Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Обнаружение Inter-хромосомных аберраций Стабильные многократными флюоресценции

9.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55162

⸱

11 января 2017 г.

 ,  , 
1Division of Radiation Health, Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of Arkansas for Medical Sciences, 2Department of Environmental Health, Fay W. Boozman School of Public Health, University of Arkansas for Medical Sciences, 3Surgical Service, Central Arkansas Veterans Healthcare System

В этой статье

Краткое содержание

Настоящий протокол описывает полезность множественной флуоресцентной гибридизации in situ (mFISH) и спектрального кариотипирования (SKY) для идентификации межхромосомных стабильных аберраций в клетках костного мозга мышей после воздействия тотального облучения тела.

Аннотация

Ионизирующее излучение (ИК) индуцирует многочисленные стабильные и нестабильные хромосомные аберрации. Нестабильные аберрации, при которых морфология хромосом существенно нарушена, могут быть легко идентифицированы с помощью обычных методов окрашивания хромосом. Тем не менее, обнаружение стабильных аберраций, которые включают обмен или транслокацию генетических материалов без существенных изменений морфологии хромосом, требует сложных методов рисования хромосом, которые основаны на гибридизации in situ флуоресцентно меченых ДНК-зондов, технике рисования хромосом, широко известной как флуоресценция in situ гибридизация (FISH). FISH-зонды могут быть специфичными для целой хромосомы/ов или для точной субобласти хромосомы. Этот метод позволяет не только визуализировать стабильные аберрации, но и обнаружить хромосомы/хромосом или конкретные последовательности ДНК, участвующие в формировании конкретной аберрации. В цитогенетике доступны различные техники рисования хромосом; Здесь обсуждаются два высокочувствительных метода, множественная флуоресцентная гибридизация in situ (mFISH) и спектральное кариотипирование (SKY), для выявления межхромосомных стабильных аберраций, которые формируются в клетках костного мозга мышей после воздействия тотального облучения тела. Хотя оба метода основаны на флуоресцентно меченых зондах ДНК, метод обнаружения и процесс получения изображений флуоресцентных сигналов различаются. Эти два метода использовались в различных областях исследований, таких как радиационная биология, цитогенетика рака, ретроспективная радиационная биодозиметрия, клиническая цитогенетика, эволюционная цитогенетика и сравнительная цитогенетика.

Введение

Двумя наиболее надежными методами выявления радиационно-индуцированных межхромосомных стабильных аберраций являются множественная флуоресцентная гибридизация in situ (mFISH), которая позволяет окрашивать две или более хромосом одновременно, и спектральное кариотипирование (SKY), которое придает особый цвет каждой гомологичной паре хромосом в геноме. В отличие от нестабильных аберраций, стабильные аберрации являются стойкими по своей природе и могут распространяться в течение нескольких поколений в облученных популяциях1 и рассматриваются как критические молекулярные «сигнатуры» радиационно-индуцированных цитогенетических поражений2. Исследования различных групп показали, что устойчивые аберрации связаны с патогенезом и развитием ряда заболеваний, в том числе рака3. До эры хромосомной живописи (также называемой молекулярной цитогенетикой) обычный метод G-полос был единственным методом обнаружения стабильных хромосомных аберраций. Тем не менее, хромосомная полосатость представляет собой проблему для цитогенетиков, потому что разрешение ограничено, воспроизводимость неопределенна, это трудоемкая процедура, и длянадежной интерпретации данных требуются высококвалифицированные и опытные цитогенетики. Более того, классический метод бандажеирования не позволяет обнаружить сложные хромосомные перестройки, которые включают взаимодействие трех или более разрывов, распределенных между двумя или более хромосомами, что является распространенным результатом радиационного повреждения. Сложные аберрации могут сохраняться у людей в течение многих лет после облучения, что делает их полезными для ретроспективной биодозиметрии5. Таким образом, потребовался альтернативный подход для преодоления ограничений традиционных методов бандажирования для выявления стабильных хромосомных перестроек.

В конце 1960-х годов новаторская работа Галла и Пардью (1969) по молекулярной гибридизации с использованием зондов нуклеиновых кислот, меченных радиоактивным материалом, открыла новую эру в области цитогенетики, которая позволила обнаружить специфическую последовательность ДНК на хромосомах6. Однако использование радиоактивных зондов для молекулярной гибридизации имело ряд недостатков: радиоактивные зонды относительно нестабильны, активность зонда зависит от радиоактивного распада используемого изотопа, гибридизация занимает больше времени, разрешающая способность ограничена, зонды относительно дороги, а радиоактивные материалы опасны для здоровья. Таким образом, возникла необходимость разработки и проектирования нерадиоактивных зондов. Внедрение в 1980-х и 1990-х годах зондов нуклеиновых кислот с флуоресцентной меткой позволило преодолеть ограничения радиоактивных зондов и значительно повысить безопасность, чувствительность и специфичностьметода гибридизации. Флуоресцентные зонды дают чрезвычайно яркие сигналы при наблюдении под флуоресцентными микроскопами, оснащенными соответствующими фильтрами возбуждения и излучения. Любая потеря, усиление или перестройка флуоресцентно меченых хромосом или части хромосомы легко идентифицируется с помощью этого метода FISH.

Анализ хромосомных аберраций с помощью рисования FISH привел к заметному прогрессу в цитогенетических исследованиях за последние годы. Разработка флуоресцентных меченых зондов для конкретных применений, начиная от локус-специфичных зондов и заканчивая зондами для рисования целых хромосом, значительно продвинула эту область; Это также облегчило обнаружение субмикроскопической («криптической») перестройки, которая была невозможна при обычном хромосомном биньировании. Хромосомная живопись с помощью mFISH и SKY оказалась ценным инструментом для идентификации простых и сложных межхромосомных перестроек. Основные принципы обоих методов схожи, но метод обнаружения и различения флуоресцентного сигнала после гибридизации in situ и процесс получения изображения различны. В mFISH отдельные изображения каждого из четырех флуорохромов захватываются с помощью фильтров узкополосного микроскопа; Затем используется специальное программное обеспечение для объединения изображений. В то время как в SKY получение изображений основано на комбинации эпифлуоресцентной микроскопии, визуализации с помощью прибора с зарядовой связью и спектроскопии Фурье, которая позволяет измерять весь спектр излучения с одной экспозицией во всех точках изображения. Как в mFISH, так и в SKY монохромные изображения захватываются независимо друг от друга, затем объединяются, и, наконец, хромосомам в монохроматических изображениях присваиваются уникальные псевдоцвета на основе конкретного красителя, прикрепленного к каждому флуорохромному зонду

.

Вклад анализа mFISH и SKY в область радиационной биологии выдающийся, особенно для ретроспективной оценки дозы воздействия на человека ИК (радиационной биодозиметрии)11-14, оценки риска радиационного канцерогенеза15, а также для выявления и оценки риска вторичного рака, связанного с лучевой терапией16. Недавнее исследование на мышах показало, что метод рисования хромосом на основе FISH также является важным инструментом для оценкиэффективности меры противодействия радиации. В настоящем исследовании с помощью методов mFISH и SKY было продемонстрировано влияние общего облучения тела на индукцию стабильных хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все исследования на животных проводились в строгом соответствии с рекомендациями, приведенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения. Протокол животных был одобрен Institutional Animal Care и использование комитета Университета Арканзаса для медицинских наук по. Все животные были размещены под стандартным кондиционированном вивария при температуре 20 ± 2 ° С с 10 - 15 часовых циклов свежего воздуха и свободный доступ к стандартной пище с грызунами и воды. По прибытии, были проведены мышей в карантине в течение 1 недели и при условии, сертифицированный корм для грызунов.

1.Radiation экспозиции и в естественных условиях Арест метафазных клеток

  1. Expose ун-наркозом мышей до 2 Гр излучения всего тела в камере облучения. При облучении мышей место в хорошо вентилируемом удерживающую камеру, чтобы убедиться, что они не двигаются свободно и получать равномерную дозу.
  2. Вводят 100 мкл 0,05% -ного раствора колхицина (сolchicine порошок растворяется в кальция и магния свободный PBS) внутрибрюшинно с помощью иглы 25 G прикрепленную с 1 мл одноразового шприца. Избегайте инъекции непосредственно в любой орган.
  3. Оставьте животное в клетке в течение 2-х часов до сбора клеток костного мозга. Обратите внимание на животное для каких-либо признаков боли или страданий.

2. клеток костного мозга для уборки урожая и выделение костного мозга мононуклеарных клеток путем центрифугирования в градиенте плотности

  1. Эвтаназии мышь СО 2 удушья.
  2. Спрей 70% этанола на спинной и брюшной стороне.
  3. Сделайте 2 см разрез на коже живота с острыми ножницами. Захватите кожу с обеих сторон разреза с тупыми пинцетом и аккуратно отогните мышцы живота.
  4. Отрезать обе задние ноги с ножницами и сразу же поместить их в предварительно охлажденный PBS с 4% FBS.
  5. Тщательно очистить все мышцы, прикрепленные к задней конечности с резким бритву и хлопка марлевую повязку.
  6. Отделите часть большеберцовой кости от бедренной кости. Обрежьте оба кончики каждой кости с бритву.
  7. Очистить содержимое костного мозга с 3 мл PBS (с 4% FBS) с помощью иглы 23 G, прикрепленную к 3 мл шприца и собирают содержимое в 15 мл центрифужную пробирку. Pass клеточной суспензии, по меньшей мере в 10 раз через иглу, чтобы сделать одну клеточную суспензию.
  8. Аккуратно наложения клеточной суспензии на равном объеме разделения лимфоцитами среды (3 мл), не нарушая границу раздела между клеточной суспензии и среды для разделения лимфоцитов. Центрифуга при 400 х г в течение 30 мин при комнатной температуре.
  9. Соберите поглощающее покрытие тщательно, не нарушая другие слои и передачи в новом 15 мл центрифужную пробирку.

3. Получение метафазе клеточных Спреды

  1. Добавьте 10 мл PBS на пробирку, содержащую поглощающее покрытие.
  2. Центрифуга при 400 х г в течение 5 мин при комнатной температуре.
  3. Осторожно удалите супернатант. Затем распадаются тон клеточный осадок с нежным постукивания и добавляют 10 мл PBS.
  4. Центрифуга при 400 х г в течение 5 мин при комнатной температуре.
  5. Удалить супернатант, не нарушая клеточный осадок, разбейте осадок, и добавить 4 мл подогретого гипотонического раствора хлорида 0,075 М калия. Добавить гипотонический каплю раствора по каплям при осторожном постоянном встряхивании.
  6. Инкубируйте клетки в течение 20 мин при 37 ° С в водяной бане.
  7. После гипотонической обработки, добавляют равный объем (4 мл) фиксирующих (метанол: лед ную уксусную кислоту, 3: 1 об / об) в 15 мл пробирку и осторожно перемешивают путем переворачивания пробирки.
  8. Центрифуга при 400 мкг в течение 5 мин при комнатной температуре и отбросить супернатант.
  9. Перерыв осадок клеток с последующим нарезания резьбы нежном вихре в течение нескольких секунд и добавьте 3 мл раствора закрепителя капли по капле с постоянным встряхиванием.
  10. Инкубировать в течение 30 мин при комнатной температуре, а затем центрифуге при 400 мкг в течение 5 мин.
  11. Удалить супернатант, разбейте осадок клеток с джентльменомле постукивание, и добавьте 3 мл свежей закрепитель.
  12. Центрифуга при 400 мкг в течение 5 мин при комнатной температуре, и удалить супернатант. Разбейте осадок клеток с нежным постукивания, и добавить свежий 3 мл закрепитель.
  13. Повторите шаг 3.12 раза больше.
  14. Центрифуга при 400 х г в течение 5 мин при комнатной температуре, и удаления надосадочной жидкости, не нарушая клеточный осадок. Затем добавьте 400 до 600 мкл закрепителя и тщательно перемешать с пипеткой.
  15. Отбросьте 30 мкл фиксированных клеток на предварительно очищенную и влажных горками, наклоненными под углом 45 ° и позволяют слайды высохнуть на воздухе полностью в течение ночи.

4. Мышь Хромосома Картина mFISH

  1. Хромосома Денатурация
    1. Поместите слайд, содержащий метафазных клеток спреды в 2х SSC в течение 2 мин при комнатной температуре.
    2. Обезвоживают слайде последовательного промывания этанолом в течение 2 мин, каждый в 70%, 80% и 100%. Инкубировать в течение 60 мин при 65 ° С.
    3. Разогреть 40 мл раствора денатурации (70% формамид / 2х ССC; рН 7,0) до 70 ° С (± 2 ° С) в стеклянной Коплин банку в течение 30 мин. Денатурации хромосом путем инкубирования слайд в подогретого раствора денатурации в течение 1 - 1,5 мин.
    4. Угашайте скользить сразу в охлажденном льдом 70% этаноле в течение 2 мин, чтобы остановить процесс денатурации, а также, чтобы предотвратить денатурированный хромосомами от повторного отжига. Затем обезвоживают путем промывки 80% -ным этанолом в течение 2 мин. Повторите промывку этанол с 100% -ным этанолом в течение 2 мин. Полностью высушите скольжение при комнатной температуре.
  2. Денатурация и Гибридизация Probe смеси
    1. Кратко центрифугировать смесь зонд, поставляемый изготовителем, передача 10 мкл зонда смеси в 500 мкл оснастки колпачок центрифужную пробирку, и денатурируют путем инкубирования при 80 ° С (± 2 ° С) на водяной бане в течение 7 мин.
    2. Поместите центрифужную пробирку с зондом смеси в водяной бане при температуре 37 ° С в течение 10 мин.
    3. Нанесите смесь денатурированного зонда на слайд с денатурированным chromosoтез.
    4. Тщательно покрывают область с х 18 мм скольжением стеклянной крышкой 18 мм и устранить любые видимые пузырьки воздуха очень осторожно нажимая на крышку скольжения скользить. Уплотнение все четыре стороны крышки скольжением с резиновым клеем и инкубировать в течение 12 ч до 16 ч в темноте при 37 ° С в увлажненной камере для гибридизации.
  3. Сообщение Гибридизация стирке и обнаружения
    1. Осторожно снимите резиновый клей и покровное.
    2. Поместите слайд в подогретого 0.4x SSC при 74 ° С (± 2 ° С) в течение 5 мин.
    3. Вымойте слайд в моющем растворе II (4x SSC / 0,1% твин-20) в течение 2 мин.
    4. Поместите 20 мкл анти-выцветанию монтажной среде с DAPI контрастирующая (1,5 мкг / мл) и покрывают покровным стеклом. Осторожно нажмите на покровное с лабораторной тканью, чтобы удалить пузырьки воздуха и излишки раствора монтажа. Печать края покровного с лаком для ногтей.
    5. Просмотр слайдов с помощью флуоресцентного микроскопа, оборудованного соответствующими фильтрами.

5. Спектральный кариотипирование (SKY) мышиных хромосомах

  1. Хромосома и зонд денатурации
    1. Равновесие слайд в 2х SSC при комнатной температуре в течение 2 мин, без встряхивания.
    2. Высушить слайд в качестве серии этанола (70%, 80% и 100% этанола) в течение 2 мин каждый при комнатной температуре. Высушите слайд, чтобы полностью удалить этанол.
    3. Теплый 40 мл раствора денатурация (70% формамид / 2х SSC, рН 7,0) в стеклянной Коплин банку в течение 30 мин.
    4. Инкубировать слайд в предварительно нагреваемый денатурации в течение 1 мин до 1,5.
    5. Немедленно погрузить сползание в охлажденную льдом 70% этаноле в течение 2 мин, чтобы остановить процесс денатурации, а также, чтобы предотвратить денатурированный хромосомами от повторного отжига.
    6. Обезвоживают слайд, поместив его в 80% этаноле в течение 2 мин, а затем в 100% этаноле в течение 2 мин при комнатной температуре.
    7. Денатурации SKY зонда (пробирка # 1 поставляется производителем) на водяной бане до 80 ° С (± 2 ° C)в течение 7 минут, а затем сразу же поместить в другую ванну воды, установленной на 37 ° С в течение 10 мин.
  2. зонд гибридизация
    1. Добавьте 10 мкл денатурированного SKY зонда на денатурированных хромосом.
    2. Аккуратно поместите 18 мм х 18 мм покровного стекла на SKY зонда так, чтобы пузырьки воздуха не попали под покровное.
    3. Печать края покровного стекла с резиновым клеем.
    4. Поместите слайд в увлажненной светонепроницаемой камере и инкубировать в темноте при температуре 37 ° С в течение 24 ч до 36 ч.
  3. Пост-гибридизация стирке и флуоресцентным детектированием
    1. Удалите резиновый клей очень осторожно, не нарушая покровное.
    2. Поместите слайд в подогретого быстрого промывочного раствора (0.4x SSC) при 72 ° С (± 2 ° С) в течение 5 мин при постоянном встряхивании. Погрузите слайд в моющем растворе III (4x SSC / 0,1% Tween 20) и инкубировать в течение 1 мин при встряхивании.
    3. Необязательно: Добавьте 80 мкл блокирующего реагента(Пробирка # 2 поставляется производителем) на область гибридизации, место 24 мм х 60 мм пластиковой покровное и инкубировать в темноте при температуре 37 ° С в течение 30 мин в увлажненной камере.
    4. Аккуратно удалите пластиковую покровное и промойте слайд с предварительно нагретом (45 ° C) промывочного раствора III в течение 5 мин.
    5. Нанесите 80 мкл Cy5 окрашивания реагента (флакон # 3 поставляется производителем), место 24 мм х 60 мм пластиковой покровное и инкубировать при 37 ° С в темноте в течение 40 мин в увлажненной камере.
    6. Погрузите слайд в стеклянный сосуд, содержащий Коплин предварительно нагретом (45 ° С) промывочного раствора III (4x SSC / 0,1% твин-20) и инкубируют при 45 ° С в водяной бане в течение 2 мин при встряхивании. Повторите эту стадию промывки 3 раза.
    7. Нанесите 80 мкл Cy5.5 окрашивающего реагента (пробирка # 4 поставляется производителем), место 24 мм х 60 мм пластиковой покровное и инкубировать при 37 ° С в темноте в течение 40 мин в увлажненной камере.
    8. Вымойте слайд 3 раза с предварительно нагретом (45 ºC) моющий раствор III.
    9. Держите слайд в наклонном положении с бумажным полотенцем, чтобы слить лишнюю жидкость. Добавьте 20 мкл анти-выцветанию DAPI реагента (флакон № 5, поставляемый изготовителем) и аккуратно разместить 24 мм х 60 мм покровного стекла без введения каких-либо воздушных пузырьков. Печать края покровного с лаком для ногтей и наблюдать с эпифлуоресцентной микроскопа, снабженного для захвата изображений SKY.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Общее облучение тела вызывает многочисленные хромосомных аберраций в клетках костного мозга облученных мышей. Текущий протокол оптимизирован для в естественных условиях митоза клеток костного мозга после радиационного облучения, урожай клеток костного мозга от задних ног облученных мышей, выделения мононуклеарных клеток костного мозга путем центрифугирования в градиенте плотности, подготовка метафазы клеток спредов и последующего обнаружение радиационно-индуцированных стабильных...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Несколько важных шагов определяют успех mFISH и SKY. Первый и самый важный шаг заключается в оптимизации лечения Колхицин в естественных условиях для митоза из мононуклеарных клеток костного мозга. Концентрация и лечение колхицином время индивидуально или совместно определяют митотический индекс, а также конденсации хромосом-два важных предпосылок для эффективного хромосомной живописи. Высокая концентрация колхицин или более длительное время обработка приводит к весьма кариосферы, несовместимыми для правильной ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Это исследование было поддержано Арканзас космических грантов консорциума и Национального института космических исследований биомедицинской через Национальное управление по аэронавтике и исследованию космического пространства, предоставляет NNX15AK32A (RP) и RE03701 (MH-J), и P20 GM109005 (MH-J), и администрация США ветеранов ( MH-J). Мы благодарим Кристофера Fettes, координатора программы Департамента охраны окружающей среды и гигиены труда в университете Арканзаса для медицинских наук, за редакционную помощь в подготовке рукописи.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
ФормамидСигма-Олдрич221198-100мл
SSC буфер 20&раз; концентратSigma-AldrichS6639-1L
SKY Laboratory реагент для мышейApplied Spectral ImagingFPRPR0030/M40
CAD - набор для обнаружения концентрированных антителApplied Spectral ImagingFPRPR0033
одиночные краски по индивидуальному заказу - 3 цвета; Хромосома мыши 1: Красная, Хромосома мыши 2: Зеленая, Хромосома мыши 3: AquaApplied Spectral ImagingFPRPR0182/10
Стеклянные покровные стеклаFisher Scientific12-545B
Tween 20Fisher ScientificBP337-100
Соляная кислота, 37%, Acros OrganicsFisher ScientificAC45055-0025 
Посуда для окрашивания стекла Fisherbrand  с завинчивающейся крышкойFisher Scientific08-816
KaryoMAX Раствор хлорида калия Life Technologies10575-090
Fisherbrand Superfrost Plus Микроскоп СлайдыFisher Scientific12-550-15
Порошок колцемидаFisher Scientific50-464-757 
Histopaque-1083 Sigma-Aldrich10831
Shepherd Mark I, модель 25 137Cs облучательJ. L. Shepherd & AssociatesModel 484B
Шприц 1 млBD Biosciences647911
этиловым спиртом, 200 ProofFisher ScientificMEX02761
PBS, (1x PBS Liq.), без кальция и магнияFisher ScientificICN1860454
фетальная бычья сывороткаFisher Scientific10-437-010
МетанолFisher ScientificA454SK-4
Ледяная уксусная кислотаFisher ScientificAC295320010
Zeiss MicroscopeZeissAXIO Imager.Z2

Ссылки

  1. Kodama, Y., et al. Stable chromosome aberrations in atomic bomb survivors: results from 25 years of investigation. Radiat Res. 156, 337-346 (2001).
  2. Lucas, J. N. Cytogenetic signature for ionizing radiation. Int J Radiat Biol. 73, 15-20 (1998).
  3. Zaccaria, A., Barbieri, E., Mantovani, W., Tura, S. Chromosome radiation-induced aberrations in patients with Hodgkin's disease. Possible correlation with second malignancy? Boll. Ist. Sieroter. Milan. 57, 76-83 (1978).
  4. Fisher, N. L., Starr, E. D., Greene, T., Hoehn, H. Utility and limitations of chromosome banding in pre- and postnatal service cytogenetics. Am J Med Genet. 5, 285-294 (1980).
  5. Hande, M. P., et al. Complex chromosome aberrations persist in individuals many years after occupational exposure to densely ionizing radiation: an mFISH study. Genes Chromosomes. Cancer. 44, 1-9 (2005).
  6. Gall, J. G., Pardue, M. L. Formation and detection of RNA-DNA hybrid molecules in cytological preparations. Proc Natl Acad Sci U S A. 63, 378-383 (1969).
  7. Bauman, J. G., Wiegant, J., Borst, P., van, D. P. A new method for fluorescence microscopical localization of specific DNA sequences by in situ hybridization of fluorochromelabelled RNA. Exp Cell Res. 128, 485-490 (1980).
  8. Hopman, A. H., et al. Bi-color detection of two target DNAs by non-radioactive in situ hybridization. Histochemistry. 85, 1-4 (1986).
  9. Nederlof, P. M., et al. Three-color fluorescence in situ hybridization for the simultaneous detection of multiple nucleic acid sequences. Cytometry. 10, 20-27 (1989).
  10. Nederlof, P. M., et al. Multiple fluorescence in situ hybridization. Cytometry. 11, 126-131 (1990).
  11. Szeles, A., Joussineau, S., Lewensohn, R., Lagercrantz, S., Larsson, C. Evaluation of spectral karyotyping (SKY) in biodosimetry for the triage situation following gamma irradiation. Int J Radiat Biol. 82, 87-96 (2006).
  12. Camparoto, M. L., Ramalho, A. T., Natarajan, A. T., Curado, M. P., Sakamoto-Hojo, E. T. Translocation analysis by the FISH-painting method for retrospective dose reconstruction in individuals exposed to ionizing radiation 10 years after exposure. Mutat. Res. 530, 1-7 (2003).
  13. Edwards, A. A critique of 'Collaborative exercise on the use of FISH chromosome painting for retrospective biodosimetry of Mayak nuclear-industrial personnel. Int J Radiat Biol. 78, 867-871 (2002).
  14. Bauchinger, M., et al. Collaborative exercise on the use of FISH chromosome painting for retrospective biodosimetry of Mayak nuclear-industrial personnel. Int J Radiat Biol. 77, 259-267 (2001).
  15. Hieber, L., et al. Chromosomal rearrangements in post-Chernobyl papillary thyroid carcinomas: evaluation by spectral karyotyping and automated interphase FISH. J Biomed. Biotechnol. 2011, 693691(2011).
  16. Cohen, N., et al. detection of chromosome rearrangements in two cases of tMDS with a complex karyotype. Cancer Genet Cytogenet. 138, 128-132 (2002).
  17. Pathak, R., et al. The Vitamin E Analog Gamma-Tocotrienol (GT3) Suppresses Radiation-Induced Cytogenetic Damage. Pharm Res. , (2016).
  18. Spurbeck, J. L., Zinsmeister, A. R., Meyer, K. J., Jalal, S. M. Dynamics of chromosome spreading. Am J Med Genet. 61, 387-393 (1996).
  19. Deng, W., Tsao, S. W., Lucas, J. N., Leung, C. S., Cheung, A. L. A new method for improving metaphase chromosome spreading. Cytometry A. 51, 46-51 (2003).
  20. Hande, M. P., et al. Past exposure to densely ionizing radiation leaves a unique permanent signature in the genome. Am J Hum Genet. 72, 1162-1170 (2003).
  21. Tug, E., Kayhan, G., Kan, D., Guntekin, S., Ergun, M. A. The evaluation of long-term effects of ionizing radiation through measurement of current sister chromatid exchange (SCE) rates in radiology technologists, compared with previous SCE values. Mutat. Res. 757, 28-30 (2013).
  22. Kanda, R., et al. Non-fluorescent chromosome painting using the peroxidase/diaminobenzidine (DAB) reaction. Int J Radiat Biol. 73, 529-533 (1998).
  23. Kakazu, N., et al. Development of spectral colour banding in cytogenetic analysis. Lancet. 357, 529-530 (2001).
  24. Rithidech, K. N., Honikel, L., Whorton, E. B. mFISH analysis of chromosomal damage in bone marrow cells collected from CBA/CaJ mice following whole body exposure to heavy ions (56Fe ions). Radiat Environ Biophys. 46, 137-145 (2007).
  25. Abrahams, B. S., et al. Metaphase FISHing of transgenic mice recommended: FISH and SKY define BAC-mediated balanced translocation. Genesis. 36, 134-141 (2003).
  26. Savage, J. R., Simpson, P. On the scoring of FISH-"painted" chromosome-type exchange aberrations. Mutat. Res. 307, 345-353 (1994).
  27. Savage, J. R., Simpson, P. FISH "painting" patterns resulting from complex exchanges. Mutat. Res. 312, 51-60 (1994).
  28. Tucker, J. D., et al. PAINT: a proposed nomenclature for structural aberrations detected by whole chromosome painting. Mutat. Res. 347, 21-24 (1995).
  29. Knehr, S., Zitzelsberger, H., Bauchinger, M. FISH-based analysis of radiation-induced chromosomal aberrations using different nomenclature systems. Int J Radiat Biol. 73, 135-141 (1998).
  30. Lucas, J. N., et al. Rapid translocation frequency analysis in humans decades after exposure to ionizing radiation. Int J Radiat Biol. 62, 53-63 (1992).
  31. Braselmann, H., et al. SKY and FISH analysis of radiation-induced chromosome aberrations: a comparison of whole and partial genome analysis. Mutat. Res. 578, 124-133 (2005).
  32. Sokolova, I. A., et al. The development of a multitarget, multicolor fluorescence in situ hybridization assay for the detection of urothelial carcinoma in urine. J Mol Diagn. 2, 116-123 (2000).
  33. Lindholm, C., et al. Biodosimetry after accidental radiation exposure by conventional chromosome analysis and FISH. Int J Radiat Biol. 70, 647-656 (1996).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Обнаружение Inter-хромосомных аберраций Стабильные многократными флюоресценции
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.