Здесь мы приводим протокол для выполнения полупроницаемую с высокой пропускной способностью анализа миграции клеток на 96-луночный культуральный планшет. Этот протокол является быстрый, простой и экономичный способ создать логичную скретч раны на клетку монослоя.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Устройства для осуществления миграции клеток / заживлении ран в 96-луночный планшет
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Миграции клеток / ранив анализа является широко используемым методом для изучения миграции клеток и другие биологические процессы, такие как ангиогенез и метастазирование опухоли. В этом анализе клетки выращивают с образованием сливающийся монослой и механический рана создается царапанием с устройством. Тогда скорость миграции клеток по отношению к обнаженную область можно контролировать с помощью визуализации. Наш 8-канальный механический wounder предназначен для решения большинства проблем, связанных с миграцией клеток анализа. Во-первых, наша wounder можно легко стерилизовать автоклавированием или с общими дезинфицирующими средствами. Во-вторых, отдельные регулируемые штифты позволяют даже контактировать с клеточной культуральной пластины таким образом, что могут быть созданы острые и воспроизводимые раны. В-третьих, направляющие стержни с обеих сторон wounder обеспечить последовательную позицию ранив в каждую лунку. Использование одноразовых наконечников пластиковой пипетки для ранении может дополнительно обеспечивать лучшее обработку wounder, а также свести к минимуму перекрестные contaminatиона. В заключение, наша ячейка wounder может предоставить исследователям с удобным и воспроизводимым устройством для проведения анализа миграции клеток с использованием стандартного 96-луночного культурального пластину.
Введение
Миграция клеток играет важную роль в клеточных процессах, таких как эмбриогенез, нейрогенез, ангиогенез, заживление ран, слизистых оболочек, эпителиальные ремонт-мезенхимальных-переходов при нормальном развитии и ситуации заболевания 1. Это сложный процесс , который включает в себя координацию многочисленных меж- и внутриклеточных событий , в том числе сигнальных взаимодействий молекул, поляризация клеток, цитоскелета реорганизации, матрицы ремоделирования, мембранного выпячивания и динамическая межклеточной адгезии модуляции 2. Путем изучения миграции клеток, обнаружение и проверка химических веществ или биологических ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Введение в Части Wounder (Рисунок 1)
- Подготовьте держатель штифта путем фиксации ранении штифты на равных расстояниях. Держите кончики пипеток и отрегулируйте высоту наконечника путем перемещения регулируемых ранив штифты вверх и вниз.
- Установить регулируемый ориентируемся планку на различных марок 96-луночные культуральные планшеты и убедитесь, что площадь ранении находится в фиксированном положении.
- Закрепите регулируемое ранив штифт, затянув болт с шестигранной головкой. Закрепите направляющую-бар в положении, затянув колпачки с шестигранной головкой гнездо на обоих концах.
2. Установка ширины держ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Этот 8-канальный механический wounder построен поцарапать монослой клеток для выполнения анализа миграции клеток. Это удобно устройство, которое может выполнять клеточные царапать анализы в 96-луночные планшеты в менее чем за минуту без специальной подготовки. Это wounder можно ввести области , намотанных на клеточных монослоев с равномерной шириной около 600 мкм и с острыми краями (5 и 6). Ширина раны зависит от марки пипеток и производительности пользо.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Наша ячейка wounder имеет несколько уникальных особенностей в решении проблем традиционной миграции клеток анализов. 8-канальный механический ячейки wounder изготовлен из высококачественной нержавеющей стали (сталь 304) с длительным сроком службы, который можно стерилизовать автоклавированием. Почти все коммерческие марки 96-луночные планшеты для культуры, доступных на рынке могут быть использованы с этой механической клетки wounder из-за регулируемым направляющим брусом. Конструкция регулируемого направляющим брусом та.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Авторы хотели бы поблагодарить г Tam Po Leung, г-н Вонг Чи Кин и технический состав факультета Workshop науки, Гонконг Baptist University, за свои технические навыки и консультации в создании прототип этого wounder.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 96-луночный планшет для клеточных культур | Nunc | 167008 | Другие бренды 96-луночных планшетов для клеточных культур также могут быть использованы |
| наконечники для пипеток P10 | Axygen | 301-03-051 | Короткий наконечник для пипетки P10 более прост для создания прозрачной раны |
| Wounder | R& P Technology Limited | ||
| Medium 199 | Sigma | M2520-1L | Для клеточной культуры эндотелиальных клеток пупочной вены человека. Используйте соответствующую питательную среду и условия для других типов клеток. |
| Фетальная бычья сыворотка | Gibco | 26140079 | Для клеточной культуры эндотелиальных клеток пупочной вены человека. Используйте соответствующую питательную среду и условия для других типов клеток. |
| Пенициллин/стрептомицин | Gibco | 15140122 | Для клеточной культуры эндотелиальных клеток пупочной вены человека. Используйте соответствующую питательную среду и условия для других типов клеток. |
| Гепарин натриевая соль из слизистой оболочки кишечника свиньи | Sigma | H3393 | Для клеточной культуры эндотелиальных клеток пупочной вены человека. Используйте соответствующую питательную среду и условия для других типов клеток. |
| Желатин из кожи крупного рогатого скота | Sigma | G9391 | Для клеточной культуры эндотелиальных клеток пупочной вены человека. Используйте соответствующую питательную среду и условия для других типов клеток. |
Ссылки
- Friedl, P., Wolf, K. Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms. Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).
- Friedl, P. Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration. Curr Opin Cell Biol. 16 (....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
