Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

In Vitro Проникновение ФИТЦ-нагруженных ферритинов через Rat гематоэнцефалический барьер: модель для изучения Поставка Nanoformulated Molecules

7.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54279

⸱

22 августа 2016 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Dipartimento di Scienze Biomediche e Cliniche Luigi Sacco, Università di Milano, 2Dipartimento di Biotecnologie e Bioscienze, Università di Milano-Bicocca

В этой статье

Краткое содержание

Описан и валидирован метод создания in vitro модели гематоэнцефалического барьера на основе совместной культуры микрососудистых эндотелиальных клеток и астроцитов мозга крысы. Эта система оказалась валидным инструментом для изучения влияния нанорецептуры на трансбарьерное проникновение флуоресцентных молекул.

Аннотация

Микрососудистые эндотелиальные клетки головного мозга, поддерживаемые перицитами и астроцитами на концах, отвечают за низкое проникновение больших гидрорастворимых препаратов через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ), что вызывает трудности для эффективной фармакологической терапии. В последние годы различные стратегии продвижения мозгового нацеливания были направлены на улучшение доставки лекарств и активности в этом месте, включая инновационные наносистемы для доставки лекарств через ГЭБ. В этом контексте подход in vitro, основанный на упрощенной клеточной модели ГЭБ, предоставляет полезный инструмент для исследования влияния нанопрепаратов на проникновение транс-ГЭБ в молекулы. В этом исследовании описывается разработка двухслойного ГЭБ, состоящего из совместно культивируемых коммерчески доступных первичных микрососудистых эндотелиальных клеток мозга крысы и астроцитов. Также описан многопараметрический подход к валидации модели, основанный на измерении трансэндотелиального электрического сопротивления и кажущейся проницаемости высокомолекулярного декстрана. В качестве доказательства концепции использования этой модели ГЭБ для изучения влияния различных наносоставов на транслокацию флуоресцентных молекул через барьер мы описываем использование флуоресцеина изотиоцианата (ФИТК), загруженного в наночастицы ферритина. Способность ферритинов улучшать транс-ГЭБ проникновение FITC была продемонстрирована с помощью измерений потока и конфокального микроскопического анализа. Результаты показывают, что это полезная система для валидации наносистем для доставки лекарств через ГЭБ.

Введение

Сопротивление центральной нервной системы (ЦНС) , заболевания (т.е.. Рак, эпилепсия, депрессия, шизофрения и ВИЧ-ассоциированные неврологические расстройства) к фармакологической терапии из - за различных различных механизмов, в том числе трудного проникание лекарственного средства через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) , ВВВ является границей, которая изолирует ткани мозга от веществ, циркулирующих в крови. В пределах этого барьера, слой мозга микрососудистых эндотелиальных клеток (BMECs), поддержанный перицитов и астроцитов endfeet, отвечает за высокой селективности ВВВ до тех водорастворимыми препаратами с молекулярной массой выше , чем 400 Да 1. Другой механизм сопротивления , связанное с наркотиками связано с наличием на BMECs истече- наркотиков транспортеров (Р-гликопротеина и множественной лекарственной устойчивости белков), которые сотрудничают с целью уменьшения проникновения наркотиков в ЦНС и облегчить их выдавливание из мозга 2.

В последнее десятилетие, Большое количество нанотехнологических подходов были разработаны для удовлетворения клинической и биологической проблемой доставки лекарств через ВВВ 3-6. В этом контексте, ферритин наносферы (БНС) представляют собой совершенно инновационное и перспективное решение. FNn 12 нм сферы 24 самосборки ферритина (Fn) мономеров, которые расположены в полой сферической структуре 8 нм внутреннего диаметра. Ферритина субъединиц могут быть разобраны при кислом рН и вновь в моде памяти формы путем доведения рН до нейтральности, позволяя различные органические молекулы быть воплощен. Поэтому БНС представляют собой интересную модель для развития многофункциональной системы доставки лекарственных средств 7,8. Кроме того, БНС может взаимодействовать с BMECs благодаря специфическим узнаванием рецептора трансферрина (TfR) 1, который экспрессируется на полостной мембране этих клеток 9.

До сих пор, по- разному в пробирке моделей ГЭБ были разработаны в Ordeг выяснить транс-ВВВ проницаемость для различных препаратов, токсичность по отношению к ВВВ, или взаимодействия молекул с эффлюксных транспортеров. Действительно, эти модели считаются действительными в пробирке подходы для быстрого скрининга активных молекул , прежде чем приступить к исследованиям в естественных условиях. Эти модели состоят из одного эндотелиального слоя BMECs или совместно культивировали BMECs и астроцитов (реже перицитов), полученные от животных (крысы, мыши, свиньи и бычий) или клеточные линии человека 10,11,12. Трансэндотелиальную Электрическое сопротивление (TEER) и кажущаяся проницаемость (P приложение) трассеров с определенной молекулярной массой представляют собой две критические параметры, которые используются для определения качества модели в пробирке. Здесь мы описываем занятость в ВВВ модели в пробирке, основанный на совместной культуре крысы BMECs (RBMECs) и коры головного мозга крыс астроциты (Rcas) для изучения транс-ВВВ проникания ферритина наноклеток заключающую флуоресцеина isothiocyanate (FITC).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Создание модели ВВВ

Примечание: Для создания модели ВВВ мы предлагаем использовать коммерчески доступные первичные RBMECs и Rcas. Все шаги должны быть выполнены стерильными реагентами и расходными материалами, обрабатываются в ламинарном потоке.

  1. Культура клеток
    1. Coat для культивирования клеток колбах с поли-L-лизин 100 мкг / мл (1 час при комнатной температуре) или фибронектина 50 мкг / мл (1 ч при 37 ° С), чтобы содействовать прикреплению RCAs или RBMECs, соответственно. Затем оттепели 1 х 10 6 RCAs и 5 х 10 5 RBMECs эндотелиальной клеточной среде, дополненной 5% фетальной бычьей сыворотки, 1% добавки роста эндотелиальных клеток и 1% пенициллина / стрептомицина (МЭСМ). Семенной RCAs в Т175 колбу в 20 мл МЭСМ и RBMECs в T75 колбу в 10 мл МЭСМ.
      Примечание: оттаивание и посевные проходы RCAs и RBMECs должны быть скорректированы, с точки зрения плотности клеток и времени в культуре, в зависимости от числа экспериментальных условий тестируемой с моделью ВВВ. начинающимиING с 1 ампуле 1 × 10 6 RCAs и 1 флакон 5 × 10 5 RBMECs, можно получить до 20 ВВВ-подшипниковых вкладышей.
    2. Поддерживать клетки при 37 ° С и 5% CO 2 в увлажненной атмосфере в течение приблизительно 6 дней, примерно до 80% слияния для RCAs и более 90% сплошности для RBMECs. Отделить клеток с использованием раствора трипсина-ЭДТА (трипсина 1: 250) в течение 5 мин (1 мл трипсина для Т75 колбы и 2 мл для T175 колбы). Прекратить активности трипсина с МЭСМ (2: 1), клеточные суспензии центрифуге при 750 × г в течение 5 мин и ресуспендируют гранул в 60 мл МЭСМ.
    3. Разделить RBMECs на 3 Т175 колб и культуры в МЭСМ в течение еще 3-х дней перед посевом на вставки. Подсчитать общее количество живых Rcas, наблюдая клеточную суспензию разводят в соотношении 1: 1 трипановым синим под оптическим микроскопом в камере Бюркера.
  2. Cell Посев на Вставки
    1. Рассматривать одну сторону Полиэтилентерефталат (ПЭТ) мембрана 6 многоскважинных transparлор вставки с поли-L-лизина, 100 мкг / мл, а с другой стороны с фибронектин 50 мкг / мл, чтобы позволить прикрепление RCAs и BMECs. Ручка вставок с помощью пинцета, чтобы избежать контакта с мембраной ПЭТ.
      1. Поместите вставки в 6-луночного планшета и добавляют в раствор фибронектина (не менее 500 мкл) в верхнюю камеру. После 1 часа инкубации при 37 ° С, удаления раствора фибронектина, принимают вкладыши Съезжаете с мульти-луночного планшета и поместить их вверх дном на дне 150 см 2 чашки Петри, который используется здесь в качестве стерильного также выражена поддержка уже покрытые вставки.
      2. Осторожно добавьте 800 мкл поли-L-лизина на нижней стороне режущей пластины (как показано на рисунке 1А; упоминается как Rcas высева), и держать решение на вставках в течение 1 часа при комнатной температуре.
      3. Аспирируйте решение и пусть вставки высохнуть при комнатной температуре в течение 15-30 мин. Вставки теперь готовы к посева клеток, но также могут быть сохранены в нескольких луночный планшет для несколькихдней при температуре 4 ° С, прежде чем приступить к строительству ВВВ.
        Примечание: Не забудьте сохранить по крайней мере, 3 Вставки с износостойким покрытием свободного от клеток, которые будут использоваться в качестве контроля для проверки установления ВВВ путем FD40 измерения потоков.
    2. Семенной RCAs (35000 / см 2) на нижней стороне вставки поли-L-лизин-покрытием, понижая 800 мкл клеточной суспензии на перевернутой вставку (Рис . 1А) Оставьте подвеску RCA на вставках в течение 4 ч при комнатной температуре, для того, чтобы обеспечить эффективное присоединение клеток к мембране.
    3. Аспирируйте остаточного раствора, размещения вставок в лунки , содержащие 2 мл SecM и поддерживать мульти-луночный планшет при 37 ° С и 5% CO 2 в увлажненной атмосфере, изменяя МЭСМ каждые 2 дня.
    4. Через 3 дня, когда RCAs были покрыты нижней поверхностью вставки, семенные RBMECs на верхнюю сторону вставки, выполнив следующие действия:
      1. Отделить RBMECs от Т175 колбах и посчитайтеОбщее количество живых клеток, как сообщалось в пунктах 1.1.2 и 1.1.3.
      2. Семенной RBMECs (60000 / см 2) на верхней поверхности пластины в МЭСМ (1000 мкл) (Фигура 1В), оставляя 3 вставок с астроцитов, которые будут использоваться в качестве фона Тир. Поместите мульти-луночный планшет в стандартных условиях культивирования. Поддерживать систему в культуре в течение по крайней мере 3-х дней, изменяя SecM во внутренней и нижней камерой через каждые 2 дня.

2. Проверка ВВВ

  1. Измерение TEER
    1. На 3 - й день совместного культивирования, проверьте TEER путем вставки ВВВ-несущие вставки в соответствующую камеру (которая имеет крышку и где обе камеры и крышка содержат пару напряжения зондирования и токовых электродов), заполненный 4 мл МЭСМ. Подключение к эпителиальной ткани вольт / омметром.
    2. Вместе с измерениями Teer клеточных ВВВ-систем, запишите значения Teer из 3-х вставок, несущих Rcas-йпри будет вычитаться из значений, полученных с БББС. Умножить полученные значения Teer поверхностью вставки (4,2 см 2), для того , чтобы выразить результаты в виде Ω х см 2.
    3. С 3 - го дня совместного культивирования, измеряют TEER каждый день. Примечание: После того, как первоначальный период , когда TEER увеличивается, записанные значения должны оставаться стабильными в течение по крайней мере двух последовательных дней (обычно между 5 - й и 7 - й день совместного культивирования). В этот момент ВВВ готов к второй стадии валидации (раздел 2.2) и / или для экспериментов транс-ВВВ.
      Примечание: Процедура, описанная в разделе 2.1, могут быть выполнены на тех же самых БББ-систем, посвященных следующим экспериментам проницаемости (раздел 3). Эксплуатация в стерильных условиях.
  2. Транс-ВВВ Поток FITC-декстран 40 (FD40)
    1. Измерьте поток FD40 от верхней до нижней палаты моделей ВВВ по сравнению с через 3 пустых вставок(См ноту раздел 1.2.1), в соответствии со следующими этапами:
      1. Добавляют 1 мг / мл FD40 (разведенный в МЭСМ) в верхний отсек БББС, и после того, как 1, 2 и 3 ч вывести 200 мкл SecM из нижней камеры и измеряют интенсивность флуоресценции с помощью спектрофлуориметра (X Ex 488 нм, А ЕМ 515 нм, щель 5).
      2. Получить значения для SecM фоне fluorescenceby измерения 500 мкл девственной среды с использованием тех же аналитических параметров. Вычтите МЭСМ фоновой флуоресценции от всех значений флуоресценции FD40.
      3. Определить количество проникшего FD40 путем сравнения наблюдаемых значений флуоресценции с калибровочной кривой , полученного с известной концентрацией (т.е.. 0,312, 0,625, 1,25, 2,5 мкг / мл) флуоресцентного индикатора , растворенного в 500 мкл МЭСМ.
      4. Вычислить кажущуюся коэффициент проницаемости (P) приложение от средних значений потока в соответствии с:
        P = приложение J / AC
        , Где J представляет поток молекулы (моли / сек), А площадь проникающая (см 2) и С обозначает концентрацию молекулы в верхнем отделении (моли / см 3).
        Примечание: Три или более ВВВ-системы, которые достигли подходящие значения Тир, должны быть исключительно посвящены этой процедуре проверки, и не должны быть использованы для следующих экспериментов проницаемости (раздел 3). Стерильность не является обязательным.

3. Транс-ВВВ Проникновение ФИТЦ-нагруженной ферритинов (БНС)

Примечание: вариант рекомбинантного человеческого ферритина (Fn), произведенный в кишечной палочки и собраны в наноклеток (БНС) для инкапсулирования различных флуоресцентных молекул, можно получить у NanoBioLab профессора Prosperi (Университет Милан-Бикокка, Италия). FNn загружаются с FITC, в соответствии с описанным ранее протоколом 13 и концентрации обоих Fn и загруженных молекул точно determinредактор

  1. Транс-ВВВ Поток FITC и FITC-БНС
    1. Измерьте поток FITC-БНС от верхней до нижней палаты проверенных моделей ВВВ ( как правило , на 5 - й - 7 - й день совместного культивирования), по сравнению с свободного красителя после 7 и 24 ч инкубации, в соответствии с следующие шаги:
      1. Добавить ФИТЦ-БНС (50 мкг / мл БНС, 1,1 мкМ FITC) или равное количество свободного FITC в верхнюю часть камеры по меньшей мере 6 систем БББ для каждой композиции, для того, чтобы вывести 2 мл раствора SecM из нижней палаты по меньшей мере, 3 вкладыша после 7 часов, а из нижней палаты других 3-х вставок после 24 часов.
      2. Измерьте интенсивность флуоресценции 500 мкл собранных образцов спектрофлоуриметре (X ех 488 нм, λ ет 515 нм, щель 5).
      3. Получение фоновой флуоресценции SecM путем измерения 500 мкл среды с использованием тех же аналитических параметров. Вычтите фоновой флуоресценции МЭСМот всех FITC или FITC-БНС значений флуоресценции.
      4. Определить концентрацию FITC , прошедшая через мембрану или FITC-FNn путем сравнения полученных значений флуоресценции с двумя различными калибровочными кривыми , произведенных с известной концентрацией (т.е.. 6,87, 13,75, 27,5, 55 нм) или свободного nanoformulated красителя , растворенного в 500 мкл МЭСМ.
  2. FITC-БНС Локализация в RBMECs
    1. Удалить МЭСМ из верхней камеры систем ВВВ, мыть вставки с PBS и фиксируют RBMECs по меньшей мере, двух вставок для каждой экспериментальной группы путем добавления 500 мкл параформальдегида (4% в фосфатный буфер солевом-PBS) в верхнем отсеке для 10 мин при комнатной температуре.
    2. Промыть Вставки три раза PBS для удаления остаточного количества формальдегида.
      Примечание: С этого момента, стерильность не нужно.
    3. Вырезать подходящие куски мембраны ПЭТ, и приступить к immunodecoration клеток в соответствии следующие шаги:
      1. PermeabiLize RBMECs с 0,1% Тритон Х-100 в PBS в течение 10 минут. Выполнение стадии блокирования в течение 1 ч при комнатной температуре с раствором, содержащим 2% бычьего сывороточного альбумина (BSA), 2% козьей сыворотки в PBS. Инкубируйте образцы с анти-фактора Виллебранда (ФВ) при разбавлении 1:20, в течение 2 ч при комнатной температуре.
      2. После промывания три раза PBS, подвергать клетки в течение 2 ч при комнатной температуре на 2% БСА, 2% -ный раствор сыворотки козьего, содержащий подходящее вторичное антитело на 1 с: 300 разбавления для того, чтобы выявить анти-VWR и DAPI в точке а 1: 1500 разбавления для обнаружения ядер.
    4. Установите части вставки на предметные стекла микроскопа с использованием antifade монтажа раствора (одна капля на фрагменте вставки), затем закройте образец с крышкой скольжения. Анализ с помощью конфокальной микроскопии с использованием масляного иммерсионного объектива при 40-кратном увеличении, 1.5 зумом и 1024 х 1024 пикселей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Во время создания модели ВВВ, прикрепление клеток и рост на вставках можно контролировать с помощью светового микроскопа, благодаря прозрачной природы ПЭТ-мембран. RCAs, высевали при плотности 35000 клеток / см 2, присоединять эффективно к нижней стороне вставки после 4 ч инкубации при комнатной температуре (фиг.2А) и расти , чтобы покрыть поверхность мембраны в течение 3 дней, принимая веретенообразную морфологию (Фигура 2В). RBMECs, высевали...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Метод в пробирке , описанный здесь представляет собой полезный подтвержденный подход к изучению доставки транс-ВВВ флуоресцентных молекул при nanoformulation с наночастицами. Здесь мы используем БНС, который представляет собой хороший кандидат для изучения транслокации молекул грузов через ВВВ. FNn считается золотым nanovector для транс-ВВВ доставки лекарственных средств / агентов, так как он специфически распознаваемый рецептором TfR1, который экспрессируется на полостной мембране BMECs и опосредует взаимодейс...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Авторы выражают признательность Assessorato alla Sanità, Regione Lombardia и Sacco Hospital (NanoMeDia Project) за финансирование исследований.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Микрососудистые эндотелиальные клетки головного мозга крысы ИннопротP10308выделен из мозговой ткани крысы Sprague Dawley, криоконсервирован на первом проходе и доставлен
замороженный кортикальный астроцит.ИннопротР10202выделен из 2-суточной ткани мозга крысы, криоконсервирован при первом проходе и доставлен в замороженном виде.
Набор Endothelial Cell MediumInnoprotP60104ECM (500 мл) и эмбриональная сыворотка бовина (25 мл), добавка для роста эндотелиальных клеток (5 мл) и пенициллин/стрептомицин (5 мл). Тепло в 37 градусов; C водяной баней перед применением и беречь от света
Trypsin-EDTA без фенола RedEuroCloneECM0920DСогреть в 37 градусов; C водяной баней перед применением
Флуоресцеин изотиоцианат-декстран 40 000SigmaFD40Sзащищают от света
параформальдегида;Сигма158127дилюитация в химическом буфере
фосфатного солевого раствора Дульбекко без Ca и MgEuroCloneECB4004L
Triton  X-100SigmaT8787
бычья сыворотка альбумин SigmaA7906
сыворотка для козы EuroCloneECS0200D
мыши моноклональные анти-Von Willebrand FactorDakoM0616
AlexaFluor 546-конъюгированное антитело против мышей IgGsThermoFischer ScientificA-11003защищают от света
DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол) ThermoFischer ScientificD1306защитить от света
ProLong Gold Antifade MountantThermoFischer ScientificP36934
Poly-L-лизина гидробромидаSigmaP1274этот же раствор можно использовать несколько раз
фибронектин из плазмы крупного рогатого скота;SigmaF1141один и тот же раствор может быть использован несколько раз
Полиэтилентерефталат (ПЭТ) вставкиFalconF3090Прозрачные полиэтилентерефталатные (ПЭТ) мембраны; площадь поверхности: 4,2 см<суп>2; размер пор 0,4; m/площадь поверхности
T75 Primo TC колбаEuroCloneET7076
T175 Primo TC колбаEuroCloneET7181
EVOM2 Эпителиальная ткань вольт/омметр     World Precision Instruments ГерманияEVOM2
Endohm-24SNAP чашкаWorld Precision Instruments ГерманияENDOHM-24SNAP
Световой/флуоресцентный микроскоп с камеройLeica MicrosystemsDM IL LED Fluo/ ICC50 W Модуль камеры  Инвертированный микроскоп для живых клеток с камерой 
Конфокальный микроскопLeica MicrosystemsTCS SPE
СпектрофлуориметрJascoFP-8000

Ссылки

  1. Banks, W. A. Characteristics of compounds that cross the blood-brain barrier. BMC Neurol. 9 (1), 3(2009).
  2. Löscher, W., Potschka, H. Drug resistance in brain disease and the role of efflux transporters. Nat Rev Neurosci. 6, 591-602 (2005).
  3. Xu, G., Mahajan, S., Roy, I., Yong, K. -T. Theranostic quantum dots for crossing blood-brain barrier in vitro and providing therapy of HIV-associated encephalopathy. Front Pharmacol. 15 (4), 140(2013).
  4. Masserini, M. Nanoparticles for Brain Drug Delivery. ISRN Biochem. , (2013).
  5. Sagar, V., Pilakka-Kanthikeel, S., Pottathil, R., Saxena, S. K., Nair, M. Towards nanomedicines for neuroAIDS. Rev. Med. Virol. 24 (2), 103-124 (2014).
  6. Kreuter, J. Drug delivery to the central nervous system by polymeric nanoparticles: What do we know. Adv. Drug Deliver. Rev. 71, 2-14 (2014).
  7. Arosio, P., Ingrassia, R., Cavadini, P. Ferritins: a family of molecules for iron storage, antioxidation and more. Biochim. Biophys. Acta. 1790 (7), 589-599 (2009).
  8. Jääskeläinen, A., Soukka, T., Lamminmäki, U., Korpimäki, T., Virta, M. Development of a denaturation/renaturation-based production process for ferritin nanoparticles. Biotechnol. Bioeng. 102 (4), 1012-1024 (2009).
  9. Jefferies, W. A., Brandon, M. R., Hunt, S. V., Williams, A. F., Gatter, K. C., Mason, D. Y. Transferrin receptor on endothelium of brain capillaries. Nature. 312, 162-163 (1984).
  10. Deli, M. A., Abraham, C. S., Kataoka, Y., Niwa, M. Permeability studies on in vitro blood-brain barrier models: physiology, pathology, and pharmacology. Cell. Mol. Neurobiol. 25 (1), 59-127 (2005).
  11. Wilhelm, I., Fazakas, C., Krizbai, I. A. In vitro models of the blood-brain barrier. Acta Neurobiol. Exp. (Wars). 71, 113-128 (2011).
  12. Wilhelm, I., Krizbai, I. A. In vitro models of the blood-brain barrier for the study of drug delivery to the brain. Mol Pharm. 11 (7), 1949-1963 (2014).
  13. Bellini, M., et al. Protein nanocages for self-triggered nuclear delivery of DNA-targeted chemotherapeutics in Cancer Cells. J. Control. Release. 196, 184-196 (2014).
  14. Fiandra, L., et al. Nanoformulation of antiretroviral drugs enhances their penetration across the blood brain barrier in mice. Nanomedicine. 11 (6), 1387-1397 (2015).
  15. Molino, Y., Jabès, F., Lacassagne, E., Gaudin, N., Khrestchatisky, M. Setting-up an in vitro model of rat blood-brain barrier (BBB): a focus on BBB impermeability and receptor-mediated transport. J. Vis. Exp. , e51278(2014).
  16. Perrière, N., et al. A functional in vitro model of rat blood-brain barrier for molecular analysis of efflux transporters. Brain Res. 1150, 1-13 (2007).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Наночастицы ферритинапроницаемость FITCтрансэндотелиальное электрическое сопротивлениеконфокальная микроскопиякокультивирование клетокдоставка наноформуляцийкокультура астроцитов и эндотелиоцитовспектрофлуориметрический анализпокрытие поли-L-лизином
In Vitro Проникновение ФИТЦ-нагруженных ферритинов через Rat гематоэнцефалический барьер: модель для изучения Поставка Nanoformulated Molecules
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.