Методическая статья

Анализ макрофагов Microglia и Monocyte из центральной нервной системы методом проточной цитометрии

DOI:

10.3791/55781

⸱

22 июня 2017 г.

 ,  ,  , 
1Inserm U 1227, CNRS UMR 7225, 2Sorbonne Universités, UPMC, University of Paris, 3Institut du Cerveau et de la Moelle épinière, ICM, 4AP-HP, Hôpital de la Pitié Salpêtrière;

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол обеспечивает анализ субпопуляций макрофагов в центральной нервной системе взрослого человека с помощью проточной цитометрии и полезен для изучения множественных маркеров, экспрессируемых этими клетками.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Многочисленные исследования продемонстрировали роль иммунных клеток, в частности макрофагов, в патологиях центральной нервной системы (ЦНС). В ЦНС имеются две основные популяции макрофагов: (i) микроглия, которые являются резидентными макрофагами ЦНС и получены из предшественников желточного мешка во время эмбриогенеза, и (ii) макрофаги, полученные из моноцитов (MDM), которые могут проникать ЦНС во время болезни и происходят от предшественников костного мозга. Роли каждой субпопуляции макрофагов различаются в зависимости от исследуемой патологии. Кроме того, нет консенсуса относительно гистологических маркеров или отличительных критериев, используемых для этих субпопуляций макрофагов. Однако анализ профилей экспрессии маркеров CD11b и CD45 методом проточной цитометрии позволяет отличить микроглию (CD11b + CD45 med ) от MDM (CD11b + CD45 high ). В этом протоколе показано, что центрифугирование градиента плотностиИ анализ проточной цитометрии может быть использован для характеристики этих субпопуляций макрофагов ЦНС и изучения нескольких интересующих маркеров, выраженных этими клетками, как мы недавно опубликовали. Таким образом, этот метод может способствовать нашему пониманию роли макрофагов в мышиных моделях неврологических заболеваний и может также использоваться для оценки воздействия лекарств на эти клетки.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Микроглия представляют собой паренхиматозные резидентные макрофаги центральной нервной системы (ЦНС). Они играют две ключевые функциональные роли: иммунную защиту и поддержание гомеостаза ЦНС. В отличие от MDM, которые постоянно обновляются из гемопоэтических стволовых клеток в костном мозге, микроглиальные клетки дифференцируются от примитивных гемопоэтических клеток-предшественников, происходящих из желточного мешка (YS), которые колонизировали мозг во время эмбрионального развития 1 , 2 , 3 . У грызунов фактор транскрипции Myb играет решающую роль в развитии всех моноцитов и макрофагов, полученных из костного мозга, но для микроглии, полученной из YS, этот фактор невозможен и дифференциация остается зависимой от фактора транскрипции PU.1 4 .

В здоровой ЦНС микроглия являются динамическими клетками, которые постоянно пробовали окружающую среду, scaNning и съемки для инвазионных патогенов или повреждения тканей 5 . Обнаружение таких сигналов инициирует путь к разрешению травмы. Микроглия быстро переключается с разветвленной морфологии на амебоидную, за которой следуют фагоцитоз и высвобождение различных медиаторов, таких как про-или противовоспалительные цитокины. Таким образом, в зависимости от их микроокружения активированная микроглия может приобретать спектр различных состояний прайминга.

Микроглии глубоко влияют на развитие и прогрессирование многих неврологических расстройств. Показано, что в моделях грызунов болезни Альцгеймера (AD) 7 , амиотрофическом боковом склерозе (АЛС) 8 , рассеянном склерозе (РС) 9 или болезни Паркинсона (ПД) 10 микроглия играет двойную роль, либо индуцируя пагубную нейротоксичность, либо действуя В нейропротекторном режиме, который зависит отN конкретное заболевание, стадию заболевания и зависит ли заболевание от системного иммунного отделения 7 , 8 , 9 , 10 , 11 . Большинство поражений ЦНС, наблюдаемых при перечисленных выше заболеваниях, содержат гетерогенную популяцию миелоидных клеток, включая не только паренхиматозную микроглию, но также периваскулярные и менингиальные макрофаги, а также ЦНС, проникающие в МДМ. Эти типы клеток могут дифференциально вносить свой вклад в патофизиологические механизмы, связанные с травмой и восстановлением 7 , 12 , 13 , 14 , 15 . Нынешняя задача исследователей, изучающих эти модели болезней, заключается в том, чтобы установить, проникают ли периферические моноциты и макрофаги в ЦНС, и если да,Пахать резидентную микроглию из этих клеток. Действительно, микроглиальные клетки очень пластичны; Когда они активируются, микроглии повторно выражают маркеры, которые обычно экспрессируются периферическими моноцитами и макрофагами. Поэтому проблема связана с идентификационными маркерами, которые могут отличать резидентную микроглию от инфильтрирующих моноцитов и макрофагов.

Различение этих популяций на срезах мозга с помощью иммуногистологических применений ограничено из-за отсутствия специфических антител. Однако проточный цитометрический анализ является эффективным методом оценки экспрессии нескольких маркеров и различения клеточных популяций (например, лимфоцитов, макрофагов / MDM CD11b + CD45 и микроглии CD11b + CD45 med ), а также субпопуляций клеток 16 , 17 , 18 . В этом протоколе описаны процедуры выделенияМононуклеарных клеток из ЦНС у мышей в моделях неврологических заболеваний с использованием оптимизированной диссиации ферментативной ткани и центрифугирования градиента плотности; А также способ дифференциации популяций микроглии и МДМ в ЦНС с использованием проточной цитометрии.

Другой подход заключается в том, чтобы устранить миелин и очистить клетки с помощью магнитных гранул, конъюгированных с конкретными антителами 19 , 20 , 21 . Удаление миелина с использованием антимиелиновых магнитных шариков является более дорогостоящим и влияет на жизнеспособность и выход изолированных клеток 22 . Эта стадия и следующее иммуномагнитное разделение микроглии ограничивают дальнейшие исследования конкретных популяций иммунных клеток 21 , 22 .

Эти процедуры обеспечивают простой способ изучения субпопуляций макрофагов при развитии болезней иДля определения эффектов лекарственного средства или модификаций генов на фенотипах макрофагов и состояниях активации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все методы, описанные здесь, были одобрены Комитетом по институциональному уходу и использованию животных в Институте ICM и Дарвинским французским комитетом по этике животных и охватываются протоколом 01407.02.

1. Подготовка

  1. Подготовьте коктейль для пищеварения в пробирке объемом 1,5 мл, объединив для каждой мыши следующее: 1 мл фосфатного буферного солевого раствора (PBS); 123 мкл фермента пищеварения (см. Таблицу материалов) при 13 мкг / мл (исходный раствор), конечная концентрация 1,6 Вт / мл; И 5 мкл ДНКазы I (см. Таблицу материалов) при 100 мг / мл (исходный раствор), конечная концентрация 0,5 мг / мл.

2. Перфузия и рассечение

  1. Усыплять мышей смертельной дозой пентобарбитала (100 мкл при 400 мг / мл).
  2. Поместите животное в положение на спине и намочите тело 70% этанолом.
  3. Разрежьте брюшную кожу тонкими ножницами чуть ниже ксифоидного процесса, чтобы обнажить грудную кавитуу.
  4. Сделайте разрез в диафрагме и разрежьте боковые стороны грудной клетки с помощью тонких ножниц на каудальном ростральном направлении, чтобы выставить сердце (и не обрезать другие органы). Определите левый желудочек (LV) и правый атриум (RA).
  5. Вставьте катетер бабочки с иглой 25 G внутри LV. Сделайте разрез на RA с помощью тонких ножниц и в начале кровотока, начните перфузию со скоростью 10 мл / мин через LV с 20 мл PBS для удаления клеток и крови из сосудов; Успешная перфузия отмечена бланшированием легких и печени при смещении крови.
  6. Обезглавить животное средними ножницами. Рассекайте позвоночник с помощью тонких ножниц и отделите его от тела, вырезая мускулатуру брюшной стенки на вентральной стороне позвоночника и разрезая позвоночную колонку у основания хвоста.
  7. Вставьте 10 мл шприц, содержащий PBS, и установленный 200 мкл наконечник пипетки в поясничную сторонуПозвоночника и смыть спинной мозг со стороны шейки матки.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Наконечник пипетки 200 мкл разрезают ножницами на самом широком конце (приблизительно 1 см) и плотно вставляют в 10 мл шприц, предварительно заполненный PBS.
  8. Удалите кожу над черепом и используйте щипцы, чтобы обнажить мозг. Вставьте ножницу в основание черепа и разрежьте череп после сагиттального шва. Вставьте маленькие щипцы в разрез и осторожно поднимите череп. Превратите мозг из головы мыши и удалите обонятельную луковицу и мозжечок.
  9. Соберите мозг и спинной мозг в 1,5 мл пробирке, содержащей 1,128 мл PBS с пищеварительным коктейлем (с шага 1.1).

3. Диссоциация клеток

  1. Мелко разрезать мозг и спинной мозг в пробирке 1,5 мл (шаг 2.9) на 1-2 мм 3 шт. С маленькими ножницами ( рис. 1 ).
  2. Инкубируйте 1,5 мл пробирку, содержащую измельченные ткани, в течение 30 мин в инкубатореПри 37 ° С с 5% CO 2 .
    ПРИМЕЧАНИЕ. Подготовьте градиент плотности на этом этапе.
  3. Добавьте 20 мкл 0,5 М ЭДТА (исходный раствор), конечная концентрация 10 мМ, в пробирку объемом 1,5 мл, чтобы остановить ферментативную реакцию.
  4. Аккуратно сделайте клеточную суспензию пипетированием вверх и вниз с помощью пипетки объемом 5 мл.
  5. Пропустите клеточную суспензию через нейлоновую сетку (размер пор 70 мкм) в трубке объемом 50 мл, используя плунжер из 10 мл шприца.
  6. Промыть нейлоновой сеткой 20 мл 5% фетальной бычьей сыворотки (FBS) -PBS.
  7. Центрифугируют в течение 7 мин (300 xg) при комнатной температуре (18 ° C). Отбросьте супернатант путем аспирации и перейдите к следующему шагу. Будьте предельно осторожны при удалении надосадочной жидкости; Не мешайте таблетке, которую можно легко отсасывать с помощью аспирационной пипетки.

4. Градиент плотности

  1. Подготовьте исходный раствор среды градиента плотности, добавив соответствующее количество 10х PBS к среде градиента плотности.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Добавьте одну часть 10X PBS к девяти частям градиента плотности.
  2. Разбавьте среду градиента плотности запаса с 1x PBS для разных процентных значений, как описано в таблице 1 .
  3. Ресуспендируют гранулу (с шага 3.7) с 4 мл 30% -ной плотности градиентной среды и переносят в пробирку объемом 15 мл.
  4. Поместите пипетку Пастера в нижнюю часть 15-миллилитровой трубки и медленно подложите 4 мл 37% -ной плотности градиентной среды.
  5. Добавить 4 мл 70% -ной плотности градиентной среды, как описано выше.
  6. Центрифугируют градиент в течение 40 минут (800 xg) при комнатной температуре (18 ° C). Убедитесь, что центрифуга останавливается с минимальным или отсутствующим торможением, так что интерфаза не нарушена.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Трубка будет выглядеть стратифицированной. Клетки, слоистые на границе градиента плотности 70% - 37%, представляют собой мононуклеарные иммунные клетки (подгруппы микроглии и макрофагов); Верхние уровни - это клеточный дебрис и миелин, соответственно ( рис. 2 ).
  7. Используя переносную пипетку, аккуратно удалите слой миелина.
  8. Соберите 3-4 мл 70-37% -ной градиентной градиентной плотности, содержащей клетки субпопуляций макрофагов, в чистую пробирку объемом 15 мл.
  9. Промыть клетки 3 раза с помощью PBS, общий объем 15 мл. Удостоверьтесь, что среда с градиентом плотности, содержащая клетки, разбавляется по меньшей мере три раза PBS и центрифугируется в течение 7 минут (500 xg, 4 ° C) при включенном торможении.
  10. Ресуспендируют клеточный осадок с 1 мл PBS для клеточной маркировки или для других функциональных анализов.

5. Маркировка клеток для проточной цитометрии

  1. Перенесите клетки (этап 4.10) в проточную цитометрию.
  2. Добавьте 1 мкл фиксируемого реагента для окрашивания мертвых клеток к каждому образцу ячейки, полученному на этапе 4.10. Инкубируйте в течение 30 мин на льду, защищенном от света.
  3. Промывают клетки один раз 2 мл PBS и центрифугируют в течение 5 минут (300 xg, 4 ° C).
  4. Удаляют супернатант и ресуспендируют клеточный осадок с400 мкл PBS 1% BSA, 0,1% азида.
  5. Добавьте 1 мкг CD16 / CD32 антител к 100 мкл клеток, чтобы блокировать Fc-рецепторы. Инкубируйте 10-15 мин на льду, защищенный от света.
  6. Подготовьте смесь первичных антител в PBS 1% BSA, 0,1% азида или PBS 1% BSA, 0,1% азида, 0,25% сапонина, для клеточной пермеабилизации для внутриклеточного окрашивания.
  7. Добавьте 100 мкл первичных антител (2x) и инкубируйте в течение 30 мин на льду, защищенных от света.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Все антитела должны быть титрованы до проведения эксперимента для обеспечения оптимальных результатов.
  8. Промывают клетки 2 мл PBS и центрифугируют в течение 5 минут (300 xg, 4 ° C). Повторите этот шаг три раза.
  9. Добавьте 100 мкл вторичного антитела, если первичные антитела непосредственно не конъюгированы с флуорофором и инкубируют в течение 30 мин на льду, защищенные от света.
  10. Промывают клетки 2 мл PBS и центрифугируют в течение 5 мин при 300 × g при 4 ° C). Повторите этот шаг три раза.
  11. ИсправьтеКлетки с 100 мкл 1% PFA в течение 15 мин при комнатной температуре, защищенные от света.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Предупреждение: PFA токсичен. Используйте в вытяжном шкафу и надевайте средства индивидуальной защиты.
  12. Промывают клетки 2 мл PBS и центрифугируют в течение 5 мин при 300 × g при 4 ° C. Повторите этот шаг три раза.
  13. Ресуспендируют клеточный осадок с помощью 200 мкл PBS и приступают к приобретению и анализу проточной цитометрии. Следуйте стратегии стробирования на рисунке 3 .

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

После центрифугирования градиента плотности и окрашивания антител клетки были получены на проточном цитометре и проанализированы с использованием стратегии морфологического стробирования следующим образом. Первый затвор был определен в области прямой развертки (FSC-A) с точечной графикой по сравнению с форвардной-рассеянной-высотой (FSC-H), чтобы различать отдельные ячейки из дублетов ( рисунок 3A ). Затем одиночные клетки были закрыты на у...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Было продемонстрировано, что микроглия и МДМ имеют различные функции и фенотипы в ЦНС, и поэтому идентификация и анализ этих субпопуляций макрофагов необходимы для лучшего понимания неврологических заболеваний 9 , 18 , 25 . Анализ проточной цитометрии с использованием двух маркеров (CD11b и CD45) позволяет проводить различие между каждой субпопуляцией ( рис. 3C ). Ранее эта стратегия была проверена...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана грантами от Agence Nationale pour la Recherche (ANR-12-MALZ-0003-02-P2X7RAD), Ассоциации France Alzheimer и Bpifrance. Наша лаборатория также поддерживается Inserm, CNRS, Université Pierre et Marie-Curie и программой «Investissements d'avenir» ANR-10-IAIHU-06 (IHU-A-ICM). Мы хотели бы поблагодарить помощь основного объекта культуры CELIS.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
5-месячные мышиJanvierC57BL/6J
Liberase TL Research GradeSigma-Aldrich5401020001фермент пищеварения
Deoxyribonuclease I из поджелудочной железы крупного рогатого скотаSigma-AldrichDN25
PercollGE Healthcare Life Sciences17-0891-01Градиент плотности средний
Cell Strainer размер 70 &микро; m НейлонCorning731751
Venofix 25 гBRAUN4056370
поршневой шприц 10 млTerumoSS+10ES1
Пастеровская пипетка 230 ммDustcher20420
1,5 мл тубаEppendorf0030 123,328
15 мл тубаTPP91015
50 мл тубаTPP91050
5 мл полистирольная круглая донная трубкаBD Falcon352054
D-PBS (1x) без Ca2+/Mg2+Thermo Fisher Scientific14190-094
D-PBS (10x) без Ca2+/Mg2+Thermo Fisher Scientific14200-067
Фетальная бычья сывороткаThermo Fisher Scientific10270-106
EDTASigma-AldrichE4884
Сывороточный раствор альбумина крупного рогатого скота 30%Sigma-AldrichA7284
Параформальдегид 32% растворЭлектронная микроскопияНауки 15714-SОсторожно -токсичный
сапонинSigma-AldrichS2002
Азид натрияSigma-Aldrich47036
PerCPCy5.5 Крыса антимышиный CD11b (клон M1/70)eBioscience45-0112
Крыса IgG2b K Контроль изотипа PerCP-Cyanine5.5eBioscience45-4031
BV421 Крыса антимышиный CD45 (клон 30-F11)BD Biosciences563890
BV421 Крыса IgG2b, κ Контроль изотипа RUOBD Biosciences562603
Rabbit anti-mouse TMEM119 (clone28 - 3)Abcamab209064
AlexaFluor 647 Donkey anti-rabbit IgGLife TechnologiesA31573
Anti-Mouse CD16/CD32 PurifiedeBioscience14-0161Mouse Fc Block
Fixable Dead Cell Stain Kit Наборы для окрашивания мертвых клетокInvitrogenL34969
Мышь CCR2 APC-конъюгированное антителоR& DFAB5538A
Rat IgG2B APC-конъюгированный контроль изотипаR& DIC013A
Мышь CX3CR1 PE-конъюгированное антителоR& DFAB5825P
козьи IgG PE-конъюгированные антителаR& DIC108P
ЦентрифугаEppendorf5804R
Клеточный анализаторBD BiosciencesBD FACSVERSE
Программное обеспечение для анализа данныхFlowJo LLCFlowJo
Тонкие ножницыF.S.T14090-11
Стандартные щипцыF.S.T11000-13
Ножницы МайоF.S.T14010-15
Пинцы Dumont #5F.S.T11251-20

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ginhoux, F., et al. Fate mapping analysis reveals that adult microglia derive from primitive macrophages. Science. 330 (6005), 841-845 (2010).
  2. Ginhoux, F., Lim, S., Hoeffel, G., Low, D., Huber, T. Origin and differentiation of microglia. Front Cell Neurosci. 7, 45(2013).
  3. Ginhoux, F., Jung, S. Monocytes and macrophages: developmental pathways and tissue homeostasis. Nat Rev Immunol. 14 (6), 392-404 (2014).
  4. Schulz, C., et al. A lineage of myeloid cells independent of Myb and hematopoietic stem cells. Science. 336 (6077), 86-90 (2012).
  5. London, A., Cohen, M., Schwartz, M. Microglia and monocyte-derived macrophages: functionally distinct populations that act in concert in CNS plasticity and repair. Front Cell Neurosci. 7, 34(2013).
  6. Miron, V. E., Franklin, R. J. Macrophages and CNS remyelination. J Neurochem. 130 (2), 165-171 (2014).
  7. Mildner, A., et al. Distinct and non-redundant roles of microglia and myeloid subsets in mouse models of Alzheimer's disease. J Neurosci. 31 (31), 11159-11171 (2011).
  8. Boillee, S., et al. Onset and progression in inherited ALS determined by motor neurons and microglia. Science. 312 (5778), 1389-1392 (2006).
  9. Yamasaki, R., et al. Differential roles of microglia and monocytes in the inflamed central nervous system. J Exp Med. 211 (8), 1533-1549 (2014).
  10. Wu, D. C., et al. Blockade of microglial activation is neuroprotective in the 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine mouse model of Parkinson disease. J Neurosci. 22 (5), 1763-1771 (2002).
  11. Cartier, N., Lewis, C. A., Zhang, R., Rossi, F. M. The role of microglia in human disease: therapeutic tool or target? Acta Neuropathol. 128 (3), 363-380 (2014).
  12. Ajami, B., Bennett, J. L., Krieger, C., McNagny, K. M., Rossi, F. M. Infiltrating monocytes trigger EAE progression, but do not contribute to the resident microglia pool. Nat Neurosci. 14 (9), 1142-1149 (2011).
  13. Funk, N., et al. Characterization of peripheral hematopoietic stem cells and monocytes in Parkinson's disease. Mov Disord. 28 (3), 392-395 (2013).
  14. Butovsky, O., et al. Modulating inflammatory monocytes with a unique microRNA gene signature ameliorates murine ALS. J Clin Invest. 122 (9), 3063-3087 (2012).
  15. Lewis, C. A., Solomon, J. N., Rossi, F. M., Krieger, C. Bone marrow-derived cells in the central nervous system of a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis are associated with blood vessels and express CX(3)CR1. Glia. 57 (13), 1410-1419 (2009).
  16. Sedgwick, J. D., et al. Isolation and direct characterization of resident microglial cells from the normal and inflamed central nervous system. Proc Natl Acad Sci U S A. 88 (16), 7438-7442 (1991).
  17. Ford, A. L., Goodsall, A. L., Hickey, W. F., Sedgwick, J. D. Normal adult ramified microglia separated from other central nervous system macrophages by flow cytometric sorting. Phenotypic differences defined and direct ex vivo antigen presentation to myelin basic protein-reactive CD4+ T cells compared. J Immunol. 154 (9), 4309-4321 (1995).
  18. Martin, E., Boucher, C., Fontaine, B., Delarasse, C. Distinct inflammatory phenotypes of microglia and monocyte-derived macrophages in Alzheimer's disease models: effects of aging and amyloid pathology. Aging Cell. , (2016).
  19. Bennett, M. L., et al. New tools for studying microglia in the mouse and human CNS. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (12), E1738-E1746 (2016).
  20. Jin, L. W., et al. Dysregulation of glutamine transporter SNAT1 in Rett syndrome microglia: a mechanism for mitochondrial dysfunction and neurotoxicity. J Neurosci. 35 (6), 2516-2529 (2015).
  21. Bedi, S. S., Smith, P., Hetz, R. A., Xue, H., Cox, C. S. Immunomagnetic enrichment and flow cytometric characterization of mouse microglia. J Neurosci Methods. 219 (1), 176-182 (2013).
  22. Nikodemova, M., Watters, J. J. Efficient isolation of live microglia with preserved phenotypes from adult mouse brain. J Neuroinflammation. 9, 147(2012).
  23. Mizutani, M., et al. The fractalkine receptor but not CCR2 is present on microglia from embryonic development throughout adulthood. J Immunol. 188 (1), 29-36 (2012).
  24. Lecoeur, H., Ledru, E., Gougeon, M. L. A cytofluorometric method for the simultaneous detection of both intracellular and surface antigens of apoptotic peripheral lymphocytes. J Immunol Methods. 217 (1-2), 11-26 (1998).
  25. Richter, N., et al. Glioma-associated microglia and macrophages/monocytes display distinct electrophysiological properties and do not communicate via gap junctions. Neurosci Lett. 583, 130-135 (2014).
  26. Mahad, D., et al. Modulating CCR2 and CCL2 at the blood-brain barrier: relevance for multiple sclerosis pathogenesis. Brain. 129 (Pt 1), 212-223 (2006).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

CD11b CD45

Похожие статьи