Новый анализ для холодной ноцицепции в Drosophila личинки

Summary

Здесь мы демонстрируем новый анализ для изучения холодной ноцицепции у личинок дрозофилы. Этот тест использует пользовательский встроенный Пельтье зонд, способный прикладывать фокусный вредный холодный стимул и приводит к количественному холодных конкретному поведению. Эта методика позволит дальнейшему клеточному и молекулярному рассечение холодной ноцицепции.

Abstract

Как организмы чувствуют и реагируют на вредные температуры до сих пор плохо изучены. Кроме того, механизмы, лежащие в основе сенсибилизации сенсорной техники, такие, как у пациентов, испытывающих периферической невропатии или травмы, вызванной сенсибилизацию, не очень хорошо охарактеризованы. Генетически послушная модель дрозофилы была использована для изучения клетки и генов , необходимую для обнаружения вредного тепла, которая давала несколько консервативных генов, представляющих интерес. Мало что известно, однако, о клетках и рецепторах, важных для вредного холодного зондирования. Хотя, Drosophila не выдерживает длительное воздействие низких температур (≤10 ° C), и позволит избежать прохладно, предпочитая более теплые температуры в поведенческих предпочтений анализов, как они чувствуют , и , возможно , избежать вредных холодных раздражители только недавно были исследованы.

Здесь мы описываем и охарактеризовать первый вредный холод (≤10 ºC) поведенческий анализ вDrosophila. С помощью этого инструмента и анализа, мы покажем, следователь, как качественно, так и количественно оценить холодные ноцицептивных поведения. Это может быть сделано при нормальных / здоровых условий культивирования, или предположительно в контексте заболевания, травмы или сенсибилизации. Кроме того, этот анализ может быть применен к личинкам, выбранному для желательных генотипов, которые могли бы повлиять на thermosensation, боль или ноцицептивную сенсибилизацию. Учитывая, что боль является высоко консервативен процессом, с помощью этого анализа для дальнейшего изучения тепловой ноцицепции, вероятно, почерпнуть важное понимание болевых процессов у других видов, в том числе позвоночных.

Introduction

Дрозофилы, оказались весьма полезными для идентификации новых генов сохраняются и нейронных цепей , которые лежат в основе сложного поведения. Мухи обеспечивают сложный генетический инструментарий и упрощенную нервную систему , которая позволяет точно и генетической манипуляции нейрональной ^{1, 2, 3, 4} рассекать клеточные и молекулярные основы ноцицепции ^{5, 6, 7.} Личинки являются особенно полезными для этих анализов, учитывая , что поведенч....

Protocol

1. Подготовка Личинки

1. Повысить акции или генетических кресты в инкубаторе 25 ºC.
   1. Если культивирование креста, использовать 20-25 девственные самка и 15-20 самцов в пузырек, содержащий регулярные кукурузной мука летучих СМИ. Разрешить самки откладывают яйца в течение приблизительно 48 часов до передачи их в новый флакон пищи.
2. 4-5 дней после того, как йценоскости, собирать 3 - ^й возрастной стадии личинки желаемого генотипа, осторожно впрыскивая поток воды в кашицеобразную пищу и личинка, и вылить содержимое в среднем размере, чистую чашке Петри (60 мм х 15 мм).
3. Затем, аккуратно сортировать личинка по размеру ....

Results

Дрозофилы личинки двигаются с помощью перистальтического движения , которое включает в себя случайные паузы, повороты головы, и изменения в направлении ^22. В ответ на фокальное применение вредного холодного раздражителя однако, личинки демонстрируют набор уникальных поведения, в отличии от аверсивного бокового валка к вредному теплу и механическим стимулам. Такое поведение также отличается от ответов на нежное прикосновение ^8,.......

Discussion

Анализ, описанный здесь, может быть использован для качественно и количественно оценить ноцицепции или ноцицептивную сенсибилизацию у личинок различных генетических фонов, воздействий окружающей среды, и / или повреждений индуцированных условий. Так как этот анализ позволяет фокальное применение холодного раздражителя, с помощью этого инструмента можно оценить функцию подмножества периферических сенсорных нейронов, в частности, в ответ на низкие температуры. Интересно, что это холоднокатаное вызывали поведение , кажется.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Холодный зонд	Pro-Dev Engineering	Изготовлен по индивидуальному заказу	Номера деталей и детали конструкции могут быть предоставлены по запросу
Блок терморегулирования	TE Technology	Изготовленный по индивидуальному заказу корпус	Номера деталей и детали конструкции могут быть предоставлены по запросу
Микроскоп Zeiss Stemi 2000	Zeiss	NT55-605
Fiber-Lite MI-150 Осветитель	высокой интенсивностиДолан-Дженнер Индастриз.	A20500
Schott Dual Gooseneck 23-дюймовый волоконно-оптический световод	Schott North America, Inc.	Schott A08575
Щипцы	FST	FS-1670	Используются для сортировки и обработки личинок. Обязательно слегка разгладьте и затупите кончики щипцов, чтобы снизить риск случайного прокола или травмирования личинок
Кисть	Dick Blick Art Materials	06762-1002	Используется для сортировки и обработки личинок. Это полезно, если кисть влажная во время использования.
35 мм x 10 мм Полистирольная чашка	Петри Falcon	351008
60 мм x 10 мм Полистирольная чашка	Петри Falcon	351007
Кусок черного винила (не менее 2 дюймов x 2 дюймов)			Используется для обеспечения контраста и ориентации личинок на холодный щуп
Fisherbrand Scoopula Spatula	Fisher Scientific	14-357Q	Используется для перемещения продуктов питания
Kimtech Science Kimwipes	Fisher Scientific	06-666A	Используется для сушки личинок и холодного зонда при наличии избытка влаги