Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Спинной корень ганглиев изоляции и основной культуры для изучения нейромедиатора релиз

51.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57569

⸱

6 октября 2018 г.

 , 
1Graduate Institute of Biomedical Sciences, Department of Physiology and Pharmacology, Chang Gung University, 2Healthy Aging Research Center, Chang Gung University, 3Neuroscience Research Center, Chang Gung Memorial Hospital

В этой статье

Краткое содержание

Спинной корень ганглиев (DRG) первичных культур часто используются для изучения физиологических функций или события, связанные с патологией в сенсорных нейронов. Здесь мы продемонстрировать использование поясничной DRG культур для обнаружения освобождения нейромедиаторов, после нейропептида FF рецептор типа 2 стимуляции с селективным агонистом.

Аннотация

Спинной корень ганглиев (DRG) содержат ячейки органов сенсорных нейронов. Этот тип нейрон псевдо-однополярного, с двумя аксонов, которые иннервируют периферических тканях, такие, как кожи, мышц и внутренних органов, а также спинного мозга Спинной рога центральной нервной системы. Сенсорные нейроны передают соматические ощущения, включая сенсорный, боль, тепловой и проприоцептивная ощущений. Таким образом DRG первичных культур широко используются для изучения клеточных механизмов Ноцицепция, физиологических функций сенсорных нейронов и нейронных развития. Культивированный нейроны могут быть применены в исследованиях с участием электрофизиологии, сигнальной трансдукции, нейромедиатора релиз или кальция изображений. С DRG основных культур ученые могут культура диссоциированных нейронов DRG контролировать биохимические изменения в одной или нескольких ячеек, преодолевая многие из ограничений, связанных с экспериментов в естественных условиях . По сравнению с коммерчески доступных DRG-гибридомной клеточных линий или увековечен DRG нейрональных клеточных линий, состав и свойства клеток первичного гораздо больше похожи на сенсорных нейронов в ткани. Однако из-за ограниченное количество культивируемых DRG первичных элементов, которые могут быть изолированы от одного животного, трудно выполнить высок объём экраны для ориентации исследования наркотиков. В текущей статье описаны процедуры сбора DRG и культуры. Кроме того мы демонстрируем лечение клетки культивировали DRG с агонистом рецепторов типа нейропептида FF 2 (NPFFR2), с тем чтобы побудить освобождения нейромедиаторов пептида (пептид связанных с геном кальцитонина (CRGP) и вещество P (SP)).

Введение

Клетки тела сенсорных нейронов, содержатся внутри DRG. Эти нейроны псевдо-однополярного и иннервируют периферических тканей и центральной нервной системы. Периферических нервных окончаний Сенсорные нейроны находятся в мышц, кожи, внутренних органов и костей, среди других тканей. Они передают сигналы периферийного ощущения нерв, который затем окончаний в спинного мозга Спинной рога и сигналы передаются в мозг через различные восходящем пути соматические ощущения1,2. Соматические ощущения позволяет организму чувствовать себя (то есть, сенсорный, боль и тепловых ощущений) и воспринимать движение и пространственной ориентации (проприоцептивной ощущений)1,3. Есть четыре подклассы первичных афферентных аксонов, в том числе, группа I (aα диалога доступных) волокон, которые реагируют на Проприоцепцию скелетных мышц, группа II (значения) волокон, которые реагировать механорецепторов кожи, и группы III (Aδ) и V (C) волокон в группы, которые реагируют на боль и Температура. Только С-волокна являются unmyelinated, в то время как остальные Миелинизированные в разной степени.

Ноцицепторами являются первичных сенсорных нейронов, которые активируются вредных раздражителей (механические, тепловые и химические стимуляции), которые несут потенциал для повреждения тканей. Эти нейроны состоят из Миелинизированные Aδ волокна и волокна1,unmyelinated C4. Aδ волокна Экспресс рецепторов фактора роста нервов (ФРН, Ведьмина рецепторов), CGRP и SP. С-волокна, классифицируются как peptidergic и не peptidergic С-волокна. С другой стороны не peptidergic С-волокна Экспресс рецепторов для глиальной нейротрофического фактора (рецепторов GDNF, RET и Федеративная Республика Германия), isolectin IB4 и АТФ закрытый ионного канала подтип (P2X3)5,6,7. Ноцицепторами можно отличить выражением ионных каналов и активированную нейротрофических факторов, цитокины, Нейропептиды, АТФ или других химических соединений8. После стимуляции нейротрансмиттеров, включая CGRP, SP и глутамат может быть освобожден от сенсорных нейронах терминалов в спинного мозга Спинной рога для передачи сигналов ноцицептивных2. DRG состоят не только из нейронов, но также содержат Спутниковое глиальных клеток. Спутниковое клетки окружают сенсорных нейронов и обеспечивают механические и метаболизм поддержки9,10. Интересно, что существует растущий объем свидетельств, указывающих, что Спутниковое глиальные клетки в DRG могут быть вовлечены в регулировании боли ощущение11.

Чтобы быть наиболее часто используемые первичной нейрональные клетки12 и были использованы для электрофизиологии, сигнала и нейромедиатора релиз исследований сообщалось сенсорных нейронов. Они также часто используются для изучения клеточных механизмов развития нервной системы, воспалительные боли, невропатической боли, ощущение кожи (как зуд) и аксон нарост12,13,14,15. DRG первичных культур может культивировали как диссоциированных нейронов оценивать биохимические изменения в одной или нескольких ячеек, позволяет ученым для проведения исследований, которые не может быть выполнена экспериментальная предметам. Недавно DRG были успешно культивировали человеческий орган доноров, которые могли бы пользу трансляционного исследования16. С другой стороны Сенсорные нейроны могут также выращиваются как DRG эксплантах. DRG эксплантов сохранить оригинальную архитектуру ткани нейронов, включая Шванновские клетки и спутниковое глиальных клеток и особенно полезны для изучения взаимодействия нейронов и не нейрональные клетки17. DRG первичных культур можно легко приготовить в течение 2,5 ч. Клеточный состав и свойства высокой отражающей способностью источника DRG, и таким образом, конкретные DRG (поясничный или грудной DRG) может быть собрана по данным экспериментальных требования. Культурах эмбриональных и неонатальной DRG нейронов требуют NGF выжить и вызвать нарост аксона, но культуры взрослых нейроны не требуют добавления нейротрофических факторов к СМИ12,17. Существует также коммерчески доступных DRG-гибридомной клеточных линий, таких как ND7/23 и F11, которые не требуют использования экспериментальных животных. Однако, отсутствие Переходный рецепторный потенциал катионного канала член subfamily V 1 (TRPV1) выражение (важный маркер для малых сенсорных нейронов ноцицептивных) и несовместимые ген выражение профили ограничивают их приложения18. Недавно увековечен DRG нейрональных клеток линии были получены от крыс (50B11)19 и20мыши (MED17.11), которые подходят для использование в экраны высокой пропускной способностью для ориентации исследования наркотиков. Однако выражение гена профилируя для этих клеточных линий еще предстоит выполнить. Таким образом еще продолжаются эксперименты проверки, сравнивая эти увековечен клетки для сенсорных нейронов.

NPFFR2 синтезируется в DRG и арестовано сенсорные нервные окончания в Рог спинного мозга Спинной21. В этой статье мы предоставляем протокол для культивирования поясничного DRG клетки и относиться к ним с агониста NPFFR2 побудить освобождения нейромедиаторов, CGRP и SP. Зависимость от NPFFR2 Далее проверяется с использованием NPFFR2 малые интерферирующие РНК (siRNA), который может transfected в клетки культивировали DRG.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все методы, описанные здесь, которые используют подопытных животных были утверждены институциональный уход животных и использовать Комитет (IACUC) Чжан Гун университета (Ге 13-014).

1. сбор поясничного DRG от экспериментальных крыс

  1. Использовать 2-3 недели старый крысах Sprague-Dawley (SD) для поясничного DRG коллекции.
    Примечание: DRG нейронов, собранных от крыс более 4 недель не растут хорошо в условиях культуры, описанные здесь.
  2. Стерилизуйте всех хирургических инструментов в автоклаве.
  3. Анестезировать Крыса с 1:1 смесь tiletamine и zolazepam (20 мг/кг; внутрибрюшинной инъекции (IP)) и подождите, пока животное показывает фут вывода ответа в тесте мыс пинча.
    Примечание: Различные анестезии стратегии может успешно использоваться в этом протоколе.
  4. Пожертвуйте крыса, обезглавливание с коммерческой гильотины.
  5. Используйте гильотины изолировать ствол тело крысы между передних конечностей и бедренной кости. Смотрите Рисунок 1A для диаграммы региона должны быть собраны.
    Примечание: Каудальной линии надреза должна быть просто ростральной к бедренной кости. Поясничная DRG L6 будет вырезана Если вырезать сайт слишком высока в позвоночнике.
  6. Разрезать вдоль грудины и удалить все органы/ткани с Рассечение ножницами (рисунок 2A-).
  7. Разрежьте вдоль на стороне ствола для сбора спинной частью крысы и удалить кожу. Смотрите Рисунок 1B для фотографии расчлененных спинной ствола.
  8. Подготовка тканей на льду перед сбором DRG. Чистить мех и кровь от перчатки и стерилизовать их с 75% этанола перед переходом к следующему шагу.
  9. Удаление мышц, охватывающих поясничного отдела позвоночника. Во-первых сделать два надреза вдоль позвоночника (слева и справа) и один боковой разрез в ознаменование ростральной степени поясничного отдела позвоночника. Затем удалите спинной мышц позвоночника с щипцами кости резки (рис. 2A-b).
  10. Удаление спинная часть позвонков с щипцами кости резки и разоблачить спинного мозга.
  11. Удаление спинного мозга с Рассечение ножницами (рисунок 2A-c) и щипцы (рисунок 2A-d).
  12. Идентифицировать поясничного DRG подсчета позвонков из последнего ребра (грудной позвонок 13). Смотрите Рисунок 1 c схема положения позвонков.
  13. Соберите двусторонних поясничного DRG (L1-L6) с микро ножницы (рисунок 2A-f) в 35-мм культуры блюдо с ледяной среднего 2 мл сыворотки бесплатно. Удаление нейронов волокна (как указано на рисунке 1 c) от подключения DRG, а затем перевести его в культуры блюдо для улучшения чистоты культур.
    Примечание: Собранные DRG может храниться в среде на льду около 1 ч. Между тем несколько крыс может быть euthanized для создания большего числа DRG.

2. Первичная культура крыса пиломатериалов DRG

Примечание: Следующие шаги должны быть выполнены в Ламинарный шкаф.

  1. Подготовка питательной среды, содержащие 10% плода бычьим сывороточным, пируват натрия 100 мм и 1 x пенициллина/стрептомицина 1 x DMEM-F12.
  2. Слой клеток Культура лечение 24-ну пластины с 200 мкг/мл поли L-лизин 2 h, а затем моют стерилизованные водой.
  3. Предварительно Инкубируйте культуры блюдо с 1 мл питательной среды в инкубатор 37 ° C CO2 перед использованием для менее 30 мин.
  4. Перевести блюдо DRG-содержащих 35 мм в ламинарных капюшоном и мыть DRG с сыворотка бесплатно средний 3 раза с пипеткой.
    Примечание: За пределами блюдо должны быть очищены с 75% этанола перед передачей в капюшон. 35 мм блюдо может содержать DRG от ряда крыс (это будет зависеть от требований экспериментальный дизайн).
  5. Переместить DRG (от одного крыса или в сочетании с несколько крыс) для новой культуры блюдо 35 мм, которая содержит 2 мл коллагеназы типа IA (1 мг/мл в среде, свободной от сыворотки) стерильным пинцетом (рисунок 2A-e).
    Примечание: Коллагеназа решения следует стерилизовать, проходя через фильтр шприц 0,22 мкм.
  6. Дайджест DRG коллагеназы решения в инкубатор 37 ° C CO2 на 30 мин.
  7. Удаление решения коллагеназы и мыть DRG 3 раза по 2 мл Хэнк сбалансированного солевого раствора (HBSS).
    Примечание: Могут существовать остаточная волокна или ткани, которые приходят от DRG в раствор. Удалите их, Пипетка с моющим раствором.
  8. Добавьте 2 мл предварительно разогретую 0,05% трипсина ЭДТА в DRG-содержащих блюдо 35 мм и дайджест DRG в инкубатор 37 ° C CO2 на 30 мин.
  9. Трансфер 2 мл раствора DRG-содержащих 15 мл пластиковых пробирок на стеклянной пипетки.
    Примечание: DRG может прилипает к стеклянной пипетки, поэтому этот шаг должен выполняться с осторожностью. DRG потерь можно избежать, сохраняя DRG-содержащих раствор в конической части стеклянной пипетки (около 0,5 мл) и передачи решения в пластиковых пробирок медленно, но без паузы.
  10. Центрифуга решение на 290 x g 5 мин при 4 ° C. Удалить супернатант и добавьте еще 2 мл сыворотки свободный средних Ресуспензируйте DRG.
  11. Повторите шаг 2.10 2 раза но изменение сыворотки свободный средне подогретым питательной среды на последний раз.
  12. Вручную нарезанных DRG, приблизительно 60 раз с помощью пипетки Пастера пламени полированные (внутренний диаметр длина 230 мм и кончик головки 1 мм). Смотрите Рисунок 2B фотография сравнивая отверстия пламени полированные пипетка Пастера для пипетки-полированные.
    Примечание: Внутренний диаметр пламени полированные пипетка Пастера примерно на 10% меньше, чем управление дозаторов и внутри конический конец должен быть плавным. Будьте осторожны, чтобы не создавать пузыри, когда истирание клетки.
  13. Удаление поли L-лизин покрытием блюдо из инкубатора CO2 . Аспирационная инкубирован питательной среды от блюдо и семян диссоциированных клетки на покрытые блюдо.
  14. Семя DRG клетки от одного крыса (двусторонние коллекции от L1-L6, для 12 всего DRG) в четыре скважины 24-ну плиты; Есть примерно 5 х 104 клетки в одной скважиной 24-ну плиты.
    Примечание: Эта плотность подходит для обнаружения выпустила CGRP или SP и подходит также для иммуноокрашивания. Для западной помарки или извлечение RNA семян DRG клетки от одного крыса (двусторонние L1-L6) в одну скважину 6-ну плиты.
  15. Заменить питательной среды на следующий день с добавлением 10 мкм цитарабин (Ara-C) и 100 нг/мл ФРН и обновить средство каждые два дня.
    Примечание: Грудной DRG также может также быть культивировали этот протокол, если они были собраны от грудного отдела позвоночника.

3. transfection NPFFR2 интерферирующей РНК в клетках DRG

  1. Выполните transfection NPFFR2 siRNA и контролировать siRNA, по словам производителя протокол.
    Примечание: Протокол будет нужно быть адаптированы, если выбранный трансфекции реагент отличается от того, мы использовали (см. Таблицу материалов).
  2. На 3 день после покрытие ячейки измените среднего предварительно теплой средний 0,5 мл сыворотки бесплатно и инкубировать DRG в инкубатор 37 ° C CO2 на 1 ч.
  3. Добавьте 50 Нм интерферирующей РНК (в 1 мкл РНКазы свободной воды) в 12,5 мкл сыворотки бесплатно среднего.
  4. Добавьте 2.5 мкл Реагента трансфекции в 10 мкл сыворотки свободной среде.
  5. Mix решение от шаги 3.3 и 3.4, Пипетка и инкубировать этого смешанного трансфекции решение для 10 мин при комнатной температуре.
  6. Трансфекция решение добавить в одну плиту DRG-содержащих 24-Ну и mix решение с средний мягкий встряхивания.
    Примечание: Несколько трансфекции решения должны быть развернуты в то же время если несколько скважин нужно transfected.
  7. Инкубируйте DRG в CO2 инкубатора 37 ° C на 6 ч.
  8. Добавить 0,5 мл/хорошо из питательной среды, содержащей плода бычьим сывороточным 20%, пируват натрия 100 мм и 1 x пенициллина/стрептомицина 1 x DMEM-F12, с добавлением 10 мкм Ara-C и 100 нг/мл ФРН, в пластину 24-хорошо.
  9. Инкубируйте DRG в 37 ° C CO2 инкубатора для другой 66 h (обновить средство на 48 ч).

4. релиз нейромедиаторов из клеток первичного DRG

  1. На 6 день после того, как клетки были покрытием (72 ч после трансфекции siRNA), изменить питательной среды на 200 мкл сыворотки бесплатно средний и инкубации клеток в инкубатор 37 ° C CO2 на 30 мин.
  2. Добавить 1 мкл стимуляции видоискателя и осторожно перемешать СМИ, закупорить. Инкубируйте блюдо в инкубатор 37 ° C CO2 в назначенное время.
    Примечание: В этой статье, культивируемых клеток были стимулируется с NPFFR2 агонист, dNPA (D.Asn-Pro-(N-Me)Ala-Phe-Leu-Phe-Gln-Pro-Gln-Arg-пе-NH2, 5 нмоль), за 1 ч.
  3. Сбор культуры среднего от культуры блюдо и центрифуги на 5000 x g 5 минут при температуре 4 ° C для удаления любых взвешенных примесей.
  4. Собирать супернатант центрифугирования и развести образцы с фосфат амортизированное saline (PBS), при необходимости. Анализ уровней нейротрансмиттеров с фермента наборы иммуноферментного анализа (ОВОС).
    Примечание: Здесь, supernatants были прежде чем анализировать уровень CGRP разбавленных 1: 100. Супернатант был не разбавляют до анализа уровня SP.

5. CGRP и ОВОС СП

  1. Анализируйте образцы сразу согласно протоколу CGRP или SP ОВОС комплект производителя.
    Примечание: Протокол будет варьироваться в зависимости от используемых комплект.
  2. Промойте скважин CGRP EIA 5 раз мыть буфера, поставляемые в комплекте.
  3. Добавить 100 µL пробы с 100 мкл анти CGRP ацетилхолинэстеразы (АВО) трассировщика в скважины CGRP ОВОС и добавьте 50 мкл образцов, 50 мкл анти SP боль трассирующими и 50 мкл анти SP антисыворотка в SP EIA скважины.
  4. Уплотнение CGRP и SP скважин с пластиковой пленкой, которая поставляется в наборы.
  5. Инкубировать скважин на ночь при 4 ° C.
  6. Промыть лунки 5 раз с CGRP или SP мыть буфера и удалить все остаточные решение из скважин.
  7. Добавление Эллман 200 мкл реагента в CGRP или SP скважины, которые поставляется в рамках соответствующие наборы ОВОС.
  8. Инкубировать CGRP скважин на 30 минут при комнатной температуре и инкубировать SP скважин 90 мин при комнатной температуре. Защищайте от света для обоих анализов скважин.
  9. Читайте пластины на длине волны 414 Нм и вычисления результатов согласно соответствующего документа ОВОС.
    Примечание: Не прикасайтесь к нижней части скважин вручную все время и очистить пятна воды снизу хорошо объектив, очищающие салфетки перед добавлением Эллман реагента.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Крыса поясничного DRG нейронов, культивируемых в пластине 24-а, были выращены в питательной среды с дополнительные Ara-C, чтобы препятствовать пролиферация глиальных клеток и ФРН в поддержку нейрональных роста. Морфология жизни DRG клеток наблюдалось. Как показано на рисунке 3, клеток тело нейрона одного была прикреплена на нижней части блюдо в день 1 и отобранных для наблюдения. Аксон рост был контролировать от 1-3 день. Глиальные клетки дублируется и расшир...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В настоящей статье, мы демонстрируем коллекции, фермент диссоциации и культуры крыса поясничный DRG. При поддержке нейротрофических ФРН аксоны нейронов DRG расширена в течение 3 дней после посева клеток. Расширенный аксоны были явно наблюдаемой после того, как клетки окрашивали CGRP белок, который синтезируется в ячейку сома и транспортировать вдоль аксона волокон. Процессы клеток Спутниковое также расширена, позволяя эти деления глиальных клеток окружить нейронов в течение дней. Основной ячейки DRG вырос настоящим Прото...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Мы благодарим д-р м. Калкинс для английского редактирования. Эта работа была поддержана Чжан Гун Мемориальный госпиталь (CMRPD1F0482), Чжан Гун университета, здоровые старения научно-исследовательский центр (EMRPD1G0171) и Министерство науки и технологии (105-2320-B-182-012-MY2).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Смесь тилетамина и золазепама (Золетил)ВирбакЗолетил 50анестетик
Фетальная бычья сывороткаBiological Industries04-001-1Культуральная среда
пируват натрияSigmaS8636Культуральная среда
пенициллин/стрептомицинBiological Industries03-033-1Культуральная среда
DMEM-F12Инвитроген12400024Питательная среда
Поли-L-лизинSigmaP9011Покрытие чашки
Коллагеназа IASigma9001-12-1Ферментное разложение
Сбалансированный раствор соли ХенкаИнвитроген14170-112Культуральная среда
Трипсин ЭДТАБиологическая промышленность03-051-5Ферментное разложение
Пастер пипеткаHilgenberg3150102Растирание клеток
Цитарабин (Ara-C)SigmaC6645Питательная среда
NGFMilliporeNC011Культуральная среда
NPFFR2 миРНКDharmaconL-099691-02-0005Трансфекция
нецелевой миРНКDharmaconL-001810-10-05Трансфекция
NeuroPORTER РеагентGenlantisT400150реагент для трансфекции
dNPAGenemed SynthesisN/ANPFFR2 агонист
CGRP ELISACayman589001EIA
SP ELISACayman583751EIA
CGRP антителаCalbiochemPC205LIHC
DAPIROCHE10236276001IHC

Ссылки

  1. Bear, M. F., Connors, B. W., Paradiso, M. A. Neuroscience: exploring the brain. , 3 edn, Lippincott Williams & Wilkins. (2007).
  2. Hunt, S. P., Mantyh, P. W. The molecular dynamics of pain control. Nat Rev Neurosci. 2 (2), 83-91 (2001).
  3. Kandel, E. R., Schwartz, J. H., Jessell, T. M. Principles of neural science. , 3 edn, McGraw-Hill, Health Professions Division. (2000).
  4. Julius, D., Basbaum, A. I. Molecular mechanisms of nociception. Nature. 413 (6852), 203-210 (2001).
  5. Sah, D. W., Ossipo, M. H., Porreca, F. Neurotrophic factors as novel therapeutics for neuropathic pain. Nat Rev Drug Discov. 2 (6), 460-472 (2003).
  6. Coutaux, A., Adam, F., Willer, J. C., Le Bars, D. Hyperalgesia and allodynia: peripheral mechanisms. Joint Bone Spine. 72 (5), 359-371 (2005).
  7. Basbaum, A. I., Bautista, D. M., Scherrer, G., Julius, D. Cellular and molecular mechanisms of pain. Cell. 139 (2), 267-284 (2009).
  8. Marchand, F., Perretti, M., McMahon, S. B. Role of the immune system in chronic pain. Nat Rev Neurosci. 6 (7), 521-532 (2005).
  9. Hanani, M. Satellite glial cells in sensory ganglia: from form to function. Brain Res Brain Res Rev. 48 (3), 457-476 (2005).
  10. Nascimento, R. S., Santiago, M. F., Marques, S. A., Allodi, S., Martinez, A. M. Diversity among satellite glial cells in dorsal root ganglia of the rat. Braz J Med Biol Res. 41 (11), 1011-1017 (2008).
  11. Costa, F. A., Moreira Neto, F. L. Satellite glial cells in sensory ganglia: its role in pain. Rev Bras Anestesiol. 65 (1), 73-81 (2015).
  12. Malin, S. A., Davis, B. M., Molliver, D. C. Production of dissociated sensory neuron cultures and considerations for their use in studying neuronal function and plasticity. Nat Protoc. 2 (1), 152-160 (2007).
  13. Lin, Y. T., Ro, L. S., Wang, H. L., Chen, J. C. Up-regulation of dorsal root ganglia BDNF and trkB receptor in inflammatory pain: an in vivo and in vitro study. J Neuroinflammation. 8, 126(2011).
  14. Liem, L., van Dongen, E., Huygen, F. J., Staats, P., Kramer, J. The Dorsal Root Ganglion as a Therapeutic Target for Chronic Pain. Reg Anesth Pain Med. 41 (4), 511-519 (2016).
  15. Lee, J. S., Han, J. S., Lee, K., Bang, J., Lee, H. The peripheral and central mechanisms underlying itch. BMB Rep. 49 (9), 474-487 (2016).
  16. Valtcheva, M. V., et al. Surgical extraction of human dorsal root ganglia from organ donors and preparation of primary sensory neuron cultures. Nat Protoc. 11 (10), 1877-1888 (2016).
  17. Melli, G., Hoke, A. Dorsal Root Ganglia Sensory Neuronal Cultures: a tool for drug discovery for peripheral neuropathies. Expert Opin Drug Discov. 4 (10), 1035-1045 (2009).
  18. Yin, K., Baillie, G. J., Vetter, I. Neuronal cell lines as model dorsal root ganglion neurons: A transcriptomic comparison. Mol Pain. 12, (2016).
  19. Chen, W., Mi, R., Haughey, N., Oz, M., Hoke, A. Immortalization and characterization of a nociceptive dorsal root ganglion sensory neuronal line. J Peripher Nerv Syst. 12 (2), 121-130 (2007).
  20. Doran, C., Chetrit, J., Holley, M. C., Grundy, D., Nassar, M. A. Mouse DRG Cell Line with Properties of Nociceptors. PLoS One. 10 (6), e0128670(2015).
  21. Gouarderes, C., Roumy, M., Advokat, C., Jhamandas, K., Zajac, J. M. Dual localization of neuropeptide FF receptors in the rat dorsal horn. Synapse. 35 (1), 45-52 (2000).
  22. Lin, Y. T., et al. Activation of NPFFR2 leads to hyperalgesia through the spinal inflammatory mediator CGRP in mice. Exp Neurol. 291, 62-73 (2017).
  23. Yang, H. Y., Tao, T., Iadarola, M. J. Modulatory role of neuropeptide FF system in nociception and opiate analgesia. Neuropeptides. 42 (1), 1-18 (2008).
  24. Takeda, M., Takahashi, M., Matsumoto, S. Contribution of the activation of satellite glia in sensory ganglia to pathological pain. Neurosci Biobehav Rev. 33 (6), 784-792 (2009).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Диссекция тканейколлагеназное перевариваниетрипсин-ЭДТАпосев клетоктрансфекция сиРНКагонист NPFFR2иммуноферментный анализ
Спинной корень ганглиев изоляции и основной культуры для изучения нейромедиатора релиз
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.