Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Биолюминесценция Визуализация нейровоспаления у трансгенных мышей после инокуляции периферической альфа-синуклеина фибрилл

8.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55503

⸱

13 апреля 2017 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1German Center for Neurodegenerative Diseases (DZNE), 2Centre for Prions and Protein Folding Diseases & Department of Biochemistry, University of Alberta

В этой статье

Краткое содержание

Периферийные инъекции альфа-синуклеина фибрилл в брюшину или языком Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) мышей, которые экспрессируют человеческий альфа-синуклеина с наследственной мутации A53T и люциферазы светлячка, может вызвать невропатологии, в том числе нейровоспаления , в их центральной нервной системе.

Аннотация

Для изучения прионов, как поведение неправильно свернутых альфа-синуклеина, мышиные модели необходимы, что позволяет быстро и просто передавать альфа-синуклеина prionoids, которые вызывают невропатологии в пределах центральной нервной системы (ЦНС). Здесь мы описываем , что intraglossal или внутрибрюшинную инъекцию альфа-синуклеина фибрилл в bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) мышей, которым гиперэкспрессией человеческий альфа-синуклеина с мутацией A53T от промотора прионного белка и люциферазы светлячка из промотор для глиальных фибриллярного кислого белка (GFAP), является достаточным , чтобы вызвать заболевание нейропатологического. По сравнению с гомозиготной Tg (M83 + / +) мышей , которые развиваются тяжелые неврологические симптомы , начиная в возрасте 8 месяцев, гетерозиготных Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) животные остаются свободными от спонтанного заболевания , пока они не достигнут возраст 22 месяцев. Интересно, что инъекция альфа-синуклеина фибрилл через intraperitoneаль маршрут индуцированное неврологическое заболевание с параличами в четырех из пяти Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) мышей со средним временем инкубации 229 ± 17 дней. Пораженные животные показали серьезные отложения фосфорилированного альфа-синуклеина в мозге и спинном мозге. Скопление альфа-синуклеин было саркозили-нерастворимым и локализуется с убиквитиным и p62, и сопровождался воспалительной реакция, в результате чего астроцитов глиоза и microgliosis. Удивительно, но инокуляция альфа-синуклеина фибрилл в язык был менее эффективен в возникновении болезни только с одним из пяти инъецированных животных с альфа-синуклеина патологии после 285 дней. Наши результаты показывают , что прививка через intraglossal маршрута и тем более через внутрибрюшинно подходит для индукции неврологического заболевания с соответствующим клеймом синуклеинопатий в Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) мышей. Это дает новую модель для изучения прионов-как патогенез индуцируютd с помощью альфа-синуклеина prionoids более подробно.

Введение

Существует все больше доказательств того, что альфа-синуклеин имеет характеристики, которые аналогичны прионный белок, в частности, в его способности к самостоятельным семенам и распространяющихся неправильному фолдинг между клетками и вдоль нервными путями. Это свойство альфа-синуклеина также упоминается как «прионов типа» или «prionoid», и подтверждается наблюдениями в трансплантации экспериментов, которые предполагают трансмиссивности неправильно свернутых альфа-синуклеина из пораженных нейронов вновь пересаженные здоровые нейроны 1, 2 , 3, 4. Кроме того, прямая инъекция альфа-неправильно свернутых синуклеина в мозг или на периферии, например, мышцы задних конечностей или кишечной стенки, приводит к распространению альфа-синуклеина патологии в дистальных отделах ЦНС 5, 6, 7, 8, 9, 10. Мы проанализировали передачу альфа-синуклеина prionoids через периферийных маршрутов более подробно рассмотрены на вопрос, может ли неправильно уложенный альфа-синуклеина neuroinvade ЦНС после однократного intraglossal или внутрибрюшинного введения, функцию, которая ранее была показана для прионов, но не для неправильно свернутых альфа- синуклеин. После инъекции прионов в язык, neuroinvasion ЦНС достигается с помощью распространения вдоль подъязычного нерва языка , что приводит к ядру подъязычного нерва, который расположен в стволе головного мозга 11. В мышиной модели мы выбрали Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) мышей , которые сверхэкспрессируют A53T мутант человеческого альфа-синуклеина от промотора приона и люциферазы светлячка под контролем промотора GFAP астроцитов , чтобы контролировать активацию биолюминесценции, как ранее показано, в головном мозгеприон-инфицированных мышей 12. В наших руках bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) мышей не развивается болезнь до 23 месяцев , как было показано , другие 13. Однократное введение альфа-синуклеина фибрилл человека через intraglossal или внутрибрюшинно индуцированных заболеваний неврологического с патологией в головном мозге и спинном мозге Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) мышей , поддерживающих гипотезу о том, что альфа-синуклеина prionoids делиться важными характеристиками с прионов 14.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры, включая животных, были проведены с одобрения комитета защиты животных Северного Рейна-Вестфалии Государственного агентства по окружающей среде (LANUV). Животных содержали и уход в соответствии со стандартными условиями с 12 ч цикл свет / темнота и свободный доступ к пище и воде.

1. Модель животных

  1. Интеркросс гемизиготный Тд (GFAP -luc +/-) мышей с гемизиготным Тдом (М83 +/-) мышеем генерировать гемизиготную bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) мышей 15, 16.
  2. Генотип потомства с ПЦР в реальном времени на наличие кодирующего трансген человеческого альфа-синуклеина и со стандартной ПЦР для люциферазы светлячка 12, 17.
  3. Привить животное в возрасте от шести до восьми недель.

2. Приготовление инокулята

  1. Приготовьте моnomeric рекомбинантный человеческий альфа-синуклеина с мутацией A53T в трис-буферный солевой раствор (TBS) буфере , содержащем 150 мМ NaCl в 20 мМ Трис-HCl (рН 7,2) , как было описано ранее 14.
  2. Подготовьте фибриллярный альфа-синуклеина для прививок путем взбалтывания 3 мкг / мкл мономерного рекомбинантного человеческого альфа-синуклеина в орбитальном шейкере со скоростью 800 оборотов в минуту и ​​37 ° С в течение 5 дней.
  3. Развести фибрилл сборки в фосфатно-солевом буфере (PBS), чтобы достичь конечной концентрации 1 мкг / мкл для внутрибрюшинных или 2 мкг / мкл для intraglossal прививок.
  4. Фрагмент альфа-синуклеина фибриллы с ультразвуковую стержня в течение 1 мин (40 импульсов длительностью 0,5 с с одной секунды паузы между каждым импульсом и амплитудой, установленной на 50%) на льду. Для того, чтобы избежать загрязнения путем перекрестного посева. Используйте чистые зонды обработки ультразвука для подготовки различного инокулята.

3. Intraglossal Инъекции

  1. Обезболить животных с intraperitoneal инъекции 100 мг / кг кетамина и 10 мг / кг ксилазина. Зажмите палец ноги животного и подтвердить, что он не отказывается от своей задней конечности для обеспечения надлежащей анестезии. Используйте ветеринарную мазь на глаза животного, чтобы предотвратить сухость под наркозом.
  2. Устранить наркотизированные животное тщательно с помощью клейкой ленты на нагревательную пластину в дорсальном лежачем положении с их головами, обращенных к следователю.
  3. Заполните 27 G одноразового шприца для подкожных инъекций с 5 мкл альфа-обработанных ультразвуком фибрилл или синуклеиновых PBS.
  4. Используйте один тупой нос анатомического пинцета с зазубренными наконечниками, чтобы держать открытым рот животного, а второй меньше пары щипцов осторожно вытащить язык, чтобы сделать нижнюю часть языка доступна для инъекций.
  5. Вводят иглу шприца в правую или левую сторону нижней части языка в непосредственной близости от подъязычного нерва. Медленно вводят прививочный через 5 с. Медленно отведите иглу через 5 с, чтобы гарантировать, что инокулятпроникла в ткань и не теряется в то время втягивания иглы.
  6. Освободить животное от его фиксаций и оставить его на нагревательной плите под постоянным контролем до полного выздоровления.

4. внутрибрюшинных инъекций

  1. Для внутрибрюшинных инъекций, наркотизировать животное вскоре в камере анестезии путем ингаляции с изофлураном / кислородом с использованием скорости потока 2 л / мин и испарителя установлен на 2%. Зажмите палец ноги животного и подтвердить, что он не отказывается от своей задней конечности для обеспечения надлежащей анестезии.
  2. Заполните 27 G одноразового использования шприц с 50 мкл альфа-обработанных ультразвуком фибрилл или синуклеиновых PBS.
  3. Непосредственно вводят в брюшину мыши и избегать проникновения в тонкую кишку или слепую кишку, расположенную позади передней брюшной стенки, удерживая животное в дорсальном положении с головой, обращенной в сторону от исследователя и вниз при приблизительно 45 °. Монитор животных, пока они не восстановилисьот наркоза.

5. биолюминесценции изображений

  1. Изображение Тд (М83 +/-: GFAP -luc +/-) мышей каждые 2-4 недель с использованием системы биолюминесценции визуализации.
  2. До начала формирования изображения в скором времени анестезию мышей в камере изофлуран / кислород с расходом 2 л / мин и испарителем, установленным на 2%. Зажмите палец ноги животного и подтвердить, что он не отказывается от своей задней конечности для обеспечения надлежащей анестезии.
  3. Бритье и депилировать головы мышей с депиляции кремом. Цвет ушей в черном с не раздражающим маркером, чтобы блокировать неспецифические биолюминесценции.
  4. Развести D-люциферин соль калия, субстрат люциферазы, в PBS до 30 мг / маточного раствора мл. Хранить это в 1 мл аликвот при -20 ° C. Защита растворенного D-люциферин от воздействия света.
  5. Взвешивание животных перед инъекцией. Вычислить точный объем D-люциферин для инъекции 150 мг / кг массы тела. Внутрибрюшинно вводят D-luciferin и вернуть животное к анестезии камеры.
  6. Запустите программное обеспечение визуализации. После того, как система формирования изображения достигла рабочей температуры инициализации системы, нажав на кнопку «ИНИЦИАЛИЗИРУЙТЕ» в панели управления.
  7. Выберите кнопок «люминесцентный» и «Фотография». Установите время экспозиции до 60 секунд, в биннинга к «Medium», на F / Stop на «1», и усиление ЭМ в «Off».
  8. Убедитесь, что фильтр возбуждения установлен в «Block» и фильтр эмиссии в «открытом», и установить предмет высоту до 1,50 см.
  9. Через десять минут после инъекции с D-люциферином, поместить животное на нагревательной пластину в камере формирования изображения, и гарантировать, что их морды расположены правильно на выходе анестезии. Закройте поток изофлурана / кислород из ингаляционной камеры и открыть поток для изображения камеры с расходом 0,25 л / мин и испарением 2%. Закройте дверцу камеры изображения прoperly.
  10. Нажмите на кнопку «Acquire» для измерения биолюминесценции, которая занимает 60 сек. Остановить поток изофлурана и следить за животными, пока они не полностью восстановились после возвращения их обратно в их клетки.
  11. Используйте программное обеспечение визуализации для количественной оценки биолюминесценции. В «Палитре» выберите «Инструменты» ROI. В разделе «Тип» в рамках «ROI Tools» выберите пункт «Измерение ROI».
  12. В «ROI Tools» нажмите на «круг» инструмент и выбрать количество трансформирования, чтобы извлечь из выпадающего меню - в идеале «3» для трех мышей.
  13. В изображении, щелкните правой кнопкой мыши каждый ROI и в разделе «Свойства» отрегулировать ширину и высоту до 1,25 см. Расположите каждый ROI над областью мозга, которая количественно.
  14. В верхней левой части изображения, установить панель единиц, чтобы «излучения (фотонов)».
  15. В «Палитре», выберите «Настройка изображения» и настроить минимальное имаксимум «Цветовая гамма», к примеру, от 0.20e6 к 1.00e6.
  16. В разделе «Файл» сохранить данные с «Сохранить».

6. Биохимический анализ

  1. Изолировать мозги и спинного мозга в соответствии с установленными протоколами 18, 19.
  2. Однородный весь мозг и целые образцы спинного мозга отдельно в PBS в присутствии протеазы и фосфатазы ингибиторов (разбавленного до 1 раза в PBS) в течение двух циклов 30 сек с 6000 оборотов в минуту в гомогенизаторе тканей. Убедитесь, что мозг и образцы спинного мозга гомогенизируют до конечной концентрации 20% (вес / объем).
  3. Разрушать ультразвуком образцов в два раза при сохранении их на льду с постоянным импульсом 10 с и амплитудой, установленной на 50%.
  4. Регулировка гомогенатах до 10% в PBS и 750 мМ NaCl путем разбавления их 1: 1 с 1,5 М NaCl в PBS.
  5. Для отделения клеточного дебриса, центрифугирование гомогената при 1000 х г в течение 5 мин при4 ° С. Держи супернатант для последующих шагов и отбросить гранулы.
  6. Измерение концентрации белка в гомогенатах с использованием анализа бицинхониновой кислоты (ВСА) в соответствии с инструкциями изготовителя. Инкубируйте 1,0 мг общего белка из гомогената мозга или 0,8 мг из спинного мозга в гомогенатах N-laurylsarcosyl при конечной концентрации 10% (вес / объем) в течение 15 мин на льду.
  7. Перекрытие гомогенат на подушку сахарозы 3 мл 10% (вес / объем) в дистиллированной воде и ультрацентрифуга их на 465000 х г в течение 1 ч при 4 ° С.
  8. Ресуспендируют гранул в буфере, содержащем 4% додецилсульфата натрия (SDS), 2% & beta; меркаптоэтанола, 192 мМ глицин, 25 мМ Трис и 5% (вес / объем) сахарозы.
  9. Кипение образцов при 100 ° С в течение 5 мин и загружать их на SDS-полиакриламидном геле для электрофореза в буферной системе morpholineethanesulfonic кислоты (MES).
  10. Передача разделенных белков на поливинилидендифторидную (PVDF) мембраны в РЭМidry промокательной системы.
  11. Инкубируйте мембраны в 0,4% (объем / объем) раствора формалина в PBS в течение 30 мин при комнатной температуре на роторе с 35 оборотов в минуту для сшивания белков с мембраной.
  12. Блок мембраны в TBS буфере, содержащем 0,05% (об / об) Tween 20 и 5% (вес / объем) молока в течение 1 ч при комнатной температуре.
  13. Инкубируйте блоттинга с первичным антителом в блокирующем буфере в течение ночи при 4 ° С.
  14. Промыть мембраны три раза в буфере TBS и инкубировать их с пероксидазой или флуорофором конъюгированного с вторичными антителами в TBS в течение 1 ч при комнатной температуре.
  15. Визуализация связанных вторичных антител с помощью хемилюминесценции или флуоресценции в соответствии с установленными протоколами 20.

7. Анализ Иммунофлуоресценции

  1. Обезвоживает расчлененный мозги и спинной мозг в обработке ткани станции и внедрение их в парафин с использованием парафиновой станции.
  2. Вырезать залитых парафином ТИСсудится с микротомом в толстых корональных секциях 8 мкм и смонтировать разделы на стеклах.
  3. Deparaffinize срезов тканей пути инкубации их в двух отдельных ксилоле ванн от 5 до 10 мин и регидратация их через серию ванн градуированного этанола (100%, 90%, 70%, 50%) и , наконец, H 2 O.
  4. Инкубируйте разделы в 0,01 М цитратного буфера (рН 6,0) в течение 5 мин при комнатной температуре и дополнительно сварить их в течение 10 мин в микроволновой печи.
  5. Пусть секции остыть до комнатной температуры и инкубировать их с 3% -ным раствором перекиси водорода в течение 30 мин для ингибирования эндогенных пероксидаз.
  6. Блок срезах тканей путем инкубации с 20% (об / об) нормальной козьей сыворотки, 1% (об / об) альбумина бычьей сыворотки (BSA) и 0,5% Тритон Х-100 в PBS в течение 1 ч при комнатной температуре.
  7. Инкубируйте участки с первичным антителом, разведенным в 1% (об / об) нормальной козьей сыворотки, 1% (об / об) БСА и 0,25% Тритон в PBS Х-100 в течение ночи при 4 ° С.
    8. <литий> Промыть секции в два раза с 0,25% (объем / объем) Triton X-100 в PBS и один раз с PBS.
  8. Пятно секции с соответствующими флуорофором-конъюгированного вторичными антителами и DAPI ядерной красителя, разведенного в 1% (об / об) нормальной козьей сыворотки, 1% (об / об) BSA и PBS в течение 1 ч при комнатной температуре.
  9. После промывки дважды с 0,25% (объем / объем) Triton X-100 в PBS и один раз с PBS, покровное слайды с вложения средств массовой информации и визуализировать окрашивание с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Периферийные инъекции альфа-синуклеина prionoids с помощью языка или брюшины индуцированной невропатологии в ЦНС bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) мышей (таблица 1 и рисунок 1). После однократного внутрибрюшинного введения с альфа-синуклеина фибрилл, четыре из пяти мышей разработаны неврологическое заболевание со средним временем инкубации 229 ± 17 дней. Удивительно, но только один из пяти мышей развилась болезнь централь...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Периферийные инъекции альфа-синуклеина фибрилл в брюшину Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) мышей представляет собой метод , легкое , чтобы вызвать неврологическое заболевание , сопровождающееся нейровоспаления резюмировать важные характеристики синуклеинопатий. Аналогичным образом, инъекции язык представляет собой еще один маршрут для neuroinvasion альфа-синуклеина prionoids у трансгенных мышей, но менее эффективна. Мы решили прекратить наши эксперименты в 420 дней после инъекции, и мы не можем ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Благодарности

Авторы благодарят Ольгу Шарма, Тереса Хандт, и персонал микроскопии и животных объектов DZNE для технической поддержки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
антиактиновое антителоMerck MilliporeMAB1501
анти-альфа-синуклеин, антитело фосфо S129 [pSyn#64]Wako015-25191
анти-альфа-синуклеин, антитело фосфо S129 [EP1536Y]Abcamab51253
антитело против GFAPDakoZ0334 01
антитело против IBA-1 Wako019-19741
антитело против секвестосомы-1 (p62)Proteintech18420-1-AP
антитело против убиквитина [Ubi-1]Merck MilliporeMAB1510
фосфатно-солевой буфер (PBS)Invitrogen14190169
кетамин Ратиофарм100 мг/кг
КсилазинРатиофарм10 мг/кг
27 г шприцVWR613-4900
Изофлуран  Piramal HealthcarePZN  4831850
Крем для депиляцииVeet
Secureline лабораторный маркер Neolab25040
D-люциферин калийная сольAcrisLK1000030 мг/мл стоковый раствор
ТермомиксерEppendorf5776671
Sonopuls Mini20 ультразвуковой аппаратBandelin3648
IVIS Система визуализации Lumina IIPerkinElmer
Living Image 3.0 SoftwarePerkinElmer
Tg(M83+/-) мыши или B6; C3-Tg(Prnp-SNCA*A53T)83Vle/J мышиЛаборатория Джексона004479
Щипцы стандартного рисункаFine Science Tools11000-16
Узконаправленные щипцыFine Science Tools11002-12
N-лауриласаркозилSigmaL5125-100G
Optima Max-XP ультрацентрифуга Ротор Beckman CoulterTLA-110 
Толстостенные поликарбонатные трубкиBeckman Coulter362305
NuPAG Novex 4-12% Bis-Tris Midi Protein GelsThermo Fisher ScientificWG1401BOX
HRP конъюгированное антителоCayman CaymanCay10004301-1
IR Dye 680 конъюгированное антитело LI-COR Biosciences926-68070
SuperSignal West Dura Субстратувеличенной продолжительности Thermo Fisher Scientific34075
Stella 3200 Система визуализацииRaytest
Odyssey инфракрасная система визуализации LI-COR Biosciences
Tween 20 MP BiomedicalsTWEEN201
Triton X-100SigmaSA/T8787
Immobilon-FL PVDF мембранаMerck MilliporeIPFL00010
XylolSigmaRoth
Перекись водородаSigmaSA/00216763/000500рабочий раствор 3%
бычий сывороточный альбумин (BSA) Thermo Fisher ScientificA3294-100G
Сыворотка для козThermo Fisher ScientificPCN5000
4,6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI)Thermo Fisher ScientificD1306рабочий разбавитель 1:50 000
Fluoromount сред OmnilabSA/F4680/000025
LSM700 конфокальный лазерный сканирующий микроскопCarl Zeiss
HALT ингибиторы протеазы и фосфатазыThermo Fisher Scientific 
Гомогенизатор Precellys 24-Dual Peqlab91-PCS24D
Alexa Fluor 488 конъюгированное антителоThermo Fisher ScientificA31619
Alexa Fluor 594 конъюгированное антителоThermo Fisher ScientificA11005
Pierce  BCA  Белки  Анализ  НаборThermo Fisher Scientific10741395
Microtome RM2255Leica
LSM700 конфокальный лазерный сканирующий микроскопCarl Zeiss
10516495

Ссылки

  1. Aguzzi, A. Cell biology: Beyond the prion principle. Nature. 459 (7249), 924-925 (2009).
  2. Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T. B. Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease. Nat Med. Olanow, C. W. 14 (5), 504-506 (2008).
  3. Li, J. Y., et al. Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation. Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).
  4. Hansen, C., et al. alpha-Synuclein propagates from mouse brain to grafted dopaminergic neurons and seeds aggregation in cultured human cells. J Clin Invest. 121 (2), 715-725 (2011).
  5. Masuda-Suzukake, M., et al. Prion-like spreading of pathological alpha-synuclein in brain. Brain. 136 (4), 1128-1138 (2013).
  6. Holmqvist, S., et al. Direct evidence of Parkinson pathology spread from the gastrointestinal tract to the brain in rats. Acta Neuropathol. 128 (6), 805-820 (2014).
  7. Luk, K. C., et al. Pathological alpha-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice. Science. 338 (6109), 949-953 (2012).
  8. Sacino, A. N., et al. Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 1, 38(2013).
  9. Sacino, A. N., et al. Intramuscular injection of alpha-synuclein induces CNS alpha-synuclein pathology and a rapid-onset motor phenotype in transgenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), 10732-10737 (2014).
  10. Mougenot, A. L., et al. Prion-like acceleration of a synucleinopathy in a transgenic mouse model. Neurobiol Aging. 33 (9), 2225-2228 (2012).
  11. Bartz, J. C., Kincaid, A. E., Bessen, R. A. Rapid prion neuroinvasion following tongue infection. J Virol. 77 (1), 583-591 (2003).
  12. Tamgüney, G., et al. Measuring prions by bioluminescence imaging. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (35), 15002-15006 (2009).
  13. Watts, J. C., et al. Transmission of multiple system atrophy prions to transgenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (48), 19555-19560 (2013).
  14. Breid, S., et al. Neuroinvasion of alpha-Synuclein Prionoids after Intraperitoneal and Intraglossal Inoculation. J Virol. 90 (20), 9182-9193 (2016).
  15. Giasson, B. I., et al. Neuronal alpha-synucleinopathy with severe movement disorder in mice expressing A53T human alpha-synuclein. Neuron. 34 (4), 521-533 (2002).
  16. Zhu, L., et al. Non-invasive imaging of GFAP expression after neuronal damage in mice. Neurosci Lett. 367 (2), 210-212 (2004).
  17. Bernis, M. E., et al. Prion-like propagation of human brain-derived alpha-synuclein in transgenic mice expressing human wild-type alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 3 (1), 75(2015).
  18. Gunther, R., et al. Clinical testing and spinal cord removal in a mouse model for amyotrophic lateral sclerosis (ALS). J Vis Exp. (61), (2012).
  19. Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. Protocol for the MPTP mouse model of Parkinson's disease. Nat Protoc. 2 (1), 141-151 (2007).
  20. Mathews, S. T., Plaisance, E. P., Kim, T. Imaging systems for westerns: chemiluminescence vs. infrared detection. Methods Mol Biol. 536, 499-513 (2009).
  21. Kim, C., et al. Exposure to bacterial endotoxin generates a distinct strain of alpha-synuclein fibril. Sci Rep. 6, 30891(2016).
  22. Keller, A. F., Gravel, M., Kriz, J. Live imaging of amyotrophic lateral sclerosis pathogenesis: disease onset is characterized by marked induction of GFAP in Schwann cells. Glia. 57 (10), 1130-1142 (2009).
  23. Stöhr, J., et al. Distinct synthetic Abeta prion strains producing different amyloid deposits in bigenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. , (2014).
  24. Luk, K. C., et al. Intracerebral inoculation of pathological alpha-synuclein initiates a rapidly progressive neurodegenerative alpha-synucleinopathy in mice. J Exp Med. 209 (5), 975-986 (2012).
  25. Recasens, A., et al. Lewy body extracts from Parkinson disease brains trigger alpha-synuclein pathology and neurodegeneration in mice and monkeys. Ann Neurol. 75 (3), 351-362 (2014).
  26. Sacino, A. N., et al. Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 1 (1), 38(2013).
  27. Peelaerts, W., et al. alpha-Synuclein strains cause distinct synucleinopathies after local and systemic administration. Nature. 522 (7556), 340-344 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

GFAP
Биолюминесценция Визуализация нейровоспаления у трансгенных мышей после инокуляции периферической альфа-синуклеина фибрилл
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.