Выведение лептоменинкс эксплантата культур от посмертных доноров человеческого мозга

Kelsey Lee; Ou Chong Saetern; Andrew Nguyen; Leonardo Rodriguez; Birgitt Schüle

doi:10.3791/55045

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Выведение лептоменинкс эксплантата культур от посмертных доноров человеческого мозга

7.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55045

⸱

21 января 2017 г.

Kelsey Lee^*¹ , Ou Chong Saetern^*¹ , Andrew Nguyen¹ , Leonardo Rodriguez¹ , Birgitt Schüle¹

¹Parkinson’s Institute and Clinical Center

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Протокол культуры от эксплантов мягкая и паутинная оболочки мозга человеческого мозга посмертных является технически надежный и простой способ получения фибронектин-позитивных менингеальных фибробласты в течение 6-8 недель и криоконсервируют около 20-30 миллионов клеток.

Аннотация

Несмотря на то, значительный прогресс был достигнут в клинической характеристике болезни Паркинсона, некоторые исследования показывают, что диагноз болезни Паркинсона не патологически подтверждено в до 25% от болезни клинически диагностированных Паркинсона. Таким образом, ткань собрана из клинически диагностированных пациентов с идиопатической болезнью Паркинсона может иметь высокий уровень ошибочному диагнозу; следовательно , в пробирке исследования из таких тканей для изучения болезни Паркинсона как доклинические модель может стать бесполезной.

Собрав посмертных человека лептоменинкс с подтвержденным нейропатологического диагнозом болезни Паркинсона и характеризуется нигростриатной потерей клеток и внутриклеточных белковых включений называемые тельца Леви, можно быть уверенным , что клинически наблюдается паркинсонизм не вызывается другим основным процессом заболевания (например , опухоли, атеросклероз).

Этот протокол PresenТ.С. Вскрытие и подготовка посмертных человеческих лептоменинкс для дифференцирования менингеальной культуры фибробластов. Эта процедура является надежной и имеет высокий уровень успеха. Проблема культуры является стерильность, как заготовка головного мозга, как правило, не выполняется в стерильных условиях. Поэтому, важно, чтобы дополнить культуральные среды с коктейлем пенициллин, стрептомицин и амфотерицин В.

Вывод менингеальных фибробластов из случаев аутопсии подтвержденных с болезнью Паркинсона, обеспечивает основу для моделирования в пробирке болезни Паркинсона. Менингеальные фибробласты появляются 3-9 дней после подготовки образца и около 20-30 миллионов клеток могут быть криоконсервации через 6-8 недель. Менингеальная культура фибробластов является однородным и клетки экспрессируют фибронектин, обычно используемый маркер для идентификации мозговых оболочек.

Введение

Мозговые оболочки состоят из трех оболочек, которые защищают мозг: твердой мозговой оболочки, паутинной и мягкой мозговой оболочки. Совсем недавно было признано , что Оболочек также играют важную роль в развитии мозга и мозговой гомеостаз ^1. Оболочках получены из мезенхимальных и нервного гребня полученных клеток и , что интересно, было показано , что клетки - предшественники , проживающих в оболочках могут привести к нейронов в пробирке и после трансплантации в естественных условиях ^{^2,} ^{^3,} ^4. Оболочках культур были также с успехом ис....