Бедро Window камера Модель<em&gt; В Vivo</em&gt; Отслеживание Cell в мышиных костного мозга

Yonghong Chen; Azusa Maeda; Jiachuan Bu; Ralph DaCosta

doi:10.3791/54205

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Бедро Window камера Модель

7.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54205

⸱

28 июля 2016 г.

Yonghong Chen^*¹ , Azusa Maeda^*¹^,² , Jiachuan Bu¹ , Ralph DaCosta¹^,²^,³

¹Princess Margaret Cancer Centre, ²Department of Medical Biophysics, University of Toronto, ³Techna Institute, University Health Network

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Протокол описывает новую модель оконной камеры бедренной кости мыши, которую можно использовать для отслеживания движения клеток в бедренном костном мозге in vivo. Прижизненная многофотонная флуоресцентная микроскопия используется для визуализации трех компонентов бедренного костного мозга (сосудистой сети, коллагенового матрикса и нейтрофилов) с течением времени.

Аннотация

Костный мозг — сложный орган, который содержит различные кроветворные и некроветворные клетки. Эти клетки участвуют во многих биологических процессах, включая кроветворение, иммунную регуляцию и регуляцию опухолей. Обычно используемые методы для понимания клеточных действий в костном мозге, такие как гистология и анализ крови, предоставляют статическую информацию, а не фиксируют динамическое действие нескольких клеточных компонентов in vivo. В дополнение к стандартным методам была разработана модель на основе оконной камеры (WC), позволяющая проводить последовательную визуализацию in vivo клеток и структур в костном мозге мышей. Этот протокол описывает хирургическую процедуру установки туалета в бедренную кость с целью обеспечения долгосрочного оптического доступа к бедренному костному мозгу. В частности, чтобы продемонстрировать свою экспериментальную полезность, этот подход WC был использован для визуализации и отслеживания нейтрофилов в сосудистой сети бедренной кости, тем самым обеспечив новый метод визуализации и количественной оценки транспорта и регуляции иммунных клеток в костном мозге. Этот метод может быть применен для изучения различных биологических процессов в костном мозге мышей, таких как кроветворение, трансплантация стволовых клеток и иммунные реакции при патологических состояниях, включая рак.

Введение

Костный мозг является важным органом участвует в кроветворении и регуляции иммунной системы. Он состоит из компонента , содержащего кроветворной гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток (HSPCs) и стромальных компонент , содержащий не-кроветворных клеток - предшественников , которые приводят к мезенхимальных клеток ^1. Две трети кроветворной деятельности посвящена поколению миелоидных клеток ^2. В частности, большое количество нейтрофилов в костном мозге, при 1-2 х 10 ¹¹ клеток , полученных в день в нормального взрослого человека ^2. Нейтрофилы являются первой линией защиты от микробной инфекции и в основном сохраняются....