Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Nephrotoxin Микроинъекция в данио рерио к модели острое повреждение почек

8.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54241

⸱

17 июля 2016 г.

 , 
1Center for Zebrafish Research, Department of Biological Sciences, University of Notre Dame, 2Center for Stem Cells and Regenerative Medicine, Department of Biological Sciences, University of Notre Dame

В этой статье

Краткое содержание

Почечная травмы, понесенные от нефротоксинов, которые включают в себя препараты, начиная от антибиотиков до химиопрепаратов, может привести к сложных расстройств, чьи патогенез остается не полностью понята. Этот протокол показывает, как данио могут быть использованы для моделирования заболеваний этих условий, которые могут быть применены к идентификации ренопротективных мер.

Аннотация

Почки подвержены вред от воздействия химических веществ, они отфильтровывают из крови. Это может привести к травме органа, связанного с быстрым снижением функции почек и развития клинического синдрома, известного как острое повреждение почек (AKI). Фармакологические средства, используемые для лечения медицинских условий, начиная от бактериальной инфекции, рака, при введении по отдельности или в комбинации с другими препаратами, может инициировать AKI. Рерио являются полезной животной моделью для изучения химического воздействия на функцию почек в естественных условиях, так как они образуют эмбриональной почки , состоящую из нефрона функциональных блоков, которые сохраняются с высших позвоночных, включая человека. Кроме того, данио могут быть использованы для выполнения генетических и химических экранов, которые обеспечивают возможности для выяснения клеточные и молекулярные аспекты AKI и разработки терапевтических стратегий, таких как идентификация нефропротективные молекул. Здесь мы покажем, как микроинъекции вданио эмбриона может быть использован в качестве парадигмы для исследований nephrotoxin.

Введение

AKI резкое потеря функции почек , что может привести к разрушительным последствиям для здоровья 1. AKI является серьезной проблемой здравоохранения во всем мире из - за его высокой заболеваемости примерно на 20% среди госпитализированных пациентов с еще более высокими темпами 30-50% в случаях интенсивной терапии и пожилых людей, а также показатели смертности 50-70% 1-3. К сожалению, распространенность AKI растет и, по прогнозам, к дальнейшей эскалации в течение следующего десятилетия, отчасти из-за многообразия факторов, которые могут вызвать AKI, которые включают в себя послеоперационный стресс, ишемию и подверженность воздействию нефротоксинов, таких как антибиотики и химиотерапевтические препараты 4.

AKI включает в себя внезапное повреждение клеток внутри почки, обычно встречающихся в нефронов, которые являются необходимыми функциональными единицами, и состоят из фильтра крови и сегментированным трубочку , которая стекает мочу в центральные канальцев 1. Когда значительное количество нефроновповреждения во время AKI, непосредственные эффекты включают прерывание клиренса отходов из обращения, а также снижение или отменяться потока жидкости через нефронов вследствие обструкции из мертвых и умирающих клеток 1. Со временем, трубчатая обструкция может привести к вырождению целых нефронов, которая постоянно снижает функцию почек 1. Физиологические изменения в почках следующие AKI также включать в себя сложные воспалительные явления , которые могут привести к хроническому рубцеванию 1.

Несмотря на эти результаты, нефронов имеют некоторую способность пройти регенерацию после AKI , что воссоздает трубчатый эпителий 5,6. В то время как наблюдается увеличение молекулярного понимания регенерации нефрона, механизмы остаются неуловимыми во многих отношениях и обусловливают необходимость продолжали расследование 7. Степень, в которой результаты AKI в постоянное повреждение почек также остается неизвестным. Текущие исследования показывают, восстановительный потенциал для почек являетсявысокий следующие менее серьезные случаи AKI, в то время как более выраженные или повторные эпизоды приводят к хроническим заболеванием почек (ХБП) и завершаются в терминальной стадии почечной недостаточности (ТПН) , что требует спасения жизни трансплантации или диализ 8,9. Кроме того, люди , уже страдающие от CKD находятся на еще более высокий риск заражения серьезный эпизод AKI 8,9. Взятые вместе, то ясно, что по-прежнему фундаментальные и клинические исследования имеет жизненно важное значение для понимания, лечения и профилактики AKI.

Исследования с моделями животных играет важную роль в оценивая развитие местных и экологических изменений , которые происходят во время AKI 10. Для того, чтобы расширить это понимание, а также разработать новые методы лечения, то данио модель животного была использована в различных формах 11,12. В нефронов данио почки, в обоих эмбриона и взрослого, показывают высокий уровень сохранности с млекопитающих 13-16. Кроме того, нефрона эпителиальной травмы в геbrafish напоминает процесс в высших позвоночных животных, в результате чего происходит локальное разрушение трубчатых клеток с последующим внутриканального пролиферации и восстановления нефрона архитектуры 17-19. У эмбрионов, однако, значительный ущерб трубочка от нефротоксинов как цисплатин связано с летальностью 20,21. Для сравнения, данио взрослые выживают AKI и демонстрируют существенные регенеративные способности в почках. Например, после воздействия аминогликозидов гентамицин антибиотика, данио регенерировать канальцев повреждения эпителиального и вырастить новые блоки нефрона, а 22-24. В то время как эти гентамицин-индуцированная исследования AKI предоставили ценную информацию, понимание почек ущерб от различных нефротоксинов остается критическим , чтобы оценить последствия и реакцию на различные типы повреждений 25.

Данио эмбриона, из-за его размера, прозрачности и генетической сговорчивости, имеет много преимуществ для исследований nephrotoxin 25, где метод микроинъекции 20,21 используется для администрирования молекулы (ы) для исследования. Нефронов формируются на 24 ч после оплодотворения (ФВЧ) и начинают фильтровать кровь примерно 48 HPF 26,27. Таким образом, быстрое формирование и функционирование почек эмбриона облегчает экспериментальный анализ. Тем не менее, процесс микроинъекции имеет технические проблемы, и может быть крутой кривой обучения для овладения техникой. В этом видео статье мы опишем, как выполнять микроинъекций и предоставлять советы по устранению неполадок, с тем чтобы повысить скорость успешных инъекций.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Процедуры для работы с эмбрионов данио, описанных в этом протоколе были одобрены по уходу и использованию комитета Institutional животных путем в Университете Нотр-Дам.

1. Приготовление растворов

  1. Сделать 50x маточного раствора Е3 эмбрионов сред путем смешивания 73,0 г NaCl, 3,15 г KCl, 9,15 г CaCl 2 и 9,95 г MgSO 4 в 5 л дистиллированной воды, и хранить при комнатной температуре.
  2. Для культивирования эмбрионов данио, разбавить 50x маточного раствора Е3 эмбрион медиа запаса для рабочего раствора 1x с дистиллированной водой, а затем добавляют 200 мкл 0,05% метиленовым синим на каждый 1 л 1x E3 выступать в качестве фунгицида, и хранить при RT.
  3. Сделать пигментации блокирующий раствор E3 эмбрионов сред с 0,003% 1-фенил-2-тиомочевины (PTU) путем объединения 40 мл 50Х E3 запаса с 0,06 мг PTU. Затем довести объем в общей сложности до 2 л дистиллированной водой.
  4. Перемешать E3 / PTU O / N при комнатной температуре, чтобы получить порошок PTU в раствор. Затем сохраните E3 / PTU вRT.
    Примечание: E3 / PTU имеет срок годности приблизительно в одну неделю, а более старые решения будут менее эффективны при блокировании развитие пигментации в данио личинок.
  5. Сделать анестезирующий раствор 0,2% Tricaine (MS-222) путем добавления 1 г Tricaine к 500 мл дистиллированной воды и доведения рН до 7,2 с помощью 1 М Трис, рН 9,5.
  6. Готовят сделать 2% -ный раствор метилцеллюлозы для визуализации путем размещения раствора 1x E3 (без метиленовый синий), с 1/10 объема Tricaine добавляют при температуре 4 ° С 0,2%.
    Примечание: метилцеллюлоза раствор представляет собой толстый, прозрачный раствор, который используется для стабилизации мягко живых эмбрионов для микроскопии. После того, как манипуляции выполняются эмбрионы можно мыть в 1x E3, чтобы растворить метилцеллюлозы, не повредив животное и позволяет микроскопии на последующих этапах в том же образце.
  7. При охлаждении до 4 ° С, перемешайте раствор 1x Е3 / Tricaine энергично на мешалке и постепенно добавляют соответствующее количество метилового эфирапорошок целлюлозы, продолжая энергично перемешать. Постепенно добавлять порошок к раствору, чтобы предотвратить образование нерастворимых агрегатов из метилцеллюлозы.
  8. После того, как весь порошок смешивают в 2% растворе метилцеллюлозы / E3 / Tricaine, размешать композиционный раствор в 4 ° C холодном помещении O / N.
    Примечание: Холодная температура лучше всего подходит для полного растворения порошка. Если раствор не ясно, после одной ночи, перемешивают еще в течение рабочего дня и / или второй O / N.
  9. Для того, чтобы удалить пузырьки воздуха из 2% метилцеллюлозы / раствора / Tricaine E3, аликвоты смеси в 1,5 мл пробирки и отжим на высокой скорости (12000 х г) при температуре 4 ° С в течение 30 мин или до 2 часов.
  10. Поместите 2% метилцеллюлозы решение / E3 / Tricaine при 4 ° С для длительного хранения.
    Примечание: Перед использованием аликвоты должны быть предварительно нагреты до комнатной температуры для работы с данио образцов.

2. Подготовка инструментов

  1. Подготовьте инструмент эмбрион манипулятором, используемый для роsitioning эмбрионов для микроинъекции, путем прикрепления наконечника гель нагрузки на конце "прямой рассекает иглы 5, и закрепите скотчем или суперклеем.
  2. Приготовьте иглы микроинъекции с помощью иглы съемника, предварительно поместив огонь полированные 10 см из боросиликатного стекла с нитью в прибор и закрепить боросиликатного стекла путем затягивания ручки.
  3. Вытащите из боросиликатного стекла моды тонкой иглы клиновидные. Используйте следующие параметры: нагреть 540, тянуть 245, скорость 200 и время 125.
  4. Место иглы внутри чашки Петри, суспендирующие их на полосу пластилина, чтобы защитить кончики игл, и держать блюдо покрытые, чтобы предотвратить накопление пыли.
  5. Для того, чтобы завершить подготовку иглы для микроинъекции, используйте лезвия бритвы или тонким пинцетом край, чтобы отрезать притянутое конец иглы, чтобы создать острый наконечник угловой инъекции с диаметром приблизительно 0,05-0,1 мм.
  6. Для того, чтобы лоток микроинъекции, подготовить 1,5% раствора агарозы / E3 в 100 мл колбу Эрленмейера и растворить агарозы путем нагревания E3 до кипения в микроволновой печи затем дают остыть при комнатной температуре в течение приблизительно 10 мин.
  7. Налейте охлажденный раствор агарозы / E3 в чашку Петри, чтобы сделать фундамент с глубиной около 0,5 см. Когда затвердеет налить второй слой на глубину приблизительно 0,3 см и вставьте фабрично форму эмбриона хорошо и позволяют агарозном затвердевать при комнатной температуре.
    Примечание: При вставке пресс-формы в верхний слой агара / E3, поместив пресс-формы в агар под углом, чтобы уменьшить количество пузырьков воздуха.
  8. Когда весь лоток микроинъекции установил, поднимите сборный эмбрион хорошо лепить медленно и осторожно, используя Кулинарная лопатка, а затем заполнить блюдо с раствором Е3 и хранить при температуре 4 ° С.

3. Эмбрион Приготовление

  1. Настройка данио сопрягаемые танков путем размещения разделителей в брачных камер и залить водой системы.
  2. Поместите одну рыбу на каждой стороне делителя сУч, что каждая камера содержит спаривание одна женщина и один самец рыбы, и покрывают каждую сопрягаемую камеру.
  3. На следующее утро, удалить разделители, чтобы включить нерест.
  4. Проверьте рыбу примерно через 30 минут, а после возвращения взрослых в аквариум, собирать их эмбрионов, пропуская спаривание резервуар для воды через тонкий инструмент ситечко из проволочной сетки.
  5. Обратить сетчатый фильтр над чашку Петри и полоскание с E3 для сбора эмбрионов.
  6. Инкубируйте эмбрионов на 28,5 ° CO / N.
  7. Когда эмбрионы достигли 24-26 сомитов 26, переливать большинство средств массовой информации E3 , а затем dechorionate путем добавления 100 мкл 50 мг / мл проназой каждую чашку эмбрионов и инкубирование блюдо при комнатной температуре (23 ° С) в течение приблизительно 15 минимум
    Примечание: Это займет около 24-25 ч с момента оплодотворения для эмбрионов, чтобы достичь стадии 24-26 сомита, если они собраны в том же порядке и инкубировали O / N при 28,5 ° C.
  8. Заполните блюдоE3, а затем циркулировать осторожно, чтобы выбить хорионов из эмбрионов.
  9. Слейте E3 / проназу и полоскание блюдо с 25 мл свежей Е3. Повторите шаг для ополаскивания, чтобы удалить все проназу.
  10. Для того, чтобы блокировать развитие пигментации, переливать E3 и заменить 25 мл свежего E3 / PTU, когда зародыши, достигшие 24 часов после оплодотворения.
    Примечание: Для экспериментов на протяжении нескольких дней, заменить решение E3 / PTU со свежей средой один раз в день, чтобы держать блюдо в чистоте.

4. Микроинъекция Nephrotoxin Solution

  1. В день инъекции, готовят искомое решение nephrotoxin вместе с соответствующим управления транспортным средством.
  2. Вихревой или осторожно перемешать, чтобы обеспечить препарата (ов) / находятся в растворе, проверяя сторонах трубы и верхней части столба воды.
    Примечание: Nephrotoxin растворы могут быть приготовлены, чтобы содержать следовые количества флуоресцентной сопряженного декстрана для мониторинга эффективности микроинъекции, а также оценить почечный клиренс на после-uent раз указывает 20,28.
  3. Загрузите обрезанный микроинъекции иглу с ~ 2-3 мкл nephrotoxin, продев тонкий гель загрузки наконечник в задней части иглы и приостановить иглу вертикально кусок ленты, чтобы позволить раствору, чтобы заполнить обрезанного кончик иглы под действием силы тяжести.
  4. После того, как кончик иглы полон, обеспечить загруженную иглу в микроманипулятора.
  5. Проверьте громкость микроинъекции путем размещения каплю минерального масла на микрометрическим слайде и вводят в масло для оценки размера капель. Вводимый объем 500 мкл имеет диаметр 0,1 мм.
  6. Удалите блюдо из эмбрионов из инкубатора и обезболить, добавляя приблизительно 5 мл 0,2% Tricaine к эмбриону блюдо.
  7. Для того, чтобы обеспечить полное обезболивание, осторожно потрогать эмбриона с кончиком инструмента эмбрион манипулятором. Отсутствие движения указывает на достаточное обезболивание.
  8. После успешного обезболиванием, переноса эмбрионов литья под давлением с элеменэр пипетку.
  9. Маневр каждого эмбриона в другую лунку формы размещения головки в самой глубокой части скважины таким образом, что ствол лежит вдоль впадины, а хвост торчит из депрессии.
  10. Вставьте заполненную иглу в микроманипулятора и поместите кончик иглы рядом с эмбрионом.
  11. Осторожно вставьте иглу в хвост судна, перемещая джойстик вперед и нажать на педаль, чтобы доставить микроинъекции.
    Примечание: Успешное инъекции можно судить, наблюдая жидкости входят в обращение. Кроме того, совместное введение в nephrotoxicant с флуоресцентной сопряженного декстрана позволяет исследователю проверки успешной инъекции последующей процедуры.
  12. Осторожно потяните на джойстик, чтобы удалить иглу из эмбриона.
  13. После инъекции переноса эмбрионов в чистую чашку и промойте, чтобы удалить Tricaine и заменить свежим E3 / PTU.
  14. Выдержите эмбриона к нужной точке времени на ослахs морфологии, которые могут быть задокументированы фотографии в метилцеллюлозы монтажа средств массовой информации, или процесса для экспериментального анализа, как хотелось бы.
    Примечание: Восстановление эмбрионов должны быть оценены, чтобы определить процент лиц с отеком, который обычно указывает на повреждение почек.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Микроинъекции станция создана включает в себя Стереомикроскоп микроманипулятор и регулятор давления (Рис . 1А) Просвечивание инъекционной пластины , предпочтительно , чтобы просмотреть образцы во время этой процедуры (Фиг.1В). Приготовление инъекционной иглы включает потянув соответствующий боросиликатного стекла, а затем готовит кромку резки и, наконец, обратно загрузкой иглы. Оптимально, кончик иглы скошена , а не тупой (рис 1C...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Разнообразная количество терапевтических агентов были связаны с AKI 29. Там были достигнуты значительные научные успехи в понимании ущерба , индуцированный многими отдельными соединениями, такими как аминогликозиды гентамицин 30 и широко используемого химиотерапевтического цисплатин 31,32. Некоторые патологические изменения, участвующие в этих условиях, однако, остаются предметом продолжающегося исследования. Одна эмерджентное проблема остается понимание того, как несколько препаратов от...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была частично поддержана грантом DP2OD008470 NIH. Кроме того, оперативная память была частично поддержана за счет средств, предусмотренных в Университете Нотр-Дам Высшая школа. Мы благодарим штабы Отделения биологических наук, Центр исследований данио рерио, и Центром стволовых клеток и регенеративной медицины в Университете Нотр-Дам. Мы особенно благодарны членам лаборатории за участие дискуссии по поводу почек биологии и их полезные отзывы об этой работе.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Хлорид натрияАмериканский биоаналитическийAB01915
Хлорид калияАмериканский биоаналитическийAB01652
Хлорид кальцияАмериканский биоаналитическийAB00366
N-фенилтиомочевина (PTU)Aldrich ChemistryP7629
этил3-аминобензоат (трикаин)Fluka AnalyticalA5040
Боросиликатное стеклоSutter Instruments Co.BF100-50-10
Пылающий/коричневый пуллер микропипетокSutter Instruments Co.Mo. P097
UltraPure AgaroseInvitrogen15510-027
Сульфат магнияSigma-AldrichM7506
Метиленовый синийSigma-AldrichM9140
Falcon Одноразовые чашки Петри, стерильные, Corning:
60 мм x 15 ммVWR25373-085
100 мм x 15 ммVWR25373-100
 ( лоток для микроинъекций) 150 мм x 15 ммVWR25373-187
Низкотемпературный инкубаторFischer Scientific11 690 516DQ
Микродиссекционный пинцетRoboz Surgical Instruments Co.RS-5010
МикрометрТед Пелла, Инк.2280-24
гг.

Ссылки

  1. Basile, D. P., Anderson, M. D., Sutton, T. A. Pathophysiology of acute kidney injury. Compr. Physiol. 2, 1303-1353 (2012).
  2. Ostermann, M. Diagnosis of acute kidney injury: kidney disease improving global outcomes criteria and beyond. Curr. Opin. Crit. Care. 20, 581-587 (2014).
  3. Fluck, R. J. Acute kidney: improving the pathway of care for patients and across healthcare. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 24, 511-516 (2015).
  4. Silver, S. A., Cardinal, H., Colwell, K., Burger, D., Dickhout, J. G. Acute kidney injury: preclinical innovations, challenges, and opportunities for translation. Can. J Kidney Health Dis. 2, 30(2015).
  5. McCampbell, K. K., Wingert, R. A. Renal stem cells: fact or science fiction? Biochem. J. 444, 153-168 (2012).
  6. Li, Y., Wingert, R. A. Regenerative medicine for the kidney: stem cell prospects and challenges. Clin. Transl. Med. 2, 11(2013).
  7. Romagani, P., Lasagni, L., Remuzzi, G. Renal progenitors: an evolutionary conserved strategy for kidney regeneration. Nat. Rev. Nephrol. 9, 137-146 (2013).
  8. Kline, J., Rachoin, J. S. Acute kidney injury and chronic kidney disease: it's a two-way street. Ren. Fail. 35, 452-455 (2013).
  9. Chawla, L. S., Kimmel, P. L. Acute kidney injury and chronic kidney disease: an integrated clinical syndrome. Kidney Int. 82, 516-524 (2012).
  10. Sanz, A. B., Sanchez-Niño, M. D., Martìn-Cleary, C., Ortiz, A., Ramos, A. M. Progress in the development of animal models of acute kidney injury and its impact on drug discovery. Expert Opin. Drug Discov. 8, 879-895 (2013).
  11. McCampbell, K. K., Wingert, R. A. New tides: using zebrafish to study renal regeneration. Transl Res. 163, 109-122 (2014).
  12. McKee, R. A., Wingert, R. A. Zebrafish renal pathology: emerging models of acute kidney injury. Curr. Pathobiol. Rep. 3, 171-181 (2015).
  13. Wingert, R. A., et al. The cdx genes and retinoic acid control the positioning and segmentation of the zebrafish pronephros. PLoS Genet. 3, 1922-1938 (2007).
  14. Wingert, R. A., Davidson, A. J. The zebrafish pronephros: a model to study nephron segmentation. Kidney Int. 73, 1120-1127 (2008).
  15. Wingert, R. A., Davidson, A. J. Zebrafish nephrogenesis involves dynamic spatiotemporal expression changes in renal progenitors and essential signals from retinoic acid and irx3b. Dev Dyn. 240, 2011-2027 (2011).
  16. McCampbell, K. K., Springer, K. N., Wingert, R. A. Analysis of nephron composition and function in the adult zebrafish kidney. J. Vis. Exp. (90), e51644(2014).
  17. Johnson, C. S., Holzemer, N. F., Wingert, R. A. Laser ablation of the zebrafish pronephros to study renal epithelial regeneration. J. Vis. Exp. (54), e2845(2011).
  18. Palmyre, A., et al. Collective epithelial migration drives kidney repair after acute injury. PLoS One. 9, e101304(2014).
  19. Fogelgren, B., et al. Exocyst Sec10 protects renal tubule cells from injury by EGFR/MAPK activation and effects on endocytosis. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 307, F1334-F1341 (2014).
  20. Hentschel, D. M., Park, K. M., Cilenti, L., Zervox, A. S., Drummond, I. A., Bonventre, J. V. Acute renal failure in zebrafish: a novel system to study a complex disease. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 288, F923-F929 (2005).
  21. Cosentino, C. C., Roman, B. L., Drummond, I. A., Hukriede, N. A. Intravenous microinjections of zebrafish larvae to study acute kidney injury. J. Vis. Exp. (42), e2079(2010).
  22. Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebrafish. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 299, F1040-F1047 (2010).
  23. Diep, C. Q., et al. Identification of adult nephron progenitors capable of kidney regeneration in zebrafish. Nature. 470, 95-101 (2011).
  24. McCampbell, K. M., Springer, K. N., Wingert, R. A. Atlas of cellular dynamics during zebrafish adult kidney regeneration. Stem Cell Int. , 547636(2015).
  25. Sharma, P., Sharma, S., Patial, V., Singh, D., Padwad, Y. S. Zebrafish (Danio rerio): a potential model for nephroprotective drug screening. Clinical Queries: Nephrol. 3, 97-105 (2014).
  26. Gerlach, G. F., Wingert, R. A. Kidney organogenesis in the zebrafish: insights into vertebrate nephrogenesis and regeneration. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2, 559-585 (2013).
  27. Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).
  28. Hanke, N., et al. 'Zebrafishing' for novel genes relevant to the glomerular filtration barrier. Biomed. Res. Int. 2013, 658270(2013).
  29. Kane-Gill, S. L., Goldstein, S. L. Drug-induced acute kidney injury: a focus on risk assessment for prevention. Crit. Care Clin. 31, 675-684 (2015).
  30. Lopez-Novoa, J. M., Quiros, Y., Vicente, L., Morales, A. I., Lopez-Hernandez, F. J. New insights into the mechanism of aminoglycoside nephrotoxicity: an integrative point of view. Kidney Int. 79, 33-45 (2010).
  31. Ozkok, A., Edelstein, C. L. Pathophysiology of cisplatin-induced acute kidney injury. Biomed. Res. Int. 2014, 967826(2014).
  32. Perazella, M. A., Moeckel, G. W. Nephrotoxicity from chemotherapeutic agents: clinical manifestations, pathobiology, and prevention/therapy. Semin. Nephrol. 30, 570-581 (2010).
  33. Cheng, C. N., Verdun, V. A., Wingert, R. A. Recent advances in elucidating the genetic mechanisms of nephrogenesis using zebrafish. Cells. 4, 218-233 (2015).
  34. Pickart, M. A., Klee, E. W. Zebrafish approaches enhance the translational research tackle box. Transl. Res. 163, 65-78 (2014).
  35. Cheng, C. N., Li, Y., Marra, A. N., Verdun, V., Wingert, R. A. Flat mount preparation for observation and analysis of zebrafish embryo specimens stained by whole mount in situ hybridization. J. Vis. Exp. (89), e51604(2014).
  36. Galloway, J. L., Wingert, R. A., Thisse, C., Thisse, B., Zon, L. I. Combinatorial regulation of novel erythroid gene expression in zebrafish. Exp. Hematol. 36, 424-432 (2008).
  37. McKee, R., Gerlach, G. F., Jou, J., Cheng, C. N., Wingert, R. A. Temporal and spatial expression of tight junction genes during zebrafish pronephros development. Gene Expr. Patterns. 16, 104-113 (2014).
  38. Li, Y., Cheng, C. N., Verdun, V. A., Wingert, R. A. Zebrafish nephrogenesis is regulated by interactions between retinoic acid, mecom, and Notch signaling. Dev. Biol. 386, 111-122 (2014).
  39. Gerlach, G. F., Wingert, R. A. Zebrafish pronephros tubulogenesis and epithelial identity maintenance are reliant on the polarity proteins Prkc iota and zeta. Dev. Biol. 396, 183-200 (2014).
  40. Cheng, C. N., Wingert, R. A. Nephron proximal tubule patterning and corpuscles of Stannius formation are regulated by the sim1a transcription factor and retinoic acid in the zebrafish. Dev. Biol. 399, 100-116 (2015).
  41. Lessman, C. A. The developing zebrafish (Danio rerio): A vertebrate model for high-throughput screening of chemical libraries. Birth Defects Res. C Embryo Today. 93, 268-280 (2011).
  42. Poureetezadi, S. J., Wingert, R. A. Congenital and acute kidney disease: translational research insights from zebrafish chemical genetics. Gen. Med. 1, 112(2013).
  43. Poureetezadi, S. J., Donahue, E. K., Wingert, R. A. A manual small molecule screen approaching high-throughput using zebrafish embryos. J. Vis. Exp. (93), e52063(2014).
  44. Peng, H. C., Wang, Y. H., Wen, C. C., Wang, W. H., Cheng, C. C., Chen, Y. H. Nephrotoxicity assessments of acetaminophen during zebrafish embryogenesis. Comp. Biochem. Physiol. C Toxicol. Pharmacol. 151, 480-586 (2010).
  45. Wu, T. S., Yang, J. J., Yu, F. Y., Liu, B. H. Evaluation of nephrotoxic effects of mycotoxins, citrinin and patulin, on zebrafish (Danio rerio) embryos. Food Chem. Toxicol. 50, 4398-4404 (2012).
  46. Ding, Y. J., Chen, Y. H. Developmental nephrotoxicity of aristolochic acid in a zebrafish model. Toxicol. Appl. Pharmacol. 261, 59-65 (2012).
  47. Zennaro, C., et al. Podocyte developmental defects caused by adriamycin in zebrafish embryos and larvae: a novel model of glomerular damage. PLoS One. 9, e98131(2014).
  48. Ding, Y. J., Sun, C. Y., Wen, C. C., Chen, Y. H. Nephroprotective role of resveratrol and ursolic acid in aristolochic acid intoxicated zebrafish. Toxins. 7, 97-109 (2015).
  49. Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function. J. Vis. Exp. (27), e1115(2009).
  50. Yuan, S., Sun, Z. Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos. J. Vis. Exp. (27), e1113(2009).
  51. Christou-Savina, S., Beales, P. L., Osborn, D. P. Evaluation of zebrafish kidney function using a fluorescent clearance assay. J. Vis. Exp. (96), e52540(2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Микроинъекции эмбрионов данио-рериовоздействие нефротоксиновманипуляции с эмбрионамииглы для микроинъекцийраствор E3 с агарозойобработка гентамициномвоздействие цисплатиномоценка отекавизуализация методом трансillumination
Nephrotoxin Микроинъекция в данио рерио к модели острое повреждение почек
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.