Методическая статья

Microdissection первичной почечной ткани сегментов и интеграция с технологией Роман эшафот свободной конструкции

DOI:

10.3791/57358

⸱

27 марта 2018 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, Medical University of South Carolina

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ткани инженерных конструкций почечной предоставляют решение для органа нехватка и пагубные последствия диализа. Здесь мы описываем протокол к микро вскрыть мышиных почки для изоляции cortico Медуллярная сегментов. Эти сегменты имплантируется в эшафот бесплатный сотовых конструкций, образуя почечной organoids.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Трансплантация почки в настоящее время основной терапии для терминальной стадии почечной болезни. Однако с примерно 96 000 человек на лист ожидания и только четверть из этих пациентов, достижение трансплантации, существует острая потребность в альтернативных вариантов для тех, кто не в состоянии органов. Для уменьшения вредных последствий диализа наряду с общей медицинских расходов, которую он несет, активное расследование продолжается в поисках альтернативных решений для трансплантации. Имплантируемые почечной сотовой конструкции, ткани инженерии, один такой реальный подход к замене потерянных почечной функции. Описанные в первый раз, вот microdissection мышиных почек для изоляции жизни corticomedullary почечной сегментов. Эти сегменты способны быстрого включения в течение бесплатно эшафот эндотелия фибробластов конструкций, которые могут включить быстрое соединение с принимающей сосудистую после имплантации. Взрослый мыши почки были закуплены от живых доноров, следуют стереоскоп microdissection для получения почечной сегментов 200-300 мкм в диаметре. Несколько почечной конструкции были изготовлены с использованием первичных почек сегментов заготавливаемым от только одной почки. Этот метод демонстрируется процедура, которая может спасти функциональной почечной ткани от органов, которые в противном случае будет игнорироваться.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Хроническая болезнь почек (CKD) является одним из текущих общественного здравоохранения проблемы во всем мире1. Распространенность CKD в Соединенных Штатах составляет более 14% от общей численности населения, с более чем 600 000 американцев страдают от наиболее тяжелой формой, терминальная стадия почечной недостаточности (ТПН)2. Текущие варианты лечения доступны для тех, кто с ТПН включают диализа и почечной трансплантации. Хотя приблизительно 25 000 пациентов проходят почечной трансплантации каждый год, значительное количество пациентов добавляются ежегодно приводит к большой разрыв между теми ожидающих спасения жизни о....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все животные хирургических процедур, описанных ниже были утверждены институциональный уход животных и использовать Комитет (IACUC) в медицинский университет Южной Каролины до любых животных операций или использование любых животных тканей.

1. мышиных нефрэктомия

  1. Дон хирургические маски и начес шапку, чтобы свести к минимуму риск загрязнения. Поддерживать стерильность во время настройки области хирургического.
    1. Место не перфорированную хирургические шторы на операционном столе.
    2. Откройте пакет газобетона инструментов на стерильную шторы. Инструменты, необходимые для нефрэктомия включают 3 небольших hemostats, изыск....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол, в описанный производит около 50 почечной сегментов на пирамидальную 2мм3 часть почечной ткани. Почечная сегментов, которые были обработаны и образы имеют трубчатых и клубочковых компоненты в различных пропорциях (см. Рисунок 2). Нетронутыми сегменты были подвергнуты assay для определения жизнеспособности различных сегментов один раз каждые 24 часа в течение трех дней. Зеленый флуоресцентный Флуорексон ам присутствует с активность внутрикл.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Методы, используемые для инженер почечной ткани жизни конструкции различаются в отношении как тип клеток и биоматериалов использованы и во многих случаях являются устаревшими или не хорошо изученных в литературе7. Хотя многие используют подходы стволовых клеток или перечислении отдельные компоненты архитектуры почек в изоляции, перспектива искусственно воссоздать весь орган с более чем 26 типов различных дифференцированных клеток из клеточных суспензий Подавляющее рассмотреть21

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH институциональных докторантура Грант, низ HL-007260

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Нефенестрированный стерильный FieldBusse Hospital Disposables696
Fenestrated Sterile FieldBusse Hospital Disposables697
Halsted Mosquito Щипцы 5 ИзогнутыйMiltexMil-7-4"Hemostat" in manuscript
Extra Fine Graefe Щипцы, изогнутые с зубамиFine Science Tools11155-10Тонкие щипцы с зубами
Очень тонкие щипцы Graefe, зазубренные (без зубов)Fine Science Tools11152-10Тонкие щипцы без зубов
Тонкие ножницы - карбид вольфрамаFine Science Tools14568-09Ножницы для ирисов
Betadine Хирургический скраб с насосом, повидон-йод 7,5%Purdue Products L.P.67618-151-17
Стерильная ватная марлевая салфетка (4" x 4")Fisher Healthcare22-415-469
Буферный раствор фосфата ДульбеккоCorning21-030-CV
раствор пенициллина/стрептомицина, 100XCorning30-002-Cl
изофлуран, USPПроизводитель: Piramal, дистрибьютор: McKesson2254845
Nair Hair RemoverNair22600-23307Крем для удаления волос в тексте
200 Proof EthanolDecon Laboratories2705Разбавленный до 70% раствор этанола
BioLite 60 мм Чашка для культуры тканейThemo-Scientific130181
Press'n SealGlad12587-70441Нанесено на стереоскоп
SZX16 СтереомикроскопOlympusSZX16
Волоконно-оптический осветительCole Parmer41720-20
Самонесущая двойная световая труба, 23 "L гусиная шеяCole ParmerEW-41720-60
Ручка скальпеля # 3MiltexMil-4-7
Стерильное ребро назад Лезвие из углеродистой стали, размер лезвия 15Bard-Parker371115
игла 31 1/2 калибраThermoFisher Scientific14-826FBecton Dickinson 305106
Dulbecco's Modified Eagle's MediumCorning10-017-CV
Fetal Select 100% бычья сывороткаAtlas BiologicalsFS-0500-AD
Нормальные дермальные фибробласты человекаLonzaCC-2511
Жировые микрососудистые эндотелиальные клетки человекаНаучные исследовательские лаборатории7200
Хирургические лупы (2,5x)Ораскопическая(Н/Д) по индивидуальному заказу
FGM-2 (Базальная среда фибробластов с добавлением FGM-2 SingleQuots)LonzaCC-3131, CC-4126
EGM-2 (Эндотелиальная базальная среда с добавлением EGM-2 SingleQuots)LonzaCC-3156, CC-4176
Набор для жизнеспособности/цитотоксичности живых/мертвых клеток млекопитающихThermoFisher ScientificL3224
Антитело к цитокератину-18Abcamab668
Антитело к мышам IgG у козы, Alexa Fluor 633ThermoFisher ScientificA-21052
У козы против кролика IgG, Alexa Fluor 546ThermoFisher ScientificA-11010
Антитело к фактору фон ВиллебрандаAbcamab6994
Альбумин, флуоресцеин изотиоцианат КонъюгатSigma AldrichA9771-50MG
Hoescht 33342BD Pharmingen561908
Background BusterInnovex BiosciencesNB306

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jha, V., et al. Chronic kidney disease: global dimension and perspectives. Lancet. 382 (9888), London, England. 260-272 (2013).
  2. 2016 USRDS Annual Data Report: Epidemiology of Kidney Disease in the United States. U.S.R.D. , Available from: https://www.usrds.org/2016/download/v2_ESRD_16.pdf (2016).
  3. Hart, A., et al.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи