Методическая статья

Ищет пути водитель приобрела устойчивость к таргетной терапии: лекарственно Subclone поколения и чувствительность, восстановление генов нокдаун

DOI:

10.3791/56583

⸱

11 декабря 2017 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Biosciences Laboratory, Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) IRCCS, 2Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) IRCCS

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это время - и экономичным в vitro протокол, изучение механизмов приобретенных сопротивление целевых терапевтических агентов, который является весьма неудовлетворенный медицинского управления рака.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В последние два десятилетия стали свидетелями перехода от цитотоксических препаратов для целенаправленной терапии в медицинской онкологии. Хотя целевых терапевтических агентов показали более впечатляющим клинической эффективности и минимизация побочных эффектов, чем традиционные методы лечения, лекарственной устойчивости стал основным ограничением для их преимущества. Были разработаны несколько доклинических/в пробирке/в естественных условиях модели приобретенных сопротивления целевых агентов в клинической практике главным образом с помощью двух стратегий: i) генетические манипуляции для моделирования генотипов приобретенных сопротивления, и ii) в пробирке / в естественных условиях выбор устойчивых моделей. В настоящей работе мы предлагаем объединяющей основы, для изучения основных механизмов, ответственных за приобретенные сопротивление целевых терапевтических агентов, начиная от поколения лекарственно-клеточных subclones к описанию глушителей процедуры, используемые для восстановления чувствительности к ингибитор. Этот простой времени и экономичным подход широко применяется и может быть легко расширена для изучения механизмов сопротивления для других целевых лечебных препаратов в различных опухолевых histotypes.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Вслед за важнейших открытий в области молекулярной и клеточной биологии, был разработан ряд Роман синтезированных молекул противораковые выборочно целевой онкогенные сигнальные пути в широкий спектр типов опухолей. В частности две категории целевых терапевтических агентов с уникальными свойствами в онкологии, а именно синтетические химические соединения и рекомбинантного моноклональные антитела, известны достигли клинических успехи и значительно изменены рака уход в последние десятилетия1,2,3.

Тем не менее несмотря на их впечатляющие первоначальный ответ на лечение, большинство больных раком разработали лекарственной устойчивости для всех целевых терапевтических агентов, моноклональных антител и ингибитора киназы. Как следствие лекарственной устойчивости, основным препятствием для4классические противораковых лекарств, по-прежнему является большой проблемой для новых целевых терапии5,6.

Сопротивление для целенаправленной терапии может быть внутренней (то есть, основной) или приобретенных (т.е., среднее). Внутренние сопротивления описывает de novo , отсутствие ответа на терапию, тогда как среднее сопротивление происходит после периода ответ наркотиков лечения7. Последний вызванных вспышки небольшой когорты опухолевых клеток в основную часть примитивные опухоли или расположенный в дистальной загадочные анатомические нишах, экспонирования до 90% сопротивление одного или более целевых терапевтических агентов. Молекулярные механизмы, лежащие в основе развития резистентности к таргетной терапии главным образом в результате мутации гена целевой и избыточных активация других про выживание сигнальных путей, чьё понимание все еще далека от полной8.

В этой работе мы предложили времени и экономичным подход к расследованию в vitro механизмы приобретенных сопротивления целевых терапевтических агентов, начиная от поколения лекарственно-клеточных subclones к описанию глушителей процедуры, используемые для восстановления чувствительности к ингибитор, одним из важнейших инструментов, используемых для тестирования и проверки рабочей гипотезы. В частности наш подход был использован для расследования, в рак желудка, сопротивление механизмы (например, Герцептин), трастузумаб гуманизированные моноклональные антитела против внеклеточного домена белок HER29. Трастузумаб + химиотерапии широко признается как стандарт первой линии лечения для HER2-позитивных метастатическим раком молочной железы. Благодаря последние доклинические исследования, показывающие, что анти HER2 терапии имеют значительную активность в обоих в пробирке и в естественных условиях HER2-положительным раком желудка моделей10,11, молекулярной ориентации HER2 наркотиков были подробно рассмотрены в клинических испытаниях, некоторые из которых еще продолжаются, на больных с гастроэзофагеальной рака12,13,14,15.

Эти исследования подчеркивается рост числа пациентов, которые испытывают сопротивление трастузумаб16, подобно к что характерно для других целевых терапевтических ингибиторов. В частности ответ трастузумаб составлял 47%, а средний общей выживаемости пациентов на трастузумаб + химиотерапии был только 2.7 месяца дольше, чем для пациентов химиотерапия только17. Это свидетельствует о том, что хотя преобладает первичной трастузумаб сопротивление, сопротивление вторичной трастузумаб неизбежна. По этой причине существует настоятельная необходимость уточнить механизмы, вызывая HER2-целевой терапии сопротивление в рак желудка, которая еще более проблематичным, учитывая интра опухолевой генетической гетерогенностью данного неоплазии18.

Кроме того механизмы сопротивления трастузумаб в рак желудка оказались сложно объяснить, частично из-за трудностей в получении надежных доклинических моделей представитель этого состояния. Осима et al. сообщили в естественных условиях выбора метода трастузумаб стойкие рака желудка клеточных линий, состоящий из повторяющихся культуры малых остаточных перитонеальных метастазов после лечения с трастузумаб19. Однако необходимость корпуса, конкретных животных обработки знаний и одобрения Комитета по этике животных способствовали его времени и стоимости метод. Подход, который мы расскажем в этой работе является простым и широко применимы и может быть легко расширена для изучения механизмов сопротивления для других лечебных препаратов в различных опухолевых histotypes20.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Примечание: Этот протокол специально настроен для анализа механизмов, лежащих в основе приобретенных сопротивление трастузумаб HER-положительным раком желудка клеточных линий. Все лабораторные инструменты сообщается в Таблице материалов.

1. поколение целенаправленной терапии устойчивостью Subclones

Примечание: Это наиболее критический и трудно стандартизировать шаг в протоколе, с тем, что различных клеточных линий могут демонстрировать различные чувства в целевых терапевтических ингибитор независимо от их опухоли histotype или наркотиков концентрации используется.

  1. Культура клеток NCI-N87 линия в среде RPMI, дополненная плода телячьей сыворотки (10%) и глютамин (2 мм, 1%), как монослоя при 37 ° C и семени его на 25 см2 культуры колбы.
  2. Добавьте на носитель культуры в каждом колбе 10 мкг/мл трастузумаб как стартовая доза. Разоблачить клетки в начальной дозе до тех пор, пока они возобновить рост.
    Примечание: Начальная доза ингибитора таргетная терапия должна быть в 10 раз ниже, чем его пик концентрации в плазме. Пик концентрации в плазме является высокий уровень концентрации препарата в крови пациента обычно после нескольких доз стандартной терапии. Это значение можно получить из исследования фармакокинетики.
  3. Контролировать рост клеток с методом исключения Трипановый синий; При возобновлении роста клеток (обычно после периода от двух до трех недель) предоставляют клетки в 10 раз выше концентрации дозы трастузумаб.
  4. Разоблачить клетки постепенно увеличивая дозу трастузумаб (от 100 мкг/мл до 400 мкг/мл) до клетки держать растущий (примерно через 2 недели), несмотря на наличие наркотиков высокой концентрации (по крайней мере 2,5 - 4 раза выше, чем пик плазмы).
  5. Выполните колониеобразования пробирного оценить уровень сопротивления для целенаправленной терапии на каждое изменение концентрации ингибитора целевой терапии в среде культуры и определить относительную устойчивость IC50 индекс (ОР IC50) следующим образом.
    1. Семя 500 клеток в 24 несколькими хорошо культуры пластин.
      Примечание: 5 скважин должны быть готовы для каждого состояния набора.
    2. Подвергайте увеличение концентрации ингибитора (трастузумаб) целевой терапии клетки от 100 мкг/мл до 400 мкг/мл.
    3. Инкубируйте клетки в инкубатор CO2 при 37 ° C на 15 дней.
    4. После инкубации исправить и пятен образцы следующим образом.
      1. Удаление средних и промыть клетки с PBS 1 x 10 мл. Удаление ПБС и добавить 2-3 мл раствора фиксации (уксусной кислоты: метанол, 1:7, (vol/vol)). Удаление решения фиксации и добавить 0,5% раствор Фиолетовый Кристалл. Инкубации при комнатной температуре на 2 ч
      2. Тщательно удалите решение Фиолетовый Кристалл, аспирационных с пипеткой и погрузить плиты в водопроводной воды, чтобы смыть остатки раствора Фиолетовый Кристалл. Просушите при комнатной температуре до 2 дней.
    5. Граф колонии более чем 50 клеток с помощью инвертированного микроскопа (4 X увеличение).
      Примечание: Для этого необходимы два независимых наблюдателей.
    6. Вычислить RR IC50 как соотношение между значением50 IC целевой терапии-устойчивых к subclone клеток и значения ячеек оригинал/наивными.

2. Проверка протокола для кандидата целевой терапии сопротивление ген (R-гена)

Примечание: После характеристика экспрессии генов, подписи связанные с приобретенных сопротивление целевой терапии и любой кандидат ген как водитель сопротивления будут расследоваться через: RT-PCR) и b) западного анализа помаркой.

  1. RT-ПЦР в реальном времени
    1. Извлечение всего РНК из клеточных линий, с помощью кислоты Гуанидиновые тиоцианат фенол хлороформ смеси (см. Таблицу материалы).
    2. Выполнение обратной транскрипции (RT) реакции с использованием случайных hexamer грунты и установите тепловая велосипедист следующим: грунтовка при 25 ° C за 5 мин, RT на 46 ° C в течение 20 мин и инактивации RT на 95 ° C в течение 1 мин.
    3. Использование 400 нг всего РНК реакции 20 мкл. Подготовьте смесь реакции для образца следующим: 7 мкл РНКазы бесплатно H2O 2 мкл cДНК (10 нг/мкл), 1 мкл 20 x помечены флуоресцентных зондов целевой объект специфического и 10 мкл 2 x Mix содержащие буфер, дНТФ и ДНК-полимеразы (см. Таблицу материалы).
    4. 20 мкл реакционной смеси каждый хорошо пластины и запустите следующую программу: проведение этапа при 50 ° C на 2 мин., на 95 ° C в течение 10 мин (1 цикл); затем в 40 циклов при 95 ° C 15 s и при 60 ° C за 1 мин.
  2. Западная помарка
    1. Восстановите клеточных суспензий, добавив 2 мл 0,05% раствора трипсина/ЭДТА и позволяя 2-3 мин для трипсина работать.
    2. Добавьте 2 тома средних содержащий 10% плода бычьим сывороточным нейтрализовать трипсина (например, 2 мл среды для каждого 1 мл трипсин) и центрифуги на 1200 x g для 5 минут удалить супернатант и вымыть клетки с холодной ПБС.
    3. Центрифуга на 1200 x g 5 минут и удалить супернатант. Ресуспензируйте клетки лепешка с буфера lysis и инкубировать на рокер на 4 ° C на 30 мин.
      1. Объем буфера lysis зависит количество клеток (например, 100 мкл для 1 х 106 клеток); Убедитесь, что готовить свежие литического буфера каждый раз. 1 мл препарата буфера lysis (отпуск на льду): используйте 975 мкл М-за млекопитающих lysate буфер, 15 мкл ингибиторы протеазы и фосфатазы и 10 µL 100 мкм PMSF ингибиторов.
    4. Восстановите супернатанта белка центрифугированием lysate клетки на 13 000 x g при 4 ° C на 15 мин.
    5. Определите концентрацию белка, используя assay протеина BCA.
    6. Добавьте 4 x буфер Лэмли образца образцы протеина (по крайней мере 20-30 мкг белка) и тепла при 100 ° C на 3 мин.
    7. Использование сборного 4-20% гели и загрузить 20-30 мкг Лэмли белка раствора и 5-10 мкл белка стандарта на сэмпл.
    8. Заполните иммуноблоттинга кольцо с буфера TRIS/GLICYNE /SDS 1 x и Побегите гель на 110 V за 30-60 мин (когда время останавливается, убедитесь, что краска достиг конца геля, в противном случае баллотироваться на несколько дополнительных минут)
    9. Electroblot для передачи белка в PVDF мембрану (см. Таблицу материалы) с помощью полусухие системы.
    10. Блокировать мембраны путем замачивания в решении соответствующих белков (5% молока/BSA) шейкер при комнатной температуре за 1 ч.
    11. Сделайте раствор 1: 400 с основного антитела анти IQGAP1 в 5% растворе молока (см. Таблицу материалы).
    12. Место мембрану в раствор первичных антител на шейкер в холодной комнате на ночь.
    13. На следующий день, удалить раствор антител и Замочите в растворе T-TBS 1 x (1 x T-TBS: 1 х добавлен физиологический буфера Tris Tween20 0,1%) на шейкер при комнатной температуре за 7 мин.
    14. Отказаться от T-TBS 1 x решения и заменить. Повторите 3 раза.
    15. Сделать мэм раствор вторичных мыши антител, добавив антитела для стандартной западной помарки обнаружения (см. Таблицу материалы) и мембраны на шейкер; Оставьте при комнатной температуре в течение 2 ч.
    16. Отменить раствор антител и Замочите в растворе 1 x T-TBS на шейкер при комнатной температуре за 7 мин.
    17. Отказаться от T-TBS 1 x решения и заменить. Повторите 3 раза.
    18. Замочите мембрана для 5 минут в растворе хемилюминесцентный и изображение мембраны на тепловизор хемилюминесценции.

3. Восстановление целевой терапии ингибитором чувствительность, кандидат R-генов нокдаун

  1. Подготовка клетки
    1. Подготовьте одну ячейку подвеска, trypsinization. Выполняют трансфекции в день, что покрытие клетки.
      1. Вымойте NCI-N87 клетки с PBS и инкубировать при 37 ° C с 0,05% раствор трипсина/ЭДТА на 5-10 минут добавить 2 объем RPMI средних содержащий 10% плода бычьим сывороточным для нейтрализации трипсина (например, 2 мл среды для каждого 1 мл трипсин).
      2. Подсчет количества ячеек с Горяева, с помощью окрашивания Трипановый синий. Семян 2,5 x 105 клеток (60% слияния) на колбе T25 см2 для каждого условия.
        Примечание: Соответствующее количество клеток для заполнения определяется время удвоения клеток линии и продолжительность эксперимента. Цель заключается в достижении целевых генов нокдаун для всей продолжительности эксперимента. Девять T25 см2 фляги идеальны для transfection условий и пробирного колониеобразования (3 колбы для элементов управления, 3 колбы для отрицательных трансфекции элементов управления, 3 колбы для transfection ген целевой).
  2. Обратный Трансфекция
    1. Подготовить ген целевой и негативные управления трансфекции смесь для каждого T25 см2 настой следующим.
      1. Разбавьте 12,5 мкл каждого олигонуклеотиды гена ориентации малых интерферирующих РНК или отрицательный контроль siRNA олигонуклеотиды в среде минимальным необходимым трансфекции (соотношение 1:55; см. Таблицу материалы).
      2. Добавление реагента трансфекции Катионный липосомы (соотношение 1:1 с олигонуклеотиды гена таргетинг siRNA; см. Таблицу материалы). Инкубации при комнатной температуре в течение 20 мин.
        Примечание: Общий объем трансфекции смеси составляет 700 мкл.
      3. Мкл 700 трансфекции смеси для каждой T25 фляга2 см. Инкубируйте клетки при 37 ° C 1-3 дней.
    2. Проверка генов нокдаун RT-PCR и Западный анализ помаркой. Перепроверить воздействия предполагаемого R-Джин НОК Даун на восстановление чувствительности целевой терапевтического агента через эксперименты формирования колонии (повторите шаг 1.5).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Рисунок 1 излагаются основы экспериментальной процедуры. Три рака желудка-линии клетки выражая высокий уровень HER2 и чувствительны к трастузумаб (IC50 < пик плазменный уровень препарата, рисунок 2A, левый график) были выращены в питательной среды, содержащей целевой терапевтический агент. Дозы в 10 раз ниже, чем пик концентрации в плазме по трастузумаб (10 мкг/мл) был задать в качестве начальной дозы и постепенно у...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В то время как персонализированные и целевой терапии вызвали рост энтузиазм, эти так называемые «умные» терапии лицом же главным препятствием как традиционных химиотерапевтических препаратов, т.е., быстрых и непредсказуемых приобретение лекарственной устойчивости. Чтобы улучшить результаты таргетной терапии, лекарственной устойчивости проблемы должны решаться путем лучшего понимания механизмов, которые вызывают их. Здесь мы представили широко доступны в vitro методологии для изучения механизмов приобрет...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы поблагодарить д-р Вероника Занони для редактирования рукопись.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
РеагентТризол Инвитроген15596026Реагент ТРИзол — это реагент для выделения высококачественной общей РНК или одновременного выделения РНК, ДНК и белка из различных биологических образцов
НАБОР ДЛЯ СИНТЕЗА КДНК ISCRIPTBio-Rad1708891Набор для синтеза кДНК iScript — это чувствительный и простой в использовании набор для синтеза кДНК первой нити для анализа экспрессии генов с помощью количественной ПЦР в реальном времени.
Анализ экспрессии генов TaqManот Life Technologies4331182Applied Biosystems Анализ экспрессии генов TaqMan состоит из пары немеченых ПЦР-праймеров и зонда TaqMan с меткой красителя Applied Biosystems FAM или VIC на 5'-конце и связывающим минорную канавку (MGB) и нефлуоресцентным гасителем (NFQ) на 3'-конце.
Реагент для экстракции белка млекопитающих M-PERThermo Scientific78501Реагент для экстракции белка млекопитающих M-PER предназначен для обеспечения высокоэффективной экстракции общего растворимого белка из культивируемых клеток млекопитающих.
Коктейль ингибиторов протеазы и фосфатазы Halt (100X)Коктейльпротеаз и ингибиторов фосфатазы Thermo Scientific 78440 Thermo Scientific Halt (100X) обеспечивает удобство одного раствора с полной защитой образца белка для лизатов клеток и тканей.
Набор для анализа белка Pierce BCAThermo Scientific23225Набор для анализа белка Pierce BCA от Thermo Scientific представляет собой двухкомпонентный, высокоточный, совместимый с моющими средствами набор реагентов для измерения (A562nm) общей концентрации белка по сравнению со стандартным белком.
4x Laemmli Sample BufferBio-Rad1610747использовать 4x Laemmli Sample Buffer для подготовки образцов для SDS PAGE. Для обжатия образцов добавьте восстановитель, такой как 2-меркаптоэтанол, в буфер перед смешиванием с образцом.
4– 20% Mini-PROTEAN TGX Precast Protein GelsBio-Rad456-1094Long-life TGX (Tris-Glycine eXtended) Гели имеют новую формулу и могут использоваться как для стандартного разделения денатурирующих белков, так и для нативного электрофореза.
Прецизионный плюс белок WesternC Blotting StandardsBio-Rad1610376Precision Plus Protein Prestained Standards доступны в форматах Dual Color, All Blue, Kaleidoscope и Dual Xtra. Все четыре имеют одинаковые схемы миграции геля с 3 референсными полосами высокой интенсивности (25, 50 и 75 кДа).
10x Tris/Glycine/SDSBio-Rad161073210x Tris/glycine/SDS - это предварительно смешанный беговой буфер для разделения образцов белка от SDS-PAGE.
Trans-Blot Turbo Mini PVDF Transfer PacksBio-Rad1704156Trans-Blot Turbo Mini PVDF Transfer Packs для быстрого и эффективного переноса белков из мини-гелей с использованием Trans-Blot Turbo Transfer System. Каждый готовый к использованию термосвариваемый трансферный пакет содержит два буферных резервуара для ионов и предварительно увлажненную мембрану из ПВДФ.
Конъюгат Precision Protein StrepTactin-HRPBio-Rad1610381StrepTactin-Хрен-пероксидаза (HRP) для хемилюминесцентного или колориметрического обнаружения стандартов неокрашенного белка Precision Plus Protein или стандартов белка Precision Plus Protein WesternC на вестерн-блотах.
Immun-Star WesternC solutionBio-Rad5572Immun-Star WesternC solution, метод детектирования белка, обнаруживает среднее количество белка в фемтограмме.
Универсальная миРНК с отрицательным контролемInvitrogen12935300Negative Control не имеет существенного сходства последовательностей с последовательностями генов мыши, крысы или человека. Контроль также был протестирован на клеточном скрининге и доказал, что он не оказывает существенного влияния на пролиферацию, жизнеспособность или морфологию клеток.
opti-MEM Glutamax MediumThermo Fisher Scientific51985026Opti-MEM Medium - это улучшенная минимальная незаменимая среда (MEM), которая позволяет сократить прием фетальной бычьей сыворотки не менее чем на 50% без изменения скорости роста или морфологии.
Выбор глушителя Предварительно спроектированный и Валидированная миРНКAmbion4390824РНК-интерференция (РНК-интерференция) является лучшим способом эффективного подавления экспрессии генов для изучения функции белка в широком диапазоне типов клеток.
Реагент для трансфекции Lipofectamine RNAiMAXInvitrogen13778075Lipofectamine RNAiMAX Реагент для трансфекции представляет собой передовое и эффективное решение для доставки миРНК. Ни один другой реагент для трансфекции миРНК не обеспечивает такую простую и эффективную доставку миРНК в широкий спектр клеточных линий, включая обычные типы клеток, стволовые клетки и первичные клетки, а также традиционно трудно поддающиеся трансфекции типы клеток.
Мышиный анти-IQGAP1Invitrigen33-8900рабочая концентрация: 1:400 в 5% молочном растворе
козы антимышиный IgG-HRP: sc-2005Santa Cruzsc-2005рабочая концентрация: 1:10000 в 5% молочном растворе
PMSFSigma AldrichP 7626это ингибитор сериновых протеаз и ацетилхолинэстеразы
Термоциклер для ОТ-ПЦРMJ ResearchMJ Research Термоамплификатор PTC-200обеспечивает однородность температуры и скорость нарастания до 3°°; К/сек. Протокол может быть выполнен также с помощью других термоциклеров
Инструмент для ОТ-ПЦР в реальном времениApplied Biosystems7500 Система ОТ-ПЦРЭто пятицветная платформа, в которой используются реагенты полимеразной цепной реакции (ПЦР) на основе флуоресценции для обеспечения относительного количественного определения с использованием сравнительного типа анализа CT. Протокол может быть выполнен также с другими термоциклерами
Микрообъемные спектрофотометрыThermo ScientificNanodropОн обеспечивает точное и быстрое измерение ядра кислоты с использованием небольшого объема образца
Блоттинг-системаBio-RadTrans-Blot Turbo системаОн выполняет семи-сухой перенос за несколько минут
Система получения изображения и документация геляBio-RadChemidoc image системаПроста в использовании для обнаружения хемилюминесцентных материалов

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gerber, D. E. Targeted therapies: a new generation of cancer treatments. Am Fam Physician. 77 (3), 311-319 (2008).
  2. Zhang, J., Yang, P. L., Gray, N. S. Targeting cancer with small molecule kinase inhibitors. Nat Rev Cancer. 9 (1), 28-39 (2009).
  3. Nelson, A. L., Dhimolea, E., Reichert, J. M. Development trends for human monoclonal antibody therapeutics. Nat Rev Drug Discov. 9 (10), 767-774 (2010).
  4. Chabner, B. A., Roberts, T. G. Timeline: Chemotherapy and the war on cancer. Nat Rev Cancer. 5 (1), 65-72 (2005).
  5. Gilbert, L. A., Hemann, M. T. Chemotherapeutic resistance: surviving stressful situations. Cancer Res. 71 (15), 5062-5066 (2011).
  6. Izar, B., Rotow, J., Gainor, J., Clark, J., Chabner, B. Pharmacokinetics, clinical indications, and resistance mechanisms in molecular targeted therapies in cancer. Pharmacol Rev. 65, 1351-1395 (2013).
  7. Ellis, L. M., Hicklin, D. J. Resistance to Targeted Therapies: Refining Anticancer Therapy in the Era of Molecular Oncology. Clin Cancer Res. 15 (24), 7471-7478 (2009).
  8. Asić, K. Dominant mechanisms of primary resistance differ from dominant mechanisms of secondary resistance to targeted therapies. Crit Rev Oncol Hematol. 97, 178-196 (2016).
  9. Arienti, C., et al. Preclinical evidence of multiple mechanisms underlying trastuzumab resistance in gastric cancer. Oncotarget. 7 (14), 18424-18439 (2016).
  10. Tanner, M., et al. Amplification of HER-2 in gastric carcinoma: association with Topoisomerase IIalpha gene amplification, intestinal type, poor prognosis and sensitivity to trastuzumab. Ann Oncol. 16 (2), 273-278 (2005).
  11. Bang, Y. J., et al. Trastuzumab in combination with chemotherapy versus chemotherapy alone for treatment of HER2-positive advanced gastric or gastro-oesophageal junction cancer (ToGA): a phase 3, open-label, randomised controlled trial. Lancet. 376 (9742), 687-697 (2010).
  12. ClinicalTrials.gov. Identifier NCT01130337. A Study of Capecitabine [Xeloda] in Combination With Trastuzumab [Herceptin] and Oxaliplatine in Patients With Resectable Gastric Cancer. , Available from: http://clinicaltrials.gov/show/NCT01130337 (2017).
  13. ClinicalTrials.gov. Identifier NCT01748773. A Study of the Combination of Oxaliplatin, Capecitabine and Herceptin (Trastuzumab) and Chemoradiotherapy in The Adjuvant Setting in Operated Patients With HER2+ Gastric or Gastro-Esophageal Junction Cancer (TOXAG Study). , Available from: http://www.clinicaltrials.gov/show/NCT01748773 (2017).
  14. ClinicalTrials.gov. Identifier NCT01472029. Explorative Phase II Study of Perioperative Treatment in Patients With Adenocarcinoma of the Gastroesophageal Junction or Stomach (HerFLOT). , Available from: http://www.clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT01472029 (2017).
  15. ClinicalTrials.gov. Identifier NCT01196390. Radiation Therapy, Paclitaxel, and Carboplatin With or Without Trastuzumab in Treating Patients With Esophageal Cancer. , Available from: http://clinicaltrials.gov/show/NCT01196390 (2017).
  16. Shimoyama, S. Unraveling trastuzumab and lapatinib inefficiency in gastric cancer: Future steps (Review). Mol Clin Oncol. 2 (2), 175-181 (2014).
  17. Kelly, C. M., Janjigian, Y. Y. The genomics and therapeutics of HER2-positive gastric cancer-from trastuzumab and beyond. J Gastrointest Oncol. 7 (5), 750-762 (2016).
  18. Wong, S. S., et al. Genomic landscape and genetic heterogeneity in gastric adenocarcinoma revealed by whole-genome sequencing. Nat Commun. 5, 5477(2014).
  19. Oshima, Y., et al. Lapatinib sensitivities of two novel trastuzumab-resistant HER2 gene-amplified gastric cancer cell lines. Gastric Cancer. 17 (3), 450-462 (2014).
  20. Pignatta, S., et al. Prolonged exposure to (R)-bicalutamide generates a LNCaP subclone with alteration of mitochondrial genome. Mol Cell Endocrinol. 382 (1), 314-324 (2014).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

HER2IC50IQGAP1

Похожие статьи