Методическая статья
* These authors contributed equally
Здесь мы представляем изысканные протокол эффективно раскрыть биотинилированным декстрана Амин (BDA) маркировки с флуоресцентных окрашивания метода через взаимные нейронные пути. Это подходит для анализа тонкой структуры из BDA маркировки и отличает его от других нервных элементов под конфокальный лазерный сканирующий микроскоп.
Биотинилированным высокомолекулярного декстрана Амин (BDA) был использован как трассировщик высокочувствительный нейроанатомический на протяжении многих десятилетий. Поскольку качество его маркировки пострадал от различных факторов, здесь, мы предлагаем изысканный протокол для применения высокой молекулярной массой BDA для изучения оптимальных нейронных маркировки в центральной нервной системе. После стереотаксической инъекции АРП в вентральной задне ядро таламуса крыс через деликатные стеклянные пипетки (ВПМ) BDA витражи с флуоресцентные стрептавидина Alexa (AF) 594 и counterstained с флуоресцентные Ниссль пятно AF500/525. На фоне зеленых Ниссль окрашивание красный BDA маркировки, включая нейрональных клеток органов и аксональной терминалы, более отчетливо проявилось в соматосенсорной коры. Кроме того, двойной флуоресцентные пятная для BDA и кальция связывания белка Парвальбумин (PV) была проведена соблюдать соотношение BDA маркировки и PV-позитивных интернейронов корковых целевой, предоставляя возможность для изучения местных нейронных схемы и их химических характеристик. Таким образом этот изысканный метод подходит не только для визуализации высокого качества нейронных маркировки с высокой молекулярной массой BDA через взаимные нервные пути между таламус и коры головного мозга, но также позволит одновременной демонстрации другие нейронных маркеры с флуоресцентные гистохимии или иммунохимии.
Высокомолекулярный BDA (10,000 молекулярный вес), высокочувствительный трассировщика, была использована для отслеживания нервные пути в центральной нервной системе для более чем 20 лет1. Хотя использование BDA является общей нейронных тракта, отслеживание техники, качество BDA маркировки могут быть затронуты в животных различных факторов1,2,3. Наши недавнее исследование показало, что оптимальная структура BDA маркировки не только связанные с надлежащей впрыск выживания время, но также коррелирует с окрашивание метод4. До сих пор....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Это исследование был одобрен Комитетом по этике на Китай Академии медицинских наук (регистрационный номер 20160014). Все процедуры были проведены в соответствии с национальными институтами здравоохранения руководство для ухода и использования лабораторных животных (Национальная академия Press, Вашингтон, о.к., 1996). В этом исследовании были использованы четыре взрослых самцов крыс (вес 250-280 г). Все животные были размещены в цикле свет/темно 12 h с контролируемой температурой и влажностью и свободный доступ к продовольствию и воде. Инструменты и материалы, используемые в настоящем исследовании были показан на рисунке 1. Перед операцие....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Выживание 10 дней поста инъекции АРП в VPM было достаточно для производства интенсивной нейронных маркировки на соответствующий корковых областях ипсилатеральные в сторону впрыска (рис. 2). Обычных ABC и люминесцентные пятнать процедуры для BDA показали аналогичные модели нейронных маркировки на автомагистрали S1, в том числе anterogradely помечены аксоны thalamocortical и retrogradely помечены corticothalamic нейронов (рис. 2 c<.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Выбор надлежащего трассирующими является важным шагом для успешной нейронных трассировки эксперимента. В семье BDA, высокой молекулярной массой BDA (10,000 молекулярный вес) было рекомендовано преференциально перевозиться через антероградная нейронные пути в отличие от низкомолекулярных BDA (3000 молекулярный вес)2,3 , 11 , 12 , 13. Однако многие исследования .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Авторы не имеют ничего сообщать.
Это исследование финансировалось Национальный фонд Китая естественных наук (проект кодекса № 81373557, № 81403327).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Биотинилированный декстранамин (BDA) | Молекулярные зонды | D1956 | 10 000 молекулярная масса |
| стрептавидин-Alexa Fluor 594 | Молекулярные зонды | S32356 | Защита от света |
| 500/525 зеленый флуоресцентный краситель по Нисслю | Молекулярные зонды | N21480 | Защита от света |
| Инструмент для стереотаксиса мозга | Narishige | SR-50 | |
| Замораживающий микротом | Thermo | Microm International GmbH | |
| Конфокальная визуализация | Olympus | FV1200 | |
| система | |||
| Micro Drill | Saeyang Microtech | Marathon-N7 | |
| Sprague Dawley | Institute of Laboratory Animal Sciences, Китайская академия медицинских наук | SCKX (JUN) 2012-004 | |
| Vectastain ABC Kit | Vector Laboratories | PK-4000 | |
| superfrost plus микроскоп слайды | Thermo | #4951PLUS-001 | 25x75x1 мм |
| Photoshop and Illustration | Adobe | CS5 |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение