Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Подготовка и характеристика новых HDL-имитирующих наночастиц для инкапсуляции фактора роста нервов

7.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55584

⸱

22 мая 2017 г.

 , 
1Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of North Texas Health Science Center

В этой статье

Краткое содержание

Простую гомогенизацию использовали для получения новых наночастиц с высокой плотностью, имитирующих липопротеин для инкапсуляции фактора роста нервов. В этой статье описываются проблемы, подробные протоколы для подготовки наночастиц, характеристика in vitro и исследования in vivo .

Аннотация

Целью данной статьи является введение методов подготовки и характеризации наночастиц (NP), нагружающих фактор роста нервной (NGF), высокой плотности, липопротеинов (HDL). ЛПВП являются эндогенными НП и изучены в качестве носителей для доставки терапевтических агентов. Разработаны различные методы получения HDL-имитирующих НП. Однако они, как правило, сложны, трудоемки и трудны для промышленного наращивания. В этом исследовании одноступенчатую гомогенизацию использовали для смешивания эксципиентов и образования прототипов NPs. NGF представляет собой водорастворимый белок массой 26 кДа. Для облегчения инкапсулирования NGF в липидную среду HDL-имитирующих NPs протамин USP использовали для образования комплекса ионной пары с NGF для нейтрализации зарядов на поверхности NGF. NGF / протаминовый комплекс затем вводили в прототипы NPs. Наконец, аполипопротеин AI был нанесен на поверхность НП. NGF-HDL-имитирующие NPs показали предпочтительные свойства в терминахС размером частиц, распределением по размерам, эффективностью захвата, высвобождением in vitro , биологической активностью и биораспределением. Благодаря тщательной разработке и исследованию гомогенизации в HD-имитирующих NP, процедура была значительно упрощена, и NP были сделаны масштабируемыми. Кроме того, были преодолены различные проблемы, такие как отделение незагруженного NGF от NP, проведение надежных исследований высвобождения in vitro и измерение биоактивности NP.

Введение

Макромолекулы, такие как белки, пептиды и нуклеиновые кислоты, появились в качестве перспективных препаратов и в последние десятилетия получили значительное внимание 1 , 2 . Благодаря их высокой эффективности и специфическим режимам действия они обладают большим терапевтическим потенциалом для лечения рака, иммунных заболеваний, ВИЧ и связанных с ними состояний 3 , 4 . Однако физико-химические свойства, такие как их большие молекулярные размеры, трехмерная структура, поверхностные заряды и гидрофильная природа, делают in vivo доставку этих макромолекул очень сложной. Это значительно затрудняет их клиническое применение 4 . Недавние достижения в системах доставки лекарственных средств, таких как микрочастицы, полимерные наночастицы (NP), липосомы и липидные NP, преодолели эти трудности и значительно улучшили доставку макромолекул in vivo . эйБыли выявлены некоторые недостатки в отношении этих доставочных грузов, включая низкую загрузочную способность лекарства, низкую эффективность улавливания, короткий период полураспада, потерю биоактивности и нежелательные побочные эффекты 5 , 6 , 7 , 8 . Эффективные системы носителей остаются областью исследования. Более того, разработка аналитических методов для характеризации нагруженных препаратами НП более сложна для макромолекул, чем для малых молекул.

Липопротеины высокой плотности (HDL) представляют собой природные NP, состоящие из липидного ядра, покрытого аполипопротеинами и монослоем фосфолипидов. Эндогенный ЛВП играет критическую роль в транспорте липидов, белков и нуклеиновых кислот посредством его взаимодействия с рецепторами-мишенями, такими как SR-BI, ABCAI и ABCG1. Он был изучен как средство доставки различных терапевтических агентов 9, 10 , 11 , 12 . Разработаны различные методы получения HDL-имитирующих НП. Диализ - популярный подход. В этом способе НЧ образуются путем гидратации липидной пленки с использованием раствора холата натрия. Затем соль удаляют посредством 2-дневного диализа с тремя буферами 13 . Способы ультразвуковой обработки производят НП путем ультразвуковой липидной смеси в течение 60 мин при нагревании; НЧ далее очищают с помощью гель-хроматографии 14 . Микрофлюиды генерируют НП с помощью микрожидкостного устройства, которое смешивает фосфолипиды и растворы аполипопротеина AI (Apo AI) путем создания микровихрей в фокусирующей схеме 15 . Очевидно, что эти методы могут быть трудоемкими, жесткими и трудными для промышленного наращивания.

В этой статье мы вводим подготовку и характеристику новых HDL-имитирующих NP для нерваИнкапсуляция фактора роста (NGF). NGF представляет собой дисульфидсвязанный полипептидный гомодимер, содержащий два полипептидных мономера 13,6 кДа. Была разработана новая методика получения НП путем гомогенизации с последующим инкапсулированием NGF в NP. NGF-HDL-имитирующие NP характеризовались по размеру частиц, распределению по размерам, дзета-потенциалу и выделению in vitro . Их биоактивность оценивали на разрастание нейритов в клетках РС12. Биораспределение NGF HDL-имитирующих НП сравнивали с биосферным свободным NGF после внутривенной инъекции у мышей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ. Исследования на животных, включенные во все процедуры, были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных при университете Северного Техаса.

1. Получение наночастиц, имитирующих NGF HDL

  1. Растворяют эксципиенты, фосфатидилхолин (ПК), сфингомиелин (SM), фосфатидилсерин (PS), холестерин олеат (CO) и сукцинат D-α-токоферил полиэтиленгликоля (TPGS) в этаноле для приготовления исходных растворов в концентрации 1 мг / мл.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Исходные растворы разделяли на аликвоты и хранили при -20 ° С. Олеат холестерина хранили в темных бутылках. Исходные растворы ПК, SM, PS и CO были стабильными в течение 6, 3, 12 и 12 месяцев соответственно при -20 ° C. Раствор TPGS был стабильным в течение по меньшей мере 12 месяцев при -20 ° C.
  2. Смешайте 10 мкл NGF (1 мг / мл в воде) с 10 мкл протамина USP (1 мг / мл в воде) в 1,5 мл микроцентрифужной пробирке и дайте ему постоять в течение 10 мин при комнатной температуре, чтобыОбразуют комплекс.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Исходные растворы NGF и протамина разделяли по аликвоту и хранили при -20 ° C. Повторное замораживание и оттаивание не рекомендуется для запаса NGF.
  3. Добавить 59 мкл ПК, 11 мкл SM, 4 мкл PS, 15 мкл CO и 45 мкл TPGS в стеклянный флакон. Перемешивают и выпаривают этанол под слабым потоком азота в течение примерно 5 мин; Все наполнители должны образовывать маслянистую тонкую пленку на дне стеклянной пробирки.
  4. Добавить 1 мл сверхчистой (тип 1) воды в пробирку и гомогенизировать при 9500 об / мин (8600 мкг) в течение 5 мин при комнатной температуре для образования прототипов НП.
  5. Добавить комплекс, полученный на стадии 1.2, в прототипные NPs и инкубировать при 37 ° C в течение 30 мин при перемешивании с помощью небольшого перемешивающего стержня в стеклянной пробирке.
    1. Охлаждают NPs путем перемешивания при комнатной температуре в течение еще 30 мин. После этого охлаждают, добавляют 106 мкл Apo AI (1,49 мг / мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, чтобы получить окончательныйNGF-HDL-имитирующие НП.

2. Характеристика наночастиц, имитирующих NGF HDL

  1. Измерить размер частиц и дзета-потенциал с помощью анализатора частиц (см. Таблицу материалов) в соответствии с инструкциями изготовителя.
  2. Используйте сшитую агарозную гель-фильтрационную хроматографическую колонку, чтобы отделить ненагруженный NGF от NGF HDL-имитирующих NP и определить эффективность захвата NGF.
    1. Для приготовления колонки переносите 15 мл суспензии Sepharose 4B-CL в стакан емкостью 50 мл. Размешайте суспензию шарика, используя стеклянный стержень, и вылейте часть в колонку (диаметр 30 см × 1 см, со стеклянной фриттой внизу). Аккуратно нажмите на колонку, чтобы избавиться от пузырьков. Дайте растворителю стечь и бусинки остыть в течение нескольких минут.
    2. Продолжайте добавлять оставшуюся подвеску. Промойте внутреннюю стенку колонны, чтобы очистить бусинки. Слейте растворитель, пока уровень растворителя не станет слегкаЗалейте верхнюю часть неподвижной фазы. Промывают и кондиционируют колонку 20 мл 1x фосфатно-буферного солевого раствора (PBS, содержащего 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 8 мМ Na 2 HPO 4 и 2 мМ KH 2 PO 4 ).
    3. Для определения фракций, содержащих ненагруженный NGF, загрузите 200 мкл раствора NGF (10 мкг / мл) на колонку для гель-фильтрации (диаметр 25 см х 1 см) и элюируйте 1х PBS.
    4. Соберите в общей сложности 12 фракций (по 1 мл для каждой фракции) и измерьте концентрацию NGF в каждой фракции, используя набор для анализа сэндвич-ELISA для NGF.
    5. Определить NGF из фракций 6-10, используя набор Sandwich ELISA. Получают хроматограмму незагруженного NGF на колонке. Промойте колонку 20 мл PBS.
    6. Для определения фракций, содержащих NGF HDL-имитирующие NPs, загрузите 200 мкл NPs на колонку и элюируйте 1x PBS. Соберите в общей сложности 12 фракций (по 1 мл на каждую фракцию) и измерьте интенсивность частиц в каждой фракции uПеть анализатор размера частиц. Определите NPF NP от фракций 2 до 4.
      ПРИМЕЧАНИЕ. Интенсивность - это параметр, измеряемый анализатором частиц, который показывает, сколько наночастиц может присутствовать в тестируемом растворе. Чем больше NP существует в растворе, тем выше интенсивность. При таком подходе мы можем подтвердить, что столбец может отделять NGF NPs от незагруженного NGF.
    7. Чтобы измерить эффективность захвата NGF, загрузите 200 мкл NGF HDL-имитирующих NPs на колонку и элюируйте 1x PBS. Соберите в общей сложности 12 фракций (по 1 мл на каждую фракцию).
    8. Измерить концентрацию ненагруженного NGF с фракций 6-10, используя набор Sandwich ELISA.
    9. Добавить суммы NGF, измеренные от фракций 6 до 10 вместе, в качестве незагруженного NGF и вычислить эффективность улавливания NGF, используя следующее уравнение.
      % EE = (1 - незагруженный NGF / общий NGF, добавленный в NP) x 100% Уравнение (1)

3. Выделение in vitro NGF HDL- имитация наночастиц

  1. Исследование свободного NGF (10 мкг / мл в воде, n = 4) и NGF HDL-имитирующих НП (10 мкг / мл, n = 4) параллельно.
  2. Предварительно обработать 8 диализных пробирок (ограничение молекулярной массы: 300 кДа), следуя инструкциям производителя.
  3. Готовят 5% бычий сывороточный альбумин (BSA) в PBS в качестве среды высвобождения. Добавить 30 мл среды для выделения в центрифужную пробирку на 50 мл и разогреть ее до 37 ° С в шейкере со скоростью встряхивания 135 об / мин. Поместите еще 50 мл среды для выпуска в шейкер для замены.
  4. Добавьте 400 мкл среды для выделения в диализную пробирку и быстро добавьте 200 мкл испытуемого образца, чтобы получить достаточный объем для диализа.
  5. Закройте пробирку и быстро вставьте диализную пробирку в среду для выпуска (центрифужная пробирка). Быстро вытащите 100 мкл среды для выпуска из внешней диализной трубки в качестве образца для времени 0. Сразу же поставьте образец на -20 ° C для последующего анализа. Добавить 100 мкл свежего реСдайте среду в центрифужную пробирку, чтобы заменить отобранный образец. Запустите таймер.
  6. Через 1, 2, 4, 6, 8, 24, 48 и 72 ч отводят 100 мкл среды высвобождения и заменяют ее 100 мкл свежей среды. Немедленно помещают отобранные образцы в -20 ° C для последующего анализа.
  7. Через 72 ч вынимают все образцы от -20 ° С и оттаивают их при комнатной температуре. Измерьте концентрации NGF в образцах высвобождения с помощью набора для сэндвич-анализа ELISA.

4. Биоактивность NGF HDL-имитирующих наночастиц (исследование роста невритов)

  1. Культура клеток PC12 в среде RPMI-1640, дополненной 10% инактивированной нагреванием лошадиной сывороткой, 5% фетальной бычьей сыворотки, 100 мкг / мл стрептомицина и 100 единиц / мл пенициллина. Поддерживайте клетки в увлажненном инкубаторе при 37 ° C и 5% CO 2 .
  2. Когда клетки достигают ~ 70-80% слияния, удаляют культуральную среду и промывают клетки 1x PBS (приблизительно 2 мл на 10 см 2 площадь поверхности культуры). Удалите промывочный раствор. Трипсинизируют клетки, добавляя 0,25% раствор трипсина-ЭДТА (0,25% трипсина и 1 мМ ЭДТА, 0,5 мл на площадь поверхности культуры 10 см 2 ) в колбу и инкубируют при 37 ° С до тех пор, пока большинство клеток не отсоединятся.
  3. Добавьте два объема культуральной среды и спин вниз при 180 xg в течение 5 мин. Удалите супернатант и ресуспендируйте клеточный осадок в 5 мл культуральной среды. Фильтруйте клетки через иглу 22 G, ½ дюйма, чтобы разбить кластеры клеток.
  4. Разделите клетки в соотношении 1: 3 в новую колбу для культуры клеток. После инкубации в течение ночи удалите неприкрепленные клетки PC12. Позвольте прикрепленным клеткам оставаться для дальнейшего роста.
  5. Повторите эту процедуру для 3 проходов, чтобы выбрать субкультуру PC12, которая обладает сильным свойством адгезии. Предварительно покрыть 6-луночный планшет с 800 мкл / лунку крысиного хвоста коллагена типа I (100 мкг / мл).
  6. Трипсинизируйте выбранные клетки PC12, как описано в шаге 4.2, и отфильтруйте их через22 G, ½ дюйма иглу, чтобы разорвать кластеры клеток. Подсчитайте клетки с помощью гемоцитометра. Посеяли клетки в течение ночи при плотности 10 000 клеток на лунку в предварительно покрытой 6-луночной планшете на этапе 4.5, чтобы клетки были прикреплены к пластине.
  7. Разведите свободный NGF (10 мкг / мл) и NGF HDL-имитирующие NP (10 мкг / мл) с культуральной средой (описанной на шаге 4.1), чтобы получить концентрации 0,5, 1, 5, 10, 50 и 100 нг / мл. Удалите 2 мл среды из каждой лунки и замените их на 2 мл разбавленных свободных NGF или NGF HDL-имитирующих НП. Культура на 4 дня.
  8. На 4-й день меняют среду на свежую среду (описанную на шаге 4.1), содержащую соответствующее лечение, и продолжают лечение еще в течение 3 дней.
  9. На 7-й день визуализируйте клетки с помощью инвертированного светового микроскопа и просейте каждую лунку в случайных точках под 10-кратным увеличением.

5. Биораспределение NGF HDL-имитирующих наночастиц

  1. Взрослым мышам BALB / c (самцы, 25-30 г) до tА также распределение тканевых NPF NP. В случайном порядке разделить мышей на три группы по 3 мыши на группу. Используйте конусообразный пластиковый ограничитель ( например, декапикон), чтобы удерживать мышь и протирать хвост этанолом, чтобы способствовать вазодилатации и видимости вен.
  2. Внесите 100 мкл или физиологического раствора, свободного NGF, или NGF HDL-имитирующих НП каждой группе мышей (3 группы) через хвостовые вены в дозе 40 мкг / кг NGF. Используйте иглу 30 ½ G, прикрепленную к шприцу объемом 1 мл.
  3. Через 30 мин после инъекции обезболивают мышей, используя 3% ингаляционного изофлурана (в кислороде при расходе 2 л / мин). Выполните пальто хвоста и пальца ноги, чтобы определить глубину анестезии. Соберите кровь при сердечной пункции.
    1. Вывести приблизительно 1 мл крови из сердца. Усыпите каждую мышь шейной дислокацией.
  4. Поместите мышь в дорсальную спину. Откройте живот хирургическими ножницами и перемещайте жир и кишечник в сторонуИспользуя ватный тампон для выявления печени, селезенки и почек. Уберите эти ткани и промойте их в 1x PBS для очистки крови.
  5. Немедленно центрифугируйте образцы крови при 3400 xg и 4 ° C в течение 5 минут, чтобы получить плазму. Хранить плазмы и тканей при -80 ° C до анализа.
  6. Чтобы проанализировать образцы ткани, перемещайте образцы от -80 ° C до 4 ° C и суспендируйте 100 мг образца ткани в 10-кратном объеме экстракционного буфера (0,05 М ацетата натрия, 1,0 М хлорида натрия, 1% тритона Х-100, 1% BSA, 0,2 мМ фенилметансульфонилфторида и 0,2 мМ бензетониума хлорида). Гомогенизируют при 10000 об / мин и 4 ° С в течение 5 мин.
  7. Пожертвуйте двух необработанных мышей для сбора пустых плазмы и тканей, как описано в шагах 5.3 и 5.4. Приготовьте стандартные растворы NGF, используя чистые плазменные или гомогенизированные чистые ткани.
  8. Определите концентрации NGF в гомогенатах плазмы и тканей с использованием набора Sandwich ELISA, как описано выше.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

На рис. 1 показана техническая схема HDL-имитирующих NPF NP, покрытых α-токоферолом, приготовленных по стратегии ионных пар. Чтобы нейтрализовать поверхностные заряды NGF, протамин USP использовали в качестве агента ионной пары для образования комплекса с NGF. Для защиты биоактивности были спроектированы прототипы NPL, имитирующие HDL, с использованием гомогенизации; Затем NGF / протаминовый комплекс инкапсулировали в прототипы NPs. Гомогенизация обеспечивала достаточную энергию и успешн...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом исследовании мы продемонстрировали простой метод приготовления HDL-имитирующих NP для инкапсуляции NGF. Были изучены различные системы доставки NP для доставки белков. В настоящее время многие препараты НП включают диализ, осаждение растворителя и гидратацию пленки. Эти процессы, как правило, сложны и сложны при масштабировании. Во время этой разработки NP было определено, что липиды обладают сильной адгезией к стеклянной стенке контейнера, что привело к трудностям в увлажнении тонкой пленки и эффективном перемеш...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана NIH R03 NS087322-01 до Dong, X.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Рекомбинантный человеческий бета-NGFCreative BiomartNGF-05H
L-α-фосфатидилхолин (PC)Avanti131601P95%, яйцо, куриный
сфингомиелин (SM)Avanti860062Pмозг, свиной
фосфатидилсерин (PS)Avanti840032Pмозг, свиной
холестерилолеат (CO)SigmaC9253
D-α-токоферилполиэтиленгликоль сукцинат (TPGS)BASF9002-96-4Витамин Е Полиэтиленгликоль Сукцинат
Протамина сульфатSigmaP3369соответствует спецификациям тестирования USP
Аполипопротеин A1, Плазма человекаAthens Research & Технология16-16-1201011 мг в 671 &; L 10 mM NH4HCO3, pH 7,4
Sepharose 4B-CLSigmaCL4B200Cross-linked agarose,  гель фильтрация хроматография материал для заполнения колонки
Sandwich ELISA Kit for NGFR& D системаDY008
Бычья сыворотка АльбуминSigmaA2153
RPMI-1640 среднийGE Healthcare Life ScienceSH30096.02
Лошадиная сывороткаGE Healthcare Life ScienceSH30074.03
Фетальная бычья сывороткаGibco10082147
PC12 клеткиATCCCRL-1721
Крысиный хвост коллаген типа ISigmaC3867
Ацетат натрияSigmaS2889
Хлорид натрияSigma31414
Triton X-100SigmaT8787
Фенилметансульфонилфторид (PMSF)SigmaP7626
Бензетония хлоридSigmaB8879
НазваниеCompany<strong>Номер в каталоге>Комментарии
Оборудование
ГомогенизаторTekmarT 25-S1
Delsa Nano HC анализатор частицBeckman-CoulterDelsa Nano HC
Float-A-Lyzer G2 Аппарат для диализаSpectrum LaboratoriesG235036отсечкой молекул 300 кДа
ЦентрифугаEppendoff5424R
ГомогенизаторPolytron KinematicaPT 1200C
DecapiCone  Braintree Scientific Inc.DC-M200

Ссылки

  1. Bruno, B. J., Miller, G. D., Lim, C. S. Basics and recent advances in peptide and protein drug delivery. Ther Deliv. 4 (11), 1443-1467 (2013).
  2. Mo, Z. C., Ren, K., Liu, X., Tang, Z. L., Yi, G. H. A high-density lipoprotein-mediated drug delivery system. Adv Drug Deliv Rev. 106 (Pt A), 132-147 (2016).
  3. Lacko, A. G., Sabnis, N. A., Nagarajan, B., McConathy, W. J. HDL as a drug and nucleic acid delivery vehicle. Front Pharmacol. 6, 247-252 (2015).
  4. Vaishya, R., Khurana, V., Patel, S., Mitra, A. K. Long-term delivery of protein therapeutics. Expert Opin Drug Deliv. 12 (3), 415-440 (2015).
  5. Lasic, D. D., Papahadjopoulos, D. Medical application of liposomes. , Elsevier. (1998).
  6. Samad, A., Sultana, Y., Aqil, M. Liposomal drug delivery systems: an update review. Curr Drug Deliv. 4 (4), 297-305 (2007).
  7. Bezemer, J. M., Radersma, R., Grijpma, D. W., Dijkstra, P. J., van Blitterswijk, C. A., Feijen, J. Microspheres for protein delivery prepared from amphiphilic multiblock copolymers: 2. Modulation of release rate. J Control Release. 67 (2-3), 249-260 (2000).
  8. Patel, A., Patel, M., Yang, X., Mitra, A. K. Recent advances in protein and peptide drug delivery: a special emphasis on polymeric nanoparticles. Protein Pept lett. 21 (11), 1102-1120 (2014).
  9. Kuai, R., Li, D., Chen, Y. E., Moon, J. J., Schwendeman, A. High-density lipoproteins: nature's multifunctional nanoparticles. ACS Nano. 10 (3), 3015-3041 (2016).
  10. Gursky, O. Structural stability and functional remodeling of high-density lipoproteins. FEBS Lett. 589 (19 Pt A), 2627-2639 (2015).
  11. McMahon, K. M., Thaxton, C. S. High-density lipoproteins for the systemic delivery of short interfering RNA. Expert Opin Drug Deliv. 11 (2), 231-247 (2014).
  12. McMahon, K. M., Foit, L., Angeloni, N. L., Giles, F. J., Gordon, L. I., Thaxton, C. S. Synthetic high-density lipoprotein-like nanoparticles as cancer therapy. Cancer Treat Res. 166, 129-150 (2015).
  13. Lerch, P. G., Förtsch, V., Hodler, G., Bolli, R. Production and characterization of a reconstituted high density lipoprotein for therapeutic applications. Vox Sang. 71 (3), 155-164 (1996).
  14. Zhang, Z., Chen, J., Ding, L., Jin, H., Lovell, J. F., Corbin, I. R., Cao, W., Lo, P. C., Yang, M., Tsao, M. S., Luo, Q., Zheng, G. HDL-mimicking peptide-lipid nanoparticles with improved tumor targeting. Small. 6 (3), 430-437 (2010).
  15. Kim, Y., Fay, F., Cormode, D. P., Sanchez-Gaytan, B. L., Tang, J., Hennessy, E. J., Ma, M., Moore, K., Farokhzad, O. C., Fisher, E. A., Mulder, W. J., Langer, R., Fayad, Z. A. Single step reconstitution of multifunctional high-density lipoprotein-derived nanomaterials using microfluidics. ACS Nano. 7 (11), 9975-9983 (2013).
  16. Prathipati, P., Zhu, J., Dong, X. D. Development of novel HDL-mimicking α-tocopherol-coated nanoparticles to encapsulate nerve growth factor and evaluation of biodistribution. Eur J Pharm and Biopharm. 108, 126-135 (2016).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

in vitroA I
Подготовка и характеристика новых HDL-имитирующих наночастиц для инкапсуляции фактора роста нервов
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.