Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Биолюминесценции и ближней инфракрасной области визуализации неврита зрительного нерва и мозга Воспаление в EAE модели рассеянного склероза у мышей

9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55321

⸱

1 марта 2017 г.

 , 
1Institute of Clinical Pharmacology, University Hospital Frankfurt

В этой статье

Краткое содержание

Мы покажем технику для живого биолюминесценции в естественных условиях и в ближней инфракрасной области визуализации неврит зрительного нерва и энцефалита в экспериментальном аутоиммунный энцефаломиелит (EAE) модели рассеянного склероза у мышей SJL / J.

Аннотация

Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (EAE) в SJL / J мышей является моделью для ремиттирующего рассеянного склероза (РРС). Клинические EAE показатели, характеризующие дефицит моторной функции являются основными показания иммунной опосредованной воспаления спинного мозга. Тем не менее, оценки и веса тела не позволяют провести оценку в естественных условиях воспаления мозга и зрительного нерва. Последнее является ранним и частым проявлением в около 2/3 больных рассеянным склерозом. Здесь мы покажем методы биолюминесценции и ближней инфракрасной области живого изображения для оценки EAE вызванные неврит зрительного нерва, воспаление головного мозга и через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) нарушения в живых мышей с использованием естественных условиях системы формирования изображения в. Биолюминесцентного субстрат активируется оксидаз в первую очередь показал, неврит зрительного нерва. Сигнал был специфичным и позволил визуализировать эффекты лекарств и время курсов заболеванием, которое параллельно клинические результаты. Пегилированные флуоресцентные наночастицы, которые оставались в пределах vasculaturе в течение длительных периодов времени, были использованы для оценки целостности ВВВ. Ближней инфракрасной области обработки изображений выявил утечку ВВВ на пике заболевания. Сигнал был самым сильным вокруг глаз. Ближнего инфракрасного субстратом для матричных металлопротеиназ использовали для оценки EAE-вызванных воспалением. Автофлуоресценции вмешивались сигнала, требуя спектрального расслоении для количественной оценки. В целом, биолюминесценции изображений является надежным методом для оценки EAE-ассоциированной неврит зрительного нерва и эффекты лечения и был выше ближней инфракрасной техники с точки зрения сигнала специфичности, надежности, простоты количественной оценки и стоимости.

Введение

Рассеянный склероз вызван аутоиммунно-опосредованной атакой и разрушением миелиновой оболочки в головном и спинном мозге1. С общей частотой около 3,6 случаев на 100 000 человек в год у женщин и около 2,0 у мужчин, рассеянный склероз является второй по распространенности причиной неврологической инвалидности у молодых людей, после травматических повреждений2,3. Патология заболевания обусловлена генетическими факторами и факторами окружающей среды4, но до сих пор до конца не изучена. Аутореактивные Т-лимфоциты проникают в центральную нервную систему и запускают воспалительный каскад, который вызывает очаговые инфильтраты в белом веществе головного мозга, спинного мозга и зрительного нерва. В большинстве случаев эти инфильтраты изначально обратимы, но стойкость увеличивается с увеличением числа рецидивов. Для изучения патологии заболевания был разработан ряд моделей грызунов. Наиболее популярными моделями являются рецидивирующе-ремиттирующая ЭАЭ у мышей SJL/J и первично-прогрессирующая ЭАЭ у мышей C57BL6.

Клинические баллы EAE, которые описывают степень дефицита двигательной функции и массу тела, являются золотыми стандартами для оценки тяжести EAE. Эти клинические признаки согласуются со степенью инфильтрации иммунных клеток и разрушения миелина в спинном мозге и умеренно предсказывают эффективность медикаментозного лечения у человека5. Однако эти признаки в основном отражают разрушение вентральных волокнистых путей в спинном мозге. В настоящее время не существует простого, неинвазивного, надежного и воспроизводимого метода оценки in vivo инфильтрации мозга и неврита зрительного нерва у живых мышей.

Визуализация in vivo согласуется с принципами 3 "R" Рассела и Берча (1959), которые утверждают замену R, образование Rи уточнение Rв экспериментах на животных6, потому что визуализация увеличивает показания одного животного в несколько временных точек и позволяет уменьшить общее число. В настоящее время воспаление или миелиновый статус в основном оцениваются ex vivo с помощью иммуногистохимии, FACS-анализа или различных молекулярно-биологических методов7, все из которых требуют эвтаназии мышей в определенные моменты времени.

Ряд системных зондов визуализации in vivo был разработан для оценки воспаления кожи, суставов и сосудистой системы. Методы основаны на активации биолюминесцентных или ближних инфракрасных флуоресцентных субстратов тканевыми пероксидазами, включая миелопероксидазу (МПО), матриксные металлопротеиназы (ММП)8 и катепсины9 или циклооксигеназу2. Эти зонды были в основном валидированы на моделях артрита или атеросклероза9,10. Чувствительный к катепсину зонд также использовался для флуоресцентной молекулярной томографической визуализации EAE11. MMP, особенно MMP2 и MMP9, способствуют опосредованному протеазой разрушению ГЭБ в EAE и активируются в местах инфильтрации иммунных клеток12, что позволяет предположить, что эти зонды могут быть полезны для визуализации EAE. То же самое относится и к зондам на основе пероксидазы или катепсина. С технической точки зрения, визуализация воспаления в головном или спинном мозге значительно сложнее, потому что череп или позвоночник поглощают биолюминесцентные и ближние инфракрасные сигналы.

В дополнение к индикаторам воспаления были описаны флуоресцентные химические вещества, которые специфически связываются с миелином и могут позволить количественно определить myelination13. Было обнаружено, что флуоресцентный зонд ближнего инфракрасного диапазона, 3,3'-диэтилтиатрикарбоцианина йодид (ДБТ), специфически связывается с миелинизированными волокнами, и был валидирован в качестве количественного инструмента на мышиных моделях первичных дефектов миелинизации и в классе демиелинизации, вызванной купризоном14. При EAE сигнал DBT был довольно повышенным, что отражало воспаление миелиновых волокон5.

Дополнительным признаком EAE и MS является распад ГЭБ, приводящий к увеличению проницаемости сосудов и экстравазации клеток крови, внеклеточной жидкости и макромолекул в паренхиму ЦНС. Это может привести к отеку, воспалению, повреждению олигодендроцитов и, в конечном итоге, к демиелинизации15,16. Следовательно, визуализация утечки ГЭБ с использованием флуоресцентных зондов, таких как меченный флуорохромом бычий сывороточный альбумин5, которые обычно очень медленно распределяются из крови в ткани, может быть полезной для оценки ЭАЭ.

В настоящем исследовании мы оценили полезность различных зондов в EAE и показали процедуру для наиболее надежного и надежного биолюминесцентного метода. Кроме того, мы обсудим плюсы и минусы зондов ближнего инфракрасного диапазона для активности MMP и целостности BBB.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. EAE Индукция в SJL / J мышей

  1. мышей
    1. Используйте 11-недельных самок мышей SJL / J и позволяют им привыкают к экспериментальной комнате в течение 7 дней. С помощью N = 10 мышей на группу.
    2. Для оценки эффектов лекарств, введение лекарственного средства и плацебо в контрольной группе непрерывно с питьевой водой или с помощью пищевых гранул, начиная 3 или 5 дней после иммунизации (п = 10 в каждой группе). Во время пика заболевания, вводить лекарство или плацебо с молоком или 3% сахара водянистыми кукурузных хлопьев.
  2. материал Иммунизация
    1. С помощью индукционной набор EAE, состоящий из антигена (пептид из протеолипидного белка, PLP139-151, 1 мг / мл эмульсии) в виде эмульсии с полным адъювантом Фрейнда (CFA, убитых нагреванием микобактерий туберкулеза Н37 Ra) и 2-х ампул (5 мкг каждого) лиофилизированного токсина коклюша (PTX).
    2. Растворить PTX (2 мкг / мл) в 1X фосфатно-солевом буфере (PBS, то есть </ EM> добавьте 1,5 мл PBS в каждую пробирку PTX, хорошо перемешать, снять с тем же самым концом пипетки, и добавляют к 1 мл PBS в пробирку объемом 50 мл); хорошо перемешать.
  3. иммунизация
    1. Вводят ПЛП / CFA подкожно в 2 порции, каждая по 100 мкл, как у основания хвоста. Не вводят в задней части шеи, потому что любые иммунные реакции в коже в верхней части спины и шеи будет мешать томографию головы и спинного мозга.
    2. Вводят 100 мкл PTX внутрибрюшинно (IP) два раза в мышь, первый 1 - 2 ч после иммунизации, а второй в 24 ч.
    3. Для получения контрольных мышей, вводят CFA без PLP (2 части по 100 мкл) плюс PTX без PLP.
  4. Мышь обработки после иммунизации
    1. Взвесьте мышей любой другой день до 7-го дня, а затем взвесить их ежедневно.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Мыши теряют около 1 - 2 г массы тела в течение EAE. Снижение отмечает начало EAE.
    2. Оценка клинических симптомов ежедневно с 7-й день согласияING к системам стандарт подсчета очков (то есть, не оценка 0: никаких очевидных изменений двигательных функций; оценка 0.5: дистальный паралич хвоста; счетом 1: полный хвост паралич; оценка 1.5: мягкий парез одной или обеих задних конечностей; счетом 2: тяжелая парез задних ног; оценка 2.5: полный паралич одной задней ноги; оценка 3: полный паралич обеих задних конечностей; оценка 3.5:. полный паралич задних ног и парез одной передней ноги Эвтаназии мышей с десятками 3.5 или выше для > 12 ч.
  5. EAE курс и время визуализации
    1. Выполнение первой формирующей изображение в начале болезни, когда мыши достигают баллы> 1, что будет происходить вокруг 10-й день - 12 после иммунизации.
    2. Выполнение второго изображений на пике, который будет достигнут 1 или 2 дня после того, как первоначальные симптомы развиваются и будут длиться в течение 1 - 3 дней.
      Примечание: В дальнейшем, мыши будут полностью восстановить в течение 7 до 10 дней. Визуализации в промежутках могут по-прежнему показывают утечку сосудов,но показатели воспаления должно быть отрицательным.

2. Биолюминесцентный и ближней инфракрасной области визуализации неврита зрительного нерва и воспаления мозга

  1. Настройка системы формирования изображения
    1. Выполните в естественных изображений с любым оборудованием , которое позволяет для анализа биолюминесценции и ближней ИК сигналов.
    2. Держите мышей под 2 - 2,5% изофлуран анестезии во время всех процедур визуализации.
    3. Позиция один или две мыши рядом друг с другом в аппарате с использованием источников среднего газа. Расположите верхнюю часть позвоночника в центре.
    4. Используйте две мыши одновременно, по одному в каждой группе, для оценки эффектов лекарств для сравнения пар. Это важно для биолюминесценции визуализации.
    5. Щит сайт иммунизации с черной тканью и сфотографировать и базовое изображение, чтобы оценить правильное позиционирование мыши / мышей. Используйте B-фокус с 6,5 см расстоянием до камеры для всех изображений.
  2. Инъекции и визуализация биолюминесценции воспаления зонда
    1. Используйте в естественных условиях настройки системы формирования изображения: эпи-BLI, Em фильтр открыть, Ex фильтровального блока, fstop 1, бинирование 8, фокус B = 6,5 см, объявление экспозиции 120 с; принять базовое изображение.
    2. Вводят 100 мкл IP готового к употреблению хемилюминесцентного реагента (40 мг / мл). Хорошо перемешать перед заполнением шприца.
    3. Захват изображений биолюминесценции 5, 10 и 15 мин после инъекции. Временной ход биолюминесцентного пика отличается от животных.
      Примечание: Пик будет происходить 5 - 10 мин после инъекции; снижение на 15 мин указывает на то, что никаких дополнительных изображений не требуется. С помощью пары мышиные контроля и лечения групп для устранения незначительных погрешностей из-за различных курсов времени.
    4. Заполните описаний, относящихся к эксперименту. Обратите внимание диалоговое окно выскочит автоматически; она включает в себя информацию, такую как штамм мыши, пол, момент времени, времени впрыска зонда, группы и др. Сохраните все файлы в опе папки; они будут иметь метки времени и все описания.
  3. Инъекции и визуализация ближней инфракрасной наночастиц флуоресцентными для целостности ВВВ
    1. Использование ближней инфракрасной области эпифлуоресцентной изображений в B-фокусе (расстояние: 6,5 см). Максимумы возбуждения / эмиссии илированных люминесцентных наночастиц 675/690 нм. Захват двух изображений на различных длинах волн, на Ex640 / Em700 и Ex675 / EM720; использовать 2-ю экспозицию, бинирование 8, и fstop 2. Возьмите базовое изображение.
    2. Вводят 70 мкл пегилированного люминесцентных наночастиц инфракрасных в.в. через хвостовую вену и представить мышей через 3 ч и 24 ч после инъекции с помощью описанных выше параметров. Смешайте скважину раствора перед заполнением шприца.
    3. Вводят 0,9% хлорида натрия в контрольных мышей, которые будут необходимы для оценки специфичности сигнала.
  4. Инъекции и визуализация ближней инфракрасной флуоресцентного зонда для активности ММР
    1. Бритье или депилировать голову и UPPER позвоночника область осторожно за один день до принятия базового изображения. Кожа не должна быть причинен вред.
    2. Использование ближней инфракрасной области эпифлуоресцентной изображений в B-фокусе (расстояние: 6,5 см). Максимумы возбуждения / эмиссии активируемый зонда ММР являются 680/700 нм. Захват двух изображений на различных длинах волн, на Ex640 / Em700 и Ex675 / EM720; использовать 1-s экспозиции, бинирование 8, и fstop 2. Возьмите базовое изображение.
    3. Добавить 200 мкл 1x PBS в 1,5-мл трубки раствора готового к использованию (20 нмоль / 1,5 мл в 1x PBS), таким образом, что она будет достаточно для 10 мышей; хорошо перемешать перед заполнением шприца.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Прилагаемый объем не принимает во внимание, что некоторый объем теряется при заполнении шприца и инъекции.
    4. Вводят 150 мкл зонда IV через хвостовую вену за 24 ч до обработки изображений. Вводят PBS только у контрольных животных с целью оценки специфичности сигнала.
    5. Через 24 часа после инъекции, возьмите эпи-FL изображения, по крайней мере на двух длинах волн, Ex640 / Em700 и Ex 675 / EM720, с настройками объяснено выше (1-s экспозиция, фокус B, бинирование 8 и fstop 2).
      Примечание: Использование двух длин волн позволяет спектрального несмешивания путем вычитания неспецифического сигнала.

3. Анализ изображений

  1. Анализ биолюминесценции (BLI)
    1. Дважды щелкните на программное обеспечение, чтобы открыть его.
    2. В верхней строке меню, нажмите на значок браузера файлов, перейдите в каталог папки эксперимента, и выберите его; это откроет все файлы в папке в таблице.
    3. Настроить столбцы, показывающие описания, относящиеся к эксперименту.
    4. Для контроля качества, дважды щелкните по файлу не-респондеров мыши без симптомов EAE и / или наивным мыши, чтобы проверить специфичность сигналов EAE.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Там не должно быть никакого сигнала в наивных мышей и минимального сигнала в не иммунокомпетентных мышей.
      1. Проверка базового изображения перед инъекцией пробыть для каждой мыши в качестве дополнительного контроля специфичности сигнала; оно должно быть отрицательным.
    5. Для выбора изображения, дважды щелкните на первом файле первого EAE мыши и проверьте интенсивности биолюминесценции (LUT диапазон бар) и локализации. Проверьте все снимки один за другим. Закройте файл с самой низкой интенсивности для каждой мыши (то есть, держать 2 из 3 изображений для каждой мыши).
    6. Настройка изображения и экспорт
      1. Дважды щелкните первый файл, который будет количественно. Обратите внимание новое окно выскочит. В разделе "Варианты" (верхнее меню), настроить ярлыки для отображения в каждом изображении.
      2. В палитре правильный инструмент, перейдите в раздел "настройки изображения." По умолчанию, минимальные и максимальные значения интенсивности устанавливаются на "Авто" и отображается в радужной псевдоцвете. Выберите "Manual", чтобы изменить настройки, если это необходимо.
        Примечание: Например, все экспортируемые изображения могут иметь идентичные LUT полосы (идентичные минимумы и максимумы), чтобы быть легко сопоставимы.Регулирование минимумов и максимумов не оказывает никакого влияния на количественные результаты.
      3. Нажмите на экспорт изображения, выберите PNG, каталога, и имя изображения
    7. Количественное регионов интереса (ROI)
      1. Перейти к "ROI" инструмента в палитре инструментов. Выберите метод ROI (круг, прямоугольный, авто, или свободной руки) и количество трансформирования. Обратите внимание окно ROI всплывают в окне изображения.
      2. С помощью мыши, настроить размер и положение. Используйте одинаковые пороги ROI для всех изображений, если используется инструмент автоматического ROI. Используйте одинаковые области для всех изображений , если размеры и позиции ROI определяются вручную (например, циркулярные трансформирования).
      3. Нажмите на кнопку "измерения RO.I. Наблюдайте новое окно выскочит. Настройка столбцов (например, имя файла, номер животного, группа, эксперимент, площадь, всего на счету, средний подсчет, подсчет SD, минимальное и максимальное подсчитывает, площадь, время точка, время впрыска зонда и т.д.). Сохраните пользовательские настройки. При повторномАди, выбрать все (Ctrl + A), а затем скопировать и вставить таблицу в таблицу.
      4. Экспорт изображения в качестве PNG с трансформирования на месте. Сохраните и закройте файл изображения.
    8. Повторите процедуру (шаги 3.1.6 - 3.1.7) для всех файлов изображений, которые должны быть определены количественно. Скопируйте все ROI количественными в электронную таблицу.
      Примечание: Здесь, результаты могут быть отсортированы по группам, момент времени и т.д. , и статистический анализ. Используйте общие подсчеты биолюминесценции сигналов в трансформирования для статистического анализа.
  2. Ближней ИК -области спектра (NIR) анализ флуоресцентных наночастиц
    1. С помощью элементов управления в программном обеспечении, отрегулируйте порог изображения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Это не оказывает никакого влияния на количественный результат.
    2. Визуально сравнить изображения, снятые при Ex / Em 675/720 и Ex / Em 640/700 для оценки специфичности сигнала.
    3. Используйте изображения, снятые при Ex / Em 675/720 для количественного анализа (максимум возбуждения: 680 нм), Определение трансформирования, для которых может быть использован инструмент автоматического ROI. Отрегулируйте порог автоматического ROI и использовать его для всех изображений. Количественно общий лучистую эффективность в трансформирования (см шаг 3.1).
  3. Ближней ИК -области спектра (NIR) анализ протеазы-чувствительного зонда
    1. С помощью программного управления, регулировки порога изображения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Это не оказывает никакого влияния на количественный результат. Выполните спектральный расслоении в автофлуоресценции. Инструмент несмешивание реализуется в живой образ. Авто-несмешивание использует Ex / EM 640/700 как специфический и 675/720 в качестве авто-флуоресцентное изображение.
    2. Выберите замешанный изображение и определить трансформирования, как описано выше. Используйте полную лучистую эффективность трансформирования для количественного и статистического анализа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Время Курс биолюминесценции неврита зрительного нерва

Биолюминесценции сигнал воспаления зонда был самым сильным вокруг глаз и происходило исключительно у мышей с EAE неврита зрительного нерва. Сигнал произошло ни в одном из мышей не-EAE, ни мышей, которым не вводили воспаления зонда. Сигнал исчез, когда мышей выздоровели. Следовательно, сигнал специфичен для неврита зрительного нерва, а пик сигнала параллелен...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Настоящее видео показывает методы для биолюминесценции и ближней инфракрасной флуоресценции в естественных условиях визуализации EAE у мышей SJL / J. Мы покажем, что биолюминесценции визуализации с использованием воспаление чувствительного зонда в основном показывает, неврит зрительного нерва, а также количественное определение согласуется с клинической оценкой тяжести ЕАЕ и побочные эффекты препаратов. Тем не менее, метод биолюминесценции визуализации не смог обнаружить воспаление поясничного отдела спинного м...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Это исследование было поддержано Deutsche Forschungsgemeinschaft (CRC1039 A3) и программа исследования финансирования "Landesoffensive цур Entwicklung wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz" (LOEWE) штата Hessen, научно-исследовательского центра трансляционной медицины и фармакологии TMP и Else Kröner-Fresenius Foundation (EKFS), подготовки научных кадров Группа трансляционные исследования Инновации - Pharma (TRIP).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
AngioSpark-680Perkin Elmer, Inc., Waltham, СШАNEV10149Imaging Probe, пегилированные наночастицы, пригодные для визуализации целостности гематоэнцефалического барьера
MMP-sense 680Perkin Elmer, Inc., Waltham, СШАNEV10126Imaging Probe, активируемый матриксными металлопротеиназами, полезный для визуализации воспаления
XenoLight RediJect Inflammation ProbePerkin Elmer, Inc., Waltham, США760535Визуализирующий зонд, активируемый оксидазами, полезный для визуализации воспаления
PLP139-151/CFA эмульсия Hooke Labs, Сент-Лоренс, MAEK-0123Индукционный набор EAE
Токсин коклюшаHooke Labs, Сент-Лоренс, MAEK-0123Индукционный комплект EAE
IVIS Lumina SpectrumPerkin Elmer, Inc., Уолтем, СШАБиолюминесцентная и инфракрасная система визуализации
LivingImage 4.5 программное обеспечение Perkin Elmer, Inc., Уолтем, США CLS136334программное обеспечение для анализа IVIS
IsofluraneAbbott Labs, Иллинойс, США26675-46-7Анестетик

Ссылки

  1. Compston, A., Coles, A. Multiple sclerosis. Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).
  2. Dunn, J. Impact of mobility impairment on the burden of caregiving in individuals with multiple sclerosis. Expert Rev Pharmacoecon Outcomes Res. 10 (4), 433-440 (2010).
  3. Dutta, R., Trapp, B. D. Mechanisms of neuronal dysfunction and degeneration in multiple sclerosis. Prog Neurobiol. 93 (1), 1-12 (2011).
  4. Sawcer, S., et al. Genetic risk and a primary role for cell-mediated immune mechanisms in multiple sclerosis. Nature. 476 (7359), 214-219 (2011).
  5. Schmitz, K., et al. R-flurbiprofen attenuates experimental autoimmune encephalomyelitis in mice. EMBO Mol Med. 6 (11), 1398-1422 (2014).
  6. Balls, M. The origins and early days of the Three Rs concept. Altern Lab Anim. 37 (3), 255-265 (2009).
  7. Barthelmes, J., et al. Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues. J Vis Exp. (111), (2016).
  8. Leahy, A. A., et al. Analysis of the trajectory of osteoarthritis development in a mouse model by serial near-infrared fluorescence imaging of matrix metalloproteinase activities. Arthritis Rheumatol. 67 (2), 442-453 (2015).
  9. Scales, H. E., et al. Assessment of murine collagen-induced arthritis by longitudinal non-invasive duplexed molecular optical imaging. Rheumatology (Oxford). 55 (3), 564-572 (2016).
  10. Nahrendorf, M., et al. Dual channel optical tomographic imaging of leukocyte recruitment and protease activity in the healing myocardial infarct. Circ Res. 100 (8), 1218-1225 (2007).
  11. Eaton, V. L., et al. Optical tomographic imaging of near infrared imaging agents quantifies disease severity and immunomodulation of experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo. J Neuroinflammation. 10, (2013).
  12. Kandagaddala, L. D., Kang, M. J., Chung, B. C., Patterson, T. A., Kwon, O. S. Expression and activation of matrix metalloproteinase-9 and NADPH oxidase in tissues and plasma of experimental autoimmune encephalomyelitis in mice. Exp Toxicol Pathol. 64 (1-2), 109-114 (2012).
  13. Wang, C., et al. In situ fluorescence imaging of myelination. J Histochem Cytochem. 58 (7), 611-621 (2010).
  14. Wang, C., et al. Longitudinal near-infrared imaging of myelination. J Neurosci. 31 (7), 2382-2390 (2011).
  15. Engelhardt, B. Molecular mechanisms involved in T cell migration across the blood-brain barrier. J Neural Transm. 113 (4), 477-485 (2006).
  16. Badawi, A. H., et al. Suppression of EAE and prevention of blood-brain barrier breakdown after vaccination with novel bifunctional peptide inhibitor. Neuropharmacology. 62 (4), 1874-1881 (2012).
  17. Simmons, S. B., Pierson, E. R., Lee, S. Y., Goverman, J. M. Modeling the heterogeneity of multiple sclerosis in animals. Trends in immunology. 34 (8), 410-422 (2013).
  18. Lin, T. H., et al. Diffusion fMRI detects white-matter dysfunction in mice with acute optic neuritis. Neurobiol Dis. 67, 1-8 (2014).
  19. Knier, B., et al. Neutralizing IL-17 protects the optic nerve from autoimmune pathology and prevents retinal nerve fiber layer atrophy during experimental autoimmune encephalomyelitis. J Autoimmun. 56, 34-44 (2015).
  20. Schellenberg, A. E., Buist, R., Yong, V. W., Del Bigio, M. R., Peeling, J. Magnetic resonance imaging of blood-spinal cord barrier disruption in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis. Magn Reson Med. 58 (2), 298-305 (2007).
  21. Mori, Y., et al. Early pathological alterations of lower lumbar cords detected by ultrahigh-field MRI in a mouse multiple sclerosis model. Int Immunol. 26 (2), 93-101 (2014).
  22. Bittner, S., et al. Endothelial TWIK-related potassium channel-1 (TREK1) regulates immune-cell trafficking into the CNS. Nat Med. 19 (9), 1161-1165 (2013).
  23. Theien, B. E., et al. Differential effects of treatment with a small-molecule VLA-4 antagonist before and after onset of relapsing EAE. Blood. 102 (13), 4464-4471 (2003).
  24. Hawkins, B. T., Davis, T. P. The blood-brain barrier/neurovascular unit in health and disease. Pharmacol Rev. 57 (2), 173-185 (2005).
  25. Coisne, C., Mao, W., Engelhardt, B. Cutting edge: Natalizumab blocks adhesion but not initial contact of human T cells to the blood-brain barrier in vivo in an animal model of multiple sclerosis. J Immunol. 182 (10), 5909-5913 (2009).
  26. Andresen, V., et al. High-resolution intravital microscopy. PLoS One. 7 (12), e50915(2012).
  27. Bukilica, M., et al. Stress-induced suppression of experimental allergic encephalomyelitis in the rat. Int J Neurosci. 59 (1-3), 167-175 (1991).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

in vivo
Биолюминесценции и ближней инфракрасной области визуализации неврита зрительного нерва и мозга Воспаление в EAE модели рассеянного склероза у мышей
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.