Лямбда выбрать cII мутации системы обнаружения

Ahmad Besaratinia; Stella Tommasi

doi:10.3791/57510

Method Article

Лямбда выбрать cII мутации системы обнаружения

DOI:

10.3791/57510

⸱

April 26th, 2018

Ahmad Besaratinia¹ , Stella Tommasi¹

¹Department of Preventive Medicine, USC Keck School of Medicine, University of Southern California

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы описываем подробный протокол для assay лямбда выбрать мутации cII в культивируемых клеток трансгенных грызунов или соответствующих животных, лечение с агентом химические/физические интерес. Такой подход широко использовался для тестирования мутагенность канцерогенов в mammalian клетках.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ряд трансгенных животных моделей и систем обнаружения мутации были разработаны для мутагенность тестирования канцерогенов в mammalian клетках. Из них трансгенных мышей и лямбда (λ) выберите cII мутации системы обнаружения были заняты на мутагенность экспериментов на многих исследовательских групп во всем мире. Здесь мы описываем подробный протокол для лямбда выбрать assay cII мутации, которые могут быть применены для культивируемых клеток трансгенных мышей/крыс или соответствующих животных обрабатывают с агентом химические/физические интерес. Протокол состоит из следующих этапов: (1) изоляции геномной ДНК из клеток или органов/тканей трансгенных животных рассматривается в vitro или в естественных условиях, соответственно, с тест соединения; (2) восстановление вектора Трансфер лямбда, перевозящих мутационного Репортер ген (то есть, cII трансген) от геномной ДНК; (3) упаковки спасли векторов в инфекционных бактериофагов; (4) заражающий принимающей бактерии и культивирования условиях выборочный разрешить распространение мутаций индуцированных ИСИ ; и (5) забил cII-мутанты и ДНК последовательности анализа для определения частоты мутантных cII и спектра мутаций, соответственно.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Широкий спектр трансгенных животных моделей и систем обнаружения мутации были разработаны для мутагенность тестирования канцерогенов в mammalian клетках. Из них трансгенных Big Blue (далее именуемое BB) мышах и λ выберите cII мутации системы обнаружения использовались для экспериментов мутагенность этой группой и многих других исследовательских групп во всем мире¹^,²^, ³^,⁴^,⁵^,⁶^,^,⁷⁸^,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. геномной ДНК изоляции от мыши эмбриональных фибробластов

Примечание: Основная мышь эмбриональных фибробластов изолированы от эмбрионов, полученных от BB трансгенных мышей C57BL/6 генетическим фоном, согласно опубликованной протокол⁵³. Исходным материалом для этого протокола состоит из 1 x 10-⁶ до 1 x 10⁷ эмбриональных фибробластов клетки относиться с тест соединения по сравнению с элементом управления. Сбора и подсчета этих клеток, используя стандартные методы описаны в ссылки на¹⁰^,⁵⁴^,⁵⁵.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В зависимости от распределения данных параметрические и непараметрические тесты используются для определения значимости различий в частоте мутант cII между группами лечения и управления (т.е., индуцированной против спонтанной частоты мутантных) . Производится сравнение индуцированных cII мутант частот между группами различных лечения различными (попарно) статистических тестов, если это применимо. Гипергеометрическая испытание Адамс и Скопек обычно используется д.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Выберите cII пробирного λ используется для обнаружения мутаций в ИСИ трансген, оправился от геномной ДНК клеток, полученных от органов/тканей BB грызунов³. Геном этих трансгенных животных содержит несколько копий тандем хромосомно комплексной λLIZ Трансфер вектора, который несет cII (294 bp) и ЗСБН (1080 bp) трансгенов, как гены мутационного репортер¹^, ² ^, ²⁵. пробирног.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все авторы заявляют никакого конфликта интересов.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы хотели бы признать вклад всех коллег и партнеров для наших оригинальных исследований, результаты которого были переданы в этой рукописи (для примера). Работа авторов поддерживается за счет субсидий из Национального Института стоматологии и челюстно-лицевой исследования национальных институтов здравоохранения (1R01DE026043) для AB и из университета California Tobacco-Related программы исследований болезни (AB TRDRP-26IR-0015) и ST (TRDRP-25IP-0001). Авторы данного исследования было никакой роли в дизайн исследования, сбор данных, анализ данных, интерпретация данных, написание доклада, или решение представить для публикации.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
Агар	МО Био Лаборатории, Инк.	12112-05	Бактериологический класс
BigDye Terminator v3.1 Набор для секвенирования цикла	Thermo Fisher Scientific	4337455	Нет
Пептон казеина	Альфа Аэсар	H26557	Нет
Желатин	J. T. Baker	2124-01	Порошок
глицерина	Fisher Scientific	BP 229-1 / M-13750	Нет
LB Агар	Фишер Сайенд	BP 9724-500	Нет
QIAquick Набор для очистки ПЦР	Qiagen	8104	50 Реакции очистки ПЦР
Тригидрат ацетата натрия	Fisher Scientific	M-15756
NoneTaq5000 ДНК-полимераза	Qiagen	201207	None
Thiamine гидрохлорид	Macron Fine Chemicals	2722-57	None
Transpack Packaging Extract	Stratagene Corp., приобретена BioReliance \| Корпорация «Сигма-Олдрич»	200223	50 упаковка реакций Tris
Base	Fisher Scientific	BP 152-1 / EC 201-064-4	Нет
Trypton	Biosciences	RC-110	Нет

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Jakubczak, J. L., et al. Analysis of genetic instability during mammary tumor progression using a novel selection-based assay for in vivo mutations in a bacteriophage lambda transgene target. Proc Natl Acad Sci U S A. 93 (17), 9073-9078 (1996).
Lambert, I. B., Singer, T. M., Boucher, S. E., Douglas, G. R.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Лямбда выбрать cII мутации системы обнаружения

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

References

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles