Низкий поле (L-band, 1,2 ГГц) электронного парамагнитного резонанса с использованием растворимых нитроксильных и trityl зондов продемонстрировала для оценки физиологически важных параметров в микроокружения опухоли в моделях мыши рака молочной железы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
В естественных условиях ЭПР Оценка рН, pO2, окислительно-восстановительного состояния и концентрации фосфатов и глутатиона в микроокружения опухоли
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Этот протокол демонстрирует возможности низкой поля электронного парамагнитного резонанса (EPR)-на основе методов в сочетании с функциональной парамагнитных зонды для обеспечения количественной информации о химической опухоли микроокружения (ТМЕ), включая p O2, pH, redox статус, концентрации интерстициальный неорганического фосфата (Pi) и внутриклеточных глутатиона (GSH). В частности, применение недавно разработанных растворимых многофункциональный trityl зонд обеспечивает непревзойденную возможность для в vivo параллельных измерений pH,2 pOи Pв E пространство xtracellular (Надежда зонд). Измерения трех параметров с помощью одного зонда позволяют их анализ корреляцию независимо от расположения датчика и время измерений.
Введение
Ключевую роль TME в прогрессии рака и терапии является все более высокую оценку1. Среди важных физиологических параметров TME в солидных опухолей, гипоксия тканей2, ацидоз3,4, высокое сокращение потенциала5, повышенные концентрации внутриклеточного GSH6,7, и интерстициальный Pi8 хорошо документированы. Неинвазивный в естественных условиях pO2, рН, Pi, GSH, редокс оценок и обеспечивают уникальное понимание биологических процессов в TME и п....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все животные работа была выполнена в соответствии с протоколом WVU IACUC утверждения.
1. зонд синтеза и калибровка
- Твердых pO2-чувствительных линк-BuO зонд
Примечание: Линк-BuO микрокристаллов синтезируется и подготовлен как описано в ссылка13. Они очень стабильна и может храниться при комнатной температуре на протяжении лет. ЭПР linewidth линк-BuO пробоотборника твердых частиц является pO2-чувствительных параметр. Линк-BuO микрокристаллов продемонстрировать идеальное линейную зависимость linewidth на концентрацию кислорода в диапазоне от анаэробны....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Ткани p O 2 Оценка с использованием линк BuO зондов:
С помощью процедуры, описанной в разделе Шаг 1.1, мы провели калибровка свежеприготовленные линк-BuO микрокристаллов подвеска. На рисунке 2 показан типичный кислорода зависимость linewidth линк-BuO зонд, а также его свидетельствует спектрам ЭПР.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Представленные методы позволяют для неинвазивной в естественных условиях оценки критических параметров химического ТМЕ, а именно pO2, рН, окислительно-восстановительного состояния и концентрации интерстициальных Pi и внутриклеточного GSH. Магнитный резонанс методы, такие как МРТ и низким поле ОРЭД, являются методы выбора для неинвазивной в vivo профилирования этих параметров TME. МРТ визуализирует анатомических структур, но не хватает функциональной чувствительностью. В отличие от МР.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Эта работа частично поддерживается NIH предоставляет CA194013, CA192064 и U54GM104942. WVCTSI признается для запуска ВВК, AB, и TDE. Авторы благодарят за помощь с иллюстративным экспериментов доктор м. Gencheva и K. Steinberger. Содержание является исключительно ответственности авторов и не обязательно отражают официальную точку зрения NIH.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
probe
Внутри HOPE В Доме
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| ЭПР-спектрометр L-диапазона | Magnettech, Германия | Спектрометр электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) L-диапазона (1,2 ГГц) для сбора спектров парамагнитных молекул in vitro и in vivo | |
| Температура и Контроллер газа | Noxygen, Германия | Температура и Газовый контроллер предназначен для контроля и регулировки температуры и состава газа | |
| Ультразвуковой аппарат | Fisher Scientific | ||
| GSH (L-глутатион восстановлен) | Sigma-Aldrich | G4251 | |
| MMTV-PyMT мыши | В доме | ||
| DMEM | Thermo Fisher Scientific | 11995065 | |
| Met-1 мышиные клетки рака молочной железы | В доме | ||
| мышей C57Bl/6 дикого типа | Jackson Laboratory | ||
| Trypsin | Thermo Fisher Scientific | 25200056 | |
| Trypan Blue Exclusion Dye | Thermo Fisher Scientific | T10282 | |
| Ohmeda Fluotec 3 | |||
| Изофлуран (IsoFlo) | Abbott Laboratories | ||
| Двухосновной фосфат | натрия Сигма-Олдрич | S9763 | |
| Одноосновной фосфат натрия | сигма-Олдрич | S07051 | |
| Хлорид натрия | сигма-Олдрич | S7653 | |
| Соляная кислота | сигма-Олдрич | 320331 | |
| Гидроксид натрия | сигма-Aldrich | S8045 | |
| Глюкоза | сигма-Олдрич | ||
| Глюкозооксидаза | сигма-Aldrich | ||
| Lauda Circulator E100 | pH-метр Lauda-Brikmann | ||
| Orion | Thermo Scientific | ||
| Зонд LiNc-BuO | Внутри Зонд | Окта-н-Бутокси-Нафталоцианиновый зонд был синтезирован в соответствии с референсом 13 | |
| NR Зонд | Внутри Зонд | Нитрооксид был синтезирован в соответствии с референсом 11 | |
| RSSR Зонд | Ди-Нитраоксидный зонд был синтезирован в соответствии с референсом 15 | ||
| Монофосхонированный триарилметиловый зонд был синтезирован в соответствии с артикулом 12 |
Ссылки
- Siemann, D. W. Tumor Microenvironment. , John Wiley & Sons Ltd.,. Chichester, UK; Hoboken, NJ, USA. (2011).
- Tatum, J. L., et al. Hypoxia: importance in tumor biology, noninvasive measurement by imaging, and value of its measurement in the management of cancer thera....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
