Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Изоляция дендритных клеток от женского репродуктивного тракта человека Фенотипические и функциональных исследований

6.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57100

⸱

13 марта 2018 г.

 ,  ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, Geisel School of Medicine at Dartmouth

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы описываем метод, чтобы изолировать и очистить дендритные клетки из различных анатомических отсеков в человека женского репродуктивного тракта для оценки их Фенотипические и функциональные характеристики. Этот метод может быть адаптирована для изоляции другие иммунные клетки или дендритные клетки от других слизистых тканей.

Аннотация

Характеристика человека дендритных клеток (DCs) проживающих в слизистых тканей сложной из-за трудностей в получении образцов, и малочисленность РСУ представляют на ткани. Тем не менее измененная фенотипа и функции контроллеров домена является ткани окружающей среды, необходимо анализировать ткани жителей DC, поскольку кровь производные DCs неполно отражают сложность DCs в тканях. Здесь мы представляем протокол изолировать DCs от человека женского репродуктивного тракта (ФРТ) с использованием образцов гистерэктомия, позволяющий Фенотипические и функционального анализа. Протокол состоит из ткани пищеварение сформировать одну ячейку смешанные суспензию клеток, последовали положительные магнитный шарик выбор. Наши ткани пищеварение протокол не прилепится поверхностных маркеров, который позволяет Фенотипические и функциональный анализ DCs в стационарном состоянии, без ночи инкубации или клетки активации. Этот протокол может быть адаптирована для изоляции других типов иммунных клеток или изоляции DCs из других тканей.

Введение

ФРТ имеет двойную функцию защиты от патогенов, позволяя имплантации и беременность-1. Для этого, ФРТ разобщенным, с каждого анатомического региона отображения уникальные гистологические, иммунологических и функциональные характеристики1.

DCs на слизистой поверхности сделать контакт с микробами в легких и кишечника, половых путей и обеспечивают иммунной наблюдения для потенциальных патогенов2. Контроллеры домена имеют уникальную возможность премьер наивные Т-клеток и инициировать адаптивного иммунного ответа3. DCs на ФРТ также специализированные терпеть иностранных антигены, например в спермы и развивающегося плода, чтобы позволить беременность4. Таким образом в зависимости от местоположения, DC фенотипа и функция будет собственный. Известно, что DCs сильно зависит от окружающей среды ткани, таким образом, что их количество, фенотип и функции изменяются средой ткани, в которой они проживают3. Таким образом чтобы понять роль, которую играют FRT DCs в инфекционных заболеваний и беременности, рака в ФРТ, резидентов DCs необходимо изучить, поскольку производные DC модели являются недостаточными для решения нормативные сложности в тканях FRT крови.

Характеристика тканей человека резидентов DCs является сложной задачей из-за низкого числа клеток в слизистой ткани и трудности с получением образцов человеческой ткани. РСУ были изучены в ФРТ, иммуногистохимия5,6, который сообщает о местонахождении клеток в тканях, но исключает функциональных исследований и ограничено количество идентификации ячейки маркеры, которые могут быть проанализированы с помощью за один раз. Кроме того протоколы изоляции одной ячейки для анализа потока гранулярных были развитых7,8,9. Некоторые из этих протоколов воспользоваться мигрирующих DCs способность изолировать те клетки, которые мигрируют. Эти методы обычно требуют ночи инкубаций и подбор активированного DCs, но не позволяют для изучения DCs в стационарном состоянии.

Здесь, используя образцы гистерэктомия, оптимизированный протокол изолировать DCs из различных анатомических сайтов в ФРТ, эндометрия (EM), эндоцервикса (CX) и ectocervix (ECX), что позволяет Фенотипические и функционального анализа. С помощью протокола не протеолитических ферментативного пищеварения, мы можем приступить сразу же после переваривания ткани для ячейки изоляции и потока гранулярных характеристика без активации клеток. Используя многоцветные проточной цитометрии и адаптации функциональные исследования для незначительного числа клеток, мы можем определить и охарактеризовать редких подмножеств DCs в различных сайтах фрахт

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Исследования с участием людей были проведены в соответствии с принципами, выраженные в Хельсинкской декларации. Исследования были утверждены Дартмутский колледж институциональных Наблюдательный Совет и Комитет для защиты человеческих субъектов (центрах). Письменное информированное согласие было получено до операции от ВИЧ негативных женщин проходят гистерэктомии в Дартмут-Хичкок медицинский центр (Ливан, NH). Подготовленных патологоанатомов выбранные образцы ткани из EM, CX и ECX, бесплатно патологических поражений и отдаленных от мест его патологии. Образцы крови были получены из добровольцев здоровых доноров, набранных в медицинский центр Дартмута Хичкока. Доноры крови являются анонимными. Свежевыделенных EM, CX и ECX тканей от операционной комнате были переданы патологии для изоляции и классификации до передачи в нашу лабораторию в отдельных, стерильные полипропиленовые трубы.

1. ферментативный пищеварения тканей

Примечание: Использование стерильных материалов и работы в биологической безопасности кабинета.

  1. Подготовьте измененный Хэнк сбалансированный соли раствор (HBSS) 1 x HBSS с помощью фенола красного, 100 ед/мл пенициллина и стрептомицина, 0,35 г/Л NaHCO3и 20 мм HEPES.
  2. Подготовить ферментативные коктейль (изменение HBSS, 450 ед/мл коллагеназы IV, дезоксирибонуклеаза 0,01% [wt/vol] я и 2 мг/мл D-глюкозы). Решение пройти через стерильную 0,22 мкм фильтром. В идеале, подготовить Пищеварение энзима в день использования, но она может быть заморожены при-20 ° C для хранения. Избегайте повторного замораживания и оттаивания циклов.
  3. Промывайте ткань с модифицированных HBSS и место в чашке Петри2 100 x 15 мм. Отрегулируйте размер Петри, основанный на количество ткани доступны и объем фермента коктейль используется (см. шаг 1.4.2 ниже).
    Примечание: Ткани варьируется в зависимости от хирургического образца, полученные от патологии, начиная от 1-10 g.
  4. Физическая обработка с одноразовые скальпель и пинцет:
    1. Добавьте около 3 мл пищеварения фермента коктейль в ткани для предотвращения высыхания во время резки.
    2. Используйте щипцы для стабилизации ткани и фарш с помощью скальпеля для увеличения площади поверхности ткани, подвергается пищеварение фермента коктейль. Разрежьте ткань на мелкие кусочки (< 2 мм на стороне). Добавьте достаточно пищеварение фермента коктейль для покрытия всех тканей штук (5 мл/г ткани). Поместите крышку на Петри блюдо.
    3. Инкубируйте при 37 ° C с 5% CO2 на вращателе на приблизительно 80 об/мин за 45 мин убедитесь, что скорость ротатор тщательно смешивается пищеварение фермента коктейль без разлив или пузырей.
    4. Визуализация Подготовка тканей с инвертированным микроскопом света с 4 X и 10 X целей.
      Примечание: После переваривания, небольшие фрагменты тканей и смешанных клеток подвеска, включая видимый эпителия желез должна присутствовать (см. рис. 1A).

2. физическое разделение одиночных клеток

  1. В стерильных условиях поместите сетку тугой 250 мкм с держателем в чашку Петри2 150 x 15 мм. Убедитесь, что сетка около 0,5 см над поверхностью Петри.
  2. Мокрые сетки с 2 мл модифицированных HBSS и передачи переваривается ткани на сетке.
  3. С помощью плоской поверхности 10-мл шприц плунжерный, мягко, но твердо, шлифуют переваривается фарша ткани через сетку.
    Предупреждение: Шлифование слишком агрессивно будет повреждения сетки и увеличения смертности клеток. Этот шаг будет отделить эпителиальных клеток и стромальных клеток (включая иммунные клетки) от соединительной ткани и слизи.
  4. После того, как тщательно были разогнаны фрагменты тканей, поднять сетки и держателя 2-3 см выше Петри и полоскания с 3 мл изменение HBSS восстановить дополнительные ячейки.
  5. Соберите суспензию клеток. Место 20 мкм сетки с держателем в чашку Петри и мокрый с 2 мл модифицированных HBSS. Залить суспензию клеток через сетку, держа сетки 2-3 см выше Петри и полоскания с 6 мл модифицированных HBSS.
    Примечание: Этот шаг будет отдельный эпителиальных листы, которые сохраняются на вершине, от одной клетки, которые проходят через сетку. Поток через представляет собой суспензию смешанных клеток, которая включает в себя иммунные клетки и фибробласты стромы.
  6. Собирать суспензию смешанных клеток и центрифуги на 500 x g 10 мин аспирата жидкости и Ресуспензируйте гранулы в 4 мл модифицированных HBSS для плотности градиентного центрифугирования.
  7. Слой суспензию смешанных клеток более 3 мл polysucrose раствора и центрифуги при комнатной температуре на 500 x g 30 мин с без тормозов. Собирать белая полоса в верхней части polysucrose раствора и промыть с PBS.
    Примечание: Эта часть является обогащенный смешанных клеток подвеска, которая богата в иммунных клеток и содержит некоторые фибробласты стромы.

3. мертвые клетки удаление

Примечание: Если большой процент мертвых клеток (> 20%), присутствуют в суспензию обогащенного смешанных клеток после плотность градиентного центрифугирования, рекомендуется удаление мертвых клеток с магнитной бусины. Мертвые клетки должны быть удалены, поскольку они могут вмешиваться в процесс отбора позитивные магнитный шарик.

  1. Подсчет количества ячеек с помощью Горяева на световой микроскоп с тем 10 X. Спин вниз всех клеток в суспензии обогащенного смешанных клеток (500 x g, 10 мин, 4 ° C). Полностью удалить и удалить супернатант. 100 мкл бусины удаления мертвых клеток в 1 x 107 всего клетки (живых и мертвых), в соответствии с инструкциями производителя. Инкубации при комнатной температуре в течение 15 мин.
  2. Место 30 мкм фильтр на столбце магнитные, применять суспензию клеток и позволяют клеткам шарик меченых падать через магнитную колонку.
  3. Промойте столбце с буфером удаления мертвых клеток как рекомендованные (3 мл). Соберите проточный, содержащие живые клетки. Диапазон ячеек восстановления после удаления мертвых клеток представлена на рисунке 1B.
    Примечание: Эти клетки могут использоваться для выполнения проточной цитометрии пятнать фенотипические исследований (раздел 5) или продолжить с DC изоляции (раздел 4).

4. DC очистки выбором положительных магнитный шарик

  1. После удаления мертвых клеток (шаг 3.2) спина клетки вниз, удалить супернатант и Ресуспензируйте Пелле клеток в 80 мкл буфера магнитные выбор за 1 x 10-7 клеток (PBS, 0,5% тепло инактивированная AB сыворотку крови человека (HS), 2 мм ЭДТА).
  2. Для позитивного выбора DC населения добавьте CD1a или CD14 магнитные бусы согласно инструкциям производителя (20 мкл магнитные бусы на ячейки 1 x 10-7 ). Инкубируйте 15 мин при 4° C.
  3. Вымыть клетки с магнитного выделения буфера, уменьшается и полностью удалить буфер. Ресуспензируйте клетки в минимум 500 мкл буфера магнитные выбор.
  4. Вставьте столбец магнита и добавьте 30 мкм фильтром на вершине столбце, чтобы сохранить любые оставшиеся сгустки ячейки. Промойте фильтр и столбец с магнитной выделения буфера как рекомендуется.
  5. Суспензию клеток применяются к столбцу. Промойте 3 раза с магнитной выделения буфера.
  6. Передать 15 мл столбца, добавить 5 мл магнитных выделения буфера и применять поршень выпустить выделенных ячеек в столбце.
  7. Для повышения чистоты, повторите шаги 4.4-4.6 с восстановленной клетки, с помощью нового столбца. В рисунке 1 cпредставлен ассортимент восстановления клеток после выбора магнитный шарик.

5. Оценка чистоты клеток: поток цитометрии и микроскопия

  1. Антитело пятная для проточной цитометрии:
    1. Ресуспензируйте до 1 x 106 клеток в 100 мкл ФСБ, содержащих 20% тепла инактивированная HS блокировать рецепторы Fc, и проинкубируйте втечение 10 мин на льду.
    2. Добавьте требуемый дневно обозначенные антитела и реагент для идентификации мертвых клеток (например, см. раздел 6.5). Установите флуоресценции минус один (FMO) элементы управления установить ворота, и использовать компенсацию бусы для подготовки единого пятно элементов управления для компенсации. В таблице 1приводятся примеры использования антител. Проинкубируйте втечение 20 мин при 4 ° C, защищать от света.
    3. Вымойте клетки с 2 мл магнитных выделения буфера.
      Примечание: Избежать формирования слипания для анализа потока гранулярных клеток важно присутствие ЭДТА. Спин вниз и удалить супернатант.
    4. Исправьте ячейки, добавив 100 мкл параформальдегида 2% раствора в трубку.
    5. Анализировать образцы в потока цитометр10,11.
  2. Spin столбце (например, cytospin) и использовать Гимзы, пятнать для анализа морфологии:
    1. Ресуспензируйте клетки в 200 мкл буфера магнитные выбор.
    2. Загрузить в столбце спин и спина на 5 мин. Пусть слайд полностью просохнуть.
    3. Исправить слайд путем погружения в 100% метанола для 2 минут промыть слайд с дейонизированной водой и позволить ему воздух сухой.
    4. Выполнение стандартного пятнать Wrights-Гимза. Обложка клетки с эозином и проинкубируйте втечение 10 мин, ополосните деионизированной водой и дайте ему высохнуть. Обложка клетки с Wrights-Geimsa пятно, инкубировать в течение 1 мин, ополосните деионизированной водой и высохнуть на воздухе.
    5. Изучите подготовку с инвертированным микроскопом (рисунок 2A, 40 X цель).

6. Аллогенная стимуляции Assay оценить функцию клеток DC

  1. Оттепель замороженных периферической крови мононуклеаров (получения)
    1. Теплый СМИ культуры клеток с 10% HS до 37 ° C.
    2. Оттепель репликацию, поставив cryotube в ванну воды 37 ° C, до тех пор, пока небольшое количество замороженных клеток СМИ остается в cryotube. В стерильных условиях, передавать содержимое cryotube 10 мл подогретым клетки культуры средств массовой информации с 10% HS в 15 мл.
    3. Центрифуга на ~ 500 g x 7 мин удалить медиафайл, разогнать гранулы, Ресуспензируйте репликацию в 10 мл средства массовой информации культуры клеток с 10% HS и центрифуги клетки.
    4. Повторите шаг мыть третий раз. Подсчитать количество ячеек.
  2. Наивные Т-клеточный отбор:
    1. Используйте набор выбора ячейки негативный выбор магнитных антитела для изоляции наивные Т-клетки согласно протоколу производителя.
    2. После изоляции Проверьте чистоту, используя CD45RA и CCR7 антител.
      Примечание: Типичный чистоты-> 99% наивные Т-клеток.
  3. Наивные Т-клеток распространения краситель окрашивание:
    1. Подготовка 600 мкл раствора 2 x клеток распространения красителя, защищая краска от воздействия света.
    2. Вымойте наивные Т-клетки 2 x с PBS. Ресуспензируйте клетки в 500 мкл PBS.
    3. Во время нежно vortexing клетки в биобезопасности кабинета, добавьте 500 мкл распространения краска наивные Т-клеток.
    4. Инкубировать клетки в течение 10 минут при 37° C.
    5. Остановить маркировки ячейки, добавив 5 мл носителей культуры клеток с 10% HS в клетки. Инкубируйте на льду на 5 мин, защищенном от света.
    6. Центрифуга клетки на ~ 500 g x 7 мин, аспирационная средства массовой информации и Ресуспензируйте клетки в 4 ° C носителей культуры клеток с 10% HS. Повторите еще два раза в общей сложности 3 стирок. Возьмите Алиготе клеток рассчитывать до последнего центрифугирования.
      Примечание: Как правило, наивно окончательного числа Т-клеток будет варьироваться от 5% до 15% первоначального подсчета клеток КСДОР.
    7. Ресуспензируйте клетки с медиа культуры клеток с 10% HS в концентрации нужной ячейки.
  4. DC-Аллогенная наивные Т-клеток Сопредседатель Культура:
    1. Пластина изолированных DCs и наивные Т-клеток в 96-луночных, раунд нижней пластине, в 1:15 соотношение РС для Т-клеток. Убедитесь, что оптимальное количество для DCs колеблется между 3000 и 5000 клеток/хорошо.
    2. Центрифуга пластину на ~ 500 x g 3 мин для обеспечения клетки расположены в центре скважины. Контакт к ячейке имеет важное значение для надлежащего сигнализации происходят.
    3. Инкубируйте при 37 ° C в течение 6 дней. Мониторинг этих клеток, которые появляются в скважинах, как происходит распространения, с помощью микроскопии (Рисунок 3А).
  5. Проточная цитометрия, пятнать для оценки распространения:
    1. После 6 дней клетки могут быть изучены проточной цитометрии. Пятно Сопредседатель культуру для проточной цитометрии.
    2. Приготовляют раствор 2 x жизнеспособности желтого красителя (максимальная выбросов 572 Нм) в PBS.
      Примечание: Использование PBS без сыворотки имеет важное значение, как сыворотка протеинов вмешиваться с красителем).
    3. Центрифуга для пластины с клетки на ~ 500 x g за 5 мин.
    4. Удаление 100 мкл супернатант.
      Примечание: на данный момент собирать и хранить супернатант для отдельного анализа растворимых факторов.
    5. Вымыть клетки два раза с PBS: добавить 150 мкл/колодец PBS, центрифуги на ~ 500 g x 5 минут, удалить 150 мкл супернатант с пипеткой. Убедитесь, что имеется 50 мкл супернатанта, остающихся в каждой скважине.
    6. 50 мкл 2 x жизнеспособности красителя в каждой скважине. Инкубации при комнатной температуре в течение 10 мин, защищенном от света.
    7. Во время инкубации Подготовьте мастер смесь желаемого антитела маркеров. Например: CD3 APC/Cy7, CD4 PE, CD8 FITC, и т.д.
    8. Добавьте смесь антител в каждой скважине. Инкубации при комнатной температуре в течение 10 мин, защищенном от света.
    9. Вымыть клетки 2 x с PBS + 2% HS: добавить 150 мкл/хорошо PBS + 2% HS. Центрифуга на ~ 500 x g для 5 минут удалить 150 мкл супернатант с пипеткой.
    10. Исправьте ячейки, добавив 100 мкл/хорошо 2% пункт-формальдегида. При необходимости: клетки и средства массовой информации передавать цитометрии Трубы полипропиленовые потока. Трубы можно хранить при 4 ° C и защищены от света, до гранулярных анализ потока.
    11. Чтения трубы в проточный цитометр.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Могут наблюдаться следующие ткани пищеварение, освобождение эпителиальных листов и желез, как показано на рисунке 1A; Это позитивный элемент управления, указывающее успешность ферментативного пищеварения. Количество общего числа жизнеспособных клеток и DCs, восстановленные в грамм ткани также показано на рис. 1B и 1 c рисунок, соответственно. Иммунные клетки представляют собой 5-30% стромальных клето...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Слизистых оболочек DCs являются популяции редких клеток под влиянием окружающей среды ткани, который изменяет их фенотипа и функции, как только они вступают в тканях3. Хотя производные крови DCs являются весьма полезной модели, они не полностью отражают разнообразие DC населения в тканях. Таким образом чтобы понимать уникальные характеристики слизистой DCs, изоляция начальных клеток тканей необходима. Изоляция РС от различных анатомических объектов в ФРТ предлагает возможность изучить DC функция <...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать

Благодарности

Поддерживаемый NIH стипендии AI102838 и AI117739 (CRW). Мы благодарим Ричарда Rossoll для оказания технической помощи. Анализ потока гранулярных был проведен в DartLab, общий ресурс на Dartmouthsupported (P30CA023108-37) и (P30GM103415-15).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Сбалансированный солевой раствор Хэнка (HBSS)ГиклонSH30015,03
Пенициллин-стрептомицинГиклонSV30010
HEPES (1M)Гиклон15630-080
Коллагеназа IVSigmaC5138
Дезоксирибонуклеаза IWorthington БиохимическийLS002140
D-глюкозаSigma Aldritch50-99-7
0,22 мкм Stericup 500 мл  фильтрMilliporeSCGPU05RE
100 мм x 15 мм чашка Петри из полистиролаFisherbrandFB0875712
150 мм x 15 мм чашка Петри из полистиролаFisherbrandFB0875714
чашка из полистирола 150 мм x 25 ммЧашкаобработанных клеточных культур Corning 430599 Чашка
Инкубатор IsotempFisher ScientificFICO3500TABB5,0% CO2
American Rotator VAmerican DADER4140
250 мкм нейлоновая сеткаSefar03-250/50
20 мкм нейлоновая сеткаSefar03-20/14
Beckman GS-6R ЦентрифугаBeckman358702
X-VIVO 15 с гентамицином L-gln, фенол красный, 1 лLonza04-418Q
Сыворотка крови человека ABДолина биомедицинскихHP1022
Histopaque-1077Sigma Aldritch10771
Фосфатный буферный раствор (PBS)National DiagnosticsCL-253pH 7.4
Набор для удаления мертвых клетокMiltenyi Biotec130-090-101
Фильтр предварительного разделения (30 мкм)Miltenyi Biotec130-041-407
LS колоннаMiltenyi Biotec130-042-410
Quadro MACS сепараторMiltenyi Biotec130-090-976
MACS многостендовыйMiltenyi Biotec130-042-303
EDTAUSB15694
CD1a Микрогранулы, человеческиеMiltenyi Biotec130-051-001
CD14 Микрогранулы, человеческийMiltenyi Biotec130-050-201
eFluor 670 краситель для пролиферации клетокeBiosciences65-0840-85
96 хорошо круглая нижняя пластинаFalcon9/8/2866
Зомби желтый краситель жизнеспособностиBiolegend423104
CD3 APC/Cy7, античеловеческийTonbo Biosciences25-0038-T100
CD4 PE, античеловеческийeBiosciences12-0048-42
CD8a FITC, античеловеческийTonbo Biosciences35-0086-T100
Проточный цитометр GalliosBeckman Coulter Life SciencesB4361810 цвет, VBR
MACSquant Analyzer 10Miltenyi Biotec130-096-3438 цвет, VBR
для для обработанных клеточных культур

Ссылки

  1. Wira, C. R., Rodriguez-Garcia, M., Patel, M. V. The role of sex hormones in immune protection of the female reproductive tract. Nat Rev Immunol. 15 (4), 217-230 (2015).
  2. Banchereau, J., Steinman, R. M. Dendritic cells and the control of immunity. Nature. 392 (6673), 245-252 (1998).
  3. Schlitzer, A., McGovern, N., Ginhoux, F. Dendritic cells and monocyte-derived cells: Two complementary and integrated functional systems. Semin Cell Dev Biol. 41, 9-22 (2015).
  4. Tagliani, E., Erlebacher, A. Dendritic cell function at the maternal-fetal interface. Expert Rev Clin Immunol. 7 (5), 593-602 (2011).
  5. Kaldensjo, T., et al. Detection of intraepithelial and stromal Langerin and CCR5 positive cells in the human endometrium: potential targets for HIV infection. PLoS One. 6 (6), e21344(2011).
  6. Schulke, L., Manconi, F., Markham, R., Fraser, I. S. Endometrial dendritic cell populations during the normal menstrual cycle. Hum Reprod. 23 (7), 1574-1580 (2008).
  7. Ballweber, L., et al. Vaginal langerhans cells nonproductively transporting HIV-1 mediate infection of T cells. J Virol. 85 (24), 13443-13447 (2011).
  8. Hladik, F., et al. Initial events in establishing vaginal entry and infection by human immunodeficiency virus type-1. Immunity. 26 (2), 257-270 (2007).
  9. Duluc, D., et al. Functional diversity of human vaginal APC subsets in directing T-cell responses. Mucosal Immunol. 6 (3), 626-638 (2013).
  10. Herzenberg, L. A., Tung, J., Moore, W. A., Parks, D. R. Interpreting flow cytometry data: a guide for the perplexed. Nat Immunol. 7 (7), 681-685 (2006).
  11. Juno, J. A., Boily-Larouche, G., Lajoie, J., Fowke, K. R. Collection, isolation, and flow cytometric analysis of human endocervical samples. J Vis Exp. (89), (2014).
  12. Givan, A. L., et al. Flow cytometric analysis of leukocytes in the human female reproductive tract: comparison of fallopian tube, uterus, cervix, and vagina. Am J Reprod Immunol. 38 (5), 350-359 (1997).
  13. Rodriguez-Garcia, M., et al. Dendritic cells from the human female reproductive tract rapidly capture and respond to HIV. Mucosal Immunol. 10 (2), 531-544 (2017).
  14. Rodriguez-Garcia, M., Barr, F. D., Crist, S. G., Fahey, J. V., Wira, C. R. Phenotype and susceptibility to HIV infection of CD4+ Th17 cells in the human female reproductive tract. Mucosal Immunol. 7 (6), 1375-1385 (2014).
  15. Shen, Z., Rodriguez-Garcia, M., Ochsenbauer, C., Wira, C. R. Characterization of immune cells and infection by HIV in human ovarian tissues. Am J Reprod Immunol. , (2017).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

CD1a CD14
Изоляция дендритных клеток от женского репродуктивного тракта человека Фенотипические и функциональных исследований
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.