecular basis of metastasis. N Engl J Med. 359 (26), 2814-2823 (2008).
  32. Gupta, G. P., et al. Identifying site-specific metastasis genes and functions. Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 70, 149-158 (2005).
  33. Frantz, C., Stewart, K. M., Weaver, V. M. The extracellular matrix at a glance. J Cell Sci. 123, (Pt 24) 4195-4200 (2010).
  34. Price, A. P., England, K. A., Matson, A. M., Blazar, B. R., Panoskaltsis-Mortari, A. Development of a decellularized lung bioreactor system for bioengineering the lung: the matrix reloaded. Tissue Eng Part A. 16 (8), 2581-2591 (2010).
  35. Bonnans, C., Chou, J., Werb, Z. Remodelling the extracellular matrix in development and disease. Nat Rev Mol Cell Biol. 15 (12), 786-801 (2014).
  36. Hynes, R. O. The extracellular matrix: not just pretty fibrils. Science. 326 (5957), 1216-1219 (2009).
  37. Psaila, B., Lyden, D. The metastatic niche: adapting the foreign soil. Nat Rev Cancer. 9 (4), 285-293 (2009).
  38. Lee, R. H., Oh, J. Y., Choi, H., Bazhanov, N. Therapeutic factors secreted by mesenchymal stromal cells and tissue repair. J Cell Biochem. 112 (11), 3073-3078 (2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Поколение Органосохраняющие условных СМИ и приложений для изучения органоспецифической Влияния на рак молочной железы метастатическое поведение
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.