Методическая статья

Сосудистом сплетении эпителиальных клеток на основе модели крови человека-спинномозговой жидкости барьер для изучения бактериальной инфекции от базолатеральной стороны

DOI:

10.3791/54061

⸱

6 мая 2016 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, Medical Faculty Mannheim, Heidelberg University, 2Department of NDU Life Sciences, Nippon Dental University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эпителиальные клетки сосудистого сплетения (ЦП) образуют гемато-спинномозговой барьер жидкости (BCSFB). В модели BCSFB in vitro используются клетки папилломы сосудистого сплетения человека (HIBCPP). В данной статье описывается культивирование и базолатеральная инфекция клеток HIBCPP с использованием системы фильтрации клеточных культур.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эпителиальные клетки сосудистого сплетения (ЦП), расположенные в желудочковой системе головного мозга, образуют гемато-спинномозговой барьер жидкости (BCSFB). BCSFB функционирует в отделении спинномозговой жидкости (СМЖ) от крови и минимальном ограничении молекулярного обмена. Модель BCSFB in vitro основана на клетках, полученных из папилломы сосудистого сплетения человека (HIBCPP). Клетки HIBCPP демонстрируют типичные барьерные функции, включая образование плотных соединений (TJs), развитие трансэпителиального электрического сопротивления (TEER), а также незначительную проницаемость для макромолекул. Существует несколько патогенов, которые могут проникать в центральную нервную систему (ЦНС) через BCSFB и впоследствии вызывать тяжелое заболевание, такое как менингит. Одним из таких патогенов является Neisseria meningitidis (N. meningitidis), специфическая для человека бактерия. Использование клеток HIBCPP в инвертированной системе фильтрации клеточных культур позволяет изучать взаимодействия патогенов с клетками BCSFB с базолатеральной клеточной стороны, что актуально in vivo. В этой статье мы описываем посев и культивирование клеток HIBCPP на вставках для клеточных культур. Кроме того, продемонстрировано инфицирование клеток N. meningitidis вместе с анализом инвазированных и адгезивных бактерий с помощью двойной иммунофлюоресценции. Поскольку клетки ЦП также участвуют в других заболеваниях, включая нейродегенеративные расстройства, такие как болезнь Альцгеймера и рассеянный склероз, а также во время метастазирования опухолевых клеток в мозг, модельная система также может быть применена в других областях исследований. Это дает возможность расшифровать молекулярные механизмы и идентифицировать новые терапевтические мишени.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Барьер жидкость кроваво-спинномозговой (BCSFB) является одним из трех барьерных участков между кровью и мозгом 1. Его морфологический коррелят являются эпителиальные клетки сосудистое сплетение (CP) 2,3, эндотелиальный-эпителиальной гофр, который сильно развитую сосудистую сеть и находится в желудочках головного мозга. CP служит для получения цереброспинальной жидкости (CSF), а также для отделения последнего из крови. Для достижения барьерной функции, СР эпителиальные клетки показывают низкую активность pinocytotic, выражают специфические транспортеров, и плотно связаны непрерывной сетью плотных контактов (TJS) 2,3.

Человеческого хориоидпапиллома (HIBCPP) клетки, полученные из злокачественной хориоидпапиллома японской женщины 4, были использованы для построения функционала в пробирке модели BCSFB. HIBCPP клетки показывают пару характеристик функционального BCSFB как образование TJпрядей, развитие высокой трансэпителиальной мембранного потенциала, который может быть определен в качестве трансэпителиальная электрического сопротивления (TEER), а также незначительные проницаемостей для макромолекул. Кроме того, HIBCPP клетки экспрессируют характерные транспортеров, которые могут служить для регулирования ионной микросреду, и показать апикальной / базолатеральная полярности 5,6,7.

BCSFB было показано , использовался в качестве сайта входа для болезнетворных микроорганизмов (бактерий, вирусов и грибов) в центральную нервную систему (ЦНС) 8. Вторжение патогенных микроорганизмов, в том числе менингококк (N.meningitidis , ), грамотрицательные бактерии, может вызвать серьезные заболевания , как менингит. Доказательства того, что он преодолевает защитный барьер эпителиальные СР поддерживается гистопатологических наблюдений у больных с менингококк экспонирование повышенное количество менингококков в сосудах и CP эпителиальных клеток 9,10. Для того, чтобы получить вход в клетки-хозяева баcteria часто угон эндоцитозного механизмы, которые опосредованы или по заданным поверхностными рецепторами, расположенными на клетках-хозяевах. Так как взаимодействия патогенов с этими рецепторами , могут быть виды конкретных моделей 11, животных можно обратиться лишь в ограниченной степени. Клеточная линия HIBCPP дает возможность изучить процесс вторжения, а также лежащие в основе молекулярных механизмов в модельной системе человека. Использование клеточных культур вставок позволяет анализировать взаимодействия патогенов с клетками-хозяевами из двух разных сторон клеток. Многие бактерии, в том числе Н. менингита, сильно подвержены воздействию силы тяжести во время анализов инфекции. Для оптимального взаимодействия патогенов с клетками HIBCPP в ходе теста, бактерии сначала добавлены в верхний отсек системы фильтрующего элемента клеточной культуры. Чтобы включить инфекцию от апикальной или базолатеральной стороне клеток, соответственно, два варианта системы в пробирке был Эстащающие: В стандартной системе HIBCPP клетки высевают в верхний отсек вставки фильтра, имитируя ситуацию , когда микроорганизмы находятся на CSF стороне и войти в контакт с апикальной стороне клеток (Фигура 1А, С). В противоположность этому, используя клетки HIBCPP в перевернутом культивирования клеток системы фильтра вставки отражает условия, когда бактерии попали в кровеносную. Микроорганизмы распространение в крови и столкновение CP эпителиальных клеток от базолатеральной стороны (рис 1B, D). Стоит отметить, что в этой модельной системе , было показано , что бактерии вторгаются клетки HIBCPP в полярном моды конкретно от базолатеральной стороны ячейки 5,7.

Впоследствии к заражению СР, инфильтрации патогены могут быть признаны врожденной иммунной системы посредством перевязки с рецепторами распознавания образов (РРСС). Хорошо описанные члены PRRs принадлежат к семейству Toll-подобный рецептор (TLR). может TLRs бинd к характерным структурам инфекционных микроорганизмов, которые называются патоген-ассоциированные молекулярные структуры (PAMPs). Лигирование рецепторов приводит к активации клетки - хозяина сигнальных каскадов , которые вызывают экспрессию цитокинов и хемокинов 12, который в свою очередь стимулирует трансмиграции иммунных клеток поперек BCSFB 13,14. Было показано , что HIBCPP клетки экспрессируют несколько TLRs на уровне мРНК , так и , что заражение N. менингита приводит к секреции ряда цитокинов и хемокинов, включая CXCL1-3, IL6, IL8 и TNF & alpha ; 15,16.

Здесь мы описываем выращивание и заражение линии клеток человека HIBCPP в перевернутой системе вставки клеточной культуры, которая имитирует BCSFB. Эта модель система позволяет исследовать взаимодействия патогенов с в естественных условиях соответствующей стороны базолатеральной клеток, а также последующего клеточного ответа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка клеточной культуре вставные фильтры для высева HIBCPP клеток в системе перевернутой модели

  1. Предварительно теплой DMEM / F12 (HAM), дополненной 5 мкг / мл инсулина, 100 ед / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS).
  2. С помощью стерильного пинцета поместить 0,33 кв.см область роста клеточной культуры фильтрующие элементы с размером пор 3 мкм , в перевернутом положении в 12-луночный планшет (рис 1E).
  3. Наполните среды в нижний отсек вставки фильтра для культивирования клеток (около 3 мл) и добавляли по 100 мкл на верхней части фильтрующего элемента. Затопите пластины, а также нижний отсек со средой. Аспирируйте чрезмерную среду таким образом , что нижний отсек вставки фильтра остается заполненной (рис 1E).
    Примечание: Рекомендуется использовать серологические пипетки для этого шага.
  4. Крышка 12-луночный планшет с крышкой и передать Приготовленную культуру клеток фильтрующие элементы в инкубаторе, 37 ° С,5% СО 2 до добавления клеток.

2. Выращивание и пассажи HIBCPP клеток

  1. Подготовка DMEM / F12 (HAM), дополненную 5 мкг / мл, 100 ед / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 10% FCS.
  2. Предварительно теплая среда и PBS в C водяной бане при 37 °. Отберите среду из колбы. Добавляют 10 мл PBS в колбу и вихрем. Повторите этот шаг один раз.
  3. Добавить 3 мл 0,25% трипсин-ЭДТА в колбу и завихрения. Поместите в инкубатор, 37 ° C, 5% CO 2.
  4. После примерно 20 мин удалить колбу из инкубатора. Убедитесь, что клетки отделяют от дна колбы и отображать круглую форму при обследовании с помощью микроскопа.
    Примечание: Ячейки не отделяться полностью друг от друга и часто встречаются в агломераты. Рекомендуется использовать клетки до прохода 38.
  5. Чтобы остановить трипсинизации добавить 17 мл среды. Ресуспендируют клеток с помощью пипетки вверх и вниз и передать подвескув 50 мл пробирку. Центрифуга при 50 мкг в течение 10 мин при комнатной температуре.
  6. Ресуспендируют клеток в соответствующем объеме среды и подсчета клеток с помощью гемоцитометра.
    Примечание: Концентрация ресуспендировали клеток HIBCPP должна составлять 1 × 10 6 клеток / мл. Для поддержания клеток HIBCPP предлагается перевести сумму в размере 1-6 х 10 6 клеток в 10 мл среды для Т75-колбы. Изменение средней каждый второй день.

3. Посев Перевернутый Cell Culture фильтров Вставки с HIBCPP клеток

  1. В верхней части каждой перевернутой фильтрующего элемента (то есть нижней стороне фильтра) добавляют 80 мкл клеточной суспензии (то есть. 8 х 10 4 клеток) (рис 1E).
    Примечание: Убедитесь, что клетки равномерно распределены в суспензии путем переворачивания пробирки перед посевом.
  2. Накройте отобранный-клеточной культуры фильтрующие элементы с крышкой 12-луночного планшета и передачи в инкубатор, 37 ° C, 5% CO 2.
  3. В первый день, заполнить 1 мл среды в лунки 24-луночного планшета. Поднимите фильтрующие элементы культуры клеток с помощью щипцов из 12-луночного планшета, выбросьте среды внутри, включить фильтр вставки и поместить их в стандартной ориентации в подготовленную 24-луночного планшета (рисунок 1E).
  4. Поместите клетки в свежую среду каждый второй день. Подготовка 24-х скважин со свежей средой и передачи фильтра вставки к нему. Наполните вкладыши с 0,5 мл свежей среды. Проверьте TEER каждый день, как это описано в разделе 4.
  5. Когда значения Teer из HIBCPP посеянных клеток на клеточной культуре вставками превышает 70 Ω х см² (примерно через 4 дня после посева), а затем продолжить культуру клеток в среде, содержащей 1% FCS и 5 мкг / мл инсулина. Подготовка 24-луночные планшеты с 1 мл среды для каждой лунки. Передачи фильтра вставки на подготовленные лунки и обменной среды в верхнем отсеке.
    Примечание: Этот вывод сыворотки после сплошности приводит к образованиюболее высокий мембранный потенциал.
  6. Отберите среду из фильтра отсека, трансфер в хорошо подготовились и залить 500 мкл среды. Повторите этот шаг один раз. Помещенный клеток в течение ночи в инкубаторе, 37 ° C, 5% CO 2.

4. Измерение трансэпителиальная электрического сопротивления (TEER)

  1. Погрузитесь электрода кончики voltohmmeter эпителиальной ткани в течение 15 мин в 80% этаноле. Передача voltohmmeter под капотом и дайте высохнуть электрода на мгновение. Поместите электрод в соответствующей культуральной среде, используемой для клеток в течение еще 15 мин для уравновешивания.
  2. Провести измерения, расположив более длинную руку электрода так, чтобы он касался нижней части нижнего отсека каждый раз, поместите более короткую руку в фильтр вставки отсека.
    Примечание: значения сопротивления клеточных культур фильтрующих вставок без клеток в среде следует использовать в качестве пустых значений ((измеренное значение (Ω) - пустое значение (Ω)) х фильтрповерхность (т.е. 0,33 кв.см) , ).
  3. После того, как место для измерения электрод обратно в 80% этаноле в течение 15 мин. Хранить в сухом трубке.

5. Определение парацеллюлярная Проницаемость

  1. Растворить 1 г FITC-инулин в 200 мл культуральной среды, дополненной 5 мкг / мл инсулина 1% FCS. Применяют 50 мкг / мл раствора в верхний отсек фильтра перед заражением клеток.
  2. После заражения собирают средние пробы из нижней лунки, чтобы определить, сколько Инулин переходил из фильтрующего отсека через слой клеток.
  3. Готовят стандартный раствор FITC-инулин и выполнить 1: 2 разбавленные в 10 раз (100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,13%, 1,56%, 0,78%, 0,39%, 0,2% и 0%) , Определение флуоресценции путем измерения всех образцов в планшет-ридере.

6. Подготовка бактерий для инфекции HIBCPP клеток на клеточной культуре вставные фильтры

  1. За один день до эксперимента, царапанье тон замороженное Н. Штаммы от менингита глицерина на складе и полоса на шоколадный агар с Vitox. Расти в течение ночи в инкубаторе при 37 ° C, 5% CO 2.
  2. Извлечение 20-30 колоний из ночной культуры и переносят в пробирку , содержащую 8 мл протеоза пептон , дополненную 0,042% NaHCO 3, 0,01 М MgCl 2 и 1% Polyvitex.
  3. Взболтать бактерии в течение 1,25 ч при 220 оборотах в минуту, 37 ° С. Гранул бактерий путем центрифугирования при 2684 г в течение 10 мин при комнатной температуре. Удалите супернатант и ресуспендируют бактериальных гранул с 8 мл не содержащей сыворотки среде. Вихревой для обеспечения однородной суспензии.
  4. Для определения плотности культуры, измеряют разведение 1:10 при оптической плотности (OD) на длине волны 600 нм. Отрегулировать бактериальной суспензии на OD 600 0,1.
    Примечание: Эта суспензия содержит ок. 1 х 10 8 КОЕ / мл.
  5. Для подтверждения концентрации бактериальной клетки, развести подвески ступенчато (1:10) вплоть доразведение 10 -5 и пластины на шоколадный агар пластин.
    Примечание: необходимо выполнить для расчета кривых роста бактерий Подобные серийные разведения.

7. Инфекция HIBCPP клеток на клеточной культуре вставные фильтры и определение бактериального вторжения двойной иммунофлуоресценции

  1. Продолжив культуры клеток в среде, содержащей 1% FCS и 5 мкг / мл инсулина, измеряют клетки каждый день, используя voltohmmeter эпителиальной ткани. Если клетки достигли TEER составляет около 500 Ω х cm², осуществляют инфекцию.
  2. Инфицировать клетки с приготовленной бактериальной суспензии при множественности инфекции (MOI) из 10. Хранить инфицированных клеток в инкубатор при 37 ° C, 5% CO 2 в течение указанного периода времени.
    Примечание: MOI можно рассчитать с учетом количества клеток на клеточной культуры фильтрующего элемента при слиянии (1.21 х 10 6 клеток / см 2).
  3. Прекратить Infectиона трижды промывали 500 мкл не содержащей сыворотки среде (SFM), содержащим 1% бычьего сывороточного альбумина (БСА), подаваемую на фильтровальной отсек, 1 мл в нижний отсек.
  4. Блок с 500 мкл SFM, содержащую 1% буфера BSA в фильтрующем отсеке и 1 мл в нижнем отделении в течение 20 мин при комнатной температуре, чтобы предотвратить прилипание антител к неспецифических сайтов связывания.
  5. Инкубируйте 100 мкл первичного антитела анти N. meningtidis α-OMP (1: 200) в фильтрующем отделении и 500 мкл в нижнем отделении в течение 20 мин при комнатной температуре.
    Примечание: При необходимости, концентрация антитела должно быть титруют.
  6. Промывают клетки аспирацией среды из фильтровальной камеры, передавать фильтрационную вставку к подготовленному хорошо с 1 мл SFM, содержащего 1% бычьего сывороточного альбумина и заполнить опустели фильтр отсек с 500 мкл SFM, содержащего 1% бычьего сывороточного альбумина. Повторите этот шаг дважды.
  7. Fix клеток с 500 мкл 4% формальдегида в фильтре комrtment, 1 мл в нижнем отделении в течение 10 мин при комнатной температуре.
  8. Промывают клетки аспирацией среды из фильтровальной камеры, передавать фильтрационную вставку к подготовленному хорошо с 1 мл PBS и заполнить опустели фильтр отсек с 500 мкл PBS. Повторите этот шаг один раз.
    Примечание: Образцы могут храниться в течение ночи в PBS при 4 ° С.
  9. Вырезать культуры фиксированной ячейки отфильтровывает вставок и промывают 250 мкл PBS, содержащим 1% BSA. Инкубируйте клетки в течение 15 мин при комнатной температуре с помощью 250 мкл флуоресцентной меченой (длина волны возбуждения 594 нм) вторичного куриного антитела против кролика (1: 500), чтобы окрасить внеклеточных бактерий.
    Примечание: При необходимости, концентрация антитела должно быть титруют.
  10. Проницаемыми клеток с 250 мкл PBS, содержащего 1% бычьего сывороточного альбумина и 0,5% Triton X-100 в течение 1 ч при комнатной температуре. Мыть клетки три раза с 250 мкл PBS, содержащего 1% бычьего сывороточного альбумина.
  11. Инкубируют 250 мкл первичного антитела против N. менингита α-OMP (1: 200) в течение 30 мин, чтобы окрасить вне- и внутриклеточные бактерии. Мыть клетки три раза с 250 мкл PBS, содержащего 1% бычьего сывороточного альбумина.
  12. Применить 250 мкл флуоресцентного меченого (длина волны возбуждения 488 нм) вторичным антителом (1: 500), флуоресцентный маркированы (длина волны возбуждения 660 нм) фаллоидином (1: 250) и 4 ', 6-диамидино-2-фенилиндол дигидрохлорид (DAPI) ( 1: 50000) в течение 1 ч при комнатной температуре, чтобы окрасить внеклеточном и внутриклеточном бактерии, актинового цитоскелета и ядра.
    Примечание: При необходимости, концентрация антитела должно быть титруют.
  13. Мыть клетки три раза с 250 мкл PBS, содержащего 1% бычьего сывороточного альбумина. Вставить клетки в среду не монтажа и хранить при температуре 4 ° С до обследования с помощью микроскопа.
  14. Определить количество вторгшихся бактерий на предопределенное поле. Сделайте это путем подсчета 20 полей в фильтрующую мембрану. Вычислить процент вторгшихся бактерий.
    Примечание: Умножьте среднее количество бактерий 20 микроскопических полей с площадью coefficнике,. В результате выражает количество присутствующих в 0,33 см ² для культивирования клеток фильтрующего элемента в общей бактерии. Разделите эту величину количества бактерий, выращенных в среде во время продолжительности инфекции.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы опишем культивирование и инфицирование клеток HIBCPP в перевернутом системе вставки клеточной культуры. Эта модель позволяет изучать механизмы вторжения и основные пути передачи сигналов от молекулярного базолатеральной стороне клеток, воспроизводя физиологическую ситуацию бактерий и распространителей , входящих в эпителиальные клетки через кровоток (Рисунок 1).

Клетки HIBCPP присущи определенные барь...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эпителиальные клетки CP образуют BCSFB, отделяющую CSF от 2,3 крови. Недавно мы установили клеточную линию HIBCPP в качестве функциональной человеческой модели BCSFB. Клетки отображения важных барьерные функции BCSFB в пробирке, в том числе развития высокого мембранного потенциала, низкой проницаемостью для макромолекул, а также наличие непрерывных нитей TJs 5. Белки TJ способствуют верхушечного / базолатеральная полярности клеток. Полярность имеет большое значение для направленной локализ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы поблагодарить профессора Хартвига Вольбурга за проведение электронной микроскопии.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0,25% Трипсин-ЭДТАGibco25200-056
4´,6 диамидино-2-фенилиндол (DAPI)Life TechnologiesD1306
12-луночные планшетыStarlabCC7682-7512
24-луночные планшетыStarlabCC7682-7524
Anti Neisseria meningitidis α-OMPЭто антитело было подарком от докторов Х. Клауса и У. Фогеля (University of Wü rzburg, Германия)
Alexa Fluor 488 (курица против кролика)InvitrogenA21441
Alexa Fluor 594 (курица против кролика)InvitrogenA21442
Alexa Fluor 660 ФаллоидинInvitrogenA22285
Бычья сыворотка альбумин (BSA)Calbiochem12659
Шоколадные агаровые тарелкиBiomerieux43109
Цитохалазин DSigmaC8273
DMEM/F12 + L-избыток + 15 мМ HEPESGibco31330-095
DMEM/F12 + L-избыток + 15 мМ HEPES без фенолредаGibco11039-047
ДиметилсульфоксидSigmaD2650
Фетальная сыворотка теленка (FCS)Life Technologies10270106
FITC-инулинSigmaF3272
ИнсулинSigma19278
MgCl2Sigma2393
NaHCO3Sigma55761
PBS + Mg + CaGibco14040-174
Пенициллин/стрептомицинMP Biomedicals1670049
PolyvitexBiomerieux55651
Proteose peptoneBD211684
бессывороточная средаGibco10902-096
Вкладыши для клеточных культур Thincert для 24-луночных планшетов, размер пор 3 и микро; mGreiner662630
Колба для культуры тканей 75 см² красная крышка стерильнаяGreiner658175
Triton X-100SigmaT8787
Вольт-Ом-метр Millicell-ERS2 с MERSSTX01 электродомMilliporeMERSSTX00

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Abott, N. J., Patabendige, A. A. K., Dolman, D. E. M., Yusof, S. R., Begley, D. J. Structure and function of the blood-brain barrier. Neurobiol Dis. 37, 13-25 (2009).
  2. Wolburg, H., Paulus, W. Choroid plexus: biology and pathology. Acta Neuropathol. 119, 75-88 (2010).
  3. Engelhardt, B., Sorokin, L. The blood-brain and the blood-cerebrospinal fluid barriers: function and dysfunction. Semin Imunopathol. 31, 497-511 (2009).
  4. Ishiwata, I., Ishiwata, C., Ishiwata, E., Sato, Y., Kiguchi, K., Tachibana, T., et al. Establishment and characterization of a human malignant choroid plexus papilloma cell line (HIBCPP). Hum Cell. 18, 67-72 (2005).
  5. Schwerk, C., Papandreou, T., Schuhmann, D., Nickol, L., Borkowski, J., Steinmann, U., et al. Polar invasion and translocation of Neisseria meningitidis and Streptococcus suis in anovel human model of the blood-cerebrospinal fluid barrier. PloS One. 7, e30069(2012).
  6. Bernd, A., Ott, M., Ishikawa, H., Schroten, H., Schwerk, C., Fricker, G. Characterization of efflux transport proteins of the human choroid plecus papilloma cell line HIBCPP, a functional in vitro model of the blood-cerebrospinal fluid barrier. Pharm Res. , (2014).
  7. Gründler, T., Quednau, N., Stump, C., Orian-Rousseau, V., Ishikawa, H., Wolburg, H., et al. The surface proteins InlA and InlB are interdependently required for polar basolateral invasion by Listeria monocytogenes in a human model of the blood-cerebrospinal fluid barrier. Microbes Infect. 15, 291-301 (2013).
  8. Schwerk, C., Tenenbaum, T., Kwang, S. K., Schroten, H. The choroid plexus - a multi-role player during infectious diseases of the CNS. Front Cell Neurosci. 9, 80(2015).
  9. Pron, B., Taha, M. K., Rambaud, C., Fournet, J. C., Pattey, N., Monnet, J. P., et al. Interaction of Neisseria meningtidis with the components of the blood-brain barrier correlates with increased expression of PilC. J Infect Dis. 176, 1285-1292 (1997).
  10. Guarner, J., Greer, P. W., Whitney, A., Shieh, W. J., Fischer, M., White, E. H., Carlone, G. M., et al. Pathogenesis and diagnosis of human meningococcal disease using immunohistochemical and PCR assays assays. Am J Clin Pathol. 122, 754-764 (2004).
  11. Pizarro-Cerda, J., Kuhbacher, A., Cossart, P. Entry of Listeria monocytogenes in mammalian epithelial cells: an updated view. Cold Spring Harb Perspect Med. 2, (2012).
  12. Beutler, B. Microbe sensing, positive feedback loops and the pathogenesis of inflammatory diseases. Immunol. Rev. 227, 248-263 (2009).
  13. Wilson, E. H., Weninger, W., Hunter, C. A. Trafficking of immune cells in the central nervous system. J Clin Invest. 120, 1368-1379 (2010).
  14. Meeker, R. B., Williams, K., Killebrew, D. A., Hudson, L. C. Cell trafficking through the choroid plexus. Cell Adh Migr. 6, 390-396 (2012).
  15. Borkowski, J., Li, L., Steinmann, U., Quednau, N., Stump-Guthier, C., Weiss, C., et al. Neisseria meningitidis elicits a pro-inflammatory response involving I kappa B zeta in a human blood-cerebrospinal fluid barrier model. J Neuroinflammation. 11, 163(2014).
  16. Steinmann, U., Borkowski, J., Wolburg, H., Schroppel, B., Findeisen, P., Weiss, C., et al. Transmigration of polymorphnuclear neutrophils and monocytes through the human blood-cerebrospinal fluid barrier after bacterial infection in vitro. J Neuroinflammation. 10, 30(2013).
  17. McGuiness, B. T., Clarke, I. N., Lambden, P. R., Barlow, A. K., Poolman, J. T., Heckels, J. E. Point mutation in meningococcal por A gene associated with increased endemic disease. Lancet. 337, 514-517 (1991).
  18. Ram, S., Cox, A. D., Wright, J. C., Vogel, U., Getzlaff, S., Boden, R. Neisserial lipopolysaccharide is a target for complement component C4b. inner core phosphoethanolamine residues define C4b linkage specificity. J Biol Chem. 278, 50853-50862 (2003).
  19. Claus, H., Maiden, M. C., Maag, R., Frosch, M., Vogel, U. Many carried meningococci lack the genes required for capsule synthesis and transport. Microbiology. 148, 1813-1819 (2002).
  20. Claus, H., Maiden, M. C., Wilson, D. J., Mccarthy, N. D., Jolley, K. A., Urwin, R., et al. Genetic analysis of meningococci carried by children and young adults. J Infect Dis. 191, 1263-1271 (2005).
  21. Tenenbaum, T., Papandreou, T., Gellrich, D., Friedrichs, U., Seibt, A., Adam, R., et al. Polar bacterial invasion and translocation of Streptococcus suis across the blood-cerebrospinal fluid barrier in vitro. Cell Microbiol. 11, 323-336 (2009).
  22. Laflamme, N., Echchannaoui, H., Landmann, R., Rivest, S. Cooperation between toll-like receptor 2 and 4 in the brain of mice challenged with cell wall components derived from gram-negative and gram-positive bacteria. Eur J Immunol. 33, 1127-1138 (2003).
  23. Laflamme, S., Rivest, S. Toll-like receptor 4: the missing link of the cerebral innate immune response triggered by circulating gram-negative bacterial cell wall components. FASEB J. 15, 155-163 (2001).
  24. Zughaier, S. M. Neisseria meningitidis capsular polysaccharides indice inflammatory responses via TLR2 and TLR4-MD-2. J Leukoc Biol. 89, 469-480 (2011).
  25. Yamamoto, M., Yamazaki, S., Uematsu, S., Sato, S., Hemmi, M., Hoshino, K., et al. Regulation of Toll/IL-1-receptor -mediated gene expression by the inducible nuclear protein IkappaBzeta. Nature. 430, 218-222 (2004).
  26. Lorenz, J., Zahlten, J., Pollok, I., Lippmann, J., Scharf, S., N'Guessan, P. D., et al. Legionella pheumophila-induced IkappaBzeta-dependent expression of interleukin-6 in lung epithelium. Eur Respir J. 37, 648-657 (2011).
  27. Jaerve, A., Muller, H. W. Chemokines in CNS injury and repair. Cell Tissue Res. 349, 229-248 (2012).
  28. Schneider, H., Weber, C. E., Schoeller, J., Steinmann, U., Borkowski, J., Ishikawa, H., et al. Chemotaxis of T-cells after infection of human choroid plexus papilloma cells with Echovirus 30 in an in vitro model of the blood-cerebrospinal fluid barrier. Virus Res. 170, 66-74 (2012).
  29. Chodobski, A., Szmydynger-Chodobska, J. Choroid plexus: Target for polypeptides and site of their synthesis. Microsc. Res. Tech. 52, 65-82 (2001).
  30. Dickson, P. W., Schreiber, G. High levels of messenger RNA for transthyretin (prealbumin) in human choroid plexus. Neurosci. Lett. 66, 311-315 (1986).
  31. Stylianopoulou, F., Herbert, J., Soares, M. B., Efstratiadis, A. Expression of the insulin-like growth factor II gene in the choroid plexus and the leptomeninges of the adult rat central nervous system. Proc Natl Acad Sci USA. 85, 141-145 (1988).
  32. Lim, L., Zhou, H., Costa, R. H. The winged helix transcription factor HFH-4 is expressed during choroid plexus epithelial development in the mouse embryo. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 94, 3094-3099 (1997).
  33. Vandenhaute, E., Stump-Guthier, C., Lasierra Losada, M., Tenenbaum, T., Rudolph, H., Ishikawa, H., et al. The choroid plexus may be an underestimated site of tumor invasion to the brain: an in vitro study using neuroblastoma cell lines. Cancer Cell Int. , 15-102 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Neisseria meningitidisFITCZO 1

Похожие статьи