Методическая статья

Эффекты аллогенной тромбоцитов богатые плазмы (PRP) на процесс заживления секционного ахиллова сухожилия крыс: методологическое описание

8.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55759

⸱

19 марта 2018 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Experimental Surgery, GIGA-R & Credec, University of Liège, 2Laboratory of Connective Tissues Biology, GIGA-R, University of Liège, 3Department Argenco, University of Liège, 4Department of Clinical Biology, University Hospital of Liège, University of Liège, 5Physical Medicine and Sport Traumatology Department, FIFA Medical Center of Excellence, University Hospital of Liège, University of Liège

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает процесс оценки исцеления сухожилия в крыс, которые были введены с аллогенной тромбоцитов богатой плазмы (PRP) или физиологический раствор после удаления части ахиллова сухожилия. Ход лечения сухожилия оценивается в нескольких точках времени, с использованием различных видов анализа.

Аннотация

Эта статья описывает экспериментальной процедуры, используемые для наблюдения, если PRP могут позитивно влиять на сухожилие исцеления. Есть 4 основные шаги, чтобы следовать: вызывают поражения в ахиллова сухожилия; подготовить PRP и вставляют его (или физиологический раствор); удалите сухожилия; и выполнять биомеханических, молекулярной и гистологической оценок. На каждом шаге все процедуры и методы описаны в деталях, так что они могут быть легко воспроизведены.

Ахиллова сухожилия были хирургически секционного (Удаление секции длиной 5 мм). Впоследствии ОТР или физиологический раствор был введен для изучения ли PRP имеет положительное влияние на исцеление сухожилия. Три группы 40 животных (в общей сложности 120 крыс были использованы в этом исследовании) были разделены на 2 подгруппы: PRP инъекции группы и солевые впрыск управления группы. Крысы были принесены в жертву на увеличение времени точек (Группа A: 5 дней; Группа B: 15 дней; Группа C: 30 дней) и сухожилий, были удалены. 90 сухожилий прошли биомеханические тестирования перед выполнением анализа транскриптомики и 30 оставшихся сухожилий были представлены гистологический анализ.

Введение

Хорошо известно1коагуляции, воспалительные процессы и иммунитет модуляция функции тромбоцитов. Совсем недавно было продемонстрировано, что они также имеют реституционного свойства2,3. Действительно, различные факторы цитокинов и роста (VEGF, PDGF, TGF-Б, IGF-I и HGF) выпускаются тромбоцитов во время дегрануляции. Эти факторы роста содействовать ангиогенеза, тканей ремоделирования и раны исцеление (кости, кожу, мышцы, сухожилия)2. Центрифугирование аутологичной крови производит тромбоцитов богатой плазмы (PRP) который содержит тромбоцитов высокой концентрации в зависимости от метода изоляции (между 3 и 10 раз крови концентрации исходных условий). Действительно различные методы приготовления ОТР не может обеспечить идентичные конечного продукта. До сих пор был международного общего согласия по этому вопросу. В целом ОТР может быть привлекательным терапевтического лечения хронического опорно-двигательного аппарата, например плеча, подошвенный фасциит, артроз и исправления4. Он был использован в первый раз в оральной хирургии и имплантологии4 для улучшения и ускорения заживления после размещения стоматологических имплантатов кость. В этом исследовании мы описываем используется воспроизводимый метод, который позволяет приобретение PRP для экспериментов на животных4.

После поражения сухожилий часто наблюдаются в спортсменов и физических рабочих, повышение процесс заживления и таким образом сократить время восстановления являются большой интерес5. Новые методы лечения, которые разрабатывают часто связаны с использованием факторов роста, и администрация ОТР является простой и минимально инвазивной способ доставить смесь эндогенных факторов роста4.

Несколько в пробирке или животных исследования показали, что администрация плазмы, содержащие высокий уровень тромбоцитов, выпуская биологических посредников, могут стимулировать ремонт сухожилия и связки, выпустив биологических посредников6 ,,78,9. Кроме того другие исследования показали, что PRP могут стимулировать типа I и III синтез коллагена в сухожилие клетки9,10,11. Он также предложил, что PRP может уменьшить активации матрицы металлопротеиназ (MMPs) и таким образом уменьшить деградацию матрицы. Клетки, которые участвуют в процессе воспаления могут производить MMP-9, который играет роль в ткани реконструкции (физиологические и патологические) индуцированных воспаление12.

Основываясь на этой информации, мы предположили, что однократного введения ОТР в секционного ахиллова сухожилия крысы могут улучшить процесс восстановления и механическую прочность ткани, ремонт. Это проверяется путем измерения биомеханические свойства исцеления сухожилия во время процесса восстановления и гистологические и молекулярный анализ для оценки коллагена Ремоделирование в новообразованной ткани. Целью исследования было наблюдать, если одной инъекции аллогенной PRP могут повлиять на исцеление секционного ахиллова сухожилия.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Уход и обработки животных были проведены в соответствии с руководством для ухода за и использования лабораторных животных, подготовленный Национальной академии наук и публикации национальных институтов здравоохранения (США). Были тщательно следили за европейское и национальное законодательство.

1. животных подготовка

  1. Используйте 132 2 - месячного Sprague-Dawley самцах массой 320-450 г (120 крыс для экспериментов) и 12 крыс для забора крови, Рисунок 1. Основываясь на Dell13, 15 крыс для каждой группы был достаточно для питания 0,8 (80% шанс найти статистической значимости, если существует указанный эффект).
  2. Дом всех крыс в классической клеток в условиях изоляции в объекте обычных, с меняющейся станции. Спровоцировать разводить в стойке IVC (индивидуально вентилируемых Кейдж), с SPF (конкретного возбудителя бесплатно) крыс специально закупаемого.
  3. Используйте следующие жилищных условий: диапазон температур от 19-24 ° C; Относительная влажность: 40-60%; Вентиляция: частота обновления воздуха: 10-15 в час; свет/темно цикла: 12 h - 12 h.
  4. Простерилизуйте все арретирование оборудования и использовать облученного постельные принадлежности. Системно реализуйте Кейдж обогащения путем размещения стерильные картонные поддоны и полотенца внутри клетки.
  5. Разрешить доступ к зоне ограниченных условиях: новые лаборатории пальто, маски, перчатки, обувь и волосы капота на входе.
  6. Осуществлять наблюдение за работоспособностью колонии на контрольных животных, размещенный на грязной подстилке на ежегодной основе, в соответствии с рекомендациями14 Felasa для обычных объектов. Держать четыре или пять животных в клетке, с соответствующим облученных диеты и обеспечивают подкисленное воды ad libitum. Монитор ежедневно.
  7. Передача крыс, избранных для хирургического вмешательства в фильтрации верхней клетки в хирургической номера 2 ч до операции.

2. хирургическая процедура

  1. Подготовить хирургические инструменты: штраф ножницы, клещи, два кровоостанавливающие зажимы и иглодержателя. Во время всех процедур носите перчатки, маска, капот и халате.
  2. Случайным образом разделите крыс на две группы (PRP и физиологический раствор).
  3. Возьмите крысы из своей клетки и взвесить его. Используйте нумерованные ушные бирки для идентификации крыс. Чтобы избежать высыхания глаз, место капли воды на роговице.
  4. Анестезировать крыса внутрибрюшинно с Ксилазина (10 мг/кг массы тела) и кетамин (80 мг/кг веса тела). Чтобы подтвердить анестезии, место животных под кардио-респираторных функций мониторинга и проверки для любой глаз рефлексов.
  5. Придать 50 мкл бупренорфина подкожно (0,01-0,05 мг/кг каждые 8-12 ч) в области шеи, как болеутоляющее средство.
  6. Бритья левой задние конечности с электробритва, вылечить его с 3, чередуя скрабы iso-betadine/алкоголя (разбавленных 1:10) решения и крысы на площадку теплой (20 ° C) под микроскопом рассечения. Место крысы на боковых пролежни с ноги, чтобы быть оперированы в главенствующее положение. Держите Лапы с Щипцы хирургические.
  7. С помощью ножниц, сделать небольшой боковой разрез (20-25 мм) в кожу вокруг левого ахиллова сухожилия и вскрыть фасции, с помощью тонкой ножниц выставить ахиллово сухожилие комплекс (Рисунок 2a).
  8. Удаление plantaris сухожилия с ножницами (рис. 2b).
  9. Отрубом ахиллово сухожилие 5 мм проксимальнее пяточная вставки и удалить часть длиной 5 мм с помощью ножниц. Не шов сухожилия (рис. 2 c, 2d).
  10. Шовные фасции и затем кожу с рассасывающимся пряжи, делают overjet швом (непрерывный шов). Леска швов может использоваться также для предотвращения влагу от кожи в хирургический разрез.
  11. Поместите крысу под лампой Отопление пока спит и затем поместите крыса обратно в клетке (58 x 38 см) (Nota bene: накладывается не иммобилизация).

3. PRP подготовку15

  1. Внутрибрюшинной инъекцией анестезировать доноров крыс с Ксилазина (10 мг/кг массы тела) и кетамин (80 мг/кг веса тела). PRP впрыска осуществляется 2 ч после операции без каких-либо ре цистит.
  2. Вводить подкожно 50 мкл бупренорфина как болеутоляющее средство.
  3. Сбор цельной крови (20 мл на крысу, окончательный кровотечение), сердечной прокол в стерильные пробирки содержащие 3.2% буферизуются цитрат натрия (0.109 М, антикоагулянт). Затем усыпить крыса внутрисердечной инъекции.
  4. Чтобы получить ОТР, центрифуга крови в течение 10 минут при 150 x g и комнатной температуре. Этот первоначальный низкая скорость центрифугирования шаг дает два различных этапа: Нижняя фаза, состоящая из красных кровяных телец (эритроцитов), которые приходится около 80-90% от общего объема и Верхний этап, состоящий из тромбоцитов богатые плазмы (PRP) (обычно 10-20% крови образец).
  5. Аккуратно собирают PRP (Верхний этап) в средних пластиковую трубку с помощью пипетки пластиковые передачи. Как интерфейс между НРП и красные кровяные клетки очень свободно, не Пипетка слишком близко к интерфейсу. При правильном, загрязняя эритроцитов в ОТР должен быть ниже 0,05 x 103 клеток / мкл. отменить оставшиеся нижней фазе и основной пробирки.
  6. Определить объем собранных PRP и измерить количество тромбоцитов на гематологический анализатор. Эти значения необходимы для расчетов для регулировки концентрации тромбоцитов на следующем шаге. Кровяных телец также является полезным для оценки потенциального загрязнения с эритроцитов и лейкоцитов. тромбоцитов концентрация в ОТР на этой стадии обычно 1-1,5 x106µл.
  7. Выполните второй центрифугирования PRP для 10 мин на 1000 x g и комнатной температуре. Этот шаг высокоскоростной центрифуги дает свободно тромбоцитов лепешки и супернатанта, состоящий из аутологичной тромбоцитов плохой плазмы (ППС). С помощью значений, определенных на шаге 3.6, рассчитать объем супернатант удаляется сконцентрировать PRP и добраться до конечной концентрации 2,5 x106µл.
  8. Аккуратно собирают супернатант (ППС) вторичные пластиковую трубку с помощью пипетки пластиковые передачи, оставив примерно две трети из заключительного тома, рассчитанные на шаге 3.7. Как гранулы рыхлая, значительное количество тромбоцитов теряется, когда PPP отбрасывается, следовательно потенциально уменьшая окончательный желаемой концентрации.
  9. Тщательно Ресуспензируйте гранулы тромбоцитов с оставшихся супернатанта, нежный неоднократные закупорить. Измерьте количество тромбоцитов на этот концентрированный ОТР. Если требуется, добавьте соответствующие тома аутологичной PPP для достижения окончательной цели концентрации.
    Примечание: Используйте ОТР в течение 3 часов подготовки.
  10. Добавьте 50 мкл CaCl2 (11 mEq 10 мл) мл PRP для активации тромбоцитов.
  11. Inject 50 мкл свежие ОТР или физиологический раствор с иглой 21G непосредственно в место зашивается операции около 1 ч после подготовки. В это время Держите PRP при комнатной температуре.
  12. Внимательно следить за функциональное восстановление крыс в течение дней после операции и до удаления ахиллово сухожилие.

4. Удаление ахиллова сухожилия и биомеханические тестирования16

  1. 5, 15 или 30 дней позднее5, весят крыса. Затем анестезировать Ксилазина (10 мг/кг массы тела) и кетамин (80 мг/кг массы тела) внутрибрюшинной инъекцией.
  2. Вводить подкожно 50 мкл бупренорфина как болеутоляющее средство. Удалите сухожилия до принесения в жертву животное, чтобы сохранить физиологические условия для как можно дольше.
  3. Брить левой задних конечностей и место крысу под микроскопом рассечения. Место крысы на боковых пролежни с ноги, чтобы быть оперированы в главенствующее положение. Держите Лапы с пальцами.
  4. Сделать небольшой надрез (10 мм) в предыдущую операцию и продлить до suralis трицепс подвергается.
  5. Чтобы удалить исцеления ахиллова сухожилия, вырежьте пяточная кость поперек 5-10 мм дистальной своей привязанности ахиллова сухожилия. Затем вскрыть частью трицепс suralis, который прилагается к ахиллова сухожилия (рис. 3b). Мышечную часть должна быть достаточно большой, чтобы уместиться в крио челюсть (рис. 3 c-d). Поместить образец сразу в крио челюсти с помощью щипцов (Рисунок 3e).
  6. После удаления комплекс мышц сухожилие кость, усыпить крыса внутрисердечной инъекции с нембуталовым (200 мг/кг). Подтвердите смерть путем оценки отсутствие ритма сердца и дыхания за 15 мин.
  7. Поместите блок мышц в верхней челюсти (Рисунок 3e), закройте его и поместите его вертикально в Универсальная испытательная машина (106,2 кН, рис. 3a). Затем зафиксируйте кости между нижней зажимами машины (Рисунок 3f).
  8. Добавьте жидкого азота в обоих бассейнах верхней челюсти заморозить мышцы, так что это на порядок жестче, чем сухожилия и не деформируется во время испытания на растяжение.
  9. При замораживании зоны достигает границы металлический зажим, начните испытания на растяжение, поэтому сухожилие сохранит свою структуру. Установите скорость перемещения машины с постоянной скоростью 1 мм/с до разрыва. Запись конечной прочности (UTS) дано в Ньютонах (Н) на компьютере.
  10. Чтобы вычислить площадь поперечного сечения, место две камеры перпендикулярно друг к другу, образуя эллиптической формы и принимать фотографии.
  11. Для учета разницы в сечение исцеления сухожилий, нормализовать ОТС на единицу площади (N на квадратный миллиметр), которое представляет с механическим стрессом ткани.

5. гистологический анализ

Примечание: 15 сухожилий каждой группы прошли гистологический анализ.

  1. После его удаления, опускайте ахиллово сухожилие сразу в параформальдегида 4% для сохранения его структуры (1 мм ткани фиксируется в час, поэтому время фиксации варьируется в зависимости от размера сухожилие).
  2. Заменить параформальдегида на 70% этиловом спирте и оставить образец для по крайней мере одну ночь в этом решении.
  3. Место сухожилие маленький пластиковый контейнер с отверстиями и место этого контейнера в свежий раствор этанол 70% за 1 час.
  4. Место контейнера в 95% этаноле за 1 ч. повторить.
  5. Место в контейнер в 100% этанола за 1 ч. повторить.
  6. Место в контейнер в ксилоле 100% за 1 ч. повторить.
  7. Теперь поместите пластиковый контейнер, который содержит сухожилия, жидкий парафин (56 ° C) и оставить его на ночь.
  8. С помощью внедрения станции (оборудован расплавленный воск, плита и холодной пластины), выбрать металлический плесень, который лучше всего соответствует образца ткани и заполнить его с немного жидкий парафин, так что база покрыта.
    Примечание: Ориентироваться образца для получения вертикальных разрезов на микротома.
  9. Когда образец правильно, заполнить форму с жидкий парафин и поместить его на холодильной машины. Пусть ему остыть по крайней мере 15 минут.
  10. Удалите из блока парафина и поместите его на льду, по крайней мере 30 минут.
  11. Подготовить несколько слайдов чистого стекла и положить несколько капель деионизованной воды на них.
  12. В микротом вырезать блоков в разделах 5 мкм (только использовать разделы из средней части сухожилие) и раздел на слайде.
  13. Место слайды в Отопление печи при 65 ° C на несколько минут, так что парафин только начинает таять для склеивания тканей к стеклу.
  14. Место слайды, содержащие парафиновых срезах в держатель фрагмента.
  15. Теперь deparaffinize и увлажняет ткань, поместив его в следующих последовательных бани:
    8 мин в ксилоле (ванна 1)
    4 мин в ксилоле (баня 2)
    2 мин в 100% этанола
    2 мин в 95% спирте
    2 мин в 70% этанол
    2 мин в деионизированной воде
  16. Для окрашивания гематоксилином-эозином место ткани в следующих решений.
    1. Погружайте ткани на 8 минут в растворе гематоксилином (1 g гематоксилином моногидрата, 0,2 г Кио3, 50 г AIK (4т)2.12H2O; 200 мл глицерина; приспособиться к 1 Л дистиллированной водой).
    2. Погружайте ткани на 8 мин под струей водопроводной воды.
    3. Погружать ткани на 30 s в раствор эозина (0,25% эозина в 100 мл дистиллированной воды, содержащей 200 мкл неразбавленном уксусной кислоты).
    4. Погружайте ткани на 2 мин под струей водопроводной воды.
  17. Для Trichrome окрашивание Masson выполните следующие действия.
    1. После регидратации поместить эти разделы в контейнере с железа квасцов (0,5 г (NH4) Fe (4т)2.12H2O 10 мл H2O) и закройте контейнер. Прогреться 3 мин в 280 W в микроволновую печь.
    2. Пусть ему остыть на минуту и затем ополосните деионизированной водой.
    3. Место разделы в закрытом контейнере раствором Regaud в гематоксилином (0,5 г гематоксилином растворяют в 50 мл H2O при 50 ° C, затем добавить этанола 95% 5 мл и 5 мл глицерина), прогреться 90 s на 280 W.
    4. Ополосните деионизированной водой.
    5. Место разделы в раствора пикриновой кислоты (при насыщении в метаноле) для 3 мин, ополосните в течение 5 мин под проточной водой и затем поместите его в деионизированной воде в течение нескольких секунд.
    6. Теперь место разделы в кислоты фуксин (0,5 g в 50 мл H2O, содержащий 0,25 мл неразбавленного уксусной кислоты) для 5 s и промыть под проточной водой до тех пор, пока краска исчезает.
    7. Инкубировать в подразделах phosphomolybdic кислоты раствор (0,5 g в 50 мл H2O) за 5 мин, поместить его на несколько секунд в деионизированной воде.
    8. Поместить эти разделы в светло-зеленый (0,5 g в 50 мл H2O, содержащий 0,25 мл неразбавленного уксусной кислоты) решение для еще 5 мин и поместите его под проточной водой до тех пор, пока краска исчезает.
  18. Теперь снова обезвоживает ткани.
    1. Погрузитесь в разделе 1 мин в 70% этиловом спирте.
    2. Погрузитесь в разделе 1 мин в 95% этаноле.
    3. Погрузитесь в разделе 1 мин в 100% этанола.
    4. Погрузитесь в разделе 1 мин в ксилоле (ванна 1).
    5. Погрузитесь в разделе 1 мин в ксилоле (баня 2).
    6. Удалите разделы без удаления слишком много ксилол и капнуть каплю монтажа средних на образце.
    7. Сверху положить coverslip (без провоцирования любые пузыри) и пусть он затвердеть в течение не менее 2 ч.
    8. Гидролизуют 5 Гистологические срезы (каждый из разных сухожилия) каждой группы в 6 N HCl 3 часа и определить концентрацию коллагена, измеряя гидроксипролина как индекс в 5 мкм незапятнанное секций.
  19. Нормализовать результаты по области раздела с помощью производителя программного обеспечения.
  20. Выведение некоторых секций с свет зеленый краситель для визуализации и количественно фибриллярного коллагена компьютерного анализа.
  21. Сканировать разделы и конвертировать изображения в оттенках серого, с использованием программного обеспечения IrfanView. Использование программного обеспечения для полу количественной оценке (например, количество один).

6. молекулярные оценки

  1. После разрыва сухожилия, которая происходит во время механические испытания, брать пробы, оснастки заморозить их в жидком азоте и хранить их в-80 ° C (PRP и физиологический раствор)17.
  2. Используйте коммерческий набор всего РНК для изоляции всего РНК17.
  3. Оценить экспрессию коллагена (Col I и Col III), матрицы металлопротеиназ (ММП-2, ММП-3 и ММП-9) и tenomodulin (TNMD), ПЦР-17,18.
  4. Нормализовать выражение уровня мРНК до уровня 28S19.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Результаты выражаются как среднее ± стандартное отклонение от среднего значения и были по сравнению с дисперсионный анализ (ANOVA). Двусторонний ANOVA и пост Специального теста де Scheffé, который является параметрические испытания, были использованы.

Предел прочности на растяжение (UTS) требуется вызвать разрыв-ранения ахиллова сухожилия крыс было 42,0 ± 5.7 N (n = 10). Прочность на растяжение значительно увеличилось (...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Тромбоциты имеют важное значение для раннего воспалительной фазы сухожилия, процесс заживления. Когда эти тромбоцитов подвергаются обязательной ткани или факторы, которые вызывают коагуляции, они будут выпускать факторы роста, которые хранятся в α гранул. Вследствие этого взаимодействия внеклеточная матрица макромолекул, синтезированный и Мезенхимальные клетки размножаются. Тромбоциты также имеют эозинофилов действие на клетки-предшественники в циркуляции крови, повышение ангиогенеза и стимулирования клеточной дифференци...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Отсутствие конфликта интересов объявил.

Благодарности

Это исследование было поддержано стандартных де Льеж и Лежён - Lechien предоставляет Леон Frédéricq средств.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Ксилазин (Xyl-M)VMDбезанестетика
Кетамин (Jé tamine 1000 CEVA)CEVA Santé Animalбезанестетика
Бупренорфин (Vetergé sic Multidosis)ALSTOEnoneОбезболивающее
изо-бетадинMEDA-PharmanoneДезинфицирующая
резорбируемая пряжа Vicryl 6/0Johnson &
NembutalCEVA Santé АнималнетОбезболивающий
параформальдегидSigma-AldrichP6148Сохраняет структуру ткани
Изопропанол 100%VWR20,922,364
Этанол 95%VWR20,823,362
КсилолVWR28973.363
ПарафинVWRLEIC3950.1006
ГематоксилинМиллипор1.15938.0025Краситель
ЭозинМиллипор1.15935.0100Краситель
EukittSigma-Aldrich3989Монтажный средний
CaCl2
Johnson

Ссылки

  1. Kaux, J., Degrave, N., Crielaard, J. Platelet rich plasma traitement des tendinopathies chroniques? Revue de la littérature. Platelet rich plasma treatment of chronic tendinopathies? Review of literature. J. Traumatol. du Sport. 24, 99-102 (2007).
  2. Anitua, E., et al. Autologous preparations rich in growth factors promote proliferation and induce VEGF and HGF production by human tendon cells in culture. J. Orthop. Res. 23, 281-286 (2005).
  3. Bosch, G., et al. Effects of platelet-rich plasma on the quality of repair of mechanically induced core lesions in equine superficial digital flexor tendons: A placebo-controlled experimental study. J. Orthop. Res. 28, 211-217 (2010).
  4. Kaux, J. F., Drion, P., Croisier, J. L., Crielaard, J. M. Tendinopathies and platelet-rich plasma (PRP): From pre-clinical experiments to therapeutic use. J. Stem Cells Regen. Med. 11, P7-P17 (2015).
  5. Maffulli, N., Wong, J., Almekinders, L. C. Types and epidemiology of tendinopathy. Clin. Sports Med. 22, 675-692 (2003).
  6. Molloy, T., Wang, Y., Murrell, G. The roles of growth factors in tendon and ligament healing. Sports Med. 33, 381-394 (2003).
  7. Lyras, D. N., et al. The effect of platelet-rich plasma gel in the early phase of patellar tendon healing. Arch. Orthop. Trauma Surg. 129, 1577-1582 (2009).
  8. Aspenberg, P., Virchenko, O. Platelet concentrate injection improves Achilles tendon repair in rats. Acta Orthop. Scand. 75, 93-99 (2004).
  9. Visser, L. C., et al. Growth Factor-Rich Plasma Increases Tendon Cell Proliferation and Matrix Synthesis on a Synthetic Scaffold: An In Vitro Study. Tissue Eng. Part A. 16, 1021-1029 (2010).
  10. Zhang, J., Wang, J. H. -C. Platelet-Rich Plasma Releasate Promotes Differentiation of Tendon Stem Cells Into Active Tenocytes. Am. J. Sports Med. 38, 2477-2486 (2010).
  11. Kajikawa, Y., et al. Platelet-rich plasma enhances the initial mobilization of circulation-derived cells for tendon healing. J. Cell. Physiol. 215, 837-845 (2008).
  12. Pasternak, B., Aspenberg, P. Metalloproteinases and their inhibitors-diagnostic and therapeutic opportunities in orthopedics. Acta Orthop. 80, 693-703 (2009).
  13. Dell, R. B., Holleran, S., Ramakrishnan, R. Sample size determination. ILAR J. 43, 207-213 (2002).
  14. Mähler Convenor, M., et al. FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units. Lab. Anim. 48, 178-192 (2014).
  15. Kaux, J. -F., et al. Étude comparative de cinq techniques de préparation plaquettaire (platelet-rich plasma). Pathol. Biol. 59, 157-160 (2011).
  16. Wieloch, P., Buchmann, G., Roth, W., Rickert, M. A cryo-jaw designed for in vitro tensile testing of the healing Achilles tendons in rats. J. Biomech. 37, 1719-1722 (2004).
  17. Kaux, J. -F., et al. Vascular Endothelial Growth Factor-111 (VEGF-111) and tendon healing: preliminary results in a rat model of tendon injury. Muscles. Ligaments Tendons J. 4, 24-28 (2014).
  18. Docheva, D., Hunziker, E. B., Fässler, R., Brandau, O. Tenomodulin is necessary for tenocyte proliferation and tendon maturation. Mol. Cell. Biol. 25, 699-705 (2005).
  19. Lambert, C. A., Colige, A. C., Munaut, C., Lapière, C. M., Nusgens, B. V. Distinct pathways in the over-expression of matrix metalloproteinases in human fibroblasts by relaxation of mechanical tension. Matrix Biol. 20, 397-408 (2001).
  20. Nurden, A. T., Nurden, P., Sanchez, M., Andia, I., Anitua, E. Platelets and wound healing. Front. Biosci. 13, 3532-3548 (2008).
  21. Woodall, J., Tucci, M., Mishra, A., Benghuzzi, H. Cellular effects of platelet rich plasma: a study on HL-60 macrophage-like cells. Biomed. Sci. Instrum. 43, 266-271 (2007).
  22. Taylor, D. W., Petrera, M., Hendry, M., Theodoropoulos, J. S. A systematic review of the use of platelet-rich plasma in sports medicine as a new treatment for tendon and ligament injuries. Clin. J. Sport Med. 21, 344-352 (2011).
  23. Mazzocca, A. D., et al. The positive effects of different platelet-rich plasma methods on human muscle, bone, and tendon cells. Am. J. Sports Med. 40, 1742-1749 (2012).
  24. McCarrel, T. M., Minas, T., Fortier, L. A. Optimization of leukocyte concentration in platelet-rich plasma for the treatment of tendinopathy. J. Bone Joint Surg. Am. 94 (1-8), e143(2012).
  25. Boswell, S. G., et al. Increasing platelet concentrations in leukocyte-reduced platelet-rich plasma decrease collagen gene synthesis in tendons. Am. J. Sports Med. 42, 42-49 (2014).
  26. Virchenko, O., Aspenberg, P. How can one platelet injection after tendon injury lead to a stronger tendon after 4 weeks?: Interplay between early regeneration and mechanical stimulation. Acta Orthop. 77, 806-812 (2006).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

PRP

Похожие статьи