Семен сжижения необходим для спермы, чтобы освободиться от семенных геля. Это исследование содержит процедуры для сбора спермы от женского репродуктивного тракта после полового акта и Семен сжижения время измерения.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Коллекции после спаривания спермы от женского репродуктивного тракта и измерение сжижения спермы мышей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
В мышей которое преодолевает эякулированное семя осаждается в матке. После эякуляции, Семен изменяет последовательность с гель как водянистые, процесс называется сжижение. В этом исследовании мы покажем, как собрать после которое преодолевает эякулированное семя от женского репродуктивного тракта в мышиной модели. Во-первых, взрослых самок мышей в стадии эструса были размещены в клетке мужчина на ночь. Следующим утром, совокупление было подтверждено наличие копулятивного вилку на влагалище. Самок мышей с копулятивного вилки были умерщвлены, и каждый репродуктивного тракта была собрана в целом (влагалища, матки, яйцеводов, яичников), обеспечение закрытой системы содержат спермы. Репродуктивного тракта был помещен в пробки microcentrifuge 1,5 мл, и влагалища был отрезан выпустить спермы в трубу. Для обеспечения максимальной спермы тома для анализа, беззубый щипцы были использованы для выжать матки рога из яичников конца для вагинального конца изгнания оставшихся спермы. Весь репродуктивного тракта был затем отбрасывается. Семен содержащих трубки был кратко вращаться вниз. 25 мкл капиллярной пипеткой был помещен в трубу под углом 180° (параллельно стенкам трубки). Количество времени, используемый для заполнения капиллярную трубку к линии 25 мкл был записан. Сперма из проверенных мужской заводчик обычно занимает около 60-180 s для заполнения 25 мкл капиллярной трубки. Этот метод сбора спермы может также использоваться в других нисходящие приложения, такие как анализ изображений и подвижности спермы.
Введение
Женского репродуктивного тракта состоит из верхней и нижних участков. Верхняя репродуктивного тракта включает фаллопиевы трубы, матка и эндоцервикса. Нижняя репродуктивного тракта включает в себя ectocervix и влагалище. В организме человека которое преодолевает эякулированное семя осаждается на передней стенке влагалища, прилегающих к ectocervix1. В мышей однако, Семен заметен в полость матки в течение нескольких минут после спаривания2.
Семен содержатся семенных гель, который затвердевает в течение нескольких секунд семяизвержение, вызывая спермы, чтобы быть в ловушке и иммобилизованные
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все животные и процедуры, используемые в данном исследовании были обработаны согласно Вашингтон государственного университета (Вашингтон) животное уход и использование Комитетом руководящих принципов и в соответствии с WSU утвержденных животных протоколы #4702 и #4735.
1. мышь
-
Использование стандартных взрослых самцов мышей C57BL/6J или другие штаммы интерес. Сохранить животных под контролем температуры и влажности среды, с доступом ad libitum воды и пищи.
- Использование мужского заводчиков, начиная от 8 недель до 10 месяцев. Используйте только проверенные селекционеров в экспериментах.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Сперма была собрана из CTRL и KO самок около 8 ч после спаривания с плодородной CTRL мужчины. Сжижение (или вязкость спермы) количественно, время, необходимое для заполнения 25 мкл капиллярной трубки с спермы. Семен, собранные из матки CTRL взял 2.06 мин ±0.12 (mean±S.E.M, n = 5) для заполнения капиллярную трубку (рис. 1). Однако, Семен, собранных от KO матки занимает больше времени, чем 60 мин (60,0 ±0.0, mean±S.E.M, n = 5) экспериментальной времени. Эти данные позволяют п.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Сбор спермы от мыши матки может предоставить преимущества над Семен анализ в пробирке , как первый можно проиллюстрировать физиологические взаимодействий между спермы и выделениями из женского репродуктивного тракта. Методы, представленные в настоящем исследовании позволяют исследователям определить качество спермы, а также жизнеспособность спермы и подвижности в идеальных физиологических условиях. Кроме того существуют различные течению анализы, которые могут быть выполнены с использованием спермы, соб.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Эта работа поддерживается Фондом Колледжа ветеринарной медицины (WSU) запуска для WW. Авторы благодарят Сьерра Олсен (WSU) для критических чтении этой рукописи.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Зубочистка | Diamond | 750-Flat | автоклавная стерильная, используйте тупую зубочистку. Не используйте остроконечные |
| ножницы для препарирования | Fisher | 08-940 | |
| Пружинные ножницы | Roboz | RS-5600 | |
| Тонкие щипцы | Roboz | RS-5045 | |
| 25-μ L стеклянная капиллярная трубка | VWR | 53432-761 | |
| Leibovitz' s L-15 media | Life Technologies | 11415064 | Добавка с 1% FBS |
| Фетальная бычья сыворотка (FBS) | Gemini Bio-Products | 100-106 | |
| 1,5-мл микроцентрифужная пробирка | Axygen | MCT-150-C | |
| 2-мл микроцентрифужная пробирка | Axygen | MCT-200-A Цифровой | |
| сухой блочный нагреватель | VWR | 13259-052 | Для нагрева микроцентрифужной пробирки перед сбором спермы |
| Миницентрифуга | Corning | LSE 6765 | |
| 35-мм чашка для культивирования | VWR | 10861-656 | |
| 15-мл полипропиленовая центрифуга пробирка | VWR | 10025-686 | |
| Прецизионная | водяная баня | TSGP05 | |
| Столик с подогревом стереомикроскоп | Leica Microsystems | MZ10F | Для сохранения ткани в тепле до Сбор спермы |
| Светлопольный микроскоп | Leica Microsystems | DMi8 | Опционально. Для видеовизуализации подвижности сперматозоидов |
| камера | Leica Microsystems | DMC2900 | опционально. Для видеовизуализации подвижности сперматозоидов |
| Стеклянные слайды | Fisher | 12-552-3 | Опционально. Для видеовизуализации подвижности сперматозоидов |
| Coverslip | VWR | 48393-059 | Опционально. Для видеовизуализации подвижности сперматозоидов |
| отбеливатель | разбавляют в концентрации dH2O до 10% концентрации |
Ссылки
- Suarez, S. S., Pacey, A. A. Sperm transport in the female reproductive tract. Hum Reprod Update. 12 (1), 23-37 (2006).
- Bedford, J. M., Yanagimachi, R. Initiation of sperm motility after mating in the rat and hamster. J Androl. 13 (5), 444-449 (1992).
- Lilja, H.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
