Мы создали Роман хирургический протокол для двух Фотон томография печени живых мышей с минимальным вторжением. С этой техникой мы определили подробную структуру печени во время Липополисахарид индуцированной эндотоксемии. Мы ожидаем, что этот метод может использоваться для определения эффективности различных реагентов лечения печёночной лейкоцитарной миграции.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Прижизненные изображения двух Фотон лейкоцитов во время иммунный ответ в мыши Липополисахарид лечение печени
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Сепсис — это тип тяжелой инфекции, которая может вызвать отказ органов и тканей повреждения. Хотя показатели смертности и заболеваемости связанные с сепсисом являются чрезвычайно высоким, нет прямого обращения или связанных с органа механизма рассматривался подробно, в режиме реального времени. Печень является ключевым органом, который управляет токсинов и инфекций в организме человека. Здесь мы стремились выполнить прижизненные изображения мыши печени после индукции эндотоксемии, чтобы отслеживать сократительной способности иммунных клеток, таких как нейтрофилы и макрофаги печени капсульные (LCMs). Соответственно мы разработали новый хирургический метод для экспозиции печени с минимально инвазивной хирургии. Мышей внутрибрюшинно вводили с липополисахарида (LPS), общие эндотоксин. Используя наш Роман хирургический подход для экспозиции и прижизненные изображения мыши печени, мы обнаружили, что нейтрофилов вербовки в LPS-лечение LysM Зеленый флуоресцентный белок (ГПУП) мыши печени был увеличен по сравнению с этим в фосфат амортизированное солевой раствор лечение печени. После лечения LPS со временем значительно увеличилось количество нейтрофилов. Кроме того с помощью мыши CX3Cr1-GFP, мы успешно визуализирована печени-резидентов макрофаги, называется LCMs. Таким образом чтобы исследовать эффективность новых реагентов для управления иммунной мобильности в естественных условиях, определении подвижности и морфология нейтрофилов и LCMs в печени может позволить нам определить терапевтический эффект в орган тканей и неудачи ущерб, причиненный активации лейкоцитов в сепсиса.
Введение
Печень является основным метаболических органом в млекопитающих; Он действует как башня управления для энергии, гормоны и детоксикации1. Из-за ее важности исследователи провели много in vitro и in vivo экспериментов для выяснения изменений в печени при воспалении. Для захвата изображений в реальном времени из печени2 был использован прижизненной микроскопии. Действительно различные печени, что тепловизионные методы были введены2,3,4,5,6. Одна....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все процедуры были проведены в соответствии с руководящими принципами институциональный уход животных и использования Комитета Йонсейского университета колледж медицины, Корея. LysM Зеленый флуоресцентный белок (GFP; gfp / +) мышах8 и CX3Cr1-GFP (gfp / +)9 мышей в возрасте 8-12 недель были использованы для прижизненной визуализации. Все хирургические инструменты были газобетона и дезинфекции с 70% спирта.
1. специально мышь печени изображений камеры с поддержкой инструменты
- Печень мыши изображений дизайн камеры
- Сделать камеру следующих размеров для мыши печени изображений (
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Простой и очень стабильная тепловизионные камеры была разработана. В нижней части камеры была покрыта силикона, который предотвратить соскальзывание мыши тела и органов. Кроме того потому что кремний имеет правильное количество упругости, он может препятствовать ожидаемых повреждений, вызванных давлением слайд крышка (рис. 1A, C). Во-вторых, ткани Сейф клей (Vet Бонд) был применен для того, чтобы исправить извлеченные печени на кровати кольце.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Печени активно изучается многими группами3,10, ввиду важности его функции. К примеру Хейманн et al. предложил деликатный метода, с помощью агарозы. Хотя этот метод оказался весьма точные, параметр агарозы занимает время. Однако с нашей методологии, все процедуры могут осуществляться в течение 30 мин, сведения к минимуму других смешанных факторов. Во-вторых стабилизации печени является чрезвычайно важным, потому что сердцебиение может нарушить видео. Для устранени.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют не конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Это исследование было поддержано грант от национального исследования Фонда из Кореи (NRF) финансируется правительством Кореи (MSIP; 2016R1A2B4008199 Грант № Y-м. H.), Министерство здравоохранения и социального обеспечения, Республика Корея (номер гранта: HI14C1324).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Изготовленная по индивидуальному заказу камера | Live Cell Instruments | Индивидуальный размер | |
| Металлическая крышка предметного стекла | Live Cell Instruments | Индивидуальный размер | |
| Защитное стекло | Электронная микроскопия Sciences | #72204-03 | |
| Sylgard 184 Комплект силиконовых эластомеров | Dow Corning | ||
| Erlenmeyer колба | DURAN | 21 216 36 | |
| Планшет для клеточных культур (плоский тип) | HYUNDAI Micro Co. | H31006 | |
| Эксикатор | ADARSH | 55204 | |
| High Q BOND SE 5 мл | BJM Lab | Для изготовления полупостоянной плотины | |
| Гибкие нагреватели из силиконовой резины | Omega | SRFR/SRFG SERIES, M1250/0800 | |
| Источник питания постоянного тока | Toyotech | DP30-03A | |
| Фосфатно-солевой | Домашний | ||
| Липополисахариды (ЛПС) из Salmonella enteria серотипа enteritidis | Sigma-Aldrich | L6011 | |
| Texas Red Dextran | Thermo Fisher Scientific | D1830 | |
| 15 мл Высокопрозрачный полипропилен<бр/> коническая трубка | FALCON | 14-959-49B | |
| 0,45 мкм; m фильтр (Minisart Шприц-фильтр) | Sartorius | 16555k | |
| 1,5 мл микропробирка, янтарь | Axygen | MCT-150-X | Для светоблокирующего |
| шприца 1 мл | Корейская вакцина | KV-S01 | |
| 3 мл шприц | Корея Вакцина | KV-S03 | |
| 10 мл шприц | Корея Вакцина | KV-S10 | |
| 0,3 мл инсулиновый шприц | Becton Dickinson | 324900 | |
| Крем для эпиляции 100 мл | Body natur | ||
| Ватный тампон | ABDI | ||
| Zoletil 50 5 мл | Virbac | ||
| Rompun 10 мл | Bayer | ||
| Нагревательная пластина | Live Cell Instruments | PH-S-10 | Индивидуальный размер |
| контроллера постоянного тока | Live Cell Instruments | CU-301 | |
| Ножницы для микродесекции | Harvard Apparatus | 72-5418 | |
| Ножницы | Roboz | RS-5882 | |
| Щипцы | Roboz | RS-5137 | |
| Vet bond | 3M | 1469SB | |
| ZEN программное обеспечение (Черная версия) | Carl Zeiss | Программа для LSM 7 МП | |
| LSM 7 МП | Carl Zeiss | ||
| Программа анализа Volocity | PerkinElmer |
Ссылки
- Girard, J. R., et al. Fuels, hormones, and liver metabolism at term and during the early postnatal period in the rat. J Clin Invest. 52 (12), 3190-3200 (1973).
- Marques, P. E., et al. Imaging liver biology in vivo using conventional co....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
