Method Article

Количественный анализ сложности нейрональных дендритных арборизация у дрозофилы

DOI:

10.3791/57139

⸱

January 7th, 2019

 ,  , 
1Genetics and Aging Research Unit, Department of Neurology, Massachusetts General Hospital, Mass General Institute of Neurodegenerative Disease, 2Department of Geriatric Neurology, Nanlou Clinical Division, PLA General Hospital

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол фокусируется на количественный анализ сложности нейрональных дендритных арборизация (NDAC) у дрозофилы, который может использоваться для исследования дендритных морфогенеза.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Дендриты разветвленной прогнозы нейрона, и дендритных морфология отражает синаптических Организации в ходе развития нервной системы. Дрозофилы личиночной нейрональных дендритных арборизация (da) является идеальной моделью для изучения морфогенеза нейронных дендритов и функции гена в развитии нервной системы. Есть четыре класса да нейронов. Класс IV является наиболее сложным с шаблоном ветвления, который охватывает почти всю площадь личиночной стенки тела. Мы ранее характеризуют эффект подавления Drosophila ortholog SOX5 класса IV нейрональных дендритных арборизация сложности (NDAC) с помощью четырех параметров: длина дендритов, площадь поверхности покрытия дендритов, Общее количество филиалов и разветвленной структуры. Этот протокол представляет собой процесс количественного анализа NDAC, состоящий из личинок рассечение, конфокальная микроскопия и процедур анализа изображений с помощью ImageJ программного обеспечения. Дальнейшее понимание да развития нервной системы и ее основные механизмы улучшения понимания нейрональных функции и предоставить подсказки о фундаментальных причин неврологические и нервной расстройств.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Дендритов, которые являются разветвленные прогнозы нейрона, покрывают поле, которое включает сенсорные и синаптической входы нейрона от других нейронов1,2. Дендриты являются важным компонентом формирования синапсов и играть решающую роль в интеграции синаптических входов, а также распространение электрохимических стимуляции в нейрон. Дендритных арборизация (da) представляет собой процесс, по которому нейроны образуют новые дендритных деревья и ветви для создания новых синапсов. Развитие и морфология-Да, как филиал плотность и шаблоны группировки, результатом многоэтапного биологических процессов и тесной взаим....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Экспериментальная подготовка

  1. Подготовка следующих реагентов: фосфат Дульбекко в буфер солевой раствор (PBS); Тритон X-100; 0,2% PBST (PBS + 0,2% Тритон X-100); 32% параформальдегида (PFA), разбавляют в 4% перед использованием; силиконовые эластомера базы и отвердителя; antifade монтаж среднего (например, продлить золото); и ноготь польский.
  2. Подготовьте следующее оборудование: рассечение микроскопа, два острые щипцы и ножницы для microdissection, количество контактов для microdissection, чашку Петри блюдо рассечение, Микроскоп слайды и coverslips, конфокального микроскопа и компьютер с установленным программным обеспечением ImageJ Фиджи.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Дендритов нейронов да были помечены co экспрессирующих GFP (UAS-GFP; ППК GAL4) в da нейронных сома и дендритных беседки для флуоресценции GFP визуализации анализа. Морфология да нейрон дендритов было imaged Перевернутый Конфокальный микроскоп (рис. 2).

Дендритов нейронов да были прослежены с помощью Фиджи ImageJ программного обеспечения. Этот файл использовался для оценки длины дендритов (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Дендритов, которые иннервируют эпидермис являются области входных нейронов, и их морфологии определить, каким образом информация поступает и обрабатывается индивидуальных нейронов. Развития дендритов морфология отражает гена модуляции дендритов Организации. Нейрон личиночной да дрозофилы периферической нервной системы является важной моделью для изучения развития дендритов из-за: 1) функциональное сходство с млекопитающих11,12; 2) четыре класса различия,.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы хотели бы поблагодарить Уильяма а. Eimer для визуализации технической помощи. Эта работа была поддержана Фондом Cure-Альцгеймера [в R.E.T], Национальный институт здравоохранения [R01AG014713 и R01MH60009 для R.E.T; R03AR063271 и R15EB019704 а.л.] и Национальный научный фонд [NSF1455613 а.л.].

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Фосфатно-солевой буфер (PBS)Gibco Life Sciences10010-023
TritonX-100Fisher Scientific9002-93-1
Параформальдегид (PFA)Электронная микроскопия Sciences15714-S
Sylgard 184 силиконовый эластомерный основа и отвердительDow Corning Corportation3097366-0516; 3097358-1004
ProLong Gold Antifade MountantThermo Fisher ScientificP36931
Лак для ногтей CVS72180
Стерео микроскопNikonSMZ800
Конфокальный микроскопNikonEclipse Ti-E Чашка
ПетриFalcon353001
щипцамиDumont11255-20
НожницыRoboz Surgical Instrument CoRS-5611
Булавки от насекомых Roboz Surgical Instrument CoRS-6082-25
Предметные стекла и защитные стекла для микроскопаFisher Scientific15-188-52

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wassle, H., Boycott, B. B. Functional architecture of the mammalian retina. Physiol Rev. 71 (2), 447-480 (1991).
  2. MacNeil, M. A., Masland, R. H. Extreme diversity among amacrine cells: implications for function. Neuron. 20 (5), 971-982 (1998).
  3. Losonczy, A., Makara, J. K.,....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Dendritic ArborizationNeuronal MorphologyDrosophila LarvaeConfocal MicroscopyImageJ AnalysisDendrite Length MeasurementSurface Area CalculationBranching Structure AnalysisSOX5 Gene SilencingZ series Imaging

Related Articles