Методическая статья

Последствия воздействия формальдегида мышиной модели атопический дерматит вызванных лечения новорожденных капсаицин

DOI:

10.3791/55987

⸱

27 сентября 2017 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Neuroscience Research Institute & Department of Physiology, College of Medicine, Korea University, 2Department of Pharmaceutics and Biotechnology, College of Medical Engineering, Konyang University, 3Division of Biological Science and Technology, Science and Technology College, Yonsei University Wonju Campus

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы описываем методы для лечения новорожденных капсаицин побудить атопический дерматит у крыс и воздействия испаряется формальдегида для расследования последствий вдыхания формальдегида на атопический дерматит.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Атопический дерматит хронически рецидива зудящие экзема и преобладает в мире, особенно в развитых странах. Знаны, что сложных взаимодействий между генетические и экологические факторы играют важную роль в патофизиологии атопический дерматит. Однако мы все еще не имеют детальную картину Патогенез этого заболевания. Таким образом она имеет важное значение для разработки соответствующих животных моделей для выяснения прогрессирование атопический дерматит. Кроме того влияние экологических факторов, таких как загрязнителей воздуха на атопический дерматит расширяет понимание болезни. Здесь мы описываем метод для стимулирования атопический дерматит у крыс с новорожденным капсаицин лечения и протокол для экспозиции постоянной концентрации формальдегида для крыс выявить влияние на развитие атопического дерматита детской и подростковой периоды. Эти протоколы были успешно применены к несколько экспериментов и может быть использован для других веществ.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Допросить последствия вдыхания формальдегида (ФА) на прогрессирование атопический дерматит (AD), мы установили протокол для AD индукции и разработали камеру обычного обращения для хронического воздействия FA.

Объявление-хронические воспалительные заболевания кожи приписывается сложных взаимодействий между генетической предрасположенности и экологических триггеры1,2. Модель надлежащего животных требуется для изучения объявление в доклинических государства. Это особенно важно, когда изучение патогенеза AD под влиянием факторов окружающей среды. Кроме того чтобы лучше изучить воздействие экологических триггеры на объявление прогрессии, важно для разделения отдельных экологических факторов и количественно оценить степень воздействия.

Мы продемонстрировали Роман крысы модель AD, вызванных лечения новорожденных капсаицин. Это объявление модель3 имеет некоторые преимущества над другими AD модели, например модели AD, индуцированных epicutaneous сенсибилизации, генетически объявлений модели и модели спонтанного мыши AD4. Во-первых эта модель развивается AD-подобные симптомы в возрасте 3 недели, который соответствует младенца объявление и раньше, чем другие модели спонтанного мыши объявление как NC/Nga мыши. В некоторых случаях, в отличие от модели генетически AD симптомы моделей AD спадать и рецидив спонтанно в течение 20-недельного. Кроме того процесс индукции AD-подобные симптомы в модели проще, чем у модели epicutaneous сенсибилизации, который больше похож на аллергический контактный дерматит в перспективе процесса индукции.

Мы ввели Роман протокол облучения FA в животной модели, используя камеру акрилового стекла и регулятор обычного медицинского кислорода5 для изучения последствий вдыхания FA на развитие AD в детской и подростковой периоды. Регулятор позволяет нам подвергать животных к постоянной концентрации газа, регулируя скорости потока и концентрации раствора. Предыдущие исследования сообщили несколько способов воздействия фа животных моделей. Xu et al. описал метод экспозиции, в которой FA решение непосредственно применяется для кожи6. Еще одно недавнее исследование рассмотрен протокол FA газа воздействия с помощью специализированных летучими растворителями генератора, модель 49127. По сравнению с методами предыдущих исследований, новый метод оснащен более легко и может применяться для других решений, в дополнение к Англии.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

все методы, описанные здесь были одобрены международной животное уход и использование Комитет (IACUC) из Кореи университета колледжа из медицины. через 6 недель после рождения, экспериментаторов можно вызвать enthansasia и собирать различные образцы, такие, как кожи и сыворотке крови крыс.

1. индукция AD новорожденных лечение капсаицин

  1. для приготовления 5 мг/мл раствора капсаицин, добавить 50 мг капсаицина 1 мл 80 анимации и 1 мл 100% этанола в 15 мл Конические трубки.
  2. Добавить 8 мл физиологическим Конические трубки. Встряхнуть трубку до тех пор, пока не отдельные слои видны
  3. внедрить решение капсаицин (10 мкл/g) в подкожной клетчатке, на средней и задней части шеи новорожденных крыс Sprague-Dawley.
    1. Доставить капсаицин между 12 h до 48 ч после рождения (критический).
      Примечание: Если инъекции задерживается более чем на несколько дней, дерматит не будет развиваться, или она будет сохраняться только в течение нескольких недель. Если инъекции слишком рано, респираторный дистресс может произойти из-за сильной боли.
    2. Для предотвращения новорожденных крыс из дыхания с инжекцией капсаицин, нажимаем грудь новорожденных поощрять дыхания или держать новорожденных в кислородной камере до тех пор, пока дыхание становится нормальной. Поскольку капсаицин индуцированной боль может препятствовать дыханию, добавление общей анестезии возможно может усугубить трудности дыхания. Таким образом, экспериментаторов не следует использовать anesthesics увеличить выживание крыс.

2. Оценка зуд и дерматит в мышиной модели AD

  1. измерение зуда, подсчитывая спонтанное царапин поведение
    1. подготовить пластиковые камеры (20 x 30 см x 20 см) оснащены зеркалом для полного охвата для просмотра и отверстия, чтобы позволить крысы вздохнуть.
    2. Установите вверх и настроить цифровой видеокамеры должным образом, чтобы одновременно записывать зеркал и передних представления крыс.
    3. Место крыс в пластиковые камеры и охватывают потолок камеры с тяжелым предметом, чтобы предотвратить открытие.
    4. Записи спонтанного поведения крыс за 1 ч, воспроизводить видеоклипы и подсчитать количество царапин поведение.
  2. Оценки поражения кожи, с использованием системы скоринга
    1. место крыса в зале индукции.
    2. Включить расходомер кислорода до 2 Л/мин скорость потока и отрегулировать изофлюрановая испарителя до 3% для анестезии.
    3. Определить масштабы и тяжесть дерматит в уши и другие части крыса.
    4. Определяют размер подразделение для степень поражения кожи как 0,25 см 2 и тяжести поражения кожи на следующие таблицы 1: Индекс тяжести; степень дерматит Оценка путем умножения и степени тяжести (см. дерматит Оценка в < сильный класс = «xfig» > Рисунок 1B).

3. Воздействие газообразных FA животных

  1. Подготовка камеры ингаляции
    1. подготовить окно акриловое стекло (55 cm х 40 cm х 35 см), имеет два выхода на противоположных сторонах.
    2. ОСТОРОЖНОСТЬЮ. Для распространения FA газа, место выше, чем входе выходе и сделать больше, чем на входе размер розетки.
    3. ОСТОРОЖНОСТЬЮ. Для измерения концентрации внутреннего газа, на другой стороне точек, просверлить три небольших отрывков, которые могут быть закрыты.
    4. Подключить трубы с обеих точек. Поместите отводной трубки для циркуляции капот или снаружи здания для выбросов газа и подключите другой отводной трубки к регулятору медицинского кислорода.
    5. Место обычного крыса клетке внутри коробки из акрилового стекла.
    6. Поместить крыс в клетке от одной недели после рождения на 5 недель (2 часа в день и 5 дней в неделю).
    7. Уплотнение поле акрилового стекла так плотно, как можно предотвратить утечку газа.
      Примечание: Для жесткой уплотнение, крышку камеры должен содержать резиновые. Применить пленку камеры для уплотнения плотно обернуть.
  2. Поколение газообразных ОС с помощью регулятора медицинского кислорода
    1. растворить в 1 Л воды 5 g ОС.
    2. Поместить FA 0,5% раствор в бутылке увлажнитель регулятора медицинского кислорода.
    3. После подключения в трубку к регулятору, включите регулятор и установите скорость потока до 5 Л/мин
    4. Настроить концентрации раствора и скорость потока для определения концентрации газа в камере.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Воспаление кожи AD-как лечить капсаицин AD крыса модели в возрасте 7 недель представлена на рисунке 1A. Надежные царапин поведение модели крыса AD капсаицин лечение показано в видео 1. Лечение новорожденных капсаицин вызвало дерматит и усугубляет царапин поведение крыс 3-недельного возраста, и AD-подобные симптомы сохраняются в течение нескольких недель (рис. 1B, C). Хотя степень была менее серье...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол, описанные здесь для индукции AD-подобные симптомы у крыс могут быть адаптированы для изучения патофизиологии AD и используется как инструмент скрининга для тест на наркотики. Инструмент для воздействия газообразных FA капсаицин лечение крыс может применяться для оценки последствий воздействия различных газов на разнообразных животных моделях.

Новорожденных лечение капсаицин объявления модель опирается на более простой процедурой, чем других атопических модели, такие как DNCB лечения ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование было поддержано общественного благосостояния & программы исследований безопасности через Национальный фонд исследований Кореи (NRF) финансируется министерством образования, науки и технологии (СР 2014M3C8A5030612) и поддерживается Чун Ян, Cha Young Солнце, M.D. и Чан Привет Joo йеу Sa Мемориальный фонд.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Медицинский кислородный регуляторYuyao Jiahua Медицинскийпроизводитель не повлияет на результаты
Производитель трубкине повлияет на результаты
камерыTaejin Acrylне повлияет на результаты
Пластиковая камераTaejin Acrylпроизводитель не повлияет на результаты
Параформальдегид, порошокПроизводитель Sigma158127не повлияет на результаты
Оберточная пленкаUniwrapпроизводитель не повлияет на результаты
КапсаицинSigmaM2028производитель не повлияет на результаты
Tween 80SigmaP4780производитель не повлияет на результаты
Цифровая видеокамераSonyHDR-CX380yпроизводитель не повлияет повлиять на результаты
фармацевтическойизофлуранне повлияет на результаты
Производитель акриловой Производитель продукции JW

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Geha, R. S. Allergy and hypersensitivity. Nature versus nurture in allergy and hypersensitivity. Curr Opin Immunol. 15 (6), 603-608 (2003).
  2. Novak, N., Bieber, T., Leung, D. Y. Immune mechanisms leading to atopic dermatitis. The J Allergy Clin Immunol. 112 (Suppl 6), S128-S139 (2003).
  3. Back, S. K., et al. Chronically relapsing pruritic dermatitis in the rats treated as neonate with capsaicin; a potential rat model of human atopic dermatitis. J Dermatol Sci. 67 (2), 111-119 (2012).
  4. Jin, H., He, R., Oyoshi, M., Geha, R. S. Animal models of atopic dermatitis. J Invest Dermatol. 129 (1), 31-40 (2009).
  5. Han, R. T., et al. Formaldehyde-Induced Aggravation of Pruritus and Dermatitis Is Associated with the Elevated Expression of Th1 Cytokines in a Rat Model of Atopic Dermatitis. PLOS ONE. 11 (12), e0168466(2016).
  6. Xu, B., Aoyama, K., Takeuchi, M., Matsushita, T., Takeuchi, T. Expression of cytokine mRNAs in mice cutaneously exposed to formaldehyde. Immunol Lett. 84 (1), 49-55 (2002).
  7. Kim, J. Y., Jeong, M. S., Park, K. Y., Seo, S. J. Aggravation of atopic dermatitis-like symptoms by consecutive low concentration of formaldehyde exposure in NC/Nga mice. Exp Dermatol. 22 (3), 219-221 (2013).
  8. Laske, N., Niggemann, B. Does the severity of atopic dermatitis correlate with serum IgE levels? Pediatr Allergy Immunol. 15 (1), 86-88 (2004).
  9. Fujii, Y., Takeuchi, H., Sakuma, S., Sengoku, T., Takakura, S. Characterization of a 2,4-dinitrochlorobenzene-induced chronic dermatitis model in rats. Skin Pharmacol Physiol. 22 (5), 240-247 (2009).
  10. Sugimoto, T., Xiao, C., Ichikawa, H. Neonatal primary neuronal death induced by capsaicin and axotomy involves an apoptotic mechanism. Brain Res. 807 (1-2), 147-154 (1998).
  11. Saito, A., et al. Characterization of skin inflammation induced by repeated exposure of toluene, xylene, and formaldehyde in mice. Environ Toxicol. 26 (3), 224-232 (2011).
  12. Jung, W. W., et al. Formaldehyde exposure induces airway inflammation by increasing eosinophil infiltrations through the regulation of reactive oxygen species production. Environ Toixcol Pharmacol. 24 (2), 174-182 (2007).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

IgEIL 4IL 13

Похожие статьи