Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Изоляции первичных клеток человека децидуальной от плода мембраны термин Роль162

14.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57443

⸱

30 апреля 2018 г.

 ,  ,  , 
1Department of Physiology, University of Toronto, 2Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute, Sinai Health System, 3Department of Obstetrics and Gynecology, University of Toronto

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол демонстрирует метод для изоляции первичных клеток человека децидуальной, собранных от плода мембраны термин роль162, которые могут быть использованы для различных приложений (т.е. immunocytochemistry, проточной цитометрии и т.д.) направленных изучить роль различных клеточных популяций в осложнений беременности.

Аннотация

Европейская, также известный как беременные эндометрия, является критически важной репродуктивных тканей. Децидуальной клеток, в основном состоит из decidualized стромальных клеток и иммунных клеток, ответственных за секрецию гормональные и воспалительных факторов, которые имеют решающее значение для успешного бластоциста имплантации, плацентарной развития и сыграть роль в Начало труда на срок и недоношенных новорожденных. Многие осложнения беременности могут возникнуть от возмущения прекрасный баланс различных клеточных популяций, включающий decidua. Изменения доли типов конкретных децидуальной клеток может нарушить этих важнейших процессов и увеличить риск развития серьезных осложнений беременности, например отказ имплантации эмбриона, Внутриутробное ограничение роста, преэклампсией и преждевременные роды. Протокол, изложенные здесь показывает стоимость и время эффективный метод для изоляции первичных клеток человека децидуальной собранные от плода мембраны термин роль162. Объединив ферментативного пищеварения и нежный механическое нарушение децидуальной ткани, высокая доходность децидуальной клеток был получен с практически без загрязнения хориона. Главное, характеризовались изолированных децидуальной клеток (стромальные клетки (55-60%), лейкоциты (35%), эпителиальных (1%) или клеток трофобласта (0,01%)) и поддерживается высокой жизнеспособности (80%), который был подтвержден многоцветной визуализации потока цитометрии пробирного. Этот протокол для decidua parietalis и может быть адаптирована к роль162 первого и второго триместра. После того, как изолированные, децидуальной клетки могут использоваться для множества экспериментальных приложений, стремясь понять роль различных децидуальной клеток субпопуляциях в осложнений беременности.

Введение

Эндометрия, один из самых активных взрослых женщин тканей, претерпевает драматические ремоделирования каждого менструального цикла в ответ на стимуляцию яичников гормоны, эстрогены (E2) и прогестерона (P4). Европейская, также известный как беременные эндометрия, является критически важной репродуктивных ткани, которая сформирована к концу этапа postovulatory результате P4-driven дифференциация после E2-доминантный Пролиферативная фаза. Децидуальной клетки отвечают за секрецию гормональных факторов для успешного бластоциста имплантации и развития маточно плацентарный интерфейса для поддержания материнской толерантности к плода аллотрансплантатом.

Decidualization является обязательным для имплантации и последующей реконструкции децидуальной спиральных артерий. Эндометрия стромальные клетки проходят decidualization, под контролем P4 и лагерь, в конце лютеиновой фазы менструального цикла1. Этот процесс инициируется вокруг кровеносных сосудов и распространяется по всему стромы, предлагая свою роль в реконструкции сосудистую и лейкоцитов, регулирование оборота. Этот сотовый трансформации характеризуется круговой морфологии, увеличение размера ядерных и расширение грубый эндоплазматический ретикулум и аппарат Гольджи2. Decidualized стромальные клетки способны производить паракринными факторов поддержки имплантация бластоцисты и характеризуется секрецию многочисленных гормонов (то есть пролактина), ангиогенных факторов роста, инсулин фактор роста привязки белка-1 (IGFBP-1), простагландины (PG) E (стимулятором внутриклеточных лагеря), цитокины, компоненты внеклеточного матрикса и питательные вещества, необходимые для плацентарного имплантации и развития3,4,5,6 .

Популяции децидуальной клеток не состоит исключительно из decidualized стромальные клетки, но также содержит большой, специфичные для беременности децидуальной лейкоцита населения. Decidualization включает в себя временные локализованные отеки и приток природного убийца (НК) клетки, Т-клеток, дендритные клетки и макрофаги. Самая большая субпопуляция лейкоцитов является матки НК-клеток, состоящий из примерно 50-70% всех матерей лейкоцитов, проникнув decidua, которые являются источником цитокинов и ангиогенных факторов, которые могут помочь в процессе decidualization и увеличение номер на протяжении беременности7. Макрофаги, будучи вторым по величине субпопуляция иммунных клеток, находятся вокруг места имплантации и увеличить во время беременности8. Они являются источником цитокинов и роста такие факторы, как колонии стимулирующий фактор (РСУ-1)9, фактора некроза опухоли альфа (TNFα)10 и простагландина (PG) E11.

Во время беременности и до срока родов Европейская является основным источником цитокинов и chemokines ответственность за материнской лейкоцитов периферической активации и последующей миграции в маточных тканей начать труда. Исследования на животных показали, что многочисленные провоспалительных цитокинов вверх регулируются decidua мыши во время родов, такие как ФНО a, IL-6, Ил-12 и Ил 1b12. В человеческой decidua провоспалительных цитокинов ИЛ 1b, IL-6 и IL-8 (основных нейтрофилов хемотаксического) экспонат выше выражение во время родов, по сравнению с не в труд13. Эти секретным cytokines результат активации и приток лейкоцитов в децидуальной ткани14; увеличение децидуальной макрофагов и нейтрофилов инфильтрации в как людские, так и крыса рассматривается во время срока родов, децидуальной инфильтрации предшествующих миометрия, 4 раза больше, указывающее каскад активации между этой двух прилегающих тканей матки 15. Эти проникновения лейкоциты производят PGs способны активации синхронных сокращения миометрия16, матрицы металлопротеиназ (равенству) инициировать мембраны разрыв17,18, а также провоспалительных цитокинов усилить процесс активации матки («цитокинов шторм»).

Из-за многих важных функций децидуальной клеток, например, играет решающую роль в процессе имплантации, поддержание матери и плода терпимости в начале беременности и участвует в активации труда на срок различные патологии могут возникнуть во время беременности. Например (1) бесплодия из-за периодических имплантации неудачи и привычным невынашиванием может быть результатом сбоя децидуальной созревания; (2) Внутриутробное ограничение роста (IUGR) и преэклампсии из-за неправильного развития и дисфункции decidua/плаценты или скомпрометированных сосудистой преобразования на стыке децидуальной миометрия; а также (3) преждевременных родов, которая может быть результатом преждевременного децидуальной активации.

С учетом этих серьезных расстройств, в сочетании с этических и практических ограничениях человека в vivo исследований, создания линий первичной децидуальной клеток человека имеет важное значение для анализа в пробирке с целью лучшего понимания и Улучшение клинической управления осложнений беременности. Таким образом целью нашего исследования было разработать протокол, который позволяет для изоляции первичных децидуальной клеток человека с высоким клетки урожайность и жизнеспособности, собранных от плода мембраны термин роль162. Этот текущий протокол четко описывает время и экономичным метод для изоляции из конкретных подтипы децидуальной клетки которые использоваться для различных анализов в пробирке . Характеристика изобилия и фенотип децидуальной субпопуляциях в срок и сравнение на первом или втором триместре имеет решающее значение для определения их роли на протяжении беременности человека.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Роль162 собраны из здоровых термин, не в труд женщин проходит плановое кесарево сечение. Сбор, переработка и одноразовые человеческих образцов придерживаться руководящих принципов правления Маунт Синай Больница этики. Письменное согласие от каждого пациента. Это исследование утверждается Советом этики научных исследований на горе Синай.

1. Подготовка

Примечание: Все шаги должны проводиться под вытяжной шкаф и все хирургическое оборудование должны быть простерилизованы через автоклава до размещения в зонта. Все другие материалы (бутылки, 50 мл трубки и т.д.) должны быть простерилизованы с 70% этанола раствор. Всегда носить личного защитного снаряжения в любое время при работе с зараженные отходы (лаборатории пальто, перчатки, длинные волосы связаны обратно, и т.д.).

  1. Раствор ферментативного пищеварения (окончательное решение: 200 мл)
    1. Пипетка 180 мл HBSS-/ - в 500 мл стакан, добавить стерильные перемешивания магнит и на перемешивание пластины при комнатной температуре.
    2. Весят и добавьте следующее решение HBSS-/-медленно и последовательно: 20 мл FBS, 400 мг коллагеназы 2 ([окончательного] = 2 мг/мл), 20 мг соевых бобов ингибитор трипсина ([окончательного] = 0,1 мг/мл), 30 мг DNase 1 ([окончательного] = 0,15 мг/мл) и 200 мг BSA ([окончательного] = 1 мг/мл)
    3. Значение средней скорости перемешивания и позволяют смесь размешать 10-20 мин (обложка с жестяной фольги или парафин фильм помешивая).
    4. Вылить смешанные решения в стеклянная бутылка 250 мл, используя пластиковые воронку и место в зонта.
    5. Передайте решение через пластиковые Топ фильтрующего блока (0.22 мкм мембранный фильтр, 500 мл), аликвота 20 мл в 50 мл трубки (всего 10 трубы) и хранить при температуре-20 ° C до использования.
  2. RPMI 1640 СМИ (промывание решения и 10% полный рост среднего 2%)
    1. Объединить RPMI 1640 и FBS в стеклянной бутылке в зонта.
    2. 2% раствор FBS сочетают в себе 490 мл RPMI 1640 и 10 мл FBS.
    3. Для 10% раствор FBS объединить 450 мл RPMI 1640 и 50 мл FBS.
    4. Пипетка 500 мкл normocin в 500 мл флакон из предыдущего шага, содержащие, RPMI СМИ и FBS (50 мг/мл штока, рабочие концентрации 0,05 мг/мл).
    5. Передайте СМИ через 0,22 мкм мембранный фильтр и хранить в стеклянной бутылке 500 мл на 4 ° C до использования.
  3. 30 мин до начала эксперимента, место 20 мл Алиготе из замороженных ферментативного пищеварения раствор в ванну шарик 37 ° C, место 2% FBS и 10% FBS RPMI 1640 СМИ в ванне шарик с 37 ° C, включите качания водяной бане и до 37 ° C , 2 g и набор центрифугу температуры на 4 ° C.

2. сбор децидуальной ткани от термин плацентарной мембраны

  1. Место бутылки с HBSS +/ +, HBSS-/- и пять 50 мл трубки в стойку под зонт. Пипетка 25 мл HBSS +/ + в одной из труб.
  2. С помощью перчатках, вывезти термин плаценты из контейнера для его перевозки от операционной комнате театра. Место плаценты на пеленку pad (материнской стороной вверх) и распространение плода мембраны с помощью ножниц и пинцет.
    1. Положите перекрывающихся пеленки колодки на зонта.
    2. Используйте отдельный пеленки для флип через плаценту, так с материнской стороны является лицом вверх.
    3. Найти точку разрыва мембраны и делать надрезы разрешить мембраны разворачиваться и заложить плашмя на fumehood поверхности.
      Примечание: После того, как мембрана вытащил обратно из плаценты, decidua будет лицом вверх отдыхает на слое Хорион, амнион слоем на спине.
  3. Скребком пластиковые клетки, тщательно очистите децидуальной ткани хориона и место в Тюбик 50 мл, содержащие 25 мл HBSS +/ +.
  4. Скрип мембраны с умеренным давлением. Не применять слишком много давления, как это может привести к загрязнению хориона. Соберите небольшие сгустки крови, так как они содержат некоторые децидуальной клетки.
    Предупреждение: После децидуальной коллекции, должны быть упакованы в пластиковые бен биологической и заморозить в морозильной камере-20 ° C до надлежащего удаления (согласно ваших организационных правил) плаценты. Кровавый пеленки колодки должны быть завернутый в печать плотный полиэтиленовый пакет и утилизировать в коробке биологической безопасности.

3. мытье и ферментативного пищеварения децидуальной ткани

  1. Вымойте собранные тканей мягко встряхивания 50 мл трубки вручную и передавая его через 250 мкм металлическое сито (250 мкм, размер 60 сетка) наведении стерильные образца (моча) контейнер.
  2. Повторите дважды промыть HBSS +/ + и дважды с HBSS-/ - в свежих трубы для каждой стирки. (финал моет с HBSS-/-позволяет для удаления кальция и магния в HBSS +/ +, которая бы в противном случае вмешиваться в следующих процесс ферментативного пищеварения).
    ПРИМЕЧАНИЕ. Во время стирки шаги загрязнение ткани хориона будет очевидным, как децидуальной ткани светло-розовый цвет и аморфных, а хориона, белая, плотная и тягучий. Таким образом Хорион загрязнения могут быть легко удалены с щипцами.
  3. При необходимости если децидуальной ткани толщиной, передача его в чашку Петри стерильные 10 см диаметр и приступить к фарш из ткани с двух противоположных Скальпели в блюдо.
  4. Место промывают ткани в стерильных 50 мл трубки, содержащий 100 мг ткани/мл раствора ферментативного пищеварения (см. препаратов).
    1. Как точки отсчета убедитесь, что уровень децидуальной ткани достигает отметки 5-10 мл на 50 мл трубки.
    2. Используйте примерно 20 мл раствора ферментативного пищеварения (подготовлено на этапе 1.1) переваривать Общая европейская, собранные из всего срока плода мембраны.
  5. Закрыть крышку трубки с парафином фильм (печать трубки плотно и обернуть парафин фильм вокруг крышки и верхней части трубки) под культуру капот и инкубировать децидуальной ткани при 37 ° C 20 мин в тряску водяной бане (145 об/мин 2 g).
  6. После инкубации снимите пленку парафина и стерилизовать поверхности трубка, содержащая переваривается ткани с 70% этанола и под зонт. Встряхните трубки кратко вручную.
  7. Соберите суспензию клеток через металлическое сито (250 мкм, размер 60 сетка) в новый контейнер стерильные образца. Развести с равным объемом (20 мл) RPMI + 10% FBS содержащих 0,1% normocin, чтобы остановить ферментативной реакции. Перейти непосредственно к шагу центрифугирования 4.1.
  8. В случае необходимости, место оставшиеся непереваренных ткани обратно в новый Тюбик 50 мл с 20 мл раствора свежие ферментативного пищеварения и повторить пищеварения (20 мин., 37 ° C, пожимая водяная баня).
  9. При необходимости второй пищеварение, место первой трубки с суспензию клеток на льду (обложка с парафином фильм держать стерильный). Повторите шаги с 3.5-3.6 и объединить две клетки суспензий.

4. Создание одной ячейки подвеска

  1. Центрифуга суспензию клеток (420г, 4 ° C, 11 мин).
  2. Удалить супернатант и Ресуспензируйте клетки в 40 мл RPMI + 2% FBS содержащих 0,1% normocin («мыть буфера»).
    Примечание: Пелле ячейки будет свободно и желатиновых из-за загрязнения красных кровяных клеток, аспирационная супернатант с осторожностью. Может потребоваться удаление верхнего этапа с ручной дозатор.
  3. Повторите центрифугирования 420г при температуре 4 ° C на 11 мин.
  4. Тщательно удалить супернатант (как указано в записке шаг 4.2) и Ресуспензируйте Пелле клеток в 5 мл буфера мытья и добавить 35 мл буфера lysis эритроцитов в том же трубе.
    Примечание: Если гранулы большие или очень кровавый, его можно разделить на две трубы для шага Лизис эритроцитов путем добавления 10 мл буфера мытья и одинаково разделить две трубы и затем добавив 35 мл буфера lysis эритроцитов к каждой трубе.
  5. Инкубируйте на льду на 20 мин кратко вихревой трубки в начале и в конце инкубации лизируют красных кровяных клеток.
  6. Центрифуга на 420г за 11 минут при 4 ° C.
  7. Тщательно удалить супернатант и Ресуспензируйте гранулы в 40 мл буфера мытья.
  8. Клетки проходят через 70 мкм Нейлоновый фильтр для удаления скопления клеток.
  9. Центрифуга на 420 g 11 мин при 4 ° C.
  10. Удалить супернатант и Ресуспензируйте Пелле клеток в 10 мл полного среднего (RPMI 10% + FBS, содержащие 0,1% normocin).
  11. Подсчитать ячейки с помощью процедуры Горяева Трипановый синий краситель исключение как описано ниже:
    1. Под капотом культуры нежно Пипетка суспензию клеток вверх и вниз 3 x для того, чтобы тщательно перемешивают до объединения с Трипановый синий. В 1,5 мл трубки готовят суспензию клеток, разводят 1:2 (комбинат 20 мкл раствора Трипановый синий) и 20 мкл суспензии децидуальной клеток. Тщательно смешайте Трипановый синий клеточной решение закупорить вверх и вниз несколько раз (это решение не является стерильной).
    2. Место Горяева на сцене микроскоп с coverslip стекла на вершине.
      Примечание: Горяева является микроскопа с сетками на нем дать девять больших квадраты, разделенные тройной линий. Каждый большой квадрат имеет площадь 1 мм2, и глубина жидкости в камере составляет 0,1 мм. Таким образом, объем жидкости, которая может заполнить каждый большой площади составляет 1 * 1 мм * 0.1 мм = 0,1 мм3= 10-4 мл.
    3. Медленно добавьте 10 мкл Трипановый синий клеточной смеси в паз Горяева, позволяя капиллярность разойтись в ячейку смесь на весь слайд (остановка перед смесь хорошо заполняет).
    4. Просмотр клетки под микроскопом (при 10-кратном) и рассчитывать все белый/зеленый клеток, которые исключают Трипановый синий (это жизнеспособные клетки) в четырех крупных внешних квадратов Горяева. Когда подсчет клеток, которые касаются линии, граф только те, что прикосновение право и верхней линии, но не те, трогательно левой и нижней линии. Не учитываются темно синие клетки; синий цвет указывает, что ячейка мертв, как Трипановый синий краситель может легко проникнуть через плазматическую мембрану в цитоплазме.
    5. Чтобы вычислить количество жизнеспособных клеток в 1 мл суспензии клеток (X):
      figure-protocol-1
      2 = коэффициент разрежения
      10000 = коэффициент конверсии (1 мл = 1 см3 = 10, 000 * 0.1 мм3)
  12. Разбавить децидуальной клетки к желательным конечная концентрация в RPMI + 10% FBS (средний рост).
    Примечание: Для покрытия культуры ткани, Пипетка 2 * 106 клеток/колодец в пластиковые пластины 6-а, 10 * 106 клеток в 10 см пластиковые пластины или 75000 клеток к coverslip стекла.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Чтобы проверить эффективность и жизнеспособность изолированных клеток, они характеризовались двумя методами: поток цитометрии и immunocytochemistry (ICC). были направлены 4 клеточных популяций; decidualized стромальные клетки были обнаружены антитела анти виментин, Пан лейкоцита маркер CD45 использовался для выявления децидуальной иммунных клеток, Цитокератины был использован для обнаружения эпителиальных/эндотелиальных клеток и наконец, Цитокератины 7 была использована для выявления любы...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Протокол, описанные здесь демонстрирует стоимости и времени, эффективный метод для изоляции первичных децидуальной клетки собранные от плода мембраны всей человеческой термин роль162, который является очень доступным и простым. Успех этого протокола зависит от двух важнейших факторов, (1) эффективность децидуальной соскоб из слоя Хорион плода мембран и (2) заботу, с которой децидуальной клетки обрабатываются по всему протоколу. Важно, что загрязнение ткани хориона контролируется путем обеспечения того, чтобы никто случай...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить доноров, RCWIH биобанке и Маунт-Синай/UHN Кафедра акушерства и гинекологии для человека образцы, используемые в данном исследовании. Мы хотели бы поблагодарить членов в лаборатории щелок, особенно д-р Каролин замочить за ее помощь в разработке метода. Эта работа поддерживается Фондом Добро Берроуз (Грант #1013759).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Хэнк s сбалансированный солевой раствор с кальцием и магниемПриготовленный на предприятии (LTRI)
Hank' s сбалансированный солевой раствор без кальция и магнияПриготовлено в учреждении (LTRI)
ПодгузникиSigma-AldrichD9542
Большие хирургические ножницыAL Medical2018-12-20.
Большие хирургические щипцыFine Science Tools11000-18
Пластиковый одноразовый скребок для клеток (25 см)Sarstedt83.183
250 мм (размер 60 меш) металлическое ситоSigma-AldrichS1020-5EA
Одноразовый скальпель с пластиковой ручкой (#21)Fisher Scientific08-927-5D
Стерильная пластиковая чашка для Петри (диаметр 10 см)Sarstedt82.1473.001
Стерильный контейнер для образцов (чашка для мочи, 4,5 унции)VWR25384-146
Нейлоновый фильтр (70 мм)VWR/Corning21008-952
Буфер для лизиса эритроцитовQiagen79217
Трипановый синий, 0,4% растворLonza17-942E
ParafilmFisher Scientific13-374-10
ГемоцитометрReichert1490
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 питательные средыInvitrogen11835-055
Фетальная бычья сывороткаWisent080-150
Нормоцин (50мг/мл)Invivogenant-nr-1
Пластиковая верхняя фильтрующая установка (мембрана 0,22 мм, 500 мл)MilliporeSCGPT05RE
Коллагеназа 2, лиофилизированный порошокSigma-AldrichC6885
Ингибитор трипсина соевых бобов, порошокSigma-AldrichT9003-250mg
ДНКазный порошокRoche10104159001
Бычий сывороточный альбумин (порошок BSA)Fisher ScientificBP1600-100
Конфокальный микроскоп с вращающимся диском - Leica DMI 6000BLeica
Проточный цитометр Imaging - Image Stream MK2Программное обеспечение Amnis
IDEAMillipore Sigma
APC-конъюгированное антитело к виментинуR& D SystemsIC2105A
APC H7-конъюгированное антитело CD45BD641399
FITC-конъюгированное антитело к цитокератинуMACs Miltenyi Biotec130-080-101
PerCP -конъюгированное антитело к цитокератину 7NovusNBP2-47941PCP
eFluor450 Корректируемый краситель жизнеспособностиThermo Fisher Scientific65-0863-14
Первичное антитело к виментинуSanta Cruzsc-7558
CD45 первичное антителоDakoM0701
Первичное антитело к цитокератинуDakoM0821
Первичное антитело к цитокератину 7DakoM7018
Мышиный IgGSanta Cruzsc-2025
Козий IgGSanta Cruzsc-2028
Alexa Fluor 546 вторичное антителоInvitrogenA10036
Alexa Fluor 594 вторичное антителоFisher ScientificA-11058
DAPISigma-AldrichD9542

Ссылки

  1. Brosens, N., Hayashi, N., White, J. O. Progesterone receptor regulates decidual prolactin expression in differentiating human endometrial stromal cells. Endocrinology. 140, 4809-4820 (1999).
  2. Bell, S. C., D'Arcangues, C., Frase, I. S., Newton, J. R., Odlind, V. Decidualization and relevance to menstruation. , Cambridge University press. 187-212 (1990).
  3. Kariya, M. Interleukin-1 inhibits in vitro decidualization of human endometrial stromal cells. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 73, 1170-1174 (1991).
  4. Dimitriadis, E., Robb, L., Salamonsen, L. A. Interleukin 11 advances progesterone-induced decidualization of human endometrial stromal cells. Molecular and Human Reproduction. 8, 636-643 (2002).
  5. Wu, W. -X., Brooks, J., Glasier, A. F., McNeilly, A. S. The relationship between decidualization and prolactin mRNA and production at different stages of human pregnancy. Society for Endocrinology. 14, 255-261 (1995).
  6. Bell, S. C. Synthesis and secretion of protein by the endometrium and decidua. Implantation: Biology and Clinical Aspects. , 95-118 (1988).
  7. Croy, B. A., Chantakru, S., Esadeg, S., Ashkar, A. A., Wei, Q. Decidual natural killer cells: key regulators of placental development. Journal of Reproductive Immunology. 57, 151-168 (2002).
  8. Smarason, A. K., Gunnarsson, A., Alfredsson, J. H., Valdimarsson, H. Monocytosis and monocytic infiltration of decidua in early pregnancy. Journal of Clinical and Laboratory Immunology. 21, 1-5 (1986).
  9. Daiter, E., Pampfer, S., Yeung, Y. G., Barad, D., Stanley, E. R., Pollard, J. W. Expression of colony- stimulating factor-1 in the human uterus and placenta. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 74, 850-858 (1992).
  10. Casey, M. L., Cox, S. M., Beutler, B., Milewich, L., MacDonald, P. C. Cachectin/tumor necrosis factor-alpha formation in human decidua. Potential role of cytokines in infection-induced preterm labor. Journal of Clinical Investigation. 83, 430-436 (1989).
  11. Lala, P. K., Kennedy, T. G., Parhar, R. S. Suppression of lymphocyte alloreactivity by early gestational human decidua. II. Characterization of the suppressor mechanisms. Cellular Immunology. 127, 368-381 (1988).
  12. Shynlova, O., Nedd-Roderique, T., Li, Y., Dorogin, A., Nguyen, T., Lye, S. J. Infiltration of myeloid cells into decidua is a critical early event in the labour cascade and post-partum uterine remodelling. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 17, 311-324 (2013).
  13. Osman, I., Young, A., Ledingham, M. A., Thomson, A. J., Jordan, F., Greer, I. A., Norman, J. E. Leukocyte density and pro-inflammatory cytokine expression in human fetal membranes, decidua, cervix and myometrium before and during labour at term. Molecular Human Reproduction. 9, 41-45 (2003).
  14. Farine, T., Lye, S. J., Shynlova, O. Peripheral maternal leukocytes are activated in response to cytokines secreted by uterine tissues of pregnant women. Journal of Cellular and Molecular Immunology. 14, 635-638 (2017).
  15. Hamilton, S., et al. Macrophages infiltrate the human and rat decidua during term and preterm labor: evidence that decidual inflammation precedes labor. Biology of Reproduction. 86, 39(2011).
  16. Casey, M. L., Cox, S. M., Word, A., Macdonald, P. C. Cytokines and infection-induced preterm labour. Reprodution Fertility and Development. 2, 499-510 (1990).
  17. Yellon, S. M., Mackler, A. M., Kirby, M. A. The role of leukocyte traffic and activation in parturition. Journal of the Society for Gynecologic Investigation. 10, 323-338 (2003).
  18. Gomez-Lopez, N., StLouis, D., Lehr, M. S., Sanchez-Rodriguez, E. N., Arenas-Hernandez, M. Immune cells in term and preterm labor. Cellular & Molecular Immunology. 11, 571-581 (2014).
  19. Xu, Y., Plazyo, O., Romero, R., Hassan, S. S., Gomez-Lopez, N. Isolation of leukocytes from the human maternal-fetal interface. Journal of Visualized Experiments. 99, (2015).
  20. Trundley, T., Gardner, L., Northfield, J., Moffett, A. Methods for isolation of cells from the human fetal-maternal interface. Methods in Molecular Medicine. 122, 109-122 (2006).
  21. Jividen, K., Movassagh, M. J., Jazaeri, A., Li, H. Two methods for establishing primary human endometrial stromal cells from hysterectomy specimens. Journal of Visualized experiments. 87, (2014).
  22. Pelekanos, R. A., Sardesai, V. S., Futrega, K., Lott, W. B., Kuhn, M., Doran, M. R. Isolation and expansion of mesenchymal stem/stromal cells derived from human placenta tissue. Journal of Visualized experiments. 112, (2016).
  23. De Clercq, K., Hennes, A., Vrien, J. Isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization. Journal of Visualized Experiments. 121, (2017).
  24. Zhang, J., Shynlova, O., Sabras, S., Bang, A., Briollais, L., Lye, S. J. Immunophenotyping and activation status of maternal and peripheral blood leukocytes during pregnancy and labour, both term and preterm. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 10, 2386-2402 (2017).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Изоляции первичных клеток человека децидуальной от плода мембраны термин Роль162
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.