Методическая статья

Сверхвысоких резолюции мышь оптическая когерентная томография помощи внутриглазных инъекций в исследованиях сетчатки генной терапии

DOI:

10.3791/55894

⸱

2 ноября 2018 г.

 , 
1Research Service, VA Western New York Healthcare System, 2Department of Ophthalmology, (Ross Eye Institute), Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, University at Buffalo- SUNY, 3Pharmacology/Toxicology, Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, University at Buffalo- SUNY, 4Physiology/Biophysics, Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, University at Buffalo- SUNY, 5Neuroscience Program, Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, University at Buffalo- SUNY, 6The RNA Institute, University at Buffalo- SUNY, 7The SUNY Eye Institute

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы продемонстрировать новаторский подход к использованию высокого разрешения спектральной области оптическая когерентная томография (HR-SD-Окт) для содействия доставке генной терапии агентов в пространство субретинальное, оценить его ареал освещение и характеризуют фоторецепторных жизнеспособность.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

HR-SD-OCT используется для контролировать прогрессирование фоторецепторных дегенерации в прямом мыши модели, оценить доставки терапевтических агентов в субретинальное пространство и для оценки токсичности и эффективность в естественных условиях. HR-SD-Окт использует около инфракрасного света (800-880 Нм) и имеет оптику специально разработан для уникальных оптики глаза мыши с суб-2-микрон осевой резолюции. Трансгенные мыши модели внешних сетчатки (фоторецепторных) вырождение и контроля были образы оценить прогрессирования заболевания. Вытащил стеклянной микроиглы были использованы для доставки суб сетчатки инъекции аденоассоциированный вирус (AAV) или наночастиц (NP) через транс склеры и транс хориоидеи подход. Тщательно позиционировать кончик иглы в пространство субретинальное требовалось до калиброванный инъекция, которая поставляет жидкость в суб сетчатки пространство. Реальном времени субретинальное хирургии было проведено на нашей сетчатки системы (RIS). HR-SD-Окт продемонстрировал прогрессивного единообразных дегенерации сетчатки вследствие выражение токсичных мутант человека мутантов родопсина (P347S) (РоP347S) трансген мышей. HR-SD-OCT позволяет строгой количественной оценки всех слоев сетчатки. Наружный слой ядерной (ONL) толщина и фоторецепторных измерения длины (OSL) наружный сегмент коррелируют с фоторецепторных жизнеспособность, дегенерация или спасения. Система доставки RIS позволяет в реальном времени визуализации субретинальное инъекции в неонатальной (~ P10-14) или взрослых мышей, HR-SD-Окт немедленно определяет успех доставки и карты и ареал степени. HR-SD-Окт является мощным инструментом, который можно оценить успех субретинальное хирургии в мышей, в дополнение к оценке жизнеспособности фоторецепторов в естественных условиях. HR-SD-Сен также может использоваться для определения единообразных животных когорты для оценки степени дегенерация сетчатки, токсичности и терапевтические спасения в доклинических гена терапии научных исследований.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Исследователи разрабатывают генной терапии для различных дегенеративных заболеваний сетчатки и сетчатки с надежды перевода Роман терапии в лечение для болезней человека1,2,3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. время домена или спектральной области оптическая когерентная томография (SD-Окт) был использова....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Животных протоколы были рассмотрены и одобрены институциональный уход животных и использование комитетами HCS ва площадей и университете Буффало-SUNY. Животные были использованы согласно положениям ассоциации исследований в зрения и офтальмологии (Арво) и Хельсинкской декларации.

1. мышь модели

  1. Определение модели мыши должны оцениваться в том числе элементов управления.
    Примечание: Визуализация была выполнена для C57BL/6(J), Нс1/Нс1/МВт/МВт, гомозиготных для человека мутантов РоP347S Нс1 аллелей на одичал типа (WT) модель дегенерации сетчатки частично гуманизированные мыши мыши Ро

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Оценка присутствия, скорость и единообразия модель внешнего дегенерации сетчатки
Измерения ONL были записаны от ОБН в ELM, определение границ ONL, с помощью средства суппорта в инструмент программного обеспечения. Цель заключалась в карте прогрессирование внешних дегенерации сетчатки в мышиной модели частично гуманизированные adRP. Сопоставимых изображения от управления C57BL/6(J) Мышь и Нс1/Нс1/МВт/модель мыши МВт, выражая двух копий генов опсин (РоP347S.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

HR-SD-OCT предоставляет простой метод для определения характеристик потенциальных животных моделей болезней человека, чтобы определить их полезность в тестировании потенциальные терапии. Способность быстро и надежно характеризуют потенциальной модели животных болезней человека имеет решающее значение для процесса терапевтических лекарственных препаратов (например, замена генной терапии, рибозим или индуцируемый нокдаун генной терапии, комбинированных генной терапии). HR-SD-OCT предоставляет простой, быстрый и не.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Коммерческие отношения: MCB: нет; JMS: нет. Сетчатки, визуализации системы (RIS)23 , используемые в данном исследовании — Роман устройство существенного использования какой-либо группе, желающих проводить исследования доставки терапии гена в мышей, грызунов и мелких животных. Хотя авторы имеют конфликты не объявить что касается это устройство в данный момент, университет в Буффало - SUNY и ветеранов администрации имеют права интеллектуальной собственности и могут стремиться к коммерциализации этого инструмента в будущем.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот материал основан на работе, в частности, поддерживается Департаментом по делам ветеранов (VA), ветеранов здравоохранения администрации, управления исследований и развития (биомедицинские лаборатории исследования и развития) (Грант заслуги ва 1I01BX000669). JMS используется, в частности, как врач-научный сотрудник, офтальмологии, ва площадей; MCB используется, в частности, ва площадей. Исследование было проведено на и частично поддерживается система здравоохранения ветеранов администрации Западной Нью-Йорка (Буффало, Нью-Йорк). Содержание не отражает мнения Департамента по делам ветеранов или правительства Соединенных Штатов. Также поддерживается, в основную часть....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
C57BL6 (J)Jackson Laboratories664
N129R-N/AN/A
2HRho 1T/1TN/AN/A
Envisu R-2200 Прибор для когерентной глазной томографии (ОКТ)Bioptigen90-R2200-U1-120.   
Система визуализации сетчатки глаза (РИС)СобственныйН/Д
Микроскоп Stemi 2000CZeiss000000-1106-133
P-97 Пылающий/коричневый пуллер микропипетокSutter Instrument Cop-97
MMN-33 микроманипулятор Narishige СШАMMN-33
PLI-100  микроинъекторHarvard Apparatus64-1736
Держатель микропипеток (вращающийся)Собственныйн/д
Емкость для хранения микропипетокWorld Precision Instruments Inc.E210
  Капиллярные трубки из боросиликатного стекла 1,5-1,8 Х 100 мм;Гарвардский аппарат30-0053
2,2,2-трибромэтанолSIGMA AldrichT48402-25G
Трет-амиловый спиртSIGMA Aldrich240486-100ML
Офтальмологический раствор сульфата атропина, USP 1%Akorn Inc.NDC 17478-215-05
GonioviscBioVision LimitedNDC 17238-610-15
Циклопентолата гидрохлорид офтальмологический раствор, USP  2%Akorn Inc.NDC 17478-097-10
Мазь сульфата гентамицина USP, 0,1%PerigoNDC 45802-046-35
Systane UltraAlcon Laboratories, Inc.9006619-1013
Тетракаина гидрохлоридBausch and LombNDC 24208-920-64
Офтальмологический раствор, USP 0,5%Bausch and LombNDC 24208-920-64
DPBSGibco Life Technologies14190-136
Вирусные препаратыViGene /UNCN/A
Gold nanorodsNANOPARTzD12M-850-1.75
Флуоресцеин сульфат АК-ФТОР 25%Akorn Inc.NDC 17478-250-20
Покровные стеклаFisher Scientific12-548-A
ЩипцыMilton18-825
Иглы 30 калибраBeckton Dickenson   W11604
ШприцыBeckton Dickenson   
Пакет программного обеспечения BioptigenN/A
Пропаракаина гидрохлорид офтальмологический раствор, USP 0.5%Akorn Inc.NDC 17478-263-12
Windows ExcelMicrosoftN/A
Adobe IllustratorAdobe 
ВесыMettler
НожницыWorld Precision Instruments
Ear PunchNat' l лента
CL 100 Источник светаWelch AllynCL100
Газообразный азотJackson Сварочный источникН/Д
Водяная баня с подогревомNeslabRTE-140
Нагревательная плитаВ домеН/Д
Нагревательный коврикCincinnatti Sub Zero273
Глиняный держатель для мышиPlast.i.clay Американская компания «Арт Клэй»Н/Д
БетадинМедЛайнNDC53329-938-06
Аппликаторы с ватным наконечникомАмериканская служба здравоохраненияCtag
EtOH 70%Fisher ScientificBP2818-100
Перчатки нитрилVWR89038-272
Diagnosys ERG Color Dome инструментDiagnosys Inc.Контактные линзы D125
Собственное
программное обеспечение для диагностикиDiagnosys Inc.Н/Д
Origin 6.1 программное обеспечениеOriginLab Corp.Н/Д
Электроды сравненияOcuscienceF-резьбовый электрод (DTL) 24"
309659

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Regus-Leidig, H., et al. In-vivo knockdown of Piccolino disrupts presynaptic ribbon morphology in mouse photoreceptor synapses. Front Cell Neurosci. 8 (259), 1-13 (2014).
  2. Jiang, L., Frederick, J. M., Baehr, W.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи