Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Индукция и диагностика опухолей в

15.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55901

⸱

25 июля 2017 г.

 , 
1Structural Biology Center, National Institute of Genetics and Department of Genetics, School of Life Science, SOKENDAI, 2Graduate School of Media and Governance, Keio University

В этой статье

Краткое содержание

Анализ мозаичного клона в эпителии дрозофилы имагинального диска представляет собой мощную модельную систему для изучения генетических и клеточных механизмов опухолевого генеза. Здесь мы описываем протокол для индуцирования опухолей на дислоцированных крыльях Drosophila с использованием системы GAL4-UAS и вводим метод диагностики для классификации фенотипов опухолей.

Аннотация

На ранних стадиях рака трансформированные мутантные клетки проявляют цитологические аномалии, начинают неконтролируемое разрастание и постепенно нарушают организацию тканей. Drosophila melanogaster стала популярной экспериментальной модельной системой в области биологии рака для изучения генетических и клеточных механизмов опухолевого генеза. В частности, генетические инструменты для дискретных дисков Drosophila (развитие эпителия у личинок) позволяют создавать трансформированные опухолевые клетки в нормальной эпителиальной ткани, что аналогично начальным стадиям рака человека. Однако недавнее исследование опухолеобразования на крысиных имагинальных дисках дрозофилы показало, что инициирование опухоли зависит от внутренней цитоархитектуры ткани и местного микроокружения, что свидетельствует о том, что важно учитывать специфичность региона к опухолегенным стимулам при оценке фенотипов опухолей в имагинальных диски. Чтобы облегчить фенотипический анализ прогрессирования опухолиНа имагинальных дисках, здесь мы описываем протокол для генетических экспериментов с использованием системы GAL4-UAS для индукции неопластических опухолей в крыловых образных дисках. Далее мы вводим метод диагностики для классификации фенотипов клональных поражений, индуцированных в имагинальном эпителии, поскольку четкий метод классификации для различения различных этапов прогрессирования опухоли (таких как гиперплазия, дисплазия или неоплазия) ранее не описывался. Эти методы могут быть широко применимы к клональному анализу фенотипов опухолей в различных органах у Drosophila .

Введение

Эпителиальные ткани представляют собой высокоорганизованные системы, которые обладают замечательной гомеостатической способностью поддерживать свою организацию посредством развития и клеточного оборота. Однако эта устойчивая система самоорганизации постепенно разрушается при развитии опухоли. В начале развития опухоли в эпителиальном слое появляются отдельные мутантные клетки, связанные с активацией онкогена или инактивацией гена опухолевых супрессоров. Когда это преобразованная «клетка про опухоль» уклоняется подавляющей среда, разрушает эпителиальные организации, и начинается бесконтрольное распространение, канцерогенез происходит 1. В течение последних нескольких десятилетий выдающиеся технологические достижения в области генетики и молекулярной биологии достигли значительных успехов в области исследований рака. В частности, недавние исследования с использованием инструментов генетического мозаичного анализа у Drosophila melanogaster , таких как митотический рекомбинат миотического рекомбината FLP-FRT (филипса рекомбиназа / флупаза рекомбиназа)Ation 2 и flip-out-GAL4-UAS (восходящая активирующая последовательность) 3 значительно способствовали лучшему пониманию генетических механизмов, участвующих в образовании и метастазировании опухолей 4 , 5 , 6 .

Исследования группы консервативных генов опухолевых супрессоров дрозофилы, летальные гигантские личинки (ЖС), диски большой (DLG), и каракуль (Scrib), подчеркнули критическую зависимость между потерей эпителиальной организации и развитием опухолей, так как эти гены играют ключевую роль В регуляции апикально-базальной клеточной полярности и пролиферации клеток в эпителиальных тканях 7 . В то время как Drosophila имагинальные диски обычно представляют собой монолитированный эпителий, гомозиготные мутации в любом из этих трех генов заставляют клетки терять структуру и полярность, не могут различатьсяrentiate, overproliferate, и в конечном счете образуют многослойные аморфные массы , которые сливаются с окружающими тканями 7. Аналогичным образом, разрушение этих генов у млекопитающих связано с развитием злокачественных опухолей 8 , 9 . Неопластические фенотипы, проявляемые мутантными тканями, привели к классификации этих трех генов в качестве консервативных неопластических опухоле-супрессорных генов (nTSG) 7 , 8 . Однако, когда гомозиготные мутантные клетки nTSG спорадически генерируются при развитии имагинальных дисков дикого типа с использованием митотической рекомбинации, опосредованной FLP-FRT, мутантные клетки удаляются из ткани через c-Jun N-концевую киназу (JNK) -зависимый апоптоз 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , экструзия 15 , 16 , или поглощение и фагоцитоз соседей 17 . В этой генетически мозаичной эпителии апоптоз чаще всего обнаруживается в мутантных клетках nTSG, расположенных на границе клона, что указывает на то, что соседние нормальные клетки вызывают апоптоз мутантных клеток nTSG 10 , 11 , 12 , 18 . Недавние исследования в клетках млекопитающих подтвердили, что эта клеточная конкурентная элиминация проопухолевых клеток является эволюционно консервативным механизмом самозащиты эпителия против рака 19 , 20 , 21 , 22 , 23 .

Однако недавнее исследование в дислоцированных дисках Drosophila показало, что мозаичные клоны nTSG-нокдауна индуцируют опухолевые опухоли в специфическихIC областей крыла имагинальных дисков 16 . Первоначальная опухолевая формация всегда находилась в периферической области «шарнира» и никогда не наблюдалась в центральной области «мешочка» эпителия диска крыла, что указывает на то, что опухолегенный потенциал nTSG-нокдаун-клеток зависит от местной среды. Центральная область мешочка функционирует как «опухолевая холодность», где проопухолевые клетки не проявляют диспластического роста, тогда как периферическая область шарнира ведет себя как «горячая точка опухоли» 16 . В областях «холодного пятна» клетки nTSG-нокдауна расслаиваются с базальной стороны и подвергаются апоптозу. Напротив, поскольку ячейки шарнира «горячей точки» обладают сетью устойчивых цитоскелетных структур на их базальных сторонах, клетки с нокаутом nTSG расслаиваются с апикальной стороны эпителия и инициируют опухолегенный переросток 16 . Поэтому анализ фенотипов опухолей в имагинальных дисках требует тщательного анализаДеградации специфичной для региона восприимчивости к опухолегенным стимулам.

Здесь мы описываем протокол, который индуцирует образование неопластических опухолей в римановых дисках крыс Drosophila с использованием системы GAL4-UAS- RNAi , посредством которой клетки с нокаутом nTSG генерируются в нормальном эпителии диска крыла. Хотя эти экспериментальные системы полезны для изучения ранних стадий рака, четкий классификационный метод для оценки этапов прогрессирования опухоли в эпителии эпиданов эпителия не был четко описан ранее. Поэтому мы также предлагаем диагностический метод для классификации пролонгированных клональных фенотипов, индуцированных в эпителиях крыла диска, по трем категориям: гиперплазия (накопление избыточного количества клеток с нормальным появлением с повышенной пролиферацией), дисплазия (предраковая ткань, состоящая из аномально появляющихся Клетки) и неоплазия (доброкачественная или злокачественная опухоль, состоящая из клеток, имеющих аномальный вид и аномальную картину пролиферации).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Летающие кресты и индукция клонов

  1. Удалите всех мух во флаконе за 12 часов до сбора девственных мух.
  2. Анестезируйте мух во флаконе, впрыскивая газ CO 2, и поместите мухи на подушку для укладки CO 2 .
  3. Перенесите 10 - 20 девственных самок и 10 мужчин из подушки для укладки CO 2 в свежий флакон и инкубируйте в течение 1 дня при 25 ° C.
  4. Перенесите этих мух в свежий флакон и инкубируйте в течение 12 часов при 25 ° C.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Отбросьте первый флакон, поскольку девственные самки не кладут достаточное количество яиц в первый день.
  5. Для линий энхансер-GAL4 удалите взрослых мух и инкубируйте флакон при 25 ° C до вскрытия.
  6. Для индукции мозаичных клонов путем откидывания-GAL4 удалите взрослых мух и инкубируйте флакон в течение 2-4 дней при 25 ° C. Время инкубации до теплового шока зависит от экспериментальной цели. Тепловой шок через 2 дня после осаждения яйца (AED) генерирует мозаичные клоны в незрелом второмВозрастают имагинальные эпителии. Тепловой шок после 3 или 4 дней AED генерирует мозаичные клоны в дифференцированном инагинальном эпителии раннего и среднего возраста.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Важно проанализировать влияние изменения времени теплового удара на опухолегенерические фенотипы.
  7. Для индукции мозаичных клонов выталкиванием-GAL4 тепловой удар удаляли флаконом путем погружения в водяную баню с температурой 37 ° C в течение 10-45 минут с последующей инкубацией в течение 2 - 3 дней при 25 ° C.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Информация о времени теплового удара, времени и времени инкубации в каждом эксперименте показана в легендах фигур.

2. Расчленение личинок

  1. Собирайте блуждающие личинки третьего возраста с деревянной палочкой или тупыми щипцами, генотипируйте их соответствующими флуоресцентными маркерами ( например , EGFP) под стереоскопическим микроскопом с флуоресценцией и поместите их в планшет для диссекции с PBS (забуференный фосфатом физиологический раствор).
  2. Вымойте личинок в PBS путем пипетирования с помощью 2 мл пластиковых переносных пипеток.
  3. Зажмите центр личинки одним щипцом и раздирайте тело пополам другими щипцами.
  4. Зажмите крючок для рта передней половины одним щипцом и нажмите рот в направлении тела с помощью других щипцов, чтобы вывернуть тело наизнанку.
  5. Удалите ненужные материалы, такие как слюнные железы или жировые тела с помощью щипцов.

3. Фиксация и окрашивание антителом

  1. Перенесите рассеченную переднюю половину личиночного тела (включая диски воображаемого крыла) в пластиковую трубку объемом 1,5 мл и зафиксируйте в 1 мл раствора Fix (4% формальдегида в PBS) в течение 10 мин при комнатной температуре в темноте с нежным вращением.
    ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ: Формальдегид является токсичным и обладает канцерогенным потенциалом. Надевайте защитные перчатки и одежду для предотвращения контакта с кожей.
    ПРИМЕЧАНИЕ. В этой части все шаги выполняются на нутаторе при комнатной температуре в темноте, если не указано иное.
  2. Удалите решение Fix и отбросьте его. Промыть ткани 1 мл PBT (0,3% TritНа X-100 в PBS) три раза по 15 минут каждый.
  3. Удалите PBT и добавьте 1 мл PBTG (0,2% бычьего сывороточного альбумина и 5% нормальной козьей сыворотки в PBT) для блокирования и нутации 1 ч при комнатной температуре или в течение ночи при 4 ° C.
  4. Удалите PBTG и добавьте раствор первичного антитела, соответствующим образом разбавленный PBTG (см. Таблицу материалов ) и нутат в течение ночи при 4 ° C.
  5. Удалите раствор первичного антитела и три раза промывайте ткани 1 мл ПБТ три раза в течение 15 мин.
  6. Удалите PBT и добавьте раствор вторичного антитела, соответствующим образом разбавленный PBTG (1: 400). Нутаат в течение 2 ч при комнатной температуре или в течение ночи при 4 ° С.
  7. Удаляют раствор вторичного антитела и промывают ткани 1 мл PBT два раза в течение 15 минут каждый.
  8. Для окрашивания F-актина удалите PBT и добавьте раствор Phalloidin, соответствующим образом разбавленный в PBS (1:40). Затем нутат в течение 20 мин. Удалите раствор Phalloidin и промойте ткани 1 мл PBT два раза в течение 15 минут каждый.
  9. Чтобы противостоять ядерной ДНК, удалите PBT и добавьте раствор DAPI (4 ', 6-диамидино-2-фенилиндол) (0,5 мкг / мл DAPI в PBS). Затем нутат 10 мин.
    ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ: DAPI обладает канцерогенным потенциалом. Надевайте защитные перчатки и одежду для предотвращения контакта с кожей.
  10. Удалите раствор DAPI и промойте ткани 1 мл PBT два раза в течение 15 минут каждый.
  11. Промойте один раз в 1 мл PBS в течение 10 мин при комнатной температуре.
  12. Удалите PBS и добавьте 500 мкл 100% глицерина в качестве среды для предварительной установки.

4. Монтаж на микроскопы

  1. Поместите окрашенные ткани на слайд микроскопа с помощью 2 мл пластиковой переносной пипетки.
  2. Перенесите ткани в капли монтажной среды на другой микроскоп с помощью щипцов.
  3. Удерживайте конец расчлененной ткани одним пинцетом и отрывайте мозговые и глазные антенные диски с другими щипцами.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Храните рассеченные мозги, чтобы разместить их рядом с крылатыми имагинальными дисками, Мозги выступают в качестве платформы, предотвращающей покровное от дробления крылатых имагинальных дисков.
  4. Чтобы изолировать крылатые имагинальные диски, удерживайте конец рассеченной ткани одним щипцом и аккуратно поцарапайте стенку корпуса и оторвите диски другими щипцами.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Если трудно найти крылатые имагинальные диски, очистите трахею от задней к передней стороне. Крыло имагинальных дисков прилипает к трахее.
  5. Аккуратно закройте имагинальные диски с помощью покровного стекла и заклейте лаком для ногтей; Хранить при температуре 4 ° C.

5. Конфокальная микроскопия

  1. Для получения конфокальных изображений с использованием набора параметров захвата конфокального микроскопа, включая диапазон длины волны излучения, интенсивность лазера, коэффициент усиления, смещение, скорость сканирования и размер изображения 24 .
    ПРИМЕЧАНИЕ. Подробную процедуру получения изображений см. В руководстве по эксплуатации, прилагаемом каждым изготовителем микроскопа.
  2. Для захвата одного coNfocal разделов целого крыла имагинального диска, используйте объектив 20X объектива.
  3. Приобретите 3-мерные изображения с помощью сканирования z-стека с шагом 0,5-1,0 мкм с использованием линз 40X или 60X.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Для анализа ячеистых фенотипов с высоким разрешением размер изображения должен быть больше 512 х 512 пикселей.

6. Анализ изображения с использованием ImageJ

  1. Используйте Фиджи, программное обеспечение ImageJ с открытым исходным кодом, ориентированное на анализ биологического изображения (https://fiji.sc/) 25 , для получения и анализа изображений конфокальных z-стеков.
  2. Чтобы получить вертикальные сечения, откройте изображения z-стека в ImageJ и выберите пункт меню «Изображение / Стеки / Сглаживание».
    ПРИМЕЧАНИЕ. Любая ось XZ или ось YZ могут быть выбраны в меню Reslice. Вертикальная секция может быть получена также в произвольном направлении, рисуя прямую линию или прямоугольник на изображении z-стека.

7. Диагностика неопластических фенотипов

  1. Открыть вертикальную(Ось XZ или YZ), полученная из одного набора изображений z-стека, и анализирует морфологические фенотипы и окрашивание антителами.
  2. Для диагностики фенотипов опухолей основное внимание уделяется следующим трем пунктам: (1) если клеточная масса, включая кнукерные клоны, отклоняется от основного эпителиального слоя, (2), если субклеточная локализация соединительных белков изменяется в этой клеточной массе , И (3) если диаметр этой клеточной массы больше 4 клеток.
  3. Классифицировать фенотипы опухолей в соответствии с блок-схемой, описанной на рисунке 1 .

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Чтобы продемонстрировать образование неопластической опухоли, экспериментально индуцированную RNAi- опосредованным nTSG-нокдауном в дислоцированных крыльях Drosophila , три разных драйвера GAL4 использовались для выражения UAS-RNAi для lgl или scrib : (1) sd-GAL4, который управляет сильной экспрессией UAS в Крыла и мягкой экспрессии в шарнирных областях ( рис. 2 и рис. 3А ); ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Система GAL4-UAS является одним из самых мощных генетических инструментов для целевой экспрессии генов у Drosophila 26 и значительно облегчает индукцию и анализ опухолевых клеток in vivo 4 . Эта система позволяет генерировать клоны, несущие нокдаун генов опухолей-супрессоров или избыточную экспрессию онкогенов в эпителиальной ткани дикого типа, что очень похоже на начальные стадии рака человека, где трансформированные опухолевые клетки окружены нормальным...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы благодарим Дж. Ваугена за критическое чтение рукописи. Эта работа была поддержана грантами от JSPS KAKENHI Grant Numbers 26891025, 15H01500 и научным грантом Научного фонда Takeda до YT

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
<сильно>Реагенты
фосфатный буферный раствор (PBS)Wako162-19321
TritonX-100Wako168-11805
ФормальдегидWako064-00406
бычья сыворотка альбуминSigmaA7906
нормальная козья сывороткаSigmaG6767
монтажная среда, VectashieldVector LaboratoriesH-1000
DAPISigmaD9542
мышь-анти-Dlg 4F3Developmental Studies Hybridoma Bank4F3 анти-диски большая, RRID:AB_528203разведенная в PBTG, 1:40
мышь-анти-MMP1Developmental Studies Hybridoma Bank3A6B4, RRID:AB_5797803 смешанная 1:1:1 и разведенная в PBTG, 1:40
mouse-anti-MMP1Developmental Studies Hybridoma Bank3B8D12, RRID:AB_5797813 смешанный 1:1:1 и разведенный в PBTG, 1:40
мышь-анти-MMP1Developmental Studies Hybridoma Bank5H7B11, RRID:AB_5797793 смешанный 1:1:1 и разведенный в PBTG, 1:40
mouse-anti-atubulinDevelopmental Исследования Hybridoma BankAA4.3, RRID:AB_579793разведенный в PBTG, 1:100
Alexa Fluor 546 ФаллоидинМолекулярные зондыA22283разбавленные в PBS, 1:40
козий антимышиный антитело IgG, Alexa Fluor 546Молекулярные зондыA11030разведенные в PBTG, 1:400
Name<>CompanyКаталожный номерComments
>Fly strains
sd-Gal4Bloomington Drosophila Stock Center#8609рекомбинирован с UAS-EGFP
upd-Gal4Bloomington Drosophila Stock Center#26796рекомбинирован с UAS-EGFP
UAS-lgl-RNAi Венскийцентр РНК-интерференции дрозофилы#51247
UAS-scrib-RNAiВенский центр РНКи дрозофилы#105412
UAS-RasV12Bloomington Drosophila Stock Center#64196
UAS-Yki3SABloomington Drosophila Stock Center#28817
hsFLPBloomington Drosophila Stock Center#6
Act>CD2>GAL4 (откидной GAL4)Bloomington Drosophila Stock Center#4780рекомбинирован с классом UAS-EGFP
UAS-EGFPBloomington Drosophila Stock Center#5428X chromosome
UAS-EGFPBloomington Drosophila Stock Center#6658третья хромосома
UAS-Dicer2Bloomington Drosophila Stock Center#24650second chromosome
UAS-Dicer2Bloomington Drosophila Stock Center#24651третья хромосома
vkg-GFPMorin et al. 2001GFP protein trap
strong

Ссылки

  1. Hanahan, D., Weinberg, R. A. The hallmarks of cancer. Cell. 100 (1), 57-70 (2000).
  2. Xu, T., Rubin, G. M. Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues. Development. 117 (4), 1223-1237 (1993).
  3. Struhl, G., Basler, K. Organizing activity of wingless protein in Drosophila. Cell. 72 (4), 527-540 (1993).
  4. Potter, C. J., Turenchalk, G. S., Xu, T. Drosophila in cancer research. An expanding role. Trends Genet. 16 (1), 33-39 (2000).
  5. Miles, W. O., Dyson, N. J., Walker, J. A. Modeling tumor invasion and metastasis in Drosophila. Dis Model Mech. 4 (6), 753-761 (2011).
  6. Tipping, M., Perrimon, N. Drosophila as a model for context-dependent tumorigenesis. J Cell Physiol. 229 (1), 27-33 (2013).
  7. Bilder, D. Epithelial polarity and proliferation control: links from the Drosophila neoplastic tumor suppressors. Genes Dev. 18 (16), 1909-1925 (2004).
  8. Humbert, P. O., et al. Control of tumourigenesis by the Scribble/Dlg/Lgl polarity module. Oncogene. 27 (55), 6888-6907 (2008).
  9. Huang, L., Muthuswamy, S. K. Polarity protein alterations in carcinoma: a focus on emerging roles for polarity regulators. Curr Opin Genet Dev. 20 (1), 41-50 (2010).
  10. Brumby, A. M., Richardson, H. E. scribble mutants cooperate with oncogenic Ras or Notch to cause neoplastic overgrowth in Drosophila. EMBO J. 22 (21), 5769-5779 (2003).
  11. Igaki, T., Pastor-Pareja, J. C., Aonuma, H., Miura, M., Xu, T. Intrinsic tumor suppression and epithelial maintenance by endocytic activation of Eiger/TNF signaling in Drosophila. Dev Cell. 16 (3), 458-465 (2009).
  12. Tamori, Y., et al. Involvement of Lgl and Mahjong/VprBP in cell competition. PLoS Biol. 8 (7), e1000422(2010).
  13. Cordero, J. B., et al. Oncogenic Ras diverts a host TNF tumor suppressor activity into tumor promoter. Dev Cell. 18 (6), 999-1011 (2010).
  14. Yamamoto, M., Ohsawa, S., Kunimasa, K., Igaki, T. The ligand Sas and its receptor PTP10D drive tumour-suppressive cell competition. Nature. 542 (7640), 246-250 (2017).
  15. Vaughen, J., Igaki, T. Slit-Robo Repulsive Signaling Extrudes Tumorigenic Cells from Epithelia. Dev Cell. 39 (6), 683-695 (2016).
  16. Tamori, Y., Suzuki, E., Deng, W. -M. Epithelial Tumors Originate in Tumor Hotspots, a Tissue-Intrinsic Microenvironment. PLoS Biol. 14 (9), e1002537(2016).
  17. Ohsawa, S., et al. Elimination of oncogenic neighbors by JNK-mediated engulfment in Drosophila. Dev Cell. 20 (3), 315-328 (2011).
  18. Menéndez, J., Pérez-Garijo, A., Calleja, M., Morata, G. A tumor-suppressing mechanism in Drosophila involving cell competition and the Hippo pathway. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14651-14656 (2010).
  19. Hogan, C., et al. Characterization of the interface between normal and transformed epithelial cells. Nat Cell Biol. 11 (4), 460-467 (2009).
  20. Kajita, M., et al. Interaction with surrounding normal epithelial cells influences signalling pathways and behaviour of Src-transformed cells. J Cell Sci. 123 (Pt 2), 171-180 (2010).
  21. Norman, M., et al. Loss of Scribble causes cell competition in mammalian cells. J Cell Sci. 125 (1), 59-66 (2012).
  22. Wagstaff, L., et al. Mechanical cell competition kills cells via induction of lethal p53 levels. Nat Commun. 7, 1-14 (2016).
  23. Kajita, M., Fujita, Y. EDAC: Epithelial defence against cancer-cell competition between normal and transformed epithelial cells in mammals. J Biochem. 158 (1), 15-23 (2015).
  24. North, A. J. Seeing is believing? A beginners' guide to practical pitfalls in image acquisition. J Cell Biol. 172 (1), 9-18 (2006).
  25. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  26. Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118 (2), 401-415 (1993).
  27. Jory, A., et al. A survey of 6,300 genomic fragments for cis-regulatory activity in the imaginal discs of Drosophila melanogaster. Cell Rep. 2 (4), 1014-1024 (2012).
  28. McGuire, S. E., Le, P. T., Osborn, A. J., Matsumoto, K., Davis, R. L. Spatiotemporal rescue of memory dysfunction in Drosophila. Science. 302 (5651), 1765-1768 (2003).
  29. Rodrigues, A. B., et al. Activated STAT regulates growth and induces competitive interactions independently of Myc, Yorkie, Wingless and ribosome biogenesis. Development. 139 (21), 4051-4061 (2012).
  30. Khan, S. J., et al. Epithelial neoplasia in Drosophila entails switch to primitive cell states. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (24), E2163-E2172 (2013).
  31. Pagliarini, R. A., Xu, T. A genetic screen in Drosophila for metastatic behavior. Science. 302 (5648), 1227-1231 (2003).
  32. Gonzalez, C. Drosophila melanogaster: a model and a tool to investigate malignancy and identify new therapeutics. Nat Rev Cancer. 13 (3), 172-183 (2013).
  33. Patel, P. H., Edgar, B. A. Tissue design: how Drosophila tumors remodel their neighborhood. Semin Cell Dev Biol. 28, 86-95 (2014).
  34. Nakajima, Y. -I., Meyer, E. J., Kroesen, A., McKinney, S. A., Gibson, M. C. Epithelial junctions maintain tissue architecture by directing planar spindle orientation. Nature. 500 (7462), 359-362 (2013).
  35. Colombani, J., Andersen, D. S., Léopold, P. Secreted peptide Dilp8 coordinates Drosophila tissue growth with developmental timing. Science. 336 (6081), 582-585 (2012).
  36. Garelli, A., Gontijo, A. M., Miguela, V., Caparros, E., Dominguez, M. Imaginal discs secrete insulin-like peptide 8 to mediate plasticity of growth and maturation. Science. 336 (6081), 579-582 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

DrosophilaGAL4 UASImageJFlip out GAL4
Индукция и диагностика опухолей в
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.