В естественных условиях Assay для обнаружения антиген специфические Т-лимфоцитов цитолитического функции с помощью вакцинации модели

Cara L. Haymaker; Yared Hailemichael; Yi Yang; Roza Nurieva

doi:10.3791/56255

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

В естественных условиях Assay для обнаружения антиген специфические Т-лимфоцитов цитолитического функции с помощью вакцинации модели

9.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/56255

⸱

28 ноября 2017 г.

Cara L. Haymaker^*¹ , Yared Hailemichael^*¹ , Yi Yang²^,³ , Roza Nurieva²

¹Department of Melanoma Medical Oncology, University of Texas MD Anderson Cancer Center, ²Department of Immunology, University of Texas MD Anderson Cancer Center, ³Department of Radiation Oncology, The Second Hospital of Jilin University

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Целью настоящего Протокола является возможность для обнаружения в vivo антиген специфические убийство из целевой ячейки в мышиных модели.

Аннотация

Текущей методологии антиген специфические убийство ограничены для использования в пробирке или использованы в модели инфекционных заболеваний. Однако это не протокол, специально предназначенные для измерения антиген специфические убийство без инфекции. Этот протокол разработан и описывает методы, чтобы преодолеть эти ограничения, позволяя для обнаружения антиген специфические убийство из целевой ячейки, CD8⁺ T-клеток в vivo. Это достигается путем слияния с традиционной CFSE-меченых целевого убийства пробирного модель вакцинации. Эта комбинация позволяет исследователю оценить потенциал CTL антиген специфические прямо и быстро, как assay не зависит от роста опухоли или инфекции. Кроме того индикация основана на проточной цитометрии и поэтому должно быть легко доступной для большинства исследователей. Главное ограничение этого исследования является определение timeline в естественных условиях , соответствующий гипотеза тестируется. Вариации численности антигена и мутации в Т-клеток, которые могут привести к дифференциальной цитолитических функции необходимо тщательно оценивать определить оптимальное время для клеток урожай и оценки. Соответствующей концентрации пептидные для вакцинации был оптимизирован для hgp100_25-33и OVA_257-264, но потребуются дополнительные проверки для других пептидов, которые могут быть более подходящим для данного исследования. В целом этот протокол позволяет быстро оценки убийстве функции в естественных условиях и может быть адаптирована к любой данной антигена.

Введение

Множественные протоколы существуют для оценки цитолитических (CTL) потенциал CD8⁺ или CD4⁺ Т-клеток. Эта оценка может быть легко сделано в пробирке в контролируемых условиях¹^,²^,³. Кроме того, модели инфекционных заболеваний, таких как LCMV, классически изучили CTL функции с использованием дифференциально CFSE (5-(and 6)-Карбоксифлуоресцеина диацетата succinimidyl эфира) помечены клетки-мишени где CFSE^Привет-помечены клетки пульсирующий с пептида и CFSE^Ло-обозначенные цели, клетки остаются unpulsed. Клетки затем вводят в соо....