Анализ CApillary FEeder (CAFE) - это простой, недорогой и высоконадежный метод исследования механизмов, лежащих в основе потребления пищи. Используемый с очень универсальным генетическим модельным организмом Drosophila melanogaster, он предоставляет мощное средство для получения нового понимания регуляторных механизмов потребления пищи.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Капиллярных фидерных Анализ мер по обеспечению продовольственной приема внутрь
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Для большинства животных кормление является важным поведением для обеспечения выживания, и оно влияет на развитие, передвижение, здоровье и размножение. Таким образом, употребление правильного типа и в нужном количестве пищи оказывает большое влияние на качество жизни. Исследования пищевого поведения сосредоточены на основных процессах, которые обеспечивают фактическое питание, и раскрывают роль факторов, регулирующих внутренний энергетический гомеостаз и нейронные основы принятия решений. Модельный организм Drosophila melanogaster, с его большим разнообразием генетически отслеживаемых инструментов для маркировки и манипулирования отдельными нейронами, позволяет картировать нейронные сети и идентифицировать молекулярные сигнальные каскады, участвующие в регуляции потребления пищи. В этом отчете демонстрируется анализ CApillary FEeder (CAFE) и показано, как измерить потребление пищи группой мух за промежутки времени от нескольких часов до нескольких дней. Этот простой в использовании анализ состоит из стеклянных капилляров, заполненных жидкой пищей, к которой мухи могут свободно получать доступ и питаться. Потребление пищи в анализе точно определяется с помощью простых измерительных инструментов. В данной статье мы пошагово описываем метод от настройки до успешного проведения анализа CAFE, а также приводим практические примеры для анализа потребления пищи группой мух в контролируемых условиях. Читатель знакомится с возможными ограничениями анализа, а также оценивает преимущества и недостатки метода по сравнению с другими кормовыми анализами у D. melanogaster.
Введение
Питание имеет важное значение; Тем не менее, дерегулирование приема пищи , что приводит к расстройствами пищевого поведения , такие как булимия, анорексия или общей тенденции к переедать требует затрат на отдельных людей и общества в целом 1, 2, 3. Цель настоящего исследования заключается в раскрытии механизмов регуляции потребления пищи и обеспечить стратегию обхода образование расстройства. Многочисленные исследования с использованием модельных организмов млекопитающих обеспечили новые проникновения в суть схемы и роли сигнальных систем в расстройств пищевого поведения
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. КАФЕ Пробирной
Примечание: Анализ состоит из трех компонентов: экспериментальное флакон, специфическим крышкой и микро- капилляры. Пластиковая коробка с крышкой используется для транспортировки подготовленных ампул и более эффективно контролировать влажность.
- Используйте дрозофилы культуры пластиковый флакон ( по желанию высота 8 см, 3,3 см в диаметре) в виде трубки для анализа.
- Уплотнение флакона с помощью изготовленного из оргстекла крышкой , содержащей уплотнительное кольцо (фигуры 1А, 1В). Нагрузка летит, нажав или с паяльной трубкой через центральное отверстие в крышке (0,9 см диаметр....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Мухи ж 1118 генотипа используются для демонстрации того, как выполняется анализ. Ш 1118 мутанты обычно используются для генерации трансгенных линий и контролировать генетический фон трансгенов , отмеченные белым геном. Как правило, для поведенческих экспериментов, все трансгенные линии возвратное скрещивание в течение пяти поколений в то же W 1118 запаса, который используется в качестве экспериментального контроля. Мы п.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В докладе описывается анализ CAFE в моде шаг за шагом, сосредоточив внимание на технической установке и его успешной работы в лаборатории. Благодаря своей простоте, этот анализ также может быть использован в качестве педагогически школьного эксперимента. Примеры показывают , что анализ позволяет исследовать зондирования пищи, предпочтения и потребления в дрозофилы на короткие и длительные периоды времени (часов до нескольких дней). Анализ КАФЕ широко используется в области для исследования предметов , включая п.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Благодарности
Мы благодарим бывших и нынешних сотрудников лаборатории Шольца за обсуждение и Хельгу Дёринг за отличную техническую поддержку. Мы особенно благодарны участникам семинара «Биоцентр» Кёльнского университета за их поддержку и творчество. Работа поддерживается SFB 1340, SysMedAlc и DAAD-Siemens.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Флаконы (разведение) | Greiner Bio-One | 960177 | www.greinerbioone.com |
| флаконы (анализ CAFE) | Greiner Bio-One | 217101 www.greinerbioone.com | |
| Lid-CAFE | – | – | |
| Пластиковый ящик, низкостенный | Plastime | 353 | www.plastime.it |
| Чехол для пластикового ящика | Workshop | – | – |
| Капилляры | BLAUBRAND | REF 7087 07 | www.brand.de |
| Наконечники для пипеток | Greiner Bio-One | 771290 | www.greinerbioone.com |
| Круги из фильтровальной бумаги | Whatman | 10 311 804 | www.sigmaaldrich.com |
| D(+)-Sucrose | AppliChem | 57-50-1 | www.applichem.com |
| Абсолютный этанол | VWR Chemicals | 20,821,330 | www.vwr.com |
| Пищевой краситель (красный, E124) | Backfun | 10027 | www.backfun.de |
| Пищевой краситель (синий, E133) | Backfun | 10030 | www.backfun.de |
| Мыльный раствор (CVK 8) | CVH | 103220 | www.cvh.de |
| Цифровой штангенциркуль | GARANT | 412,616 | www.hoffmann-group.com |
| флаконов (разведение) | Высота 9,8 см, диаметр 4,8 см | ||
| Флаконы (CAFE проба) | Высота 8 см, диаметр 3,3 см | ||
| Крышка-CAFE проба | Изготовлено в университетской мастерской, технический чертеж прилагается Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл. | ||
| Пластиковая коробка, низкая стенка | Пластиковая сетчатая инкрустация была изготовлена на заказ для 8 x 10 мест флакона | ||
| Крышка для пластикового ящика | Размеры (37 х 29 х 18 см) | ||
| Капилляры | DIN ISO 7550 норма, IVD-guideline 98/79 EG, концы полированные | ||
| для пипеток | Пипетки для внешнего круга обрезаются в соответствии с крышкой | ||
| Круги фильтровальной бумаги диаметром | 45 мм хорошо работают в сложенном виде для использованных флаконов | ||
| D(+)-Сахароза | Не вреден | ||
| Этанол абсолютный | Легковоспламеняющаяся жидкость и пар | ||
| Пищевой краситель (красный, E124) | Не указан | ||
| Пищевой краситель (синий, E133) | Не указан | ||
| Мыльный раствор (CVK 8) | Мыло с нейтральным запахом | ||
| Цифровой суппорт | |||
| Стандартный корм | от мух (для 20 л) | ||
| Агар | 160 г | ||
| Пивные дрожжи | 299,33 г | ||
| Кукурузная мука | 1 200 г | ||
Ссылки
- Krauth, C., Buser, J., Vogel, K. How high are the costs of eating disorders - anorexia nervosa and bulimia nervosa - for German society. Eur. J. Health Econ. 3 (4), 244-250 (2002).
- Cawley, J., Meyerhoefer, C. The medical costs of obesity and ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
