Методы для обнаружения цитотоксических Амилоиды следующие инфекции из легочного эндотелиальных клеток, синегнойной палочки

Ron Balczon; Michael Francis; Silas Leavesley; Troy Stevens

doi:10.3791/57447

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Методы для обнаружения цитотоксических Амилоиды следующие инфекции из легочного эндотелиальных клеток, синегнойной палочки

5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57447

⸱

12 июля 2018 г.

Ron Balczon¹^,⁴ , Michael Francis²^,⁴ , Silas Leavesley³^,⁴ , Troy Stevens²^,⁴

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology, University of South Alabama, ²Department of Physiology and Cell Biology, University of South Alabama, ³Department of Chemical and Biomolecular Engineering, University of South Alabama, ⁴Center for Lung Biology, University of South Alabama

В этой статье

Краткое содержание

Простые методы описаны для демонстрации производство цитотоксических Амилоиды после инфицирования легочного эндотелия синегнойной палочки.

Аннотация

Пациенты, которые выживают пневмонии имеют повышенный уровень смертности в течение нескольких месяцев после выписки из больницы. Предположили, что инфекция легочной ткани при пневмонии приводит в производстве долгоживущих цитотоксины, которые могут привести к последующей конец полиорганной недостаточности. Мы разработали в vitro анализов для проверки гипотезы, что цитотоксины производятся при легочной инфекции. Изолированные крыса легочного эндотелиальных клеток и бактерий синегнойной палочки используются как модель системы, и производство cytoxins, после инфицирования эндотелиальных клеток бактерий подтверждается с помощью клеточной культуры следуют прямые количественный, используя лактатдегидрогеназа анализов и Роман микроскопического метода ImageJ технологии. Амилоидоподобные характер этих цитотоксины был продемонстрирован Тиофлавин Т привязки анализов и immunoblotting и immunodepletion, с использованием антител анти амилоид A11. Дальнейший анализ с использованием immunoblotting продемонстрировал подготовлены и выпущенная эндотелиальных клеток после заражения P. aeruginosaолигомерных Тау и значения. Эти методы должны быть легко адаптирован для анализа человеческого клинических образцов.

Введение

Пациенты, которые выживают пневмонии имеют повышенный уровень смертности в течение нескольких месяцев после больницы разряда¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶. В большинстве случаев смерти происходит некоторый тип конца полиорганной недостаточности, в том числе почек, легких, сердца, или печени события, а также ход⁵^,⁶. Причиной повышенной смертности в этой популяции пациентов никогда не было установлено.

Пневм....