Nanosponge перестройки в размер и плотность сшивки

Summary

Эта статья описывает процесс настройки размера и сшивки плотность ковалентно высокоструктурированные наночастиц из линейной Полиэфиры, содержащие Кулон функциональность. На пошив параметры синтеза (молекулярная масса полимера, кулон функции включения и сшивателя эквиваленты), наночастиц желаемый размер и сшивки плотности может быть достигнуто для наркотиков доставки приложений.

Abstract

Мы описываем протокол для синтеза линейных Полиэфиры, содержащие Кулон эпоксид функциональность и их включения в nanosponge с контролируемой размерами. Этот подход начинается с Синтез функционализированных лактон, который является ключом к функционализации Кулон результирующая полимер. Валеролактон (VL) и хлористый аллил Валеролактон (AVL) затем Сополимеризованная с помощью кольцо открытие полимеризации. После полимеризации модификация затем используется для установки эпоксид остаток на некоторых или всех групп аллиловый кулон. Эпоксидно Амин химии используется форма наночастиц в разбавленный раствор полимера и малые молекулы диамин сшивателя, основанный на желаемый nanosponge размер и сшивки плотности. Nanosponge размеры могут характеризоваться передачи электронной микроскопии (ТЕА) imaging для определения измерения и распределения. Этот метод предоставляет путь, по которому весьма перестраиваемый полиэфиры можно создать перестраиваемый наночастиц, который может использоваться для инкапсуляции малые молекулы препарата. Из-за характера позвоночника эти частицы гидролитически и ферментативно разложению для контролируемого выпуска широкого спектра гидрофобные малых молекул.

Introduction

Именно настройки размера и сшивки плотность наночастиц на основе межмолекулярные сшивки имеет большое значение для влияния и руководства наркотиков релиз профиль этих наносистем¹. Проектирование nanosponge перестройки, т.е., подготовка частиц различных сетевых плотностей, зависит функциональность Кулон прекурсор полимера и эквиваленты гидрофильные сшивателя включены. В этом подходе концентрация прекурсоров и сшивателя в растворителе имеет важное значение для формы наночастиц дискретных размер, а не гель оптом. Спектроскопия количественных ядерного магнитного резонанса (ЯМР) как характеристика техника позволяет для точного определения включены Кулон функциональность и молекулярной массы полимера. После того, как образуются наночастиц, они могут сосредоточены и солюбилизирован в органические вещества, не имея характер nanogel.

Последние работы в наночастиц доставки лекарств была сосредоточена на использование поли (молочно-co-гликолевая кислота) (PLGA) самостоятельной сборки наночастиц^2,3,4,5,6. PLGA имеет разложению Эстер связей, которые делают его пригодным для наркотиков доставки приложений и часто сочетается с poly(ethylene glycol) (PEG) из-за его хитрость свойства⁷. Однако благодаря собственн-собранные характер формирования PLGA частиц, частиц нельзя солюбилизирован в органические для дальнейшего функционализации. В отличие от PLGA наночастиц предложенный метод обеспечивает ковалентных сшивки, формировании наночастиц с определенными размерами и морфологии, которые являются стабильными в органические и деградируют в водных растворах¹. Преимущества этого подхода являются возможность дальнейшего химически functionalize поверхности nanosponge⁸, и его стабильность в органических растворителях может использоваться для после загрузки частиц с фармацевтических соединений^1,9. С помощью этого метода инкапсуляции гидрофобные малых молекул может быть достиган осадков в водной среде. Гидрофобность полиэстер позвоночника вместе с гидрофильной короткие сшивателя дает эти частицы аморфных характер при температуре тела. Кроме того после загрузки наркотиков, частицы могут образовывать тонкой суспензий в водной быть легко вводится в естественных условиях. Это наша цель в этой работе для оценки параметров для синтеза этих полиэстер nanosponges и определить те, которые имеют жизненно важное значение для разработки и управления размер и морфология.

Protocol

1. Синтез и характеристика AVL

1. Поместите магнитную мешалку в колбу с круглым дном объемом 500 мл на 2 горлышка (колба 1) и запечатайте резиновой перегородкой соответствующего размера и стальной проволокой. Высушите колбу пламенем для удаления влаги путем продувки газообразным азотом, соединенным через входную иглу и открытую выходную иглу в области перегородки, при этом с помощью бутановой пламени горелку аккуратно нагрейте внешнюю часть колбы, перемещая пламя по поверхности.
   1. Продолжайте нагревать всю колбу, проводя пламенем по поверхности до тех пор, пока не будет видно влаги, затуманивающей внутреннюю часть колбы. Уберите пламя и дайте колбе остыть до комнатной температуры, продолжая поток азота на протяжении всей реакции.
2. Добавьте 156,25 мл безводного тетрагидрофурана (ТГФ) через шприц объемом 30 мл в колбу 1. Охладите колбу от 1 до -78 °C с помощью ванны с сухим льдом и ацетоном. Следите за температурой с помощью термометра на протяжении всей реакции и добавляйте сухой лед по мере необходимости, чтобы поддерживать температуру -78 °C. Начните перемешивать магнитную мешалку с помощью магнитной мешалки, чтобы создать мягкий вихрь.
3. Добавьте N,N-диизопропилэтиламин (DIPA) (3,30 мл, 2,3 x ^10-2 моль) через шприц объемом 5 мл, а затем капля добавьте 2,5 М n-бутиллития (9,34 мл, 2,3 x ^10-2 моль) через стеклянный шприц объемом 10 мл, оснащенный механизмом блокировки иглы и металлической иглой, в колбу 1. Продолжайте помешивать с помощью магнитной мешалки в течение 15 минут при температуре -78 °C.
4. Высушите в огне (как описано в пункте 1.1) и продуйте газообразным аргоном (как описано в пункте 1.1 с помощью газообразного азота) колбу с круглым дном объемом 100 мл (колба 2). Одновременно снимите входное и выходное отверстия для газообразного аргона, как только колба остынет настолько, чтобы ее можно было прикоснуться. Добавьте 56 мл безводного ТГФ через шприц объемом 30 мл и δ-валеролактон (VL) (1,97 мл, 2,1 x ^10-2 моль) через шприц объемом 5 мл.
5. Добавьте раствор из колбы 2 в колбу 1 с помощью маленькой канюли по каплям в течение 45 минут, непрерывно помешивая с помощью магнитной мешалки. Как только колба 2 опустеет, снимите канюлю и дайте колбе 1 продолжить помешивание в течение 15 минут при температуре -78 °C.
6. Высушите пламенем (как описано в шаге 1.1) и продуйте газообразным аргоном (как описано в шаге 1.1 с газообразным азотом) колбу с круглым дном объемом 25 мл (колба 3). Одновременно снимите входное и выходное отверстия газообразного аргона, как только колба остынет настолько, чтобы на ощупь можно было прикоснуться, чтобы поддерживать положительное давление внутри колбы. Добавьте аллийный бромид (2,02 мл, 2,3 x ^10-2 моль) и гексаметифосфорамид (HMPA) (4,43 мл, 2,5 x ^10-2 моль) через шприц объемом 5 мл.
7. Добавьте колбу 3 к колбе 1 с помощью маленькой канюли. Как только колба 3 опустеет, извлеките канюлю.
   1. Удалите как можно больше сухого льда и холодного ацетона из ванны с сухим льдом/ацетоном, в которую погружена колба 1, с помощью совка и пластикового стаканчика. Замените ацетон комнатной температуры, чтобы поднять температуру в ванне до -40 °C и дайте колбе 1 продолжить помешивание в течение 2 часов, контролируя температуру. Если температура поднимается выше -40 °C, добавьте несколько кусочков сухого льда для охлаждения ацетона.
   2. Нагрейте до -10 °C, удалив холодный ацетон и сухой лед, и замените ацетоном комнатной температуры.
8. Снимите перегородку с колбы 1 и погасите реакцию насыщенным раствором хлорида аммония объемом 150 мл при помешивании с помощью магнитной мешалки. Поместите колбу 1 в морозильную камеру при температуре -20 °C на ночь для хранения.
9. Достаньте колбу 1 из морозилки и дайте нагреться до комнатной температуры. Вылейте раствор из колбы 1 в разделительную воронку объемом 500 мл.
10. Добавьте 50 мл дихлорметана (DCM), закройте разделительную воронку и осторожно покачивайте, чтобы смешать DCM и смесь воды/ТГФ, чтобы извлечь продукт в органический слой. Соберите органический слой в стакан объемом 500 мл с магнитной мешалкой соответствующего размера, открыв запорный кран сепарирующей воронки, и отложите в сторону. Повторите два раза.
11. Соберите всю органику в одну стакан и перемешайте сульфат магния (чтобы удалить остатки воды) с помощью магнитной мешалки до тех пор, пока сульфат магния не перестанет комковаться при добавлении в раствор. Выбросьте водные отходы.
12. Удалите твердое вещество сульфата магния из раствора органического продукта с помощью фильтровальной бумаги внутри стеклянной воронки и соберите органические вещества в колбу с круглым дном объемом 250 мл. Промойте фильтровальную бумагу и твердый сульфат магния с избытком DCM, чтобы убедиться, что весь продукт собран.
13. Удалите растворитель из продукта путем ротационного испарения при нагревании до 30 °C и использовании водяного аспиратора в качестве источника вакуума.
14. Очистите сырой продукт с помощью колоночной хроматографии¹⁰ с использованием силикагеля в качестве неподвижной фазы и нанесите 3% этилацетата/гексанов на 1 объем колонки (CV), увеличивая градиент до 29% этилацетата/гексанов на 5 CV. Соберите фракции в 16 x 150 мм² пробирки из боросиликатного стекла.
15. Проведите тонкослойную хроматографию с использованием 20% этилацетата/гексанов в качестве элюента для определения фракций продукта.
16. Смешайте все фракции продукта в колбе с круглым дном соответствующего размера и удалите растворитель с помощью ротационного испарения при 40 °C. Переложите в предварительно взвешенный флакон с продуктом и поместите в высокий вакуум при 0,05 торр до получения чистого AVL. Характеристика изделия по ¹H NMR¹¹ (CDCl₃, 400 МГц): δ 5.75 (m, 1H), 5.06 (m, 2H), 4.26 (m, 2H), 2.54 (m, 3H), 2.28 (m, 1H), 2.03 (m, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.54 (m, 1H). Урожайность: 2,07 г (70,56%).

2. Синтез и характеристика VL- co- AVL

1. Высушите в огне и продуйте газообразным азотом колбу с круглым дном объемом 25 мл, оснащенную магнитной мешалкой и перегородкой.
   1. Высушите колбу пламенем для удаления влаги путем продувки газообразным азотом, соединенным через входную иглу и открытую выходную иглу в области перегородки, при этом с помощью бутановой пламени горелку аккуратно нагрейте внешнюю часть колбы, перемещая пламя по поверхности.
   2. Продолжайте нагревать всю колбу, проводя пламенем по поверхности до тех пор, пока не будет видно влаги, затуманивающей внутреннюю часть колбы. Уберите пламя и дайте колбе остыть до комнатной температуры, продолжая поток азота на протяжении всей реакции.
2. Быстро снимите перегородку с круглого дна и добавьте трифлат олова(II) (2,5 мг, 5,9 х ^10-6 моль) на самое дно колбы с помощью шпателя. Замените перегородку.
3. Добавьте 3-метил-1-бутанол (72,6 μл, 6,6 x ^10-3 моль) через микрошприц объемом 100 μл и 1,33 мл безводного DCM через шприц объемом 2 мл последовательно. Перемешивайте с помощью магнитной мешалки в течение 10 минут.
4. Добавьте AVL (0,48 мл, 3,7 x ^10-3 моль) и VL (1,37 мл, 1,4 x ^10-2 моль) последовательно с помощью шприца. Дайте продолжить перемешивание в течение 18 - 20 ч.<бр/> ПРИМЕЧАНИЕ: Процентное содержание AVL и VL в конечном сополимере может быть изменено с помощью стехиометрии на этом этапе.
5. Угасите реакцию, добавив ~5 мл метанола (MeOH). Добавьте ~100 мг жестяной поглотителя с твердой опорой и перемешивайте в течение 2 часов. Отфильтруйте с помощью гравитационной фильтрации для удаления твердых частиц.
6. Удалите растворитель при ротационном испарении с помощью водяного аспиратора в качестве источника вакуума при нагревании до 30 °C до тех пор, пока раствор не станет вязким. Осадите раствор по каплям в 500 мл холодного MeOH (охлажденного сухим льдом в течение не менее 1 ч) с образованием хлопьев белого твердого вещества. Отфильтруйте раствор с помощью вакуумной фильтрации в воронку, содержащую диск из фриттированного стекла с фильтровальной бумагой для сбора твердого вещества.<бр /> ПРИМЕЧАНИЕ: Если в результате осаждения образуется мутная надосадочная жидкость или мелкий порошок, который проходит через фильтровальную бумагу, то раствор продукта слишком разбавлен. Весь надосадочный растворитель должен быть удален путем ротационного испарения с помощью водяного аспиратора в качестве источника вакуума при нагревании до 30 °C до тех пор, пока раствор не станет вязким, а затем следует снова провести осаждение.
7. Переложите твердый продукт в предварительно взвешенный флакон с помощью шпателя и высушите в течение ночи с высоким вакуумным давлением 0,05 торр, чтобы собрать белое хлопьевидное твердое вещество.
8. Характеристика полимера по ¹Н NMR¹¹ (CDCl₃, 400 МГц): δ 5,71 (м, 1Н), 5,03 (т, 2Н), 4,08 (м, 4Н), 3,65 (т, 2Н), 2,15 - 2,50 (м, 5Н), 1,47-1,78 (м, 9Н), 0,91 (г, 6Н). 81,42% VL, 18,58% AVL, 2,940 г/моль, 578 г/моль повторяется единица AVL. Урожайность: 1,43 г, (73,43%).

3. Постполимеризационное эпоксидирование с получением единиц сополимера эпоксид-валеролактона (EVL)

1. Добавьте сополимер VL-co-AVL (500 мг, 1,7 x ^10-4 моль, 2,940 г/моль) в флакон объемом 6 драм с помощью магнитной мешалки. Добавьте во флакон 6,15 мл безводного ДКМП и вортекс для растворения полимера.
2. Добавьте метахлорпероксибензойную кислоту (mCPBA) (74,53 мг, 4,3 x ^10-4 моль) во второй флакон объемом 6 драм. Добавьте 6,15 мл безводного ДКМП и вортекс до полного растворения mCPBA><. ПРИМЕЧАНИЕ: Коэффициент превращения аллилов в эпоксиды можно варьировать, изменяя стехиометрию на этом этапе. Конечная концентрация аллила в растворителе должна составлять 0,065 М.
3. Перенесите решение mCPBA в решение VL-AVL. Закройте реакцию крышкой и накройте полиэтиленовой парафиновой пленкой. Дайте помешать в течение 48 часов.
4. Переложите реакционную смесь в разделительную воронку объемом 50 мл. Добавьте 15 мл насыщенного бикарбоната натрия, закройте разделительную воронку и осторожно перемешайте. Соберите органический слой, содержащий продукт, в колбу Эрленмейера объемом 50 мл с магнитной мешалкой соответствующего размера (колба для продукта).
   1. Добавьте 5 мл DCM в водный слой, который еще находится в разделительной воронке, крышке, а затем осторожно покачивайте. Соберите органику в колбу с продуктом. Выбросьте водные отходы. Перенесите органический слой обратно в разделительную воронку. Повторите эту водную промывку два раза.
5. Добавьте сульфат магния (для удаления остатков воды) в колбу с продуктом, помешивая на магнитной мешалке. Продолжайте добавлять небольшие мерные ложки сульфата магния, пока он не перестанет комковаться при добавлении. Используйте стеклянную воронку с фильтровальной бумагой для удаления твердого сульфата магния, переливая смесь в колбу с круглым дном объемом 50 мл.
6. Удалите растворитель путем ротационного испарения с помощью водяного аспиратора в качестве источника вакуума и нагрева при 25 °C. Переложите содержимое круглодонной колбы в предварительно взвешенный флакон с продуктом и удалите растворитель путем ротационного испарения. Поместите в высокий вакуум при 0,05 торр на ночь, чтобы получить белое воскообразное твердое вещество.
7. Характеризуем ^{по 1}H NMR¹¹ (CDCl₃, 400 МГц): δ 5,71 (м, 1H), 5,03 (t, 2H), 4,08 (m, 4H), 3,65 (t, 2H), 2,94 (d, 1H), 2,90 (s, 1H), 2,74 (s, 1H), 2,15-2,50 (m, 5H), 1,47-1,78 (m, 9H), 0,92 (d, 6H). 84,53% VL, 9,65% AVL, 5,82% EVL, 2,855 г/моль, 1,841 г/моль повторяется единица EVL. Выход: 417,3 мг, (83,46%).

4. Синтез и характеризация наногубок

1. Растворите полимер VL-co-AVL-co-EVL (200 мг, 7,0 x ^10-5 моль, 2,855 г/моль) в 20,01 мл безводного DCM для получения эпоксидной концентрации 0,0054 М. Переложите в колбу с круглым дном объемом 100 мл с горлышком 14/20><. ПРИМЕЧАНИЕ: Для катализа реакции на этом этапе можно добавить 100 мкл водного насыщенного бикарбоната натрия.
2. Поместите реакционную колбу в масляную ванну при температуре 50 °C. Быстро перемешайте раствор и добавьте 2,2'-(этилендиокси)бис(этиламин) (21,45 μл, 2,9 ^10-4 моль) через микрошприц по каплям. Установите горлышко колбы с конденсатором с водяной рубашкой, через который протекает холодная вода, оснащенный адаптером горловины 14/20, и опаривайте раствор в течение 12 часов. Обеспечьте очень плотное уплотнение между горлышком колбы и конденсатором, чтобы избежать испарения растворителя.
3. Излишки растворителя удалить из реакционной колбы путем ротационного выпаривания при температуре 25 °C до получения вязкого раствора.
4. Поместите большую магнитную мешалку в стакан объемом 2 л. Отрежьте примерно шестидюймовый участок диализной трубки с молекулярной массой 10 К (MWCO) и загните один конец, затем закройте диализным зажимом.
   1. Перенесите продукт на диализную трубку 10 K MWCO. Промойте колбу от излишков DCM и переложите ее на трубку. Сложите верхнюю часть трубки и закройте диализным зажимом, который имеет проволоку для подвешивания. Повесьте диализную трубку на боковую сторону стакана с помощью проволоки и заполните стакан DCM до тех пор, пока диализная трубка не будет полностью погружена.
   2. Поместите на магнитную пластину для перемешивания и осторожно перемешайте. Накройте стакан алюминиевой фольгой, чтобы предотвратить испарение растворителя. Удалите растворитель, вылив его в контейнер для отходов, и замените его свежим DCM три раза в день в течение 48 часов, чтобы удалить непрореагировавший полимер и сшивающий агент.
5. Удалите весь растворитель из стакана и переложите содержимое диализной трубки в шприц объемом 10 мл с фильтром из политетрафторэтилена (ПТФЭ) 0,45 мкм. Протолкните раствор через фильтр непосредственно в предварительно взвешенную пробирку с продуктом, чтобы удалить оставшиеся примеси. Удалите растворитель путем ротационного испарения при 25 °C, затем поместите в высокий вакуум при 0,05 торр на ночь, чтобы собрать светло-желтое воскообразное твердое вещество.
6. Характеризуем ^{по 1}H NMR¹¹ (CDCl₃, 400 МГц): δ 5.71 (m, 1H), 5.03 (t, 2H), 4.08 (m, 4H), 3.60-3.67 (t, 14H), 2.94 (d, 1H), 2.90 (s, 1H), 2.74 (s, 1H), 2.15-2.50 (m, 5H), 1.47-1.78 (m, 9H), 0.92 (d, 6H). Выход: 176,9 мг (88,45%).

5. ПЭМ визуализация морфологии и размера наногубки

1. Отфильтруйте 5 мл воды для клеточных культур через шприцевой фильтр из ПТФЭ 0,2 мкм.
2. Поместите 0,5 мг наногубки в центрифужную пробирку объемом 1,5 мл. Добавьте 1 мл отфильтрованной воды для клеточных культур. С помощью зондового ультразвукового аппарата (20 кГц, 40 а) ультразвуковой обработкой раствора с интервалами в 2 с 4 - 5 раз при комнатной температуре до тех пор, пока частицы не образуют тонкую суспензию. Не используйте длительную ультразвук и не позволяйте раствору нагреться, так как это приведет к агрегации.
3. Добавьте 30 мг гидрата фосфовольфрамовой кислоты (ТФК) в 1 мл отфильтрованной воды для клеточной культуры в центрифужной пробирке объемом 1,5 мл. Вихревая на максимальной настройке в течение 10 с или до полного растворения ТФК с получением 3% раствора ТФК.
4. С помощью шприца объемом 1 мл с иглой 22 G наберите 0,5 мл 3% раствора ТФК. Добавьте к частицам 4 капли 3% раствора ТФК и заведите вихрь на самой высокой настройке в течение 10 с. С помощью пары самозакрывающихся пинцетов возьмите сетку ПЭМ, а затем быстро опустите ее в раствор частиц три раза. Дайте сетке высохнуть в течение 5 часов под крышкой, чтобы уменьшить скопление пыли на решетке.
5. Выполните TEM imaging¹² образца с использованием высокой контрастности и объектива 40 мкм.

Results

Чтобы оценить связь между параметры синтеза nanosponge и полученный размер, концентрации и кулон функциональность каждого прекурсор полимера имеет важное значение. В Рисунок 1successfulsynthetic схема nanosponges осуществляется в условиях рефлюкса после включения как прекурсор полимера и диамин сшивателя в DCM для 12 h. Концентрация Эпоксиды в решении также имеет решающее значение для формирования дискретных частиц. После того, как были синтезированы nanospon...

Discussion

В приложениях доставки наркотиков важно Получение воспроизводимых nanosponge размеров. Несколько параметров в полимеризации и nanosponge синтеза влияет на размер и crosslink плотность результирующего частицы. В нашем анализе были определены три важных параметров: молекулярная масса полимера, эпоксид Кулон функциональность и сшивателя эквиваленты. Чтобы производить широкий спектр молекулярным весом и эпоксид функционалом для синтеза nanosponge, стехиометрии ВЛ -co -AVL сополимера должны быть изменены. Концентраци...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2'-(этилендиокси)бис(этиламин)	Sigma-Aldrich	385506-100ML
3-метил-1-бутанол	Sigma-Aldrich	309435-100ML	безводный, ≥ 99%
Ацетон	Sigma-Aldrich	179124-4L
Аллилбромид	Sigma-Aldrich	A29585-5G	≥ 99%
хлорид аммония	насыщенный раствор Fisher Scientific	A661-500	в воде DI
Вода для клеточных культур	Sigma-Aldrich	W3500-500ML	Фильтрованный через 0,45 μ м шприц фильтр
Дихлорметан (DCM)	Sigma-Aldrich	270997-100ML	безводный, ≥ 99%, содержит 40 - 150 ppm амилена в качестве стабилизатора
этилацетата	Fisher Scientific	E145SK-4
EZFlow 0,2 мкм; m Шприцевой фильтр	Foxx Life Sciences	386-2116-OEM	Гидрофильный ПТФЭ, 13 мм
EZFlow 0,45 μ m Шприцевой фильтр	Foxx Life Sciences	386-3126-OEM	Гидрофильный ПТФЭ, 25 мм
Одноразовые пробирки из боросиликатного стекла Fisherbrand с гладким концом	Fisher Scientific	14-961-31
Микроцентрифужные пробирки Fisherbrand	Fisher Scientific	14-666-318	1,5 мл
Микролитровый шприц Hamilton, 100 μ L	Hamilton Company	80600	Model 710 N SYR, Цементированный NDL, 22s ga, 2 дюйма, тип 2
гексаметилфосфорамида	Sigma-Aldrich	H11602-100G	≥ 99%, содержит≤ 1,000 ppm Оксид пропилена в качестве стабилизатора
Гексаны	Fisher Scientific	H292-4
Сульфат магния безводный	Fisher Scientific	M65-500
Метахлорпероксибензойная кислота	Sigma-Aldrich	273031-100G	Очищенный до ≥ 99% с помощью буферной промывки
Метанол (MeOH)	Sigma-Aldrich	322415-100ML	безводный, ≥ 99%
N-бутиллитиевый раствор	Sigma-Aldrich	230707-100ML	2,5 М в гексанах
N,N-диизопропилэтиламин	Sigma-Aldrich	550043-500ML	≥ 99%
Парапленка M	Sigma-Aldrich	P7793-1EA
PELCO Pro Реверс (самозакрывающийся) пинцет	Ted Pella, Inc.	5375-NM
Гидрат фосфовольфрамовой кислоты	Alfa Aesar	40116
Q55 Sonicator	Qsonica	Q55-110	55 Вт, 20 кГц
SiliaMetS Cysteine	Silicycle	R80530B-10 г
Зажимы для диализа SnakeSkin	Thermo Scientific	68011
Трубка для диализа SnakeSkin, 10K MWCO	Thermo Scientific	68100
Гидрокарбонат натрия	Fisher Scientific	5233-500	насыщенный раствор в воде
DI TEM grid Ted	Pella, Inc.	01822-F	Ультратонкий углерод типа A, 400 меш, медь, размер отверстия в сетке: 42 и микро; m
Тетрагидрофуран (ТГФ)	Сигма-Олдрич	401757-1L	Безводный, ≥ 99,9%, без ингибитора
трифторметансульфонат олова(II)	Sigma-Aldrich	388122-1G
Vortex-Genie 2	Scientific Industries	SI-0236
Ватман фильтровальная бумага, Класс 1	Fisher Scientific	09-805H	Круги, 185 мм
&дельта;-валеролактон	Sigma-Aldrich	389579-100ML	Очищен вакуумной дистилляцией