В этой работе описывается протокол, в котором используется подход с разделением компонентов для изучения сенсибилизации к аллергенам пыльцы травы в когорте пациентов из южного Китая с аллергическим ринитом и / или астмой.
Методическая статья
* These authors contributed equally
В этой работе описывается протокол, в котором используется подход с разделением компонентов для изучения сенсибилизации к аллергенам пыльцы травы в когорте пациентов из южного Китая с аллергическим ринитом и / или астмой.
Сенсибилизация пыльцы травы наносит глобальный риск развития аллергических заболеваний дыхательных путей. Хотя профилактика основана на местном исследовании аллергенов пыльцы, данные по этой теме ограничены на юге Китая. Любые имеющиеся данные были получены путем опросов самоотчетов, тестов на кожные уколы и общих или специфических тестов IgE с использованием сырых экстрактов. По многим причинам эти методы ненадежны. Реакция сывороточного sIgE на траву Бермудских островов, траву Тимоти и Humulus scandens на аллергены в когорте пациентов из Большого Гуанчжоу (самый большой город Южного Китая и его окрестности) с аллергическим ринитом и / или астмой были исследованы с использованием полностью автоматизированного анализатора иммуноанализа в качестве компонента - разработанная диагностика (CRD).
Впервые у китайских южан была продемонстрирована значительно большая распространенность положительной реакции травы Бермудских островов с аллергическим ринитом и / или астмой. У этих пациентов тонкая распространенность сенсибилизацииК Тимоти-траве и Хумулус-сканндам, которые могут возникнуть из-за перекрестной реактивности, поскольку последние два не распространены в регионе. Это также подтверждается обнаружением компонентов аллергена.
Полностью автоматизированные анализаторы иммуноанализа могут обеспечить удовлетворительную согласованность между регионами, лабораториями и учреждениями и с течением времени. Автоматизация прибора может позволить стандартизированное обнаружение, которое не было бы легко обнаружено до появления CRD.
Это исследование, в котором используется подход CRD для исследования чувствительности к аллергенам пыльцы травы в южном Китае. Это добавляет к современным данным в литературе. Для подтверждения этих результатов необходимы дальнейшие исследования. Однако, хотя CRD является полезным инструментом, результаты, сделанные с помощью полностью автоматизированного анализатора иммуноанализа, не должны заменять другие лабораторные исследования, клинические оценки и экспертные знания.
На пыльцу травы приходится почти 50% аллергенов, связанных с иммуноглобулином E (IgE), и из-за ее воздушно-десантной природы налагает глобальный риск развития аллергических заболеваний дыхательных путей, в частности астмы и аллергического ринита 1 , 2 , 3 , 4 . Предотвращение аллергий на пыльцу в регионе зависит от информации о местном распределении аллергенов пыльцы. К сожалению, спектр чувствительных аллергенов варьируется от места к месту - наблюдение, обычно известное как региональная специфика.
В Китае, обширной восточноазиатской территории, региональная специфика сенсибилизации пыльцы травы дополнительно осложняется ограниченными данными, имеющимися в настоящее время в южной части этой страны за последние десятилетия 5 . Такая нехватка данных привела к затруднениям в выявлении общей пыльцы пыльцыВ этой большой стране 6 . Кроме того, очень ограниченные данные по китайским южанам были в основном получены из анкетных опросов, тестов на кожные заболевания (а не лабораторных анализов сыворотки), полных измерений IgE (а не аллерген-специфических IgE (sIgE)) и sIgE-обнаружения для аллергенов ( А не молекулам компонентов аллергена).
Самооценка аллергических симптомов может быть ненадежной при определенных аллергенах. Тесты кожного покрова, хотя и широко доступны, включают использование нестандартизированных сырых экстрактов аллергенов, которые сами могут содержать другие сенсибилизирующие компоненты, которые смешивают интерпретацию результатов. Надежность теста на кожный шов также критически зависит от умелого манипулирования аллергологами или медсестрами специалистов, недавнего использования гистамина и соблюдения пациентом (иногда очень трудно для маленьких детей). Общий IgE полезен для скрининга аллергии, но неE оскорбительные аллергены у пациента. Более того, почти все аллергены содержат ряд молекул аллергенных компонентов. Сенсибилизация основных компонентов ( т. Е. Der p 1 и Der p 2 от домашних пылевых клещей) может указывать на «настоящую» аллергию (аллергия на специфический аллерген, а не ложную положительность из-за перекрестных реакций с другими аллергенами), но сенсибилизация К некоторым ( т. Е. Перекрестно-реактивный Der p 10, тропомиозин) не может быть 7 .
Перед внедрением диагностики с использованием компонентов (CRD) эти разочаровывающие неудачи препятствовали исследованиям аллергенов в Китае. CRD точно обнаруживает компоненты аллергена с использованием рекомбинантных или очищенных молекул аллергена, тем самым делая измерение легко поддающимся количественной оценке и характеризуемым 8 . В последние десятилетия в исследованиях аллергии часто применялись сырые экстракты аллергенов, которые неизбежно содержат ряд неуместных компонентов. Многие из этихМины являются инертными, но иногда некоторые могут приводить к смешиванию положительных реакций. Использование рекомбинантных или очищенных молекул аллергена в CRD может обойти это и, следовательно, обеспечить лучшую точность теста. При обработке в микрочипах подход CRD быстро экранирует или идентифицирует сенсибилизацию к сотням молекул аллергенов у отдельных субъектов. В настоящее время отсутствует хорошо разработанное исследование CRD по сенсибилизации пыльцы на юге Китая. В идеальном случае такое исследование должно включать местное население с значительным географическим охватом, учет пыльцы травы, обычно сообщаемое в Китае, и рассмотрение технических аспектов, упомянутых выше. Чтобы достичь практического уровня клинической значимости и облегчить вербовку образцов сыворотки, раннее исследование сенсибилизации к пыльцевой траве в качестве ингаляционных аллергенов может также быть сосредоточено на пациентах с аллергическими респираторными заболеваниями, а не на общей популяции.
Эта работа описывает методИспользуется для тестирования реакционной способности сыворотки sIgE на траву Бермудских островов, травы Тимоти и Humulus scandens у пациентов Большого Гуанчжоу (самый большой город Южного Китая и его окраины) с аллергическим ринитом и / или астмой с использованием подхода CRD 5 . Эти данные о сенсибилизации к этим субтропическим и умеренным пыльцам травы в южном Китае добавляют важные доказательства тому, что в настоящее время в литературе.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол исследования, включая использование образцов сыворотки крови, был одобрен Комитетом по этике, Первой аффилированной больнице Гуанчжоуского медицинского университета. Все участники предлагали письменное информированное согласие либо самостоятельно, либо через своих родителей (в случае детей). Протокол зарегистрирован в Интернете (китайский клинический судебный реестр, рег. №: ChiCTR-DCC-13004003, см. Http://www.chictr.org/cn/).
1. Идентификация исследуемого населения
ПРИМЕЧАНИЕ. Первичный источник набора пациентов - это информационный репозиторий по изучению аллергии, который является основным источником для лечения респираторных заболеваний (AIR-SKLRD), поскольку ВОЗ является наиболее хорошо документированной большой базой данных пациентов для тестов на аллергены в южном Китае 9 , 10 . AIR хранит образцы сыворотки пациентов в течение почти десятилетия. Вкратце, эти сохраненные образцы предварительно готовили центрифугированием 5 млF флеботомизированная венозная кровь в течение 10 мин при 3000 мкг и восстановление супернатанта. Образцы сыворотки помещали в холодильники -80 ° C для длительного хранения. Образцы, которые соответствовали критериям включения пациента, были готовы использовать для всех испытаний в настоящем исследовании.
2. Исследование потока и измерение интереса
3. Полностью автоматизированная процедура тестирования с использованием системы анализа иммуноанализа
ПРИМЕЧАНИЕ. Вся процедура тестирования аллергена sIgE, которая полностью автоматизирована и была описана в других разделах 7 , 8 , 9 , 10 , соответствует протоколу изготовителя.
4. Определение реактивности sIgE
ПРИМЕЧАНИЕ. Для образца неразбавленной сыворотки диапазон удельного IgE-измерения составляет от 0,35 до 100 кU / л.
5. Статистический анализ
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Полностью автоматизированный анализатор иммуноанализа, используемый в этом исследовании, имеет твердофазную структуру, покрытую ковалентно связывающими аллергенами или компонентами аллергена, которые реагируют с представляющими интерес молекулами (sIgE) в образцах сыворотки от пациента. С помощью автоматической программы анализатор смывает все неспецифические IgE 150 мкл раствора для полоскания и повторяет это 5 раз. Затем он добавляет фермент-меченые антитела против IgE (50 мкл) для обр...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Полностью автоматизированные анализаторы иммуноанализа могут обеспечить удовлетворительную согласованность между регионами, лабораториями и учреждениями и с течением времени. Было обнаружено, что такая автоматическая процедура в значительной степени поддерживает лабораторные исследования и клинические исследования, позволяет стандартизовать обнаружение многих аллергенов и / или аллергенных компонентов и выявлять вероятную аллергическую перекрестную реактивность, которая не была бы легко обнаружена до появления CRD. Боле...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Авторам нечего раскрывать.
Мы благодарим Юэминга Су за его помощь в подготовке фигуры. Это исследование финансировалось Фондом науки и технологий провинции Гуандун (проект № 2014A020212352), Бюро образования Гуанчжоу (1201630044, 1201630393) и Национальным научным фондом Китая (NSFC 81572063, NSFC 81601394).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| ImmunoCAP 1000 Instrument | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала Швеция) | 12-3800-01 | |
| Программное обеспечение Phadia Information Data Manager | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала Швеция) | 12-3801-11 | |
| Программное обеспечение, ImmunoCAP 1000 | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Уппсала Швеция) | 12-3801-12 | |
| g2 ( Бермудская трава) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 14-4131-01 | |
| g6 (Тимофеевка) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 14-4100-01 | |
| w22 (японский хмель) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 14-4452-01 | |
| g216 (nCyn d 1) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 14-4972-01 | |
| g205 (rPhl p 1) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 14-5234-01 | |
| g208 (nPhl p 4) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 14-5288-01 | |
| g215 (rPhl p 5b) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 14-5338-01 | |
| g209 (rPhl p 6) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала Швеция) | 14-5289-01 | |
| g210 (rPhl p 7) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала Швеция) | 14-5290-01 | |
| g211 (rPhl p 11) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала Швеция) | 14-5291-01 | |
| g212 (rPhl p 12) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 14-5292-01 | |
| o214 Перекрестно реагирующие углеводные детерминанты (CCD) | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 14-5339-01 | |
| Специфический конъюгат IgE 400 | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 10-9310-08 | |
| Полоска для калибратора специфических IgE | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 10-9459-08 | |
| Специфическая полоска для контроля кривой IgE | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 10-9312-08 | |
| Специфическая IgE Anti-IgE ImmunoCAP | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 14-4417-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Negative Control | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 10-9445-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control L | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Уппсала Швеция) | 10-9528-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control M | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Уппсала Швеция) | 10-9529-01 | |
| ImmunoCAP Specific IgE Control H | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Уппсала Швеция) | 10-9530-01 | |
| Решение для | разработкиThermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 10-9439-08 | |
| Stop Solution | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 34-2271-58 | |
| Моющий раствор | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 10-9202-08 | |
| FluoroC | Thermo Fisher Scientific Inc.(Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 10-9264-01 | |
| Комплект для технического обслуживания | Thermo Fisher Scientific Inc. (Phadia AB, Уппсала, Швеция) | 10-9476-01 |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение