Как для лечения глиобластома инвазивных обещают опухоли ищу терапевтических мезенхимальных стволовых клеток (Майкрософт) (MSCs). Оптимальное трансплантации включает поставку MSCs в полость резекции опухоли на леса. Здесь, доклинических методы для изучения MSC лечения глиобластома предоставляются включая: резекции опухоли изображение гидом; Имплантация MSC-посеян лесов; и послеоперационной терапии отслеживания.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Изображение руководствуясь резекции глиобластома и внутричерепных имплантации терапевтического стволовых клеток посеян подмостей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Глиобластома (GBM), наиболее распространенных и агрессивной первичного мозга рак, носит продолжительность жизни составляет 12-15 месяцев. Короткой продолжительности жизни отчасти объясняется неспособностью текущего лечения, состоящий из хирургической резекции после лучевой и химиотерапии, для ликвидации очагов инвазивные опухоли. Лечение этих очагов может быть улучшена с tumoricidal человека мезенхимальных стволовых клеток (МСК). MSCs экспонат мощным опухоли тропизма и может быть сконструированы так, чтобы выразить терапевтических белков, которые убивают опухолевых клеток. Достижений в доклинических моделях показывают, что хирургическая резекция индуцирует преждевременной потери MSC и уменьшает терапевтической эффективности. Эффективность лечения MSC может быть улучшено путем посева MSCs на леске биологически poly(lactic acid) (НОАК). MSC доставки в полость хирургической резекции на леске PLA восстанавливает клетки удержания, настойчивость и опухоли убийства. Изучить последствия имплантации MSC-посеян PLA на GBM, необходима точная модель доклинических. Здесь мы предоставляем доклинических хирургический протокол для изображений руководствуясь опухоли резекция GBM иммунный дефицит мышей, следуют MSC-посеян эшафот имплантации. MSCs спроектированы с лентивирусные конструкции конститутивно выразить и выделяют терапевтических TNFα-связанных индуцировать апоптоз лиганда (TRAIL), а также Зеленый флуоресцентный белок (ГПУП) чтобы разрешить Флуоресцентные отслеживание. Аналогичным образом опухолевые клетки U87 разработаны для Экспресс mCherry и Светлячок Люцифераза, обеспечивая двойной флуоресцентный/светящиеся отслеживания. Хотя в настоящее время используется для исследования стволовых клеток при посредничестве доставки терапевтических средств, этот протокол может быть изменен исследовать влияние хирургической резекции на других GBM вмешательств.
Введение
Глиобластома (GBM) является наиболее распространенной формой рака первичного мозга у взрослых, с мрачной медиана выживаемости всего 12-15 месяцев1,2,3,4,5. Выживание существенно не улучшилась после 2005 года, когда текущие клинические стандарт максимальной хирургической резекции, следуют излучения и сопутствующих и адъювантной химиотерапии Темозоламид был принят6,7. Хотя эта процедура обеспечивает пациентов с временное облегчение симптомов, стандарт....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все методы, описанные здесь были одобрены институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) из университета Северной Каролины в Чапел-Хилл.
Примечание: Данная процедура выполняется на мышах с открытым краниотомии, как измененную версию протокола Mostany и Portera-Кайо19 которой удаляется костной ткани, который хирургическим путем, оставляя мозга доступным для создания и конечном итоге резекция опухолей GBM. После краниотомии опухоли устанавливаются через стереотаксической имплантации, как описано в Озава и Джеймс20. Мы имплантат 1 х 105 U87 mCh-Fl клетки по следующим к....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
U87 опухолевые клетки были спроектированы для Экспресс mCherry и Светлячок Люцифераза (U87 mCh-Fl) до инъекции и позволить изображения руководствуясь резекции и биолюминесценции, отслеживание (рисунок 2A-C). Стволовые клетки были аналогичным образом спроектированы с диагностики GFP-Rluc (MSC-GFP) или терапевтических GFP-судебное разбирательство (MSC-TRAIL) и посеян на PLA подмости для подтверждения прикреплению и размножению (
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Операция обычно может быть завершена в течение 30 мин на мышь, учитывая, что максимально повысить точность и избежать ловушки времени учитываются следующие моменты. Во-первых убедитесь, что мышь правильно позиционируется в стереотаксического инструмента до начала процедуры. Нежелательные движения головы будет ограничивать хирургической точностью краниотомии, расположение опухоли имплантация и степень резекции опухоли. До резекции полностью удалите часть Дура, охватывающих опухоли. Жесткие, волокнистых Дура твердеет как о.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
DRS. листов, Bagó и Hingtgen имеют справедливости в Falcon терапии, кто лицензию аспекты стволовых клеток и строительные технологии от UNC Chapel Hill.
Благодарности
Авторы признают редакционный вклад от д-р Кэтрин Pietrosimone. Подмости PLA были изготовлены д-р Элизабет Loboa лаборатории в университете штата Северная Каролина. Эта работа была поддержана Lineberger КООН всеобъемлющем онкологический центр университета онкологический научный фонд и поступательные КООН и клинических наук Институт (KL2TR001109, UL1TR001111).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Стереотаксический инструмент Just for mouse | Stoelting | 51730 | Поддерживает устойчивое положение головы во время операции |
| Флуоресцентный препарирующий стереомикроскоп | Leica | M165 FC | Позволяет визуализировать опухоль в режиме реального времени во время резекции |
| Моторизованная интегрированная система стереотаксических инжекторов (ISI) | Stoelting | 53315 | Позволяет точно вводить объем и скорость инъекции опухолевых клеток |
| Тканевый клей | Vetbond 3M | 1469 | Сугикальный клей для закрытия кожной раны |
| Искусственные слезы | Akorn | 664268 | Предотвращает высыхание глаз во время операции |
| Спиртовые препараты Webcol | Covidien | 6818 | Стерилизует место разреза |
| Хирургический скраб с бетадином | Purdue Fredick Company | 6761815117 | Стерилизация места разреза |
| Аппликаторы с ватным наконечником | Fisherbrand | 23-400-115 | Хирургический инструмент |
| Аспирационная система E-vac | Argos | EV310 | Вакуумный насос, используемый для резекции опухоли |
| Фибриноген и тромбин, извлеченные из полученного TISSEEL | Baxter | Для временного закрепления каркаса в резекционной полости | |
| IVIS Kinetic in vivo оптическая система визуализации | Caliper Life Science | Биолюминесцентный тепловизор | |
| D-люциферин соль калия | PerkinElmer | 122799 | Средство визуализации in vivo |
Ссылки
- Adamson, C., et al. Glioblastoma multiforme: a review of where we have been and where we are going. Expert opinion on investigational drugs. 18 (8), 1061-1083 (2009).
- Asthagiri, A. R., Pouratian, N., Sherman, J., Ahmed, G., Shaffrey, M. E. Advances in Brain Tumor ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
