Методическая статья

Спектроскопия ЯМР как надежный инструмент для быстрой оценки липидного профиля рыбьего жира добавки

DOI:

10.3791/55547

⸱

1 мая 2017 г.

 , 
1Department of Food Science and Technology, The Ohio State University, 2Foods for Health Discovery Theme, The Ohio State University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь, с высокой разрешающей способностью 1 Н и 13 С ЯМР (ЯМР) был использован в качестве быстрого и надежного инструмента для количественного и качественного анализа инкапсулированных добавок рыбьего жира.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Западная диета бедна п -3 жирных кислот, поэтому потребление рыбьего жира рекомендуется увеличить потребление этих необходимых питательных веществ. Целью данной работы является демонстрация качественного и количественного анализа инкапсулированных добавок рыбьего жира с использованием высокой разрешающей способностью 1 Н и 13 С ЯМР - спектроскопии с использованием двух различных ЯМР инструментов; 500 МГц и инструмент 850 МГц. Оба протона (1 Н) и углерода (13 С) ЯМР - спектры могут быть использованы для количественного определения основных составляющих добавок рыбьего жира. Количественное липидов в добавок рыбьего жира достигается за счет интеграции соответствующих сигналов ЯМР в соответствующей 1D спектров. Результаты , полученные с помощью 1 Н и 13 С ЯМР находятся в хорошем согласии друг с другом, несмотря на разницу в разрешающей способности и чувствительности между двумя ядрами и двумя инструментами. 1 Н - ЯМР предложениеса более быстрый анализ по сравнению с 13 С - ЯМР, так как спектр может быть записан менее чем за 1 мин, в отличие от 13 С - ЯМР анализа, который длится от 10 мин до одного часа. Спектр ЯМР 13 С, однако, намного более информативным. Это может обеспечить количественные данные для большего числа индивидуальных жирных кислот и может быть использовано для определения позиционного распределения жирных кислот на цепи глицерина. Оба ядра могут обеспечить количественную информацию только в одном эксперименте без необходимости очистки или разделения шагов. Напряженность магнитного поля главным образом влияет на спектры ЯМР 1 Н в связи с его низким разрешением по отношению к 13 С - ЯМР, однако, даже более низкой стоимости ЯМР инструменты могут быть эффективно применены в качестве стандартного метода в пищевой промышленности и лабораторий по контролю качества.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Потребление п -3 жирных кислот в рационе, оказалось полезным против нескольких условий , таких как сердечные расстройства 1, 2, 3, 4 воспалительных заболеваний и диабета 5. Западная диета считается бедной в п -3 жирных кислот и , следовательно , потребление рыбьего жира рекомендуется для улучшения п -6 / п -3 баланс в питании 1 потребителя. Несмотря на недавнее увеличение потребления рыбы нефти дополнения, остаются вопросы о безопасности, достоверности и качестве некоторых из этих продуктов. Быстрый и точный анализ состава добавка рыбьего жира имеет важное значение для правильной оценки качества этих коммерческих продуктов и обеспечения безопасности потребителей.

Наиболее распространенные методики оценки рыбьего жира добавкиы является газовой хроматографией (АЯ) и инфракрасная спектроскопия (ИК). Хотя эти высокочувствительные методы, они страдают от ряда недостатков 6. ГЙ - анализ занимает много времени (4-8 ч) , так как разделение и дериватизация отдельных соединений требуются 7 и окисление липидов может происходить во время анализа 8, 9. В то время как ИК - спектроскопия может быть количественным, модель прогнозирования должны быть построены с использованием частичной регрессии по методу наименьших квадратов (ПЛСР), хотя есть исключения , в которых ИК - полосы могут быть отнесены к одному соединению 10. ПЛСР требует анализа большого числа образцов, что увеличивает время анализа 11. По этой причине, существует растущий интерес к разработке новых аналитических методик, которые позволяют точно и быстро анализ большого количества образцов рыбьего жира. Такие организации, как OFFIв.п. Диетические добавки (СОД) в Национальных Институтов Здоровья (NIH) и по контролю за продуктами и лекарствами (FDA) сотрудничали с Ассоциацией химиков - аналитиков (AOAC) для разработки этих новых методов 12, 13.

Одним из наиболее перспективных аналитических методов скрининга и оценки матриц многокомпонентных, таких как пищевые добавки, ядерно - магнитного резонанса (ЯМР) 14, 15. ЯМР-спектроскопия имеет несколько преимуществ: это неразрушающий и количественный метод, он требует, чтобы минимальный без подготовки образца, и оно характеризуется превосходной точностью и воспроизводимостью. Кроме того, ЯМР-спектроскопия является экологически чистой методологией, поскольку она использует только небольшие количества растворителей. Основной недостаток ЯМР-спектроскопия является его относительно низкой чувствительностью по сравнению с другими analytiческие методы, однако, последние технологические достижения в области измерительных приборов, таких как более сильных магнитных полей, криогенных зондов различного диаметра, передовые обработки данных и универсальных импульсных последовательностей и методов повысили чувствительность до диапазона нМ. В то время как ЯМР инструментовка высокая стоимость, длительный срок службы ЯМР-спектрометров и множество применений ЯМР снизить стоимость анализа в долгосрочной перспективе. Этот подробный протокол видео призвано помочь новым практиков в области избежать ошибок , связанных с 1 Н и 13 С ЯМР - спектроскопического анализа рыбий жир добавок.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка образцов ЯМР

Примечание: Внимание, пожалуйста, обратитесь все соответствующие паспорта безопасности материала (MSDS) перед использованием. Дейтерированный хлороформ (CDCl 3) используется в приготовлении образца является токсичным. Пожалуйста, используйте все необходимые правила безопасности при проведении пробоподготовки, включая использование вытяжного шкафа и средств индивидуальной защиты (защитные очки, перчатки, лабораторный халат, полные штаны длины, закрытые носок обуви).

  1. Получение 1 Н и 13 С образцов
    1. Извлечение 120 мкл (~ 110 мг) рыбий жир из диетического капсулы с помощью шприца и поместить его в стеклянную пробирку емкостью 4 мл. Запишите вес рыбий жир.
    2. растворения образца
      1. Растворите приблизительно 120 мкл рыбий жир в 500 мкл CDCl 3 , содержащего 0,01% тетраметилсилана (TMS) , который используется в качестве эталона для 1 Н и 13 С химических сдвигов.
        Примечание: TMS является использованиеd только для химической калибровки сдвига (см номеров шагов 2.2.1.2.7 и 2.2.2.2.7), а не для количественной оценки (см номеров этапов 2.2.1.3 и 2.2.2.3) цели.
      2. Приготовьте 2,6-ди - трет - бутил-4-метилфенол (ВНТ) исходный раствор, если количественное определение, выраженные в мг / г желательно, путем растворения приблизительно 220 мг ВНТ и 15 мг хрома (III) ацетилацетонат (Cr ( асас) 3) в 20 мл CDCl 3 , содержащих 0,01% TMS. Используйте 500 мкл исходного раствора для растворения 100 мг (± 10 мг) рыбий жир.
    3. После растворения масла (это занимает несколько секунд), передать весь раствор непосредственно в ЯМР высокого качества трубки 5 мм, и прикрепить крышку. Анализ образцов в течение 24 ч после приготовления образцов.

Препарат 2. ЯМР Инструмент

Примечание: Осторожно, нужно учитывать, что наличие сильных магнитных полей, создаваемых с помощью ЯМР инструментов могут повлиять на медицинские устройства и осущмуравьев , такие как кардиостимуляторы и хирургические протезы, а также электронные элементы , такие как кредитные карты, часы и т.д. Дополнительная осторожность требуется , когда анализ выполняются с использованием не-экранирующие магнитов. Два ЯМР инструменты были использованы для приобретения 1 Н и 13 С ЯМР - спектров; спектрометр работает на 850.23 МГц и 213.81 МГц для 1 Н и ядер 13 С, соответственно, оснащен тройной резонансного с гелиевым охлаждением обратным (TCI) 5 мм зондом и спектрометром , работающим на 500.20 МГц и 125.77 МГц для 1 Н и 13 С ядра, соответственно, снабжены широкой полосой, наблюдаемой (ВВО) азот охлаждение 5 мм зонда. Все эксперименты проводились при температуре 25 ± 0,1 ° С и спектров были обработаны с помощью стандартного ЯМР сбора данных анализа и программного обеспечения обработки пакета (см списка материалов).

  1. Подготовка к приобретению спектров ЯМР
    Примечание: 1 H и C - ЯМР - спектры 13может быть получено, следовательно, не снимая пробы из прибора.
    1. Вставьте трубку ЯМР в вращаемой турбины (см список материалов).
    2. Поместите счетчик и трубу в верхней части градуированного глубиномера и осторожно нажмите на верхнюю часть трубы, пока его нижняя часть не коснется нижней части датчика.
    3. Поместите образец ЯМР в открытом месте на SampleCase. Обратите внимание на номер слота образец помещается в.
    4. Для того, чтобы загрузить образец в ЯМР, вернитесь к компьютеру и управления типа «Sx #», где # слот в SampleCase держит ваш образец.
    5. Дождитесь дейтерий сигнала CDCl 3 появится на экране окна блокировки. Если он не появляется автоматически, типа «lockdisp». Как только сигнал дейтерия виден, типа «замок» в командной строке и выбрать «CDCl 3» из списка растворителя для того , чтобы зафиксировать образец с использованием дейтерия резонанса CDCl 3.
      Примечание: дейтерий signal может не отображаться, если предыдущий пользователь использовал другой растворитель. Пользователь должен ждать показатель того, что проба вниз, а затем зафиксировать.
    6. Тип «bsmsdisp» в командной строке, чтобы обеспечить вращение не является активным. Если кнопка «SPIN» зеленый цвет, нажмите на него, чтобы отключить вращение.
    7. Введите команду «новую», чтобы создать новый набор данных. Введите имя для набора данных на вкладке «NAME», и номер эксперимента на вкладке «EXPNO». Используйте номер «1» на вкладке «PROCNO». На вкладке «Эксперимент», нажмите кнопку «Выбрать» и выберите «ПРОТОН» файл параметров. Написать название эксперимента на вкладке «TITLE». Нажмите кнопку "OK".
    8. Тип «getprosol» в командной строке, чтобы получить стандартные параметры для текущего ЯМР-зонда и растворителя.
    9. Повторите шаг 2.1.7 для 13 C, выбирая «C13IG» последовательность импульсов на вкладке «Эксперимент» для 1D 13 C обратной гованный развязан эксперимент.
    10. Тип «getprosol» в командной строке, чтобы получить стандартные параметры для текущего ЯМР-зонда и растворителя.
    11. Введите команду «атма», чтобы выполнить автоматическую настройку и согласование зонда для обоих углерода и протонов ядер.
    12. Выполните одномерный градиент шиммирования для достижения высокой однородное магнитное поле, и, таким образом, оптимальную форму линии для сигналов ЯМР.
      1. Используйте стандартную автоматическую процедуру для 1D шиммирования, просто путем последовательного выполнения команд «Цюй topshim 1dfast сс», «Цюй topshim tuneb сс» и «Цюй topshim отчет» в командной строке.
  2. оптимизация параметров
    1. Калибровка 90 ° импульса
      1. Создать новый набор данных для 1 H (см шаги 2.1.7 и 2.1.8).
      2. Введите команду «paropt» в командной строке, чтобы запустить программу автоматизации для калибровки Пули 90 °как таковые. Выбор длительности импульса, р1, в качестве параметра должен быть изменен.
      3. Начнем с «2» мкс, как начальное значение p1, введите «2» мкс с шагом и выполнять «16» эксперименты.
      4. Создание нового набора данных для 13 C (смотри стадию 2.1.9) и повторить процесс для ядер 13 С (см шаги 2.2.1.2 и 2.2.1.3).
    2. Т 1 измерение , измеренное методом нулевых 16 для 1 H
      Примечание: Нулевой метод использует последовательность импульсов восстановления инверсии, состоящий из 180 ° импульса следовать путем задержки (тау), чтобы позволить релаксации вдоль оси и конечного 90 ° импульса , который создает наблюдаемую поперечную намагниченность.
      1. Создать новый набор данных для 1 H (см шаги 2.1.7 и 2.1.8).
      2. Тип «pulprog t1ir1d», чтобы изменить последовательность импульсов на эксперимент инверсии-восстановления.
      3. Введите следующие команды на Commanд линии, чтобы настроить ширину спектра в минуту, центр РЧ передатчика, количество сканирований числа фиктивных сканирования и число точек данных «SW 8», «o1p 3,8», «NS 2», «DS 2" и "тд 64K".
      4. Тип «p1 (значение)» и введите значение длительности 90 ° импульса, как определенно с помощью калибровки импульсов (см шага 2.2.1) и типа «р2 (значение)» для импульса 180 ° (значение длительности для 180 ° длительность импульса 90 ° импульса умножается на два).
      5. Установка задержки рецикла на очень большое значение, например, 10 с, набрав «d1 10».
      6. Набор тау к короткому значению, например, 10 мс, с помощью команды «D7 10ms» в командной строке.
      7. Установить усиление приемника (RG) к соответствующему значению, используя команду «RGA» для автоматического расчета RG.
      8. Запуск спектра, введя команду «ZG».
      9. Выполнить Фурье-преобразование, набрав «EFP»в командной строке.
      10. Выполнить автоматическую коррекцию фазы, введя команду «APK» в командной строке. Если дополнительные корректировки фазы необходимы для дальнейшего улучшения спектра, нажмите на вкладку «Process», а затем нажмите на значок «Настройка фазы», ​​чтобы войти в режим коррекции фазы.
        1. Использование нулевого порядка (0) и иконки первого порядка (1) фазовая коррекция с помощью мыши, пока все сигналы не находятся в режиме отрицательного поглощения. Применить и сохранить значение коррекции фазы, нажав на кнопку «Return и Сохранить», чтобы выйти из режима коррекции фазы.
      11. Увеличение тау , пока все вершины не являются положительными или обнуляются, повторяя шаги 2.2.2.6-2.2.2.9. Для определения значения T 1, просто разделить значение тау , где пик обнуляется с ln2.
    3. Т 1 измерение , измеренное методом нулевых 16 для 13 C
      1. Создать новый набор данных для 13 C (см шаг 2.1.9)
      2. Тип «pulprog t1irpg», чтобы изменить последовательность импульсов на эксперимент инверсии-восстановления для ядер углерода.
      3. Введите следующие команды в командной строке, чтобы настроить спектральную ширину в м.д., центр РЧ передатчика, количество сканирований, количество фиктивных сканирования и число точек данных: «SW 200», «o1p 98» , "8" нс "DS 2" и "TD 64K".
      4. Тип «p1 (значение)» и введите значение длительности 90 ° импульса, как определенно с помощью калибровки импульсов (см шага 2.2.1) и типа «p2 (значение)» для импульса 180 ° (значение длительности является 90 ° длительность импульса умножается на два).
      5. Установка задержки рецикла на очень большое значение, например, 100 с, набрав «d1 100».
      6. Набор тау на короткое значение, например 100 мс, набрав «D7 100мс» в командной строке.
      7. Установите ПРИЕМусиления эр (RG) к соответствующему значению, используя команду «RGA» для автоматического расчета RG.
      8. Запуск спектра, введя команду «ZG».
      9. Выполнить Фурье-преобразование, набрав «EFP» в командной строке.
      10. Выполнить Автоматическую коррекцию фазы, введя команду «APK» в командной строке. Если дополнительные корректировки фазы необходимы для дальнейшего улучшения спектра, нажмите на иконку «Настройка фазы» и значках коррекции фазы для нулевого порядка (0) и первого порядка фазы (1) коррекции.
        1. В то время как нажимая на иконки коррекции нулевого порядка и фазы первого порядка, перетащить мышь, пока все сигналы не находятся в режиме отрицательного поглощения. Применить и сохранить значение коррекции фазы, нажав на кнопку «Return и Сохранить», чтобы выйти из режима коррекции фазы.
      11. Увеличение тау , пока все вершины не являются положительными или обнуляются, повторяя шаги 2.2.3.6-2.2.3.9. Для того, чтобы определить,значение Т 1, просто разделить значение тау , где пик обнуляется с ln2.
  3. Одномерный (1D) Спектры ЯМР
    1. Спектры 1 H-ЯМР
      1. Приобретение данных ЯМР
        1. Перейти к набору данных 1 H , созданный на шаге 2.1.7 и использовать стандартную «импульсно-захватит» последовательность импульсов, «ZG», набрав «pulprog ZG» в командной строке.
        2. Введите следующие команды в командной строке, чтобы настроить ширину спектра в минуте, центр РЧ передатчика, количество сканирование, количество фиктивных сканирования, число точек данных и длительность импульса для угла 90 ° импульса : "SW 8", "o1p 3,8", "нс 2", "DS 2", "TD 64K" и "P1 (как было определено путем калибровки импульса)" (смотри стадию 2.2.1).
          Примечание: 32K точки данных могут быть использованы для инструмента 500 МГц.
        3. Установить задержку релаксации 7 с для инструмента с частотой 500 МГц или 9 с для инструмента 850 МГц, набрав «d1 7s» или «d1» 9s, соответственно, в командной строке.
        4. Установить усиление приемника (RG) к соответствующему значению, используя команду «RGA» для автоматического расчета RG.
        5. Тип «digmod baseopt», чтобы получить спектр с улучшенной базовой линией.
        6. Начало приобретения, введя команду «ZG» импульсно-овладевают в командной строке.
      2. Обработка данных ЯМР
        1. Тип «си 64К» в командной строке, чтобы применить нулевую начинку и установить размер реального спектра 64К.
        2. Установите параметр уширения линии 0,3 Гц, набрав «фунт 0,3» в командной строке, чтобы применить функцию взвешивания (экспоненциальное затухание) с линией расширения коэффициента 0,3 Гц до преобразования Фурье.
        3. Выполнить Фурье-преобразование, набрав «EFP» в команделиния.
        4. Выполнить Автоматическую коррекцию фазы, введя команду «APK» в командной строке. Если дополнительные корректировки фаз необходимы для дальнейшего улучшения спектра, нажмите на вкладке «Process», а затем нажмите на значке «Регулировка фазы» и значках коррекции фазы для нулевого порядка (0) и первый порядок (1) фазовой коррекции ,
          1. В то время как нажимая на иконки коррекции нулевого порядка и фазы первого порядка, перетащить мышь, пока все сигналы не находятся в режиме положительного поглощения. Применить и сохранить значение коррекции фазы, нажав на кнопку «Return и Сохранить», чтобы выйти из режима коррекции фазы.
        5. Нанести полиномиальную функцию четвертого порядка для коррекции базовой линии при интегрировании, введя команду «абс N».
          Примечание: Это обеспечивает плоскую спектральную базовую линию с минимальной интенсивностью.
        6. Отчет химические сдвиги в м.д. от ТМС (δ = 0). Нажмите на калибровку ( "Calib. Axэто "значок), и поместить курсор с красной линией на верхней части сигнала ЯМР (ТМС пика ближе к 0). Левый щелчок и введите„0“.
      3. Анализ данных ЯМР
        1. Интеграция спектральной области от δ 1,1 до & delta ; 0,6, а также пики при & delta ; 4,98, δ 5,05 и & delta ; 5,81 , используя пиктограмму «интегрировать» (на вкладке «Process») и выделение ( «Определить новый регион») значок. Щелкните левой кнопкой мыши и перетащить через интегралы.
          Примечание: Если необходимо сосредоточить внимание на область, нажмите на значок выделения, чтобы отключить и щелкните левой кнопкой мыши и перетащите мышь, чтобы увеличить масштаб региона. Для регулировки интенсивности порога, используйте среднюю кнопку мыши, если это необходимо. Нажмите на значок выделения еще раз, чтобы сделать функцию интеграции активной, а затем перейти к следующему пику.
          1. Нормализация сумму выше интегралов до 100, щелкнув правой кнопкой мыши по интегральному значению, которые появляютсяs под сигнал и выберите «Нормализовать сумму интегралов». Введите значение «100» в поле и нажмите кнопку «Return и Сохранить», чтобы выйти из режима интеграции.
        2. При использовании BHT в качестве внутреннего стандарта, интегрировать пик при б 6,98 и установить интеграл равны миллимоли ВНТА в 0,5 мл исходного раствора.
        3. Интегрирование пиков, представляющих интерес (см шаг 2.3.1.3.1), проходящие 10 Гц с каждой стороны пика, когда это возможно.
        4. Продолжайте выполнять 13 С-ЯМР сбора и обработки спектров аналогичным образом.
    2. Спектры 13 С-ЯМР
      1. Приобретение данных ЯМР
        1. Перейти к набору данных 13 C и использовать обратную развязкой закрытого типа импульсной последовательности, «zgig», набрав «pulprog zgig» в командной строке.
          Примечание: Для запуска углерода эксперимента со стандартной широкополосной decouПСД последовательность импульсов, тип «pulprog zgpg» в командной строке.
        2. Введите следующие команды в командной строке, чтобы настроить ширину спектра в минуте, центр РЧ передатчика, количество сканирование, количество фиктивных сканирования, число точек данных и длительность импульса для угла 90 ° импульса : "SW 200", "o1p 95", "16 нс" "DS 2", "TD 64K" и "P1 (как было определено путем калибровки импульса)" (смотри стадию 2.2.1.4).
        3. Установить задержку релаксации 35 с для инструмента с частотой 500 МГц или 45 с для инструмента 850 МГц, набрав «d1 35s» или «d1» 45s, соответственно, в командной строке. При использовании BHT, задержка релаксации должна быть 50 с в приборе 500 МГц и 60 сек в приборе 850 МГц.
        4. Установить усиление приемника (RG) к соответствующему значению, используя команду «RGA» для автоматического расчета RG.
        5. Тип «digmod baseopt» в командной строке, чтобы получить спектр шIth улучшение базовой линии.
        6. Начало приобретения, введя команду «ZG» импульсно-овладевают в командной строке.
      2. Обработка данных ЯМР
        1. Тип «си 64К» в командной строке, чтобы применить нулевую начинку и установить размер реального спектра 64К.
        2. Установите параметр уширения линии до 1,0 Гц, набрав «фунт 1.0» в командной строке, чтобы применить функцию взвешивания (экспоненциальное затухание) с линией расширения коэффициента 1,0 Гц до преобразования Фурье.
        3. Выполнить Фурье-преобразование, набрав «EFP» в командной строке.
        4. Выполнить Автоматическую коррекцию фазы, введя команду «APK» в командной строке. Если дополнительные корректировки фазы необходимы для дальнейшего улучшения спектра, нажмите на вкладке «Process», а затем нажмите на значок «Регулировка фазы» и значков коррекции фазы для нулевого порядка (0) и первого порядка фазы (1) коррекции ,
            при нажатии на иконки нулевого порядка и коррекции фазы первого порядка, перетащить мышь, пока все сигналы не находятся в режиме положительного поглощения. Применить и сохранить значение коррекции фазы, нажав на кнопку «Return и Сохранить», чтобы выйти из режима коррекции фазы.
            Примечание: Для получения спектров углерода, записанные на частоте ларморовских 214 МГц (850 МГц прибора) коррекция зависимых отклонений частоты (первый порядок) может быть сложными и требует много времени для менее опытных пользователей из-за большие внедорожным резонанс эффектов 90 ° импульса.
        5. Нанести полиномиальную функцию четвертого порядка для коррекции базовой линии при интегрировании, введя команду «абс п» в командной строке.
        6. Отчет химические сдвиги в м.д. от ТМС (δ = 0). Нажмите на калибровку ( «Calib. Ось») значок и поместите курсор на красную линию на верхней части сигнала ЯМР будет ссылка. Щелкните левой кнопкой мыши и введите «0».
      3. Анализ данных ЯМР
        1. Интеграция спектральной области от 175 до δ & delta ; 171 , используя пиктограмму «Включить» (на вкладке «Process») и выделение ( «Определить новый регион») значок. Щелкните левой кнопкой мыши и перетащить через интегралы.
          Примечание: Если необходимо сосредоточить внимание на область, нажмите на значок выделения, чтобы отключить и щелкните левой кнопкой мыши и перетащите мышь, чтобы увеличить масштаб региона. Нажмите на значок выделения еще раз, чтобы сделать функцию интеграции активной, а затем перейти к следующему пику.
          1. Установите интеграл 100, делая правой кнопкой мыши на интегральное значение, которое появляется при сигнале и выберите «Калибровка тока Integral». Введите значение «100» в поле и нажмите кнопку «Return и сохранить» для выхода из режима интеграции.
        2. При использовании BHT в качестве внутреннего стандарта, интегрировать пик при б 151.45 и установить интеграл равенв миллимоле ВНТА в 0,5 мл исходного раствора.
        3. Интегрирование пиков, представляющих интерес, простирающейся от 5 Гц каждой стороне пика (см шаг 2.3.2.3.1).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1 Н и 13 С ЯМР - спектры были собраны для коммерчески доступных добавок рыбьего жира с использованием двух инструментов ЯМР; 850 МГц и спектрометр 500 МГц. Эти спектры могут быть использованы для количественного определения компонентов рыбьего жира, такие как докозагексаеновая кислота (DHA) и эйкозапентаеновая кислота (EPA), а также другие соединения , таких как п -1 ацильных цепи и питателен важный показатель , таких как п -6 / п -3 соотн...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Модификации и стратегии по устранению неполадок

Спектральный качество. Ширина линии сигнала ЯМР и, таким образом, разрешение спектра ЯМР сильно зависит от подкладок, который представляет собой процесс для оптимизации однородности магнитного поля. Для рутинного анализа, 1D Шиммирование адекватно и 3D Шиммирование не требуется, при условии, что она выполняется персоналом ЯМРА на регулярной основе. Если это не тот случай, 3D прокладки должны быть выполнены перед проведением анализ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана пищевыми продуктами для здоровья Discovery Темы в Университете штата Огайо и Департамент пищевой науки и технологии в Университете штата Огайо. Авторы хотели бы поблагодарить ЯМР-центр в Университете штата Огайо и ЯМР-центр в Университете штата Пенсильвания.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Avance III 850 ЯМР приборBruker
Avance III 500 ЯМР приборBruker
TCI 5 мм зондBrukerHelium охлаждаемый инверсный (протонный детектированный) ЯМР-зонд с тремя независимыми каналами (1H, 13C, 15N)
BBO prodigy 5 мм зондBrukerЗонд для наблюдения с азотным охлаждением (с обнаружением X-ядер) с двумя каналами; один для обнаружения 1H и 19Fи один для X-ядер (охватывающий от 15N до 31P)
Спиннер турбинBrukerизготовлен из полимерных материалов и имеет резиновое уплотнительное кольцо для надежного удержания трубки ЯМР на месте
Topspin 3.5Bruker
дейтерированный хлороформSigma-Aldrich  865-49-699,8 атом % D, содержит 0,03 TMS
2,6-Di-tert-бутил-4-метилфенолSigma-Aldrich  128-37-0чистота >99%
рыбьего жира
ЯМР пробиркиNew EraNE-RG5-75мм OD Routine " R” Пробирка для образцов ЯМР серии
BSMSBrukerСистема управления системами Bruker
ЯМР Образцы ; устройство системы управления

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Simopoulos, A. P. The importance of the ratio of omega-6/omega-3 essential fatty acids. Biomed. Pharmacother. 56 (8), 365-379 (2002).
  2. Goodnight, S. H. Jr, Harris, W. S., Connor, W. E. The effects of dietary omega 3 fatty acids on platelet composition and function in man: a prospective, controlled study. Blood. 58 (5), 880-885 (1981).
  3. Harper, C., Jacobsen, T. Usefulness of omega-3 fatty acids and the prevention of coronary heart disease. Am. J. Cardiol. 96 (11), 1521-1529 (2005).
  4. Kremer, J. M., et al. Effects of high-dose fish oil on rheumatoid arthritis after stopping nonsteroidal antiinflammatory drugs. Clinical and immune correlates. Arthritis and Rheumatol. 38 (8), 1107-1114 (1995).
  5. Malasanos, T., Stackpoole, P. Biological effects of omega-3 fatty acids in diabetes mellitus. Diabetes Care. 14, 1160-1179 (1991).
  6. Han, Y., Wen, Q., Chen, Z., Li, P. Review of Methods Used for Microalgal Lipid-Content Analysis. Energ. Procedia. 12, 944-950 (2011).
  7. Guillén, M., Ruiz, A. 1H nuclear magnetic resonance as a fast tool for determining the composition of acyl chains in acylglycerol mixtures. Eur. J. Lipid Sci. Technol. 105, 502-507 (2003).
  8. Sacchi, R., Medina, I., Aubourg, S. P., Addeo, F., Paolillo, L. Proton nuclear magnetic resonance rapid and structure specific determination of ω-3 polyunsaturated fatty acids in fish lipids. J. Am Oil Chem Soc. 70, 225-228 (1993).
  9. Igarashi, T., Aursand, M., Hirata, Y., Gribbestad, I. S., Wada, S., Nonaka, M. Nondestructive quantitative acid and n-3 fatty acids in fish oils by high-resolution 1H nuclear magnetic resonance spectroscopy. J. Am. Oil Chem. Soc. 77, 737-748 (2000).
  10. Plans, M., Wenstrup, M., Saona, L. Application of Infrared Spectroscopy for Characterization Dietary Omega-3 Oil Supplements. J. Am. Oil Chem. Soc. 92, 957-966 (2015).
  11. Jian-hua, C. I. A. Near-infrared Spectrum Detection of Fish Oil DHA Content Based on Empirical Mode Decomposition and Independent Component Analysis. J Food Nutr Res. 2 (2), 62-68 (2014).
  12. Millen, A. E., Dodd, K. W., Subar, A. F. Use of vitamin, mineral, nonvitamin, and nonmineral supplements in the United States: The 1987, 1992, and 2000 National Health Interview Survey results. J. of Am. Diet Assoc. 104 (6), 942-950 (2004).
  13. Dwyer, J. T., et al. Progress in developing analytical and label-based dietary supplement databases at the NIH office of dietary supplements. J. Food Compos. Anal. 21, S83-S93 (2008).
  14. Monakhova, Y. B., Ruge, I., Kuballa, T., Lerch, C., Lachenmeier, D. W. Rapid determination of coenzyme Q10 in food supplements using 1H NMR spectroscopy. Int. J. Vitam. Nutr. Res. 83 (1), 67-72 (2013).
  15. Monakhova, Y. B., et al. Standardless 1H NMR determination of pharmacologically active substances in dietary supplements and medicines that have been illegally traded over the internet. Drug Test. Anal. 5 (6), 400-411 (2013).
  16. Berger, S., Braun, S. 200 and more NMR experiments: a practical course. , Wiley-VCH. Weinheim. (2004).
  17. Knothe, G., Kenar, J. A. Determination of the fatty acid profile by 1H-NMRspectroscopy. Eur. J. Lipid Sci. Technol. 106, 88-96 (2004).
  18. Sacchi, R., Medina, J. I., Aubourg, S. P., Paolillo, I. G. L., Addeo, F. Quantitative High-Resolution 13C NMR Analysis of Lipids Extracted from the White Muscle of Atlantic Tuna (Thunnus alalunga). J. Agric. Food Chem. 41 (8), 1247-1253 (1993).
  19. Dais, P., Misiak, M., Hatzakis, E. Analysis of marine dietary supplements using NMR spectroscopy. Anal. Methods. 7 (12), 5226-5238 (2015).
  20. Pickova, J., Dutta, P. C. Cholesterol Oxidation in Some Processed Fish Products. J. Anal. Oil Chem. Soc. 80 (10), 993-996 (2003).
  21. Siddiqui, N., Sim, J., Silwood, C. J. L., Toms, H., Iles, R. A., Grootveld, M. Multicomponent analysis of encapsulated marine oil supplements using high-resolution 1H and 13C NMR techniques. J. of Lipid Rsrch. 44 (12), 2406-2427 (2003).
  22. Sua´rez, E. R., Mugford, P. F., Rolle, A. J., Burton, I. W., Walter, J. A., Kralovec, J. A. 13C-NMR Regioisomeric Analysis of EPA and DHA in Fish Oil Derived Triacylglycerol Concentrates. J. Am. Oil Chem. Soc. 87, 1425-1433 (2010).
  23. Youlin, X. A., Moran, S., Nikonowiczband, E. P., Gao, X. Z-restored spin-echo 13C 1D spectrum of straight baseline free of hump, dip and roll. Magn. Reson. Chem. 46, 432-435 (2008).
  24. Tengku-Rozaina, T. M., Birch, E. J. Positional distribution of fatty acids on hoki and tuna oil triglycerides by pancreatic lipase and 13C NMR analysis. Eur. J. Lipid Sci. Technol. 116 (3), 272-281 (2014).
  25. Berry, S. E. E. Triacylglycerol structure and interesterification of palmitic and stearic acid-rich fats:An overview and implications for cardiovascular disease. Nutr. Res. Rev. 22 (1), 3-17 (2009).
  26. Hunter, J. E. Studies on effects of dietary fatty acids as related to their position on triglycerides. Lipids. 36, 655-668 (2001).
  27. Vlahov, G. Regiospecific analysis of natural mixtures of triglycerides using quantitative 13C nuclear magnetic resonance of acyl chain carbonyl carbons. Magnetic Res. in Chem. 36, 359-362 (1998).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи