Методическая статья

Анионной полимеризации амфифильного Сополимер по подготовке блоксополимера мицелл, стабилизированных π-л стэкинг-взаимодействий

DOI:

10.3791/54422

⸱

10 октября 2016 г.

 ,  , 
1Leslie Dan Faculty of Pharmacy, University of Toronto

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Основные этапы живой анионной полимеризации фенилглицидиловый эфира (PheGE) на метокси-полиэтиленгликоль (MPEG- б) -PPheGE описаны. Результирующие блок-сополимера мицеллы (BCMS) загружались с доксорубицином 14% (мас%) и замедленное высвобождение лекарственного средства в течение 4-х дней при физиологически получали соответствующие условия.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом исследовании, амфифильный сополимер , который включает в себя базовую образующий блок с фенильными группами, синтезировали живой анионной полимеризации фенилглицидиловый эфир (PheGE) на метокси-полиэтиленгликоль (MPEG- б -PPheGE). Определение характеристик сополимера показал узкое молекулярно -массовое распределение (PDI <1,03) и подтвердили степень полимеризации мПЭГ 122 - B - (PheGE) 15. Критическая концентрация мицелл сополимера оценивали с использованием установленного способа флуоресценции с поведением агрегации оценивали с помощью динамического рассеяния света и передачи электронной микроскопии. Потенциал сополимера для использования в приложениях для доставки лекарственных средств оценивали в предварительном порядке , включая в пробирке биосовместимость, загрузка и высвобождения гидрофобного противоракового препарата доксорубицина (DOX). Стабильная рецептура мицелл DOX был подготовлен с уровнем загрузки лекарственного средства до 14% (мас%), погрузка наркотиков efficiencies> 60% (вес / вес) и замедленное высвобождение препарата в течение 4-х дней при физиологически соответствующих условиях (кислых и нейтральных рН, присутствие альбумина). Уровень загрузки высокого наркотиков и замедленным высвобождением приписывается стабилизирующих π-pi; взаимодействия между DOX и центральным блоком формирования мицелл.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В водной среде, амфифильные блок-сополимеры, собираются, чтобы сформировать нано-размера блок-сополимера мицелл (BCMS), которые состоят из гидрофобной сердцевины, окруженной оболочкой гидрофильных или короны. Ядро мицеллы может служить в качестве резервуара для включения гидрофобных лекарственных средств; в то время как гидрофильный коронный обеспечивает интерфейс между ядром и внешней средой. Поли (этиленгликоль) (ПЭГ) и его производные являются одним из наиболее важных классов полимеров , и один из наиболее широко используемых в лекарственной композиции. 1-3 BCMS оказались достойной платформой для доставки лекарственных средств с несколько составов , опираясь на этот технологии в настоящее время в поздней стадии клинической разработки. 4 Чаще всего, гидрофобный блок - сополимера состоит из поликапролактон, поли (D, L-лактида), поли (пропиленоксид) или поли (β-бензил-L-аспартат). 5 -9

Группа Катаока исследовала сферические мицеллы , образованные из ПЭО б -PBLA И поли (окись этилена) - б . - (Доксорубицин полиаспарагиновой кислоты с сопряженными) для доставки доксорубицина (DOX) 10,11 В своих докладах они выдвинули , что π-pi ; взаимодействие между препаратом полимерконъюгированных или PBLA и свободный DOX действовать, чтобы стабилизировать ядро ​​мицеллы, что приводит к увеличению нагрузки и удержания лекарственного средства. Установлено , что совместимость или взаимодействие между лекарственным средством и блок основного формирования являются определяющими ключевых параметров , связанных с производительностью. 12 В дополнение к DOX, ряд терапии рака включают ароматические кольца в пределах своей основной структуры (например, метотрексат, olaparib, С.Н. -38).

В результате существует значительный интерес к синтезу сополимеров, которые включают бензиловый кольца в их основных образующих блоков. Анионные полимеризация с раскрытием кольца ПЭГ и его производных позволяют контролировать молекулярной массой и привести к материалам с низкой полидисперсностью с хорошим выходом. 13,14 EthyleОксид пе с фенилглицидиловый эфиром (PheGE) или оксид стирола (SO) может быть (со) полимеризуется с образованием блок - сополимеров , которые образуют мицеллы для солюбилизации гидрофобных лекарственных средств. 15-18 В настоящем докладе описываются необходимые шаги для живой анионной полимеризации фенил глицидилэфир мономера на Mpeg-ОН , как макроинициатора (Рисунок 1). Полученный блок-сополимер и его агрегаты затем охарактеризованы с точки зрения свойств релевантности для использования в доставке лекарств.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-protocol-1
Рисунок 1. Схема , показывающая девять ключевых шагов в подготовке б -PPheGE сополимера MPEG-. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

1. Приготовление реагентов в сухих условиях

  1. Приготовление реагентов.
    1. Взвешивают 15 г Mpeg-5К (Мn = 5,400 г / моль, PDI 1,03) и место при 50 ° С в печи под вакуумом в течение 48 ч перед использованием.
    2. Сухие 200 мл диметилсульфоксида (ДМСО) в течение гидрид кальция (CAH 2) (~ 1 г), место под вакуумом в течение 30 мин, продувку в атмосфере аргона и перемешивают в течение 48 часов перед использованием.
    3. Поместите 50 мл в PheGE мономера в сухую и чистую колбу (100 мл), добавляют 1 г CaH 2, уплотнение под вакуумом в течение 15 мин на льду, продувку в атмосфере аргонаи оставить перемешиваться в течение 24 ч в атмосфере аргона до использования.

2. Подготовка калия нафталина

  1. Осторожно, нарезать небольшими кусками натрия (~ 1,5 г) высушивают с гексаном, чтобы удалить избыток минерального масла и добавить в круглую колбу, содержащую тетрагидрофуран (ТГФ) (V = 500 мл).
    Примечание: Куски натрия не должны подвергаться воздействию воздуха для долго из-за риска возникновения пожара.
  2. Добавить бензофенон (~ 5 г) продувку аргоном и запечатать круглую колбу (2 шеями) со стеклянными пробками.
  3. После перемешивания в атмосфере аргона в течение 24 ч, соединить колбу с круглым дном в перегонный аппарат (рисунок 2), перегонку темного раствора в атмосфере аргона в то время как кипячения с обратным холодильником (т.е., рефлюкс в течение приблизительно в течение 2 ч после того, как раствор становится синим). Начинают собирать желаемый объем ~ 150 мл ТГФ, закрыв левый клапан (находится в середине перегонного аппарата).
    Примечание: Если это решение не синеет, остановить Distilтаже, остывать при комнатной температуре (RT) и добавляют больше бензофенон или натрий, и перезапустить дистилляцию. Это указывает на то, что до сих пор ТГФ содержит воду.
  4. В сухом Эрленмейера, добавляют дистиллированную ТГФ (V = 100 мл) и растворить 3,9 г нафталина.
    Примечание: Остановить дистилляцию, остыть при комнатной температуре и откройте правую клапан для передачи объема ТГФ.
  5. Как описано в пункте 2.1, нарезать небольшими кусками калия (1,1 г) и добавляют к раствору, содержащему Нафталин (конечная концентрация ~ 0,3 моль / л). Уплотнение Эрленмейера с адаптером промывочного (T) (вкл / выкл) с перегородкой в ​​верхней и продувают аргоном.
  6. После перемешивания в атмосфере аргона в течение 24 ч, наблюдать полученный раствор калий-нафталина на основание в виде однородного темно-зеленого цвета.
  7. В инертных условиях, удалить 5 мл аликвоты основного раствора из колбы с помощью шприца и добавляют к 10 мл дистиллированной воды. Затем добавляют 1-2 капли индикатора фенолфталеина к этому раствору,который превращает раствор фуксия цвет.
  8. С помощью бюретки титровать калий-нафталина раствора со стандартным раствором соляной кислоты (0,1 N) до тех пор, пока раствор не станет бесцветным.

3. Материалы и необходимые меры для эффективного живой анионной полимеризации

  1. Система аргон / вакуумный коллектор.
    Примечание: Как описано на рисунке 2, двойное остекление многообразие с полыми стеклянными кранами используется для переключения между подачей аргона и вакуума в стеклянной посуде.
    1. Подключите бак аргона (с манометром) в сухой колонке абсорбентом и к коллектору линии с использованием инертного резиновой трубки. На другом конце линии аргона, соединить барботер (содержащий минеральное масло).
    2. Для стеклянных кранами, соедините гибкие инертные трубки и иглы. К другой линии коллектора, соединить стеклянную ловушку погружают в холодную сосуд Дьюара (заполненный льдом / водой или жидким азотом) в насос высокого вакуума.
  2. Аппарат для перегонки мономера и ДМСО.
    Примечание: Удобный (то есть, все в одном) аппарат для высокой вакуумной перегонки используют (рисунок 2). Сухой стеклянной посуды производится с высокими вакуумными клапанами, а также встроенные конденсаторы с внутренним охлажденном головы.
    1. Подключение поток воды через входное отверстие (А) и на выходе (В) охлаждающего устройства (буква). Подключите другой вход / выход (C) к двойственной коллектора для аргона / вакуума. Добавление и запечатать перегородку (металлические провода) в порту доставки / извлечения и соединить стальной канюлю из нержавеющей стали для передачи чувствительных воздушных жидкостей (D) (в верхнем / цикле).
    2. До полимеризации перегонку PheGE и ДМСО на полусферических колбонагреватели при 100 ° С и 70 ° С, соответственно, в течение 2 ч под вакуумом при перемешивании. Точка кипения В PheGE мономер составляет 254 ° С, тогда как температура кипения для ДМСО 189 ° С при (1 атм).
  3. Стеклянная посуда в анионной polymerizatиона.
    1. В дополнение к системе дистилляции, используйте только высокий вакуум стойкую стеклянной посуды в том числе с круглым дном колбы (сертифицировано производителем), градуированные цилиндры (для переноса объемов растворителя, основания и мономеров), канюль, перегородках и металлической проволоки для уплотнения перегородками.
      Примечание: Для получения тщательно живой полимеризации, тепло (под вакуумом) и охлаждают всю стеклянную посуду в потоке аргона до использования. Держите тепловые пушки на расстоянии ~ 10 см от стеклянной посуды.

figure-protocol-2
Рисунок 2. Сборка и основные этапы перегонки / передачи. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

4. Описание ключевых шагов живой анионной полимеризации: дистилляция и передачи

  1. Взвесить Mpeg-5K (2 ммоль, 10 г) в сухом Fласк / Шленка (печь), содержащий мешалку и запечатать адаптер гиперемию (T) (вкл / выкл) с перегородкой в ​​верхней части.
  2. Соедините колбу с коллектором и очистить колбу в течение 2-3 мин с флешей аргона. Поверните клапан в вакуумном состоянии очистить колбу.
  3. Поверните колбу вручную и высушить реакционный сосуд с однородно фена (тепловая пушка) до Mpeg-5K не растает.
    Примечание: Держите тепловые пушки на расстоянии ~ 10 см от колбы.
  4. Через 1 мин, перерыв вакуума, поворачивая клапан на коллекторе в направлении позиции аргона с несколькими быстрыми защелками.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Непрерывный поток аргона должен наблюдаться в барботер. Когда поток непрерывен, клапан остается в положении аргона. дважды Повторные нагрева и охлаждения шаги, чтобы удалить все следы влаги.
  5. Хранить полимерный макроинициатор в вакууме в течение ~ 2 ч и в атмосфере аргона до начала реакции.
  6. Маунт два высокого вакуума ректификационные аппараты под капотом (рисЮр 2); один для дистилляции ДМСО и один для отгонки мономера (PheGE).
  7. Соединить отдельные колбы, содержащие ДМСО и мономера к двум устройствам и установить каждый на полусферической греющим кожухом (или в масляной ванне). Подключение холодной воды к верхней части аппарата (вход / выход) и многообразию (аргон / вакуум).
  8. Убедитесь в том, что каждое устройство является безопасным и хорошо запечатаны. Engage вакуум через клапан.
    Примечание:. Как описано в шаге 3.3, повторите нагрев и стадий охлаждения в два раза, чтобы удалить все следы влаги.
  9. Установите нагрев с помощью регулятора температуры и начать перемешивания растворов. Через 2 ч циркуляционного / перегонки ДМСО, закрыть клапан высокого вакуума (находится в середине перегонном аппарате) для сбора приблизительно 20 мл раствора (для очистки внутренней части аппарата). Затем отпустить фракцию в колбу и повторить операцию еще раз, чтобы гарантировать чистоту желаемой фракции, которая представляет собой Сollected позже.
  10. Нагревают колбу, содержащую Mpeg-5K (под вакуумом) с тепловой пушки пока полимер (мПЭГ-5K) плавится. снова продувают аргоном.
    Примечание: Эта процедура поможет растворению после передачи ДМСО.
  11. Через 2 часа, закрыть клапан высокого вакуума и собирают объем растворителя (V DMSO = ~ 100 мл). Прекратите нагрев и сломать вакуум от коллектора. Выпуск аргон (по защелками) в камеру, как описано выше.
  12. При положительном давлении аргона, соединить одну сторону канюли (Удерживать на запорный кран аппарата) в градуированный цилиндр или непосредственно в колбу, содержащую Mpeg-5K (если перегонный аппарат имеет выпускной) и погружают другой конец осторожно в свежеперегнанного фракции.
  13. Использование аргона давление, привод ДМСО через канюлю в реакционную колбу. Подключите дополнительный барботер в колбу (или цилиндр, если это необходимо для измерения) и закройте стекло кран, соединенный с йе барботера на противоположной стороне коллектора.
    Примечание: Когда одна сторона канюли удаляется для передачи, убедитесь, что применяется положительное давление аргона.
  14. Для того, чтобы избежать каких-либо аварий, вызванных давлением аргона, открыть стеклянную запорного крана в течение 1-2 сек и запечатать, чтобы продолжить поток ДМСО (повторяли один раз за 0,5 мин) до момента получения полной передачи не будет завершено. Повторное открытие запорного крана, когда закончите.
    Примечание: Теперь же процедура должна применяться для дистилляции и сбора мономера. Растворитель и мономер не может быть собрана в то же время.
  15. Передача 5 мл 0,3 М нафталина калия через канюлю в градуированный цилиндр уплотнен перегородке с канюлю (контур).
    Примечание: Такие же меры предосторожности, как описано в примечании 4.13. Положительное давление аргона должно поддерживаться первым из колбы калий-нафталина в цилиндр, а затем из цилиндра в реакционную колбу, чтобы избежать загрязнения воздуха / воды.
  16. Вставьте другую иглу из manifoЛД в цилиндр (аргон). Удалите канюлю, соединенную с системой перегонки осторожно и быстро вставить в реакционную колбу.
    Примечание: Используйте этот метод для переноса базы и мономера.
  17. Добавьте базовую по капле до тех пор, пока раствор не станет темной. После медленного исчезновения цвета, добавьте еще одну порцию, пока темный цвет снова не появится, и повторять до полной передачи.
  18. Перенести желаемый объем мономера (V PheGE = 5 мл) , чтобы достичь степени полимеризации PPheGE ~ п = 18-20.
  19. Оставьте реакционную смесь в течение 48 ч при 80 ° С в атмосфере аргона при постоянном перемешивании, чтобы обеспечить полную полимеризацию.
  20. Гасят реакцию добавлением капли HCl 1 н в метаноле (измеренный с помощью лакмусовой бумаги (нейтральный рН)) и наблюдают цветного исчезновения.
  21. Извлечение нафталин из ДМСО раствора с гексаном (3 × 50 мл). Удалить ДМСО путем перегонки под вакуумом ~ 70 мл (тот же аппарат). ворковатьл раствора вниз шлама и добавляют 50 мл ТГФ.
  22. Удаления соли из раствора суспензии путем центрифугирования при 5000 х г в течение 10 мин. Передача супернатант, и добавьте по каплям к 500 мл холодного диэтилового эфира.
  23. Собирают осадок фильтрованием или центрифугированием (повтор дважды) и сушили под вакуумом при 30 ° С в течение 24-48 ч (выход 85%).
    Примечание: Сополимер теперь готов к характеристике.

5. Определение характеристик Сополимеры

  1. Взвесьте 5-10 мг сополимера (записи фактической массы) в алюминиевом образце сковороду и запечатать герметически с алюминиевой крышкой. Загрузите образец панорамирование и опорный поддон (пусто) в дифференциальной сканирующей калориметрии.
  2. Программа метод ( "нагрев / охлаждение / нагрев") цикл: 1) высокая температура от 40 ° C до 100 ° C со скоростью 10 ° С / мин, 2) охлаждают до -70 ° С со скоростью 10 ° С / мин, 3) тепла до 100 ° с со скоростью 10 ° с / мин. Повторите 2) и 3) дважды. Определить точку плавления (Т м), кристallization (T c) и температуры стеклования (Т г) и теплота плавления (H е) от тепловых следов от третьего цикла (если это применимо).
  3. Растворение полимеров в ТГФ (2 мг / мл) и фильтруют через фильтр из ПТФЭ 0,2 мкм. Вводят пробы в систему гель - проникающей хроматографии (50 мкл) и использовать время удерживания для образца и калибровочную кривую производится с использованием ряда полистирольных стандартов для определения молекулярной массы полимера. 19
  4. Растворите (со) полимеров (15 мг / мл) в ДМСО d 6 для 1 анализа спектроскопии ЯМР Н. 19
  5. Определение критической концентрации мицеллообразования (ККМ) сополимера с использованием 1,6-дифенил-1,3,5-гексатриен (DPH) в качестве флуоресцентного зонда. 9
    1. Приготовьте DPH маточного раствора в ТГФ (2,32 мг / л) в темноте, и добавить 100 мкл этого раствора в каждую из серии флаконов.
    2. Подготовительномповторно сополимером маточного раствора в ТГФ и добавляют аликвоты равного объема (2 мл) к серии ампул (каждая из которых содержит аликвоты исходного раствора DPH), что приводит к образованию конечных концентраций сополимера, что в диапазоне от 0,01 до 1000 мкг / мл сополимера.
    3. Впоследствии вихревые растворы и добавляют по каплям к 10 мл дважды дистиллированной воды при перемешивании бар сополимер-DPH. Растворы должны быть затем энергично перемешивают в темноте в течение 48 ч в токе азота, чтобы обеспечить медленное испарение ТГФ. Конечная концентрация DPH в каждом растворе составляет 0,232 мг / л.
    4. Измерьте излучение флуоресценции образцов при длине волны 430 нм (λ ех = 350 нм) с использованием двойного сканирования микропланшетов спектрофлуориметре и участок флуоресценции от входа [полимер]. Отрезок между двумя линейными склонами обеспечивает значение ККМ для сополимера.

6. Процедура Загрузка доксорубицин в BCMS

  1. Растворите 12 мг DOX в 1 мл асеtonitrile, добавить 10 мкл триэтиламина и пусть размешать раствор в темноте в течение 2 часов.
  2. Растворить сополимер (45 мг) в 1 мл ТГФ и перемешивают в течение того же периода времени. Добавьте сополимер раствора к раствору DOX и промыть флакон, содержащий остаточный сополимер с дополнительным объемом ТГФ (0,5 мл).
  3. Добавьте смесь-сополимер-лекарство (2,5 мл) по каплям в пробирку (20 мл), содержащий 15 мл физиологического раствора 0,9% (NaCl) при перемешивании.
  4. Перенесите раствор в диализный мешок (3,5 кД отрезать) и диализ против физиологического раствора 0,9% (500 мл).
    Примечание: Изменение внешнего физиологический раствор через 6 ч, и пусть диализ продолжают в течение 24 ч при перемешивании в темноте при комнатной температуре.
  5. Передача диализата в 50 мл пробирку и центрифугируют при 5000 х г в течение 15 мин.
  6. Передача супернатант на систему ультрафильтрации (емкостью 10 мл), который содержит диализной мембраны (отрезать 10 кДа). Вставьте адаптер перемешивания в систему ультрафильтрации, закройте крышку и открыта какTream азота.
  7. Концентрат ВСМ раствора до объема 4 мл и добавляют 6 мл свежего солевого раствора и повторите процедуру дважды.
  8. Концентрат ВСМ раствора до 4 мл, ополоснуть камеру с 0,5 мл физиологического раствора и добавляют к раствору. Хранить в коричневых флаконах при комнатной температуре в темноте до дальнейшего использования.

7. Оценка доксорубицина Загрузка в DOX-BCMS

  1. Растворите DOX-BCM в диметилформамиде (100 мкл в 400 мкл), чтобы нарушить мицеллы и разбавляют в водном растворе HCl (0,1 N) до оценки (по 100 мкл в 900 мкл HCl 0,1 N).
  2. Мера загрузки лекарственного средства при 490 нм с использованием системы Benchtop микропланшет спектрофотометрического. Используйте следующие уравнения для определения способности загрузки лекарственного средства (DLC) и эффективность загрузки лекарственного средства (DLE):
    DLC (вес%) = (вес препарата, погруженных / общий вес BCMS) х 100%
    СКД (%) = (масса лекарственного средства, погруженных / вес препарата в корме) х 100%

8. Оценкаэкстракорпорального Выпуск DOX от DOX-BCMS

  1. Исследовать высвобождение DOX из BCMS при 37 ° С в 0,1 М фосфатно-солевом буфере (PBS, рН 7,4) против PBS, рН 7,4, содержащего 0,1% (вес / об) твина 80, BCMS + БСА (50 мг / мл) против PBS рН 7,4 и 0,1 М ацетат-буфер при рН = 5,5. 20,21
  2. Разбавить рецептуру БЦМ-DOX (700 мкл) в выбранном буфере (2,3 мл), чтобы привести к общей сумме ≈ 0,6-0,7 мг DOX в диализной мешке.
  3. Поместите раствор в диализной мешке, запечатать с клипами и погрузить пакет в 200 мл соответствующих внешних носителей.
  4. Удалите 2 мл раствора вне диализного мешка в заранее заданные моменты времени и заменяют тем же объемом свежего буфера.
  5. Хранить аликвот удалены при -20 ° C до проведения анализа с помощью UV-VIS спектрофотометрии (абс 490 нм). Кумулятивный процент высвобожденного лекарственного вещества (Е г) можно рассчитать по следующей формуле:
    Equation1
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если м DOX представляет количество DOX в BCMS, V 0 представляет собой общий объем средств массовой информации высвобождения (200 мл), V т является объем замененных носителя (V T = 2 мл), Ci концентрация до коррекции, и с N представляет собой концентрацию DOX в образце.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Рисунок 3. Иллюстрация анионной полимеризации фенилглицидиловый эфира на мПЭГ макроинициатора для получения видеоданных MPEG - B - (PheGE) 15 для получения блок - сополимеров мицелл для загрузки доксорубицина Схема иллюстрирует депротонирования гидроксильной группы мПЭГ с использованием калий - нафталина...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В связи с хорошим контролем, что анионной полимеризации обеспечивает более молекулярным весом является одним из наиболее прикладных процессов в промышленности для получения полимеров на основе оксиэтиленовых мономеров (ПЭГ и ППГ). Оптимальные и жесткие условия должны быть использованы для успешной полимеризации должна быть достигнута. Тщательное очищение всех реагентов и соответствующего устройства имеют важное значение для живого характера синтеза. Ограничения текущей настройки в основном связаны с техникой передачи, к...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CA признает грант на открытие от Совета по естественным наукам и инженерным исследованиям Канады. CA признает кафедру фармацевтики и доставки лекарств от GSK. Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
DMEM/HAMF12Gibco, Life Technologies12500с добавлением 10% FBS. Тепло в 37 градусов; C водяной бани.
Трипсин-ЭДТА (0,25%)Сигма-ОлдричТ4049теплый в 37 градусов; C водяная баня
Фетальная бычья сыворотка (FBS)Sigma-AldrichF1051Канадское происхождение
MDA-MB-468 Клеточная линияATCCHTB-132
MTS реагент тетразолияPROMEGAG111B
Феназин этосульфат (PES)Sigma-AldrichP4544>95%
mPEG5K (Mn 5,400 г/моль)Sigma-Aldrich81323PDI=1.02
Диметилсольфосид (ДМСО)Сигма-ОлдричD4540>99,5%
НафталинСигма-Олдрич147141>99%
Фенилглицидиловый эфирСигма-ОлдричA32608>85%
БензофенонСигма-Олдрич427551>99%
КалийСигма-Олдрич451096>98%
ТетрагидрофуранКаледон Лабораторные химикаты8900 1ACS
ГексанКаледон Лабораторные химикаты5500 1ACS
Гидрид кальция (CaH2)ACPC-0460>99.5%
Диэтиловый эфирКаледон Лабораторные химикаты1/10/4800ACS
Микропланшетный ридерBioTek Instruments
Дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК)TA Instruments IncDSC Q100
Гель-проникающая хроматография (ГПХ)Вода2695 разделительная молдула / 2414 детектор 2 колонки: Agilent Plgel 5 & micro; m Смешанная
ЯМР-спектроскопияVarian Mercury 400 МГц
Chloroform-dSigma-Aldrich15185899,96%
DMSO-dSigma-Aldrich15691499,96%
Вакуумный насосGardner Denver Welch Vacuum Tech, Inc.Остаточное давление 1x10-4 торр
Дриерит с индикатором, 8 мешSigma-Aldrich238988Регенерированный при 230  ° C за 2 часа

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dickerson, T. J., Reed, N. N., Janda, K. D. Soluble Polymers as Scaffolds for Recoverable Catalysts and Reagents. Chemical Reviews. 102, 3325-3344 (2002).
  2. van Heerbeek, R., Kamer, P. C. J., van Leeuwen, P. W. N. M., Reek, J. N. H. Dendrimers as Support for Recoverable Catalysts and Reagents. Chemical Reviews. 102 (10), 3717-3756 (2002).
  3. Knop, K., Hoogenboom, R., Fischer, D., Schubert, U. S. Poly(ethylene glycol) in Drug Delivery: Pros and Cons as Well as Potential Alternatives. Angewandte Chemie International Edition. 49 (36), 6288-6308 (2010).
  4. Eetezadi, S., Ekdawi, S. N., Allen, C. The challenges facing block copolymer micelles for cancer therapy: In vivo barriers and clinical translation. Advanced Drug Delivery Reviews. 91, 7-22 (2015).
  5. Attwood, D., Booth, C., Yeates, S. G., Chaibundit, C., Ricardo, N. Block copolymers for drug solubilisation: Relative hydrophobicities of polyether and polyester micelle-core-forming blocks. International Journal of Pharmaceutics. 345 (1-2), 35-41 (2007).
  6. Matsumura, Y., Kataoka, K. Preclinical and clinical studies of anticancer agent-incorporating polymer micelles. Cancer Science. 100 (4), 572-579 (2009).
  7. Chan, A. S., Chen, C. H., Huang, C. M., Hsieh, M. F. Regulation of particle morphology of pH-dependent poly(epsilon-caprolactone)-poly(gamma-glutamic acid) micellar nanoparticles to combat breast cancer cells. Journal of Nanoscience and Nanotechnology. 10 (10), 6283-6297 (2010).
  8. Diao, Y. Y., et al. Doxorubicin-loaded PEG-PCL copolymer micelles enhance cytotoxicity and intracellular accumulation of doxorubicin in adriamycin-resistant tumor cells. International Journal of Nanomedicine. 6, 1955-1962 (2011).
  9. Mikhail, A. S., Allen, C. Poly(ethylene glycol)-b-poly(ε-caprolactone) Micelles Containing Chemically Conjugated and Physically Entrapped Docetaxel: Synthesis, Characterization, and the Influence of the Drug on Micelle Morphology. Biomacromolecules. 11 (5), 1273-1280 (2010).
  10. Kataoka, K., Harada, A., Nagasaki, Y. Block copolymer micelles for drug delivery: design, characterization and biological significance. Advanced Drug Delivery Reviews. 47 (1), 113-131 (2001).
  11. Nakanishi, T., et al. Development of the polymer micelle carrier system for doxorubicin. Journal of Controlled Release. 74 (1-3), 295-302 (2001).
  12. Liu, J., Xiao, Y., Allen, C. Polymer-drug compatibility: A guide to the development of delivery systems for the anticancer agent, ellipticine. Journal of Pharmaceutical Sciences. 93 (1), 132-143 (2004).
  13. Flory, P. J. Molecular Size Distribution in Ethylene Oxide Polymers. Journal of the American Chemical Society. 62 (6), 1561-1565 (1940).
  14. Kazanskii, K. S., Solovyanov, A. A., Entelis, S. G. Polymerization of ethylene oxide by alkali metal-naphthalene complexes in tetrahydrofuran. European Polymer Journal. 7 (10), 1421-1433 (1971).
  15. Crothers, M., et al. Micellization and Gelation of Diblock Copolymers of Ethylene Oxide and Styrene Oxide in Aqueous Solution. Langmuir. 18 (22), 8685-8691 (2002).
  16. Taboada, P., et al. Block Copolymers of Ethylene Oxide and Phenyl Glycidyl Ether: Micellization, Gelation, and Drug Solubilization. Langmuir. 21 (12), 5263-5271 (2005).
  17. Taboada, P., et al. Micellization and Drug Solubilization in Aqueous Solutions of a Diblock Copolymer of Ethylene Oxide and Phenyl Glycidyl Ether. Langmuir. 22 (18), 7465-7470 (2006).
  18. Attwood, D., Booth, C. Colloid Stability. , Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA. 61-78 (2010).
  19. Le Devedec, F., et al. Postalkylation of a Common mPEG-b-PAGE Precursor to Produce Tunable Morphologies of Spheres, Filomicelles, Disks, and Polymersomes. ACS Macro Letters. 5 (1), 128-133 (2016).
  20. Chtryt, V., Ulbrich, K. Conjugate of Doxorubicin with a Thermosensitive Polymer Drug Carrier. Journal of Bioactive and Compatible Polymers. 16 (6), 427-440 (2001).
  21. Kataoka, K., et al. Doxorubicin-loaded poly(ethylene glycol)-poly(β-benzyl-l-aspartate) copolymer micelles: their pharmaceutical characteristics and biological significance. Journal of Controlled Release. 64 (1-3), 143-153 (2000).
  22. Cammas, S., Matsumoto, T., Okano, T., Sakurai, Y., Kataoka, K. Design of functional polymeric micelles as site-specific drug vehicles based on poly (α-hydroxy ethylene oxide-co-β-benzyl l-aspartate) block copolymers. Materials Science and Engineering: C. 4 (4), 241-247 (1997).
  23. Lv, S., et al. Doxorubicin-loaded amphiphilic polypeptide-based nanoparticles as an efficient drug delivery system for cancer therapy. Acta Biomaterialia. 9 (12), 9330-9342 (2013).
  24. Kim, J. O., Oberoi, H. S., Desale, S., Kabanov, A. V., Bronich, T. K. Polypeptide nanogels with hydrophobic moieties in the cross-linked ionic cores: synthesis, characterization and implications for anticancer drug delivery. Journal of Drug Targeting. 21 (10), 981-993 (2013).
  25. Zhao, C. L., Winnik, M. A., Riess, G., Croucher, M. D. Fluorescence probe techniques used to study micelle formation in water-soluble block copolymers. Langmuir. 6 (2), 514-516 (1990).
  26. Wilhelm, M., et al. Poly(styrene-ethylene oxide) block copolymer micelle formation in water: a fluorescence probe study. Macromolecules. 24 (5), 1033-1040 (1991).
  27. Cammas, S., Kataoka, K. Functional poly[(ethylene oxide)-co-(β-benzyl-L-aspartate)] polymeric micelles: block copolymer synthesis and micelles formation. Macromolecular Chemistry and Physics. 196 (6), 1899-1905 (1995).
  28. Kwon, G., et al. Micelles based on AB block copolymers of poly(ethylene oxide) and poly(.beta.-benzyl L-aspartate). Langmuir. 9 (4), 945-949 (1993).
  29. Ahmed, F., Discher, D. E. Self-porating polymersomes of PEG-PLA and PEG-PCL: hydrolysis-triggered controlled release vesicles. Journal of Controlled Release. 96 (1), 37-53 (2004).
  30. Uhrig, D., Mays, J. W. Experimental techniques in high-vacuum anionic polymerization. Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry. 43 (24), 6179-6222 (2005).
  31. Parker, A. J. The effects of solvation on the properties of anions in dipolar aprotic solvents. Quarterly Reviews, Chemical Society. 16 (2), 163-187 (1962).
  32. Cram, D. J. Fundamentals o] Carbanion Chemistry. , (1965).
  33. Szwarc, M. ACS Symposium Series. 166, American chemistry society. 1-15 (1981).
  34. Cho, Y. W., Lee, J., Lee, S. C., Huh, K. M., Park, K. Hydrotropic agents for study of in vitro paclitaxel release from polymeric micelles. Journal of Controlled Release. 97, 249-257 (2004).
  35. Dewhurst, P. F., Lovell, M. R., Jones, J. L., Richards, R. W., Webster, J. R. P. Organization of Dispersions of a Linear Diblock Copolymer of Polystyrene and Poly(ethylene oxide) at the Air−Water Interface. Macromolecules. 31 (22), 7851-7864 (1998).
  36. Opanasopit, P., et al. Block Copolymer Design for Camptothecin Incorporation into Polymeric Micelles for Passive Tumor Targeting. Pharmaceutical Research. 21 (11), 2001-2008 (2004).
  37. Allen, G., Booth, C., Price, C. VI-The physical properties of poly(epoxides). Polymer. 8, 414-418 (1967).
  38. Jada, A., Hurtrez, G., Siffert, B., Riess, G. Structure of polystyrene-block-poly(ethylene oxide) diblock copolymer micelles in water. Macromolecular Chemistry and Physics. 197 (11), 3697-3710 (1996).
  39. Attwood, D., Florence, A. T. Surfactant systems : their chemistry, pharmacy, and biology. , Chapman and Hall. (1983).
  40. Rekatas, C. J., et al. The effect of hydrophobe chemical structure and chain length on the solubilization of griseofulvin in aqueous micellar solutions of block copoly(oxyalkylene)s. Physical Chemistry Chemical Physics. 3 (21), 4769-4773 (2001).
  41. Encyclopædia Britannica Online. , http://www.britannica.com/EBchecked/topic/479680/protein/72559/Proteins-of-the-blood-serum (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи