Чип основе трехмерной клеточной культуре в перфузии Микро-биореакторы

Summary

Мы описываем чип-платформы для трехмерного культивирования клеток в микро-биореакторов. Один чип может вмещать до 10 мил. клеток, которые можно выращивать в точно определенных условиях в связи с потоком жидкости и т.д. напряжения кислорода в стерильной, замкнутый контур циркуляции.

Abstract

Мы разработали чип основе клеточной культуры система трехмерного выращивания клеток. Чип, как правило, изготовлены из не-биоразлагаемых полимеров, например, поликарбоната или полиметилметакрилата микро литья под давлением, микро горячего тиснения или микро горячего формования. Но, он также может быть изготовлен из биоразлагаемых полимеров. Его габаритные размеры составляют 0,7 1 х 20 х 20 х 0,7 1 мм (ВxШxД). Основные особенности чипы, используемые либо сетки до 1156 кубических микро-контейнеры (CF-чип), каждая размером 120-300 х 300 х 300 μ (ВxШxД) или круглые углубления диаметром 300 μ и глубины в 300 μ (г-чип). Эшафот можно разместить 10 млн.. клеток в трехмерной конфигурации. Для оптимального питательного и газоснабжения, чип вставляется в биореакторе жилья. Биореактор является частью замкнутого контура циркуляции стерильные, что в простейшей конфигурации, дополнительно состоит из насоса ролика и средний резервуар с газом. Биореактор может быть запущен в перфузии, superfusion, или даже в смешанном режиме эксплуатации. Мы успешно культивируемых клеточных линий, а также первичные ячейки над периодами в несколько недель. Для крыс первичных клеток печени, мы могли бы показать сохранение органотипической функции в течение более 2 недель. Для линий гепатоцеллюлярной карциномы ячейки мы могли бы показать индукцию печени специфических генов нет или незначительно выраженных в стандартной культуры монослоя. Система также может быть полезна как выращивание стволовых клеток системе, так как первые опыты дифференцирование стволовых клеток были многообещающими.

Protocol

Эта статья описывает использование чип-платформы (рис. 1) для трехмерного выращивания клеточных линий, а также первичные ячейки. Так как многие клетки выразить органотипической функции только в 3D-среде, мы разработали чип полимера, который обеспечивает эшафот которой клетки могут придерживаться во всех пространственных направлениях, и которые могут быть установлены в биореакторе жилья для контроля потока жидкости , напряжения кислорода и т.д. В зависимости от экспериментального проектирования поверхности полимера могут быть изменены различными методами, например, УФ-облучение, PECVD, γ-прививкой или обычной мокрой химии.

Discussion

Мы разработали чип-платформы для трехмерного выращивания клеток в активное перфузии микро биореакторов. Чипы могут быть изготовлены из не поддающихся биохимическому разложению, а также биоразлагаемых полимеров методом микро литья под давлением, горячее тиснение, а также микро термоформования методы ^3. В зависимости от экспериментального проектирования поверхности полимера может быть изменен УФ-облучение ^4. Гепатоцитов клеточных линий, а также первичные гепатоциты крысы могут успешно культивируется в этих устройствах, к.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Клетки	Другие	ATCC	HB-8065
Коллаген I из крысиного хвоста	Реагент	Roche Группа	11 179 179 001
ПАРИЖСКИЙ набор	Реагент	Ambion	AM1921
Syto16	Реагент	Invitrogen	S7578
антицитокератин 18	Антитело	Abcam	ab668	Первичный Ab, мышь моноклональный, используется 1/100 в PBS
Anti E-cadherin Anti E-cadherin	Antibody	Abcam	ab1416	Primary Ab, мышиный моноклональный, используется 1/50 в PBS.
Реактив против альбумина козы		Bethyl Laboratories	E80-129	Первичный Ab, козий античеловеческий альбумин, используется 1/200 в
PBS Rabbit anti-mouse IgG1	Антитело	Invitrogen	A11059	Вторичный Ab, Alexa Flour 488 конъюгированный, используется 1/100 в PBS + 0,5 % BSA
Cy3 антикозий IgG	Реагент	Jackson ImmunoResearch	705-165-003	Cy3 AffiniPure осел а-коз IgG Ab, используется 1/700 в PBS + 0,5% BSA