Методическая статья

Сотовый Lineage Анализы и функции генов исследований с использованием Twin-спот MARCM

DOI:

10.3791/55278

⸱

2 марта 2017 г.

 ,  ,  , 
1Institute of Cellular and Organismic Biology, Academia Sinica, 2Graduate Institute of Life Sciences, National Defense Medical Center

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы приводим протокол для мозаичной техники маркировки, которая позволяет визуализировать нейронов, полученных из общей клетки-предшественника в двух различных цветах. Это облегчает нейронную анализ клонов с возможностью рождения-знакомства отдельных нейронов и изучения функции гена в одних и тех же нейронов разных людей.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

M osaic в НАЛИЗ с г epressible с ELL м arker (MARCM) является положительным система маркировки мозаики, которая широко применяется в Drosophila нейробиологических исследований , чтобы изобразить сложные морфологию и манипулировать функции генов в подмножества нейронов в противном случае без опознавательных знаков и невозмущенной организмы. Генетические мозаики, генерируемые в системе MARCM опосредуется через сайт-специфической рекомбинации между гомологичными хромосомами в пределах деления клеток-предшественников, чтобы производить как отмеченные знаком (MARCM клоны) и немаркированные дочерние клетки во время митоза. Расширение метода MARCM, называемый твин-спот MARCM (tsMARCM), этикетки и сдвоенных клеток, полученных от общего предка с двумя разными цветами. Этот метод был разработан для того, чтобы извлекать полезную информацию из обоих Hemi-родословных. Путем всестороннего анализа различных пар tsMARCM клонов, система tsMARCM позволяет высокого разрешения нейронального происхождения MAPPINг выявить точное порядка рождения меченых нейронов, полученных из обычных клеток-предшественников. Кроме того, система tsMARCM также расширяет исследования функции гена, позволяя фенотипический анализ идентичных нейронов различных животных. Здесь мы опишем , как применять систему tsMARCM , чтобы облегчить изучение развития нервной системы у дрозофилы.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мозг, состоящий из огромного количества разнообразных и типов нейронов, жертвует животных со способностью воспринимать, обрабатывать и реагировать на вызовы от внешнего мира. Нейроны взрослого Drosophila центрального мозга получают из ограниченного количества нервных стволовых клеток, называемых нейробласты (NBS), в течение развития 1, 2. Большинство НБС участвующих в нейрогенез головного мозга у дрозофилы проходят асимметричное деление для генерации самообновляющихся NBS и ганглий материнские клетки (GMCS), и GMCs затем пройти через еще один раунд разделения , чтобы произвести две дочерние клетки , которые дифференцируются в нейроны 3 (рис 1А ). Из-за запутанности нейронного морфологии и проблемы, связанные с определением конкретных нейронов, положительно мозаичную технологии маркировки, мозаика анализ с репрессируемый клеток маркером (MARCM), был изобретен для того, чтобы visualizatион одного нейрона или небольшой группы нейронов из популяции окружающих, немеченых нейронов 4.

MARCM использует флиппазы (FLP) / ФЛП целевой системы распознавания (FRT) посредничать сайт-специфической рекомбинации между гомологичными хромосомами внутри клетки - предшественника разделяющая несущего гетерозиготную аллель гена репрессора, экспрессия которого обычно ингибирует экспрессию гена - репортера 4. После того, как митотического деления, рекомбинантные хромосомы разделены на близнецов клетки, таким образом, что одна клетка содержит гомозиготные аллели гена репрессора и другая ячейка не имеет репрессор гена-экспрессию репортера в этой ячейке (и его потомков) больше не является 4 заблокирован. Три клоновых узоры обычно встречаются в MARCM эксперименте, когда ФЛП стохастически индуцируется в NBS или ГМО: одноклеточные и двухкамерные-GMC клоны, которые изображают нейронную морфологию в одноклеточных Resolutioп, и многоклеточные-NB клонов, раскрывающие целые морфологические закономерности нейронов , происходящих от общего NB (рис. 1В) Методика MARCM широко применяется в Drosophila нейробиологических исследований, в том числе в идентификации нейронов типа для реконструкции мозга по всей проводки сетей, нейронная линия анализа для раскрытия истории развития нейронов, фенотипической характеризации генов функций , участвующих в спецификации клеточных судеб, и нейронный морфогенез и дифференциация изучает 5, 6, 7, 8, 9, 10. Поскольку обычные MARCM только этикетки одну из двух дочерних клеток (и родословных) после индуцированного события митотической рекомбинации, потенциально полезной информации от немаркированной стороны теряется. Это ограничение исключает применение основного МСистема ARCM с высокой разрешающей способностью анализа многих нейронных линий , которые переключают клеточные судьбы в быстром темпе или точности анализа функций генов в одинаковых нейронов различных животных 11, 12.

Twin-спот MARCM (tsMARCM) представляет собой развитую систему , которая маркирует нейроны , полученные от общего предка с двумя различными цветами, что делает возможным восстановление полезной информации с обеих сторон близнецов клеток, таким образом преодолевая ограничения исходной системы MARCM 11 ( Фигура 2А - 2С). В системе tsMARCM, две РНК - интерференция (RNAi) основе супрессоры расположены в транс-сайтов гомологичных хромосом в клетке - предшественника, и экспрессию этих супрессоров независимо друг от друга ингибируют экспрессию соответствующих репортеров (Фигура 2В). После сайт-специфической рекомбинации митотического опосредованное через систему FLP / FRT, то ТВто RNAi основе супрессоры стали разделены на две односпальные клетки , чтобы разрешить экспрессию различных репортеров (рис 2В). Два клоновых модели, одноклеточные , связанные с одноклеточных клонах и двуклеточной-GMC , связанных с многоклеточным-NB клонов, как правило , рассматривается в эксперименте tsMARCM (рис 2C). Информация, полученная от одной стороны сдвоенных ячеек могут быть использованы в качестве ссылки на другую сторону, что позволяет с высокой разрешающей способностью анализов нейронального происхождения, такие как рождение датирующим меченых нейронов, и фенотипический анализ идентичных нейронов у различных животных для точного расследования нейронной функции гена 11, 12. Здесь мы приводим протокол шаг за шагом , описывающий , как провести эксперимент tsMARCM, который может быть использован в других лабораториях , чтобы расширить свои исследования развития нервной системы (а также развитие других тканей, если это применимо) у дрозофилы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Построить tsMARCM готовый Мухи с использованием требуемой трансгенов 11, 13

  1. Сформировать оригинальную версию tsMARCM-готовых мух от трансгенов, которые выполняются отдельными мухами 11 (таблица 1). Проведение стандартных генетических схем пересечения летать, которые были описаны ранее, путем ввода нескольких трансгенов в одних и тех же мух акций 13.
    1. В одной родительской линии, собрать трансгены FRT 40а, UAS-mCD8 :: GFP (первый репортер, mCD8 :: GFP, экспрессия трансгена под контролем промотора вверх по течению последовательности активации, которая производит мембранную-привязанными репортер кластера мыши дифференциации 8 белка , слитого с белком зеленого флуоресцентного) и UAS-rCD2RNAi (супрессора , который ингибирует экспрессию второго репортера, а RNAi против экспрессии кластера крысы Oе дифференциация 2, rcd2) на левой руке на 2 - й хромосомы. Место тканеспецифическая драйвер -GAL4 на X или 3 - й хромосомы, если это возможно.
    2. В другой родительской линии, собрать трансгены FRT 40А, УАС-rCD2 :: RFP (второй репортер, rCD2 :: RFP, другая мембрана-привязи репортер , состоящий из rCD2 белка , слитого с красным флуоресцентным белком) и UAS-GFPRNAi (супрессор , который ингибирует экспрессию mCD8 :: GFP, а RNAi против экспрессии GFP) на левой руке на 2 - й хромосомы. Поместите теплового шока (ГВ) -FLP или тканевую-ФЛП на специфичность Х или 3 - й хромосомы, если это возможно.
  2. Сформировать новую версию tsMARCM-готовых мух от трансгенов, которые выполняются отдельными мухами 14 (таблица 1). Проведение стандартных схем летать генетические пересечения, которые были описаны рreviously, путем ввода нескольких трансгенов в одних и тех же мух акций 13.
    1. В одной родительской линии, собрать трансгены на сайте FRT и UAS-mCD8.GFP.UAS-rCD2i (комбинированный трансгеном mCD8 :: GFP и глушителем , который ингибирует экспрессию rCD2 :: RFP) вместе в одной руке 2 - й или 3 - й хромосомы (соответствующие пары трансгены FRT и UAS-mCD8.GFP.UAS-rCD2i указаны в таблице 1). Поместите драйвер тканеспецифическая-GAL4 , отличных хромосому выбранного участка FRT, если это возможно хромосом.
    2. В другой родительской линии, собрать трансгены на сайте FRT и UAS-rCD2.RFP.UAS-GFPi (другой комбинированной трансгеном rCD2 :: RFP и глушителем , который ингибирует экспрессию mCD8 :: GFP) в той же руке 2 - го или 3 - й хромосомы (соответствующие пары трансгены FRT и УАС-rCD2.RFP.UAS-GFPi указаны в таблице 1). Место HS-FLP или тканеспецифическая-ФЛП на отличных хромосому выбранного участка FRT, если это возможно хромосом.

2. Крест tsMARCM готовых Мухи для генерации tsMARCM Клоны в их потомству

  1. Кросс-tsMARCM готовые мухи вместе (например, положить 10-15 самцов мух от стадии 1.1.1 или 1.2.1 и 20-30 девственной самки мух от стадии 1.1.2 или 1.2.2 вместе) во флаконе-муха пищи со свежим -Made дрожжи пасты на стенке флакона.
  2. Поддерживать скрещенные tsMARCM готовые мух при 25 ° С в течение 2-х дней, чтобы повысить шансы на спаривание до сбора оплодотворенных яиц.
  3. Часто передавать скрещенные tsMARCM-готовые мух в свеже дрожжевого флаконы, чтобы избежать скученности (нажмите вниз мух или использовать углекислый газ обезболить мух для облегчения передачи; держать не более 80-100 оплодотворенных яиц в 10 мл FLY-пищи с помощьюл, чтобы избежать слишком много вылупившихся личинок).
  4. Культура животных tsMARCM (т.е. оплодотворенные яйца; пример генотипа tsMARCM животных, используемый на рисунке 3, является HS-ФЛП [22], ж / д, УАС-mCD8 :: GFP, UAS-rCD2RNAi, FRT 40А , GAL4-GH146 / БАС-rCD2 :: ЗП, УАС-GFPRNAi, FRT 40A + +) , которые были заложены в серийно передаваемых флаконах при температуре 25 ° с , пока они не развиваются до желаемых стадий (например, эмбрионов, личинок, или куколки).
  5. Поместите переданные флаконы, которые содержат tsMARCM животных на той же стадии развития в ванну с 37 ° C водой в течение 10, 20, 30, 40 и 50 мин, чтобы определить оптимальное время теплового шока, который индуцирует экспрессию ФЛП для генерации tsMARCM клоны интерес. Пропустить этот шаг , если ткань-ФЛП специфичность используется в эксперименте tsMARCM (HS-ФЛП является предпочтительным для нейронной линии анализа, причины этого предпочтения были описаны ранее 15).
    Примечание: Повторите шаг 2,5, используя оптимальное время теплового шока в будущих экспериментах tsMARCM если больше tsMARCM клоны интерес хотели; как правило, более ФЛП экспрессия индуцируется в HS-FLP [22] по сравнению с ГВ-ЛПФ [1] с тем же время теплового шока.
  6. Культура не в тепловому шоку tsMARCM животных при 25 ° С до тех пор, как они достигли соответствующего стадии развития, а затем перейти к шагу 3.

3. Подготовка, Пятно, и горы Fly Мозги Содержащие tsMARCM Клоны

  1. Готовят блюда щипцов-защиты. Смешать части А (30 г) и части В (3 г) Kit силиконового эластомера с активированным углем (0,25 г). Вылейте смесь в соответствующие блюда.
  2. Dissect личиночной, пупальный или взрослых мозги животных tsMARCM в 1X фосфатно-солевом буфере (PBS) с помощью щипцов на блюдо пинцеты защиты от рассматривании через микроскоп рассечение. Примечание: Протокол для рассечения муха мозга была убываниеribed ранее 16.
  3. Закрепить Муха мозги в стеклянной пластине с точечной 1X PBS, содержащего 4% формальдегида при комнатной температуре в течение 20 мин. Процесс Муха мозги в этой стеклянной пластине пятна на оставшуюся часть шагов.
  4. Полоскание муха мозги три раза 1% PBT (1x PBS, содержащего 1% Тритон Х-100) и промойте их три раза в течение 30 минут каждый 1% PBT (полоскание: удалить PBT и добавлять новые PBT быстро, мыть: удалить PBT, добавить новый PBT и инкубировать муха мозги в новом ПБТ, используя орбитальный шейкер).
  5. Выдержите Муха мозги со смесью первичных антител в течение ночи при 4 ° С или в течение 4 ч при комнатной температуре. Примером смеси первичных антител крысы анти-CD8 антител (1: 100), анти-кролик DsRed антитела (1: 800), и мышиное анти-Bruchpilot (Brp) антитело (1:50) в 1% PBT, содержащий 5% нормальной козьей сыворотки (NGS).
  6. Промыть Муха мозги три раза с помощью 1% PBT, а затем промыть их три раза в течение 30 мин каждый с 1% PBT.
  7. Выдержите Муха мозги со смесью вторичными антителами в течение ночи при 4 ° С или в течение 4 ч при комнатной температуре. Примером смеси вторичных антител IgG антитела козы к антигенам крысу, конъюгированного с зеленым флуоресцентным красителем (1: 800), козы против кроличьего IgG антител, конъюгированных с желто-флуоресцентный краситель (1: 800), и козы против мыши IgG-антитела, конъюгированного с дальним красным-флуоресцентный краситель (1: 800) в 1% PBT, содержащем 5% NGS.
  8. Промыть Муха мозги три раза с помощью 1% PBT, а затем промыть их три раза в течение 30 мин каждый с 1% PBT. Установите их на микро слайд с реагентом анти-закаливания. Положите микро покровного стекла на микро слайд, чтобы покрыть и защитить муха мозги. Печать края микро покровного стекла и микро слайд, используя ясный лак для ногтей. Храните эти смонтированы и запечатаны полететь образцов мозга при 4 ° С.

4. Возьмите, обработки и анализа флуоресцентных изображений tsMARCM Клонов

  1. Захват флуоресцентных изображений tsMARCM клонов фром образцы, созданный на шаге 3.8 с помощью конфокальной микроскопии системы выбора.
  2. Стеки Проектные tsMARCM конфокальной флуоресцентных изображений в двумерную, сплющенные изображения с помощью программного обеспечения для обработки изображений , поставляемый с конфокальной системой микроскопии выбора (см Рисунок 3B - 3E, 3G - 3J, 3л - 3О и 3 - й квартал - 3Т примеры сплющенные софокусные флуоресцентные изображения).
  3. Подсчитайте количество клеток в многоклеточные-NB сторонах клонов tsMARCM с использованием программного обеспечения для обработки соответствующего изображения (например, функцию "Счетчик клеток" в ImageJ 17, см Рисунок 3E, 3J, 3О и 3Т примеры клетки тела нейронов).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Система tsMARCM была использована для облегчения нейронального происхождения анализов и исследований функции генов путем извлечения важной информации о нейронов, происходящих от общих NBS. Система была использована для идентификации большинство (если не все) нейронные типы, определить число клеток каждого нейронного типа, а также установить порядка рождения этих нейронов 11, 12, 18 (смотрите

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Критические шаги в рамках Протокола

Шаги 1.1.1, 1.2.1, 2.3, 2.5, 3.2 и имеют решающее значение для получения хороших результатов tsMARCM. Тканеспецифические драйверы -GAL4 , которые не экспрессируют GAL4 в нервных клеток - предшественников являются предпочтительными для стадий 1.1.1 и 1.2.1. Избегайте чрезмерной скученности животных, выращиваемых в муху пищевых флаконах на этапе 2.3. Поскольку индукция задержка, уровень экспрессии ФЛП на тепловой шок, а среднее время деление нервных кл...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Министерством науки и технологии (MOST 104-2311-B-001-034) и Институт клеточного и Организменные биологии, Академии Синика, Тайвань.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Углекислый газ (CO2)Местный поставщикn.a.Anestizeмухи
CO2 Местныйпоставщикn.a.Сортировка, скрещивание и перенос мух
10x PBS pH 7.4Uniregion Bio-Tech (или другие поставщики)PBS001Препарирование, промывка, промывка и иммуноокрашивание мозгов мух
ФормальдегидSigma-Aldrich252549Исправить мозги мухи
Triton X-100Sigma-AldrichT8787Промыть, промыть и иммуно окрашивать мозги мухи
Нормальная козаJackson ImmunoResearch 005-000-121Иммуноокрашивание мозгов мух
сыворотка
Антитела крысы против мыши CD8Антитела ИнвитрогенMCD0800Иммуноокрашивание мозга мухи
Кролик против DsКрасное антителоКлонтек632496Иммуноокрашивание мозга мухи
Антитела мыши против Brp Исследованияразвития Гибридома Банкnc82Иммуноокрашивание мозга мухи
Антитела IgG против крыс козы, конъюгированные с Alexa Fluor 488InvitrogenA11006Иммуноокрашивание мозгов мухи Антитело
IgG против кролика козы, конъюгированное с Alexa Fluor 546InvitrogenA11035Иммуноокрашивание мозгов мухи Антитело IgG
против мышей козы, конъюгированное с Alexa Fluor 647InvitrogenA21236Иммуноокрашивание мозгов мухи
Реагент против выцветания золота SlowFade золотой реагент против выцветанияМолекулярные зондыS36936Крепление мозга мухи и защита от гашения флуоресценции 
PYREX 9 депрессионная стеклянная точечная пластинаCorning7220-85Препарировать, промыть, промыть и иммуноокрашивать мозги мух
Sylgard 184 набор силиконовых эластомеровWorld Precision InstrumentsSYLG184Сделать черную посуду Sylgard для защиты щипцов во время рассечения мозга
Активированный угольSigma-Aldrich242276-250GСделать черную посуду Sylgard
Щипцы Dumont #5Fine Science Инструменты11252-30Препарировать и установить мозги мухи Микро
горкаCorning2948-75x25Установить мозги мухи
Микро защитное стекло No 1.5VWR International48366-205Установить мозги мухи
Лак для ногтейМестный продавецне доступенУплотнительное микро защитное стекло на микро слайдах
Инкубатор Культура Kansin InstrumentsLTI603летит под углом 25 градусов; C
(или другие поставщики)
Водяная баняKansin InstrumentsWB212-B2Вызывает тепловой шок у мух при температуре 37 градусов; C
(или другие поставщики)
Орбитальный шейкерKansin InstrumentsOS701Промывка и иммуноокрашивание мозгов мух
(или другие поставщики)
Микроскоп для препарированияLeicaEZ4Сортировка, скрещивание и перенос мух; Препарирование, промывка, промывка и иммуноокрашивание мозгов мух
Конфокальный микроскопZeiss (или других производителей)LSM 700 (или других моделей)Клоны изображений TSMARCM
программное обеспечение для обработки изображений 1
(например, Zeiss LSM image browser) 		ZeissнедоступенПроект стека конфокальных изображений
программное обеспечение для обработки изображений 2
(e., ImageJ) 		нет в наличиинетданных Подсчет количества ячеек клонов tsMARCM

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ito, M., Masuda, N., Shinomiya, K., Endo, K., Ito, K. Systematic analysis of neural projections reveals clonal composition of the Drosophila brain. Curr Biol. 23 (8), 644-655 (2013).
  2. Yu, H. H., et al. Clonal development and organization of the adult Drosophila central brain. Curr Biol. 23 (8), 633-643 (2013).
  3. Goodman, C. S., Doe, C. Q. The Development of Drosophila melanogaster. Bate, M., Arias, A. M. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1993).
  4. Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22 (3), 451-461 (1999).
  5. Lee, T., Lee, A., Luo, L. Development of the Drosophila mushroom bodies: sequential generation of three distinct types of neurons from a neuroblast. Development. 126 (18), 4065-4076 (1999).
  6. Lee, T., Marticke, S., Sung, C., Robinow, S., Luo, L. Cell-autonomous requirement of the USP/EcR-B ecdysone receptor for mushroom body neuronal remodeling in Drosophila. Neuron. 28 (3), 807-818 (2000).
  7. Chiang, A. S., et al. Three-dimensional reconstruction of brain-wide wiring networks in Drosophila at single-cell resolution. Curr Biol. 21 (1), 1-11 (2011).
  8. Jefferis, G. S., Marin, E. C., Stocker, R. F., Luo, L. Target neuron prespecification in the olfactory map of Drosophila. Nature. 414 (6860), 204-208 (2001).
  9. Hong, W., Luo, L. Genetic control of wiring specificity in the fly olfactory system. Genetics. 196 (1), 17-29 (2014).
  10. Zhu, S., et al. Gradients of the Drosophila Chinmo BTB-zinc finger protein govern neuronal temporal identity. Cell. 127 (2), 409-422 (2006).
  11. Yu, H. H., Chen, C. H., Shi, L., Huang, Y., Lee, T. Twin-spot MARCM to reveal the developmental origin and identity of neurons. Nat Neurosci. 12 (7), 947-953 (2009).
  12. Yu, H. H., et al. A complete developmental sequence of a Drosophila neuronal lineage as revealed by twin-spot MARCM. PLoS Biol. 8 (8), (2010).
  13. Greenspan, R. J. Fly pushing : the theory and practice of Drosophila genetics. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1997).
  14. Awasaki, T., et al. Making Drosophila lineage-restricted drivers via patterned recombination in neuroblasts. Nat Neurosci. 17 (4), 631-637 (2014).
  15. Lee, T. Generating mosaics for lineage analysis in flies. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 3 (1), 69-81 (2014).
  16. Wu, J. S., Luo, L. A protocol for dissecting Drosophila melanogaster brains for live imaging or immunostaining. Nat Protoc. 1 (4), 2110-2115 (2006).
  17. Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).
  18. Lin, S., Kao, C. F., Yu, H. H., Huang, Y., Lee, T. Lineage analysis of Drosophila lateral antennal lobe neurons reveals notch-dependent binary temporal fate decisions. PLoS Biol. 10 (11), e1001425(2012).
  19. Zhan, X. L., et al. Analysis of Dscam diversity in regulating axon guidance in Drosophila mushroom bodies. Neuron. 43 (5), 673-686 (2004).
  20. Griffin, R., et al. The twin spot generator for differential Drosophila lineage analysis. Nat Methods. 6 (8), 600-602 (2009).
  21. Potter, C. J., Tasic, B., Russler, E. V., Liang, L., Luo, L. The Q system: a repressible binary system for transgene expression, lineage tracing, and mosaic analysis. Cell. 141 (3), 536-548 (2010).
  22. Lai, S. L., Lee, T. Genetic mosaic with dual binary transcriptional systems in Drosophila. Nat Neurosci. 9 (5), 703-709 (2006).
  23. Kao, C. F., Yu, H. H., He, Y., Kao, J. C., Lee, T. Hierarchical deployment of factors regulating temporal fate in a diverse neuronal lineage of the Drosophila central brain. Neuron. 73 (4), 677-684 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Drosophila

Похожие статьи