Этот протокол описывает изготовления упругих 3D Макропористые microcryogels путем интеграции микротехнологий с технологией cryogelation. После загрузки с клетками, создаются 3D microtissues, который может быть легко вводится в естественных условиях для содействия регенеративной терапии или собраны в массивы в пробирке скрининга наркотиков высокой пропускной способности.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
3D Microtissues для инъекций восстановительной терапии и высок объём наркотиков скрининг
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Чтобы обновить традиционные 2D клеточной культуры до 3D клеточной культуры, мы интегрировали микротехнологий с технологией cryogelation для производства Макропористые микромасштабной криогелей (microcryogels), который может быть загружен с различных типов клеток сформировать 3D microtissues. Здесь мы представляем протокол изготовить универсальный 3D microtissues и их применения в восстановительной терапии и наркотиков скрининг. Размер и форма управляемый microcryogels могут быть изготовлены на чипе массива, который может быть заготавливаемым от чип как отдельных клеток загруженных перевозчиков для инъекционного регенеративной терапии или далее собран на чип в 3D microtissue массивы для высокой пропускной способности скрининга наркотиков. Из-за высокой упругой характер этих микромасштабной криогелей 3D microtissues проявляют большой injectability для малоинвазивных клеточной терапии, защищая клетки от механической поперечной силы во время инъекции. Это гарантирует выживание расширенной клетки и терапевтический эффект в мышиной модели ишемии конечности. Тем временем Ассамблея 3D microtissue массивов в стандартном формате 384-multi ну облегчает использование общих лабораторных объектов и оборудования, позволяя высок объём наркотиков скрининг на этой платформе культуры универсальный 3D клеток.
Введение
Традиционные клеточной культуры на плоского двумерного (2D) поверхностей, таких как культуры блюдо или несколькими хорошо пластины, вряд ли может вызывать поведение клеток недалеко от их собственного государства. Точное повторение родной сотовой микросреды, которые состоят из различных типов клеток, внеклеточной матрицы и биологически растворимых факторов в трехмерной (3D) архитектуры1,2,3 ,4, имеет важное значение для построения biomimicking тканей в пробирке для приложений в ткани инженерных, восстановительной медицины, биологии ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
эксперименты на животных следуют строгим протокол, утвержденных Комитетом по этике животное на центр биомедицинских анализ, Университет Цинхуа. Соответствии с одобрения Комитета по этике, жировых тканях человека была получена из Департамент пластической хирургии Peking союза больницы с информированного согласия от больных.
1. изготовление 3D Microcryogels
- , проектирование и изготовление чипов массив microstencil
- Использование коммерческого программного обеспечения дизайн массивы конкретных геометрий, таких как круги, эллипсы, треугольники или Клевер 14, в зависимости от последующ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Изготовление и характеристика microcryogels для формирования 3D microtissue.
Согласно протоколу microcryogels были изготовлены формы 3D microtissues и отдельных microcryogels или microcryogel массивы и были применены к восстановительной терапии и наркотиков скрининг, соответственно (рис. 1). Microstencil массив фишки изготовлены из PMMA применялись как micromolds для microcryogel ма.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Регенеративной медицины и в пробирке модели для скрининга наркотиков являются два важных приложений для ткани инженерных5,6,,78,9. Хотя эти два приложения имеют весьма различные потребности, точки соприкосновения между ними заключается в необходимости для более biomimetic культивирования условие для расширения функций клеток19........
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Эта работа была финансово поддержана Национальный фонд естественных наук Китая (грантов: 81522022, 51461165302). Авторы хотели бы признать все члены лаборатории Du для помощи общего назначения.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Желатин | сигма | G7041 | Все остальные реактивы были приобретены у компании Sigma-Aldrich (Сент-Луис, штат Миссури), если не указано иное. |
| Глутаральдегид | J& K | 902042 | Используется в качестве сшивающего агента при подготовке материала. |
| Стеклянная крышка накладка (24 x 50 мм) | CITOGLASS, Китай | 10212450C | Для соскребания раствора прекурсора на микротрафаретные микросхемы. |
| Натрий борогидрид, NaBH4 | Beijing Chemical Works | 116-8 | Для смывания остатков глутарового альдегида после гелеобразования. |
| Вакуумная баночка | asperts, Китай | VC8130 | Для сохранения микрогелей под вакуумом. |
| Листы полиметилметакрилата (ПММА | Sunjin Electronics Co., Ltd, Китай | Обычные листы ПММА. | |
| Лазерная система Rayjet | Rayjet, Австралия | Rayjet 50 C30 | Для гравировки листов ПММА для формирования колодцев. |
| Очиститель плазмы | Mycro Technologies, США | PDC-32G | Сделать ПММА гифофильным. |
| Лиофилизатор | Boyikang, Китай | SC21CL | Для лиофилизации материалов. |
| Раствор трипана синего цвета (0,4%) | Zhongkekeao, Китай | DA0065 | Для окрашивания микрогелей. |
| Доксорубицина гидрохлорид | ENERGY CHEMICAL, Китай | A01E0801360010 | Для проверки лекарственной устойчивости клеток в 2D или 3D микрогели. |
| Анализ живых/мертвых | Dojindo Molecular Technologies (Кумамото, Япония) | CS01-10 | Для различения живых и мертвых клеток. |
| Cell Titer-Blue | Promega (Висконсин, США). | G8080 | Для проверки жизнеспособности клеток. |
| Клеточный фильтр | BD Biosciences, США | 352360 | Для сбора микрогелей. |
| D-люциферин | SYNCHEM (Германия) | s039 | Для прилипания клеток. |
| Сканирующий электронный микроскоп | FEI, США | Quanta 200 | Для характеристики морфологии микрогелей. |
| Машина для механических испытаний | Bose, США | 3230 | Для измерения механических характеристик. |
| Программируемый шприцевой насос | World Precision Instruments, США | ALADINI 1000 | Для тестирования injactabiliy. |
| Цифровой силометр | HBO, Yueqing Haibao Instrument Co., Ltd., Китай | H-50 | Для тестирования инджактабилий. |
| Система стерилизации окисью этилена | Anprolene, Anderson Sterilization, Inc., Haw River, NC | AN74i | Для стерилизации микрогелей газообразным окисью этилена. |
| Считыватель микропланшетов | Molecular Devices, США | M5 | Для измерения интенсивности флуоресценции в микрочипе. |
| Конфокальный микроскоп | Nikon, Япония | A1Rsi | Для наблюдения за распределением клеток в 3D. |
| Ксеноген Система визуализации Lumina II | Caliper Life Sciences, США | IVIS | Для отслеживания клеток у животных. |
| Жидкая рабочая станция | Абрикосовый дизайн, США | S-пипетка | Для высокой загрузки среды или суспензии клеток через высокую производительность. |
Ссылки
- Cukierman, E., Pankov, R., Stevens, D. R., Yamada, K. M. Taking cell-matrix adhesions to the third dimension. Science. 294 (5547), 1708-1712 (2001).
- Abbott, A. Cell culture: biology's new dimension. Nature. 424 (6951), 870-872 (2003).
- Loessner, D., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
