В этом исследовании мы представляем простой и эффективной процедуры оценки нарушения blood - brain барьер нейродегенеративных условиях. Для достижения нашей цели, мы проникнуты высокомолекулярного флуоресцеин Изотиоцианаты маркировку (FITC)-альбумина в мыши яремной вены и оценку его утечки в паренхиме мозга микроскопии флуоресцирования.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Оценка проницаемости гематоэнцефалического барьера путем внутривенного вливания FITC-меченых альбумина в мышиной модели нейродегенеративные заболевания
В этой статье
Уведомление об исправлении
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Краткое содержание
Аннотация
Нарушение целостности гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) является общей особенностью для различных неврологических и нейродегенеративных заболеваний. Хотя взаимодействие возмущенных BBB гомеостаза и патогенез расстройств головного мозга требует дальнейшего расследования, разработки и проверки надежные процедуры точно обнаруживать изменения BBB может иметь решающее значение и представляют собой полезный инструмент для потенциально прогноза болезни прогрессирования и развития целевых терапевтических стратегий.
Здесь мы представляем простой и эффективной процедуры для оценки утечки BBB в состоянии нейродегенеративных подобное происходит в доклинических мыши модели болезни Гентингтона, в котором дефекты проницаемости BBB четко обнаруживаются благосклонностью в болезнь. В частности, высокой молекулярной массой флуоресцеин Изотиоцианаты маркировку (FITC)-альбумин, который способен пересечь BBB только тогда, когда последний нарушается, остро проникнуты в яремной мышь и ее распространение в районах сосудистой или Паренхиматозный Затем определяется микроскопии флуоресцирования.
Накопление Зеленый флуоресцентный-альбумина в паренхиме мозга функционирует как индекса проницаемости аберрантных BBB и, когда предел с помощью программного обеспечения для обработки изображений J, сообщается как зеленый интенсивности флуоресценции.
Введение
Гомеостаз в пределах центральной нервной системы (ЦНС) является необходимым условием для надлежащей коммуникации и функции клеток-нейронов. Паренхима ЦНС плотно запечатан от периферии эндотелиальной гематоэнцефалический барьер (ГЭБ), который представляет собой интерфейс между периферической крови и мозг и играет ключевую роль в кросс разговор между этими двумя районами1 ,2. BBB – это комплекс и динамических трехмерной структуры в основном состоит из специализированных микро судно эндотелиальных клеток (ECs) связаны друг с другом через межклеточное соединительной комплексы - плотные соединения (сомони) - и окр....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
все процедуры на животных были утверждены Правлением IRCCS Neuromed животное уход обзор и по " Istituto Superiore ди Sanita " (номер разрешения: 1163/2015-PR) и были в соответствии с руководящими принципами ЕС Директива 2010 / 63/ЕС для экспериментов животных.
1. Подготовка FITC-альбумина раствор для инъекций в яремной
Примечание: все эксперименты были управления осуществляется в манифеста (11 - неделя старый) HD R6/2 мышей и в возрасте и соответствием пола одичал тип (WT) Однопометники.
- Растворяют FITC-альбумин порошка (см. Таблицу материалы) в-фосфатный буфер (PBS) на 10 мг....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Надлежащего вливание FITC-альбумина в яремной результаты в кровоподтек зеленой флуоресценцией трассировщик из крови в мозг parenchymawhen, та BBB скомпрометированы6. В физиологических условиях, проникнуты флуоресцентные альбумина рассылается внутри кровеносных сосудов мозга и нет сигнала в окружающие области и/или мозга паренхиме периваскулярной обнаружению (рис. 1A, микроскопии на сверху). И наоборот когда BBB скомпрометирован нейро п.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Техника, которую мы опишем здесь главным образом полезен для обнаружения утечки BBB условиях болезнь мозга. BBB дисфункции завоевывает внимание как общей чертой различных неврологических расстройств4. Ранее мы использовали этот подход для описания ранних расстройство BBB целостности в мышиной модели редкие нейродегенеративные заболевания как HD6.
Этот метод принимает преимущество относительной простоты и эффективности процедуры, которая обеспечив.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют никаких конфликтов интересов раскрывать
Благодарности
Эта работа была поддержана «Fondazione Neuromed» и финансируется министерством здравоохранения «Ricerca Corrente» для в.м. Италии
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Альбумин-флуоресценцина изотиоцианат конджиугат | SIGMA | A9771-100MG | |
| pAb анти-ламинин | Novus Biologicals | NB300-144 | |
| CY3 анти-кролик изготовлен из | козы MILLIPORE | AP132 | |
| SUPERFROST PLUS | Thermo Scientific | J1800AMNZ | |
| чехол 24 x 50 мм | Thermo Scientific (DIAPATH) | 61050 | |
| Kilik Оптимальная температура резки (ОКТ) компаунд | Bio Optica | 05-9801 | |
| VECTASHIELD Монтажный материал | VECTOR | H-1500 | Монтажный материал с DAPI |
| iNSu/Light Инсулин Одноразовый шприц | RAYS Здоровье и Безопасность | INS1ML26G13 | |
| 30G 1/2" | BD Microlance | 304000 | Игла для инсулина одноразовый шприц |
| Ручка скальпеля | F.S.T.91003-12 | ||
| #22 Одноразовые скальпельные блады | F.S.T. | 10022-00 | |
| Ножницы Fine Iris 10,5 см | F.S.T. | 14094-11 | |
| Щипцы Dumont #5745 45° 0,10 x 0,06 мм | F.S.T. | 11251-35 | |
| Щипцы Грефе 10 см | F.S.T. | 11051-10 | |
| Щипцы Dumont #5 0.1 x 0.06 мм | F.S.T. | 11251-20 | |
| Пластырь медицинский | Medicalis | 34788 | |
| Простыня одноразовая стерильная | Dispotech | TVO50VE | |
| Стереоскопический микроскоп | NIKON | SMZ 745 T | |
| Оптический осветитель светодиодный (C-FLED2) | NIKON | 1003167 | Оптический осветитель для стереоскопического микроскопа |
| Eclipse Ni-U Микроскоп | Nikon | 932162 | Эпифлуоресцентный микроскоп |
| Микроскоп цифровой фотоаппарат | Nikon | DS-Ri2 | Микроскоп фотоаппарат |
| Intenslight | Nikon | C-HGFI | Микроскоп |
| лампа NIS-Elements 64 бит | Nikon | AR 4.40.00 | Программное обеспечение для анализа |
| Электрическая бритва | Gemei | GM-3007 |
Ссылки
- Obermeier, B., Verma, A., Ransohoff, R. M. The blood-brain barrier. Handb Clin Neurol. 133, 39-59 (2016).
- Serlin, Y., Shelef, I., Knyazer, B., Friedman, A. Anatomy and physiology of the blood-brain barrier. Semin Cell Dev Biol. 38, 2-6 (2015).
- Moretti, R., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Исправление
Formal Correction: Erratum: Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease
Posted by JoVE Editors on 11/10/2017. Citeable Link.
An erratum was issued for: Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease. One of the author's names was corrected from:
Maglione Vittorio
to:
Vittorio Maglione
