Методическая статья

Кролик модель прочного трансген выражения в яремной для общей сонной артерии взаиморасположение графтов

DOI:

10.3791/57231

⸱

10 сентября 2018 г.

 ,  , 
1Department of Medicine, University of Washington School of Medicine

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот метод описывает размещения разъединительных вен графтов в кроликов, трансдукции графтов и достижение прочного трансген выражения. Это позволяет расследования физиологических и патологических роли трансгенов и их белковых продуктов в привитые вен и тестирование генной терапии для трансплантата болезни вен.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Вен трансплантата шунтирования является общей лечения артериальной облитерирующий эндартериит; Однако долгосрочный успех ограничивается отказа трансплантата вследствие тромбоза, гиперплазия интимы и атеросклероза. Цель этой статьи заключается в том, чтобы продемонстрировать метод для размещения двусторонних венозной взаиморасположение графтов в кролика, а затем преобразователя графтов с вектором передачи гена, который достигает прочный трансген выражение. Метод позволяет расследование роли биологических генов и их белковых продуктов в нормальной вен трансплантата гомеостаза. Она также позволяет тестирование трансгенов для мероприятий, которые могли бы предотвратить вен трансплантата сбоя, например., ли выражение трансген предотвращает рост neointimal, уменьшает воспаление сосудистой или уменьшает атеросклероз у кроликов кормят с высоким содержанием жиров диеты. Во время первоначального выживания хирургии сегменты правого и левого внешнего яремной подакцизным и помещены на двусторонней основе как обратный конец в бок общей сонной артерии взаиморасположение графтов. В ходе второй операции выживания, выполнено 28 дней спустя каждый графтов изолирован от обращения с сосудистой клипов и люменов (через arteriotomy) заполнены раствор, содержащий вспомогательные зависимых аденовирусных вектор (HDAd). После инкубации 20-мин атмосферный вектор решения, ремонт arteriotomy и потока восстанавливается. Вены собирают в моменты времени, продиктовано отдельных экспериментальных протоколов. 28-день задержки между размещения трансплантата и трансдукция необходима для обеспечения адаптации вен трансплантата к артериальной циркуляции. Эта адаптация избегает быстрой потере трансген выражения, которое происходит в духе графтов преобразованы до или сразу же после прививки. Метод является уникальным в его способности добиться прочного, стабильного трансген выражение в привитые вен. По сравнению с другими моделями трансплантата крупных животных вен, кролики имеют преимущества низкой стоимости и простой обработки. По сравнению с моделями трансплантата грызунов вен, кролики имеют больше и легче манипулировать кровеносных сосудов, которые обеспечивают обильное ткани для анализа.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Атеросклероз является хроническим воспалительным заболеванием, в котором накопление липидов и воспаление в стенке сосудов ведут к сужению просвета сосуда, инфарктов, инсультов и потеря конечностей1,2. Чрескожного вмешательства (например., ангиопластика и стентирование) и медицинской терапии (например., статины и антиагрегантов агентов) являются полезным лечения атеросклероза; Однако они часто оказываются неэффективными в лечении тяжелой обструктивной болезни как коронарные и периферические тиражами. Шунтирование, использование аутогенных вен сегментов, остается общей процедуры для лечения пац....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все животные протоколы и исследования были утверждены в университете Вашингтона отделение животных.

1. предшествующие операции (для всех кабинетов)

  1. Анестезировать кролика с кетамином и 1,5 мг/кг Ксилазина 30 мг/кг внутримышечно (IM) в paraspinous мышц.
    Примечание: Продовольствие и вода не ограничены до операции.
  2. Время ожидания для достаточной глубины анестезии, настроить таблицы в подготовке комнате и операционной комнате (OR).
    1. Подготовка подготовка номер для бритья шеи кролика и размещение внутривенного (IV) порта в ухо (выживания хирургии только). Место глазная мазь, фентанил патч (выживание хирургии), машин....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Техническое знание нового оператора должны быть проверены, прежде чем оператор может использовать этот метод для создания экспериментальных данных. Первая веха, что необходимо достичь нового оператора является проходимость трансплантата последовательной вен после первоначального пересадка вен хирургия и последующие задержки трансдукции хирургии. Свыше 90% проходимость после каждой операции является желательным и достижимыми. Проходимость можно оценить неинвазивно с помощью чрескожной УЗИ,.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Важнейшие шаги в этом протоколе включают управление анестезии, Антисвертывающая, хирургические манипуляции Вены, артерии/привитые и гемодинамических измерения привитые Вены. Надлежащее управление анестезия имеет решающее значение в этой несколько выживания хирургии модели, которая включает в себя две относительно длинные операции (обычно 3-3,5 ч для двусторонней связи прививки и 1,5-2,5 ч для двусторонних трансплантата трансдукция). Мы ведении анестезии через ураном и эндотрахеальной интубации и обнаружили, что интубации.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Disposables
3mL шприц с иглой 24GBecton Dickinson3095712x для хирургии венозного трансплантата; 2x для переноса генов  хирургия
1 мл шприц с иглой 27GBecton Dickinson3096232x для хирургии венозного трансплантата, 5x для операции по переносу генов
19G иглаBecton Dickinson305187Gene Шприц для переносной хирургии
20 мл, люэровский замокNipro Medical CorpJD+20L
Катетеры, 24Ga x 3/4"Terumo Medical ProductsSROX2419V
иглу 21GBecton Dickinson305165хирургии переноса генов и для 20 мл шприца физраствора
Марля 4" x 4"Dynarex3242~10-15 за операцию
3-0 шелковый шовный материалCovidien Ltd.S-244
5-0 шелковый шовный материалCovidien Ltd.S-182
7-0 полипропиленовый шовный материалCP Medical8703PХирургия венозного трансплантата
7-0 полипропиленовый шовCP Medical8648PХирургия переноса генов
5-0 полигликолевая кислота шовный материалCP Medical421A
3-0 полигликолевый кислотный шовный материалCP Medical398A
Спиртовые тампоныCovidien Ltd.6818Для установки внутривенной катетерной пробки
Vetoquinol411498
Ketamine HCl, 100 мг/млVedco Inc.
Ксилазин, 100 мг/млAkorn Inc.4821
Лидокаин, 20 мг/мл Pfizer409427702
Маркаин 0,5%Pfizer409161050
Beuthanasia D-SpecialIntervet Inc.NDC 00061047305Harvest surgery только
бупренорфин гидрохлорид, 0,3 мг/млPatterson Veterinary12496075705
физиологический раствор для внутривенных вливаний, 0,9% натрия хлоридBaxter2B1309
Heparin  (5000 Ед/мл)APP PharmaceuticalsNDC 63323-047-10
Папаверин (3,5 мг/мл)American Reagent Inc.NDC 0517-4002-25Разведенный из запаса 30 мг/мл; Используйте максимум 1 мл
фентанилового пластыря, 25 мкг/чApotex Corp.NDC 60505-7006-2
ИзофлуранНесколько поставщиковКаталожный номер отсутствует
  Вирусный векторПеренос генов только для хирургии
Хирургические инструменты
Metzenbaum иглодержатель 7" прямойRobozRS-7900
Операционные ножницы 6,5" прямые тупые/тупыеRobozRS-6828
Иглодержатель /w шовные ножницыMiltex8-14-IMC
Ножницы CastroviejoRobozRS-5658
Castroviejo иглодержатель, 5.75" прямой с замкомRobozRS-6412
Stevens ножницы 4.25" изогнутый тупой/тупойRobozRS-5943
Alm ретрактор 4" 4" 4X4 5мм тупые зубцыRobozRS-65142x
Backhaus зажим для полотенца 3.5"Roboz4x
Щипцы для установки микрозажимов 4,75"RobozRS-6496
Микрососудистые зажимы, 11 ммRoboz
Surg-I-LoopScanlan International1001-81Mдлина 5 см
Щипцы Bonakcolto, 4" (10 см) длина продольных зубцов, крестообразный зазубренный наконечник, ширина наконечника 1,2 ммRobozRS-5210
Щипцы Dumont #3 Размер наконечника нержавеющей стали .17 × .10 ммRobozRS-5042
Щипцы Graefe, 4" (10 см) длинный зубчатый прямой, наконечник 0,8 ммRobozRS-5280
Щипцы для комаров Холстеда,  5" прямые, наконечники 1,3 ммRobozRS-71102x
щипцы для комаров Холстеда,  5" изогнутые, наконечники 1,3 ммRobozRS-7111
Щипцы от комаров Jacobson 5" изогнутые экстра нежные, наконечники 0,9 мм RobozRS-7117
Щипцы Кантровица, 7,25 дюйма 90 градусов деликатные, наконечники 1,7 ммRobozRS-7305
Щипцы для ткани 5", зубы 1X2, ширина наконечника 2 ммЩипцы RobozRS-8162
Allis-Baby, 12 см, 4x5 зубьев, ширина наконечника 3 ммFine Science Tools11092-122x
щипцы Adson, 12 см, зубчатые, прямыеFine Science Tools11006-12
Ветеринарный электрохирургический наконечник и электродMACAN ManufacturingHPAC-1; R-F11
Surgical Suite Оборудование
Циркуляционное одеяло для теплой воды и насосНесколько поставщиковКаталожный номер недоступен
Устройство для подогрева Bair Hugger3MМодель 505
Внутривенный инфузионный насосHeskaVet IV 2.2
Испаритель и поглотитель изофлуранаНесколько поставщиковКаталожный номер недоступен
Ветеринарный многопараметрический мониторSurgivet SurgivetAdvisor
Ветеринарный электрохирургический аппаратMACAN ПроизводствоMV-9
Хирургический микроскопD.F. VasconcellosM90025-кратное увеличение для хирургии венозного трансплантата; 16-кратное увеличение для хирургии переноса генов
5098916106

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Libby, P., Bornfeldt, K. E., Tall, A. R. Atherosclerosis: Successes, Surprises, and Future Challenges. Circ Res. 118, 531-534 (2016).
  2. Fowkes, F. G., et al. Comparison of global estimates of prevalence and ris....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи