Методическая статья

Молекулярный анализ эндотелиальной мезенхимальных перехода, вызванных преобразования сигналов фактор роста β

DOI:

10.3791/57577

⸱

3 августа 2018 г.

 ,  ,  , 
1David H. Koch Institute for Integrative Cancer Research, Massachusetts Institute of Technology, 2Department of Respiratory Medicine, Graduate School of Medicine, The University of Tokyo, 3Hastings Center for Pulmonary Research, Division of Pulmonary, Critical Care and Sleep Medicine, Department of Medicine, Keck School of Medicine, University of Southern California, 4Department of Molecular Pathology, Graduate School of Medicine, The University of Tokyo

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол для индукции в vitro эндотелиальной мезенхимальных перехода (EndMT), которая является полезной для расследования сотовой сигнальных путей, участвующих в EndMT, описал. В этой экспериментальной модели EndMT вызванные лечение с TGF-β в эндотелиальных клетках MS-1.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Фенотипические пластичности эндотелиальных клеток лежит в основе развития сердечно-сосудистой системы, сердечно-сосудистые заболевания и различные условия, связанные с фиброзом орган. В этих условиях дифференцированной эндотелиальные клетки приобретают мезенхимы как фенотипы. Этот процесс называется эндотелиальной мезенхимальных перехода (EndMT) и характеризуется Даунрегуляция эндотелиальной маркеров, upregulation мезенхимальных маркеров, и морфологических изменений. EndMT индуцируется несколько сигнальных путей, включая трансформирующий фактор роста (TGF)-β, Wnt и паз и регулируется молекулярные механизмы аналогичны эпителия мезенхимальных перехода (EMT) важные для гаструляция, фиброз тканей, и метастазами рака. Понимание механизмов EndMT имеет важное значение для разработки диагностических и терапевтических подходов, ориентации EndMT. Надежные индукции EndMT в vitro полезным характеризовать общим подписи выражение гена, определять druggable молекулярных механизмов и экран для модуляторы EndMT. Здесь мы описываем в vitro метод для индукции EndMT. MS-1 мыши поджелудочной железы микрососудистой эндотелиальные клетки проходят EndMT после увеличиваемой подвержения к TGF-β и показать upregulation мезенхимальных маркеров и морфологические изменения, а также индукции несколько воспалительных chemokines и цитокинов. Также включены методы для анализа микроРНК (miRNA) модуляции. Эти методы предоставляют платформу для изучения механизмов лежащих в основе EndMT и вклад адаптивной к EndMT.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эндотелия мезенхимальных переход (EndMT) является процессом, в котором дифференцированной эндотелиальных клеток проходит целый ряд молекулярных изменений, что приводит к фибробластоподобных мезенхимальных клеток1. Первоначально EndMT был описан как преобразование эндотелиальных клеток во время разработки в сердце2,3. В начале развития сердца сердце трубка состоит из эндокарда внутренний и наружный миокарде. Эти два слоя разделены слоем внеклеточного матрикса, называется сердечной желе. Эмбриональные клетки эндокарда, которые приобретают эндотелиальных клеток маркеры, транзита в Мезенхимальные клетки, вторгнуться базовой сердца желе и способствуем формированию сердца подушки, создавая основу для Предсердно-желудочковые клапаны и перегородки и Полулунные клапаны. Кроме того было предложено EndMT быть источники pericytes и сосудистой гладкой мышечной клетки в других эмбриональной сосудистой системы, включая коронарных сосудов, брюшной аорты и легочной артерии4,5,6. Кроме того EndMT причастны физиологических ангиогенных прорастания7.

Накапливая доказательства предположил, что EndMT также участвует в нескольких сердечно-сосудистых заболеваний и других болезней1,8. EndMT связанного условия включают сосудистой кальцификации, атеросклероз, легочной артериальной гипертензии, кавернозных мальформация, орган фиброз, вен трансплантата Ремоделирование, аллотрансплантатом дисфункции в трансплантации почки и рак8, 9,10,11,12,13,14,,1516,17, 18. недавнем докладе говорится, что несколько молекулярных маркеров EndMT может быть инструментом для диагностики и прогноза предсказания дисфункции почек трансплантата в почечной трансплантации17. Модуляции клеточных сигнальных путей, связанных с EndMT было показано для улучшения несколько условий болезни, включая фиброз сердца и вен трансплантата Ремоделирование в животных моделей8,15. Таким образом понимание механизмов базовой EndMT важно развивать диагностические и терапевтические стратегии, ориентированные EndMT.

EndMT характеризуется потерей ячеек развязок, увеличение миграционным потенциалом, Даунрегуляция эндотелиальной конкретных генов как ве Кадгерины и upregulation мезенхимальных генов, включая актина α-гладких мышц (α-SMA). Кроме того EndMT и эпителия мезенхимальных перехода (EMT), аналогичный процесс, который преобразует эпителиальных клеток мезенхимальных клеток, связаны с измененной производства различных компонентов внеклеточного матрикса, которые могут внести вклад в развитие 8,фиброз тканей19.

Недавно несколько исследований в пробирке EndMT раскрыты подробности молекулярных механизмов EndMT15,20. EndMT индуцируется различных сигнальных путей, включая трансформирующий фактор роста (TGF)-β, Wnt и надрезать1. Среди них TGF-β играет ключевую роль в индукции EMT и EndMT. В EndMT продолжительное воздействие TGF-β результаты в EndMT в различных эндотелиальных клеток, в то время как короткие выдержки, как представляется, недостаточно21. Здесь мы описали простой протокол для индукции EndMT, в которых Свен 1 миля (МС-1) поджелудочной железы микрососудистой эндотелиальные клетки мыши пройти EndMT в vitro после увеличиваемой подвержения к TGF-β20. В этой модели можно выполнить несколько ниже по течению анализа расследовать отличительной черты EndMT, в том числе морфологические изменения, Даунрегуляция эндотелиальной маркеров, upregulation мезенхимальных маркеров и воспалительные гены, цитоскелета перестановки и сокращение гель коллагена.

МикроРНК (интерферирующим) являются ~ 22 nt малых регулирования РНК, которые направляют посттранскрипционного репрессии в отношении различных мРНК целей22,-23. Через признание целевой последовательности опосредованной семян адаптивной подавить сотни целевых генов и модулировать различных клеточных функций, таких как дифференцировки клеток, распространением и подвижности. Это также касается регулирования EMT и EndMT, и несколько интерферирующим были зарегистрированы как регуляторы EMT и EndMT24,25. EndMT модель, представленная в этом обзоре можно легко комбинируется с Мирна модуляции процедур для проверки роли интерферирующим в EndMT. Настоящий обзор обобщает наши экспериментальные процедуры расследования TGF-β-индуцированной EndMT в клетках MS-1 и также включает в себя сравнение условий EndMT индукции, TGF-β в других эндотелиальных клеток.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. индукция EndMT

  1. Поддерживать клетки MS-1 в условиях стандартной культуры и избежать confluency. Источник клеток MS-1 описан в Таблице материалов. Для MS-1 ячеек используйте минимум основных средне α (MEM-α) с 10% плода телячьей сыворотки (FCS), 50 ед/мл пенициллин и 50 мкг/мл стрептомицина.
  2. Вымойте MS-1 клетки на 10 см блюдо с 1 x-фосфатный буфер (PBS) и добавить 1,0 мл трипсина к пластине. Инкубировать в течение 5 минут при 37 ° C.
  3. Отсоедините ячейки, используя 9 мл культуры средств массовой информации. Собирайте суспензию клеток в 15 мл.
  4. Центрифуга суспензию клеток на 300 – 400 x g 5 мин при комнатной температуре.
  5. Тщательно удалить супернатант и приостановить Пелле клеток в подогретым культуры средств массовой информации.
  6. Количество жизнеспособных клеток с помощью Трипановый синий раствор и стандартные Горяева или счетчик автоматический клеток.
  7. Плита MS-1 клетки на немелованной стандартных культуры пластин на 0,5 x 103 клеток на2 см для долгосрочной термин культуры. К примеру плита 5.0 x 103 клеток на хорошо в 6 хорошо культуры пластины. Используйте же культура СМИ, включая такой же концентрации FCS. В MS-1 клеток TGF-β индуцирует EndMT в долгосрочной перспективе культуре (по крайней мере 48-72 ч) с использованием FCS.
  8. Стимулировать эндотелиальных клеток с TGF-β2 (конечная концентрация 1 нг/мл) после 24 ч.
  9. Культура клетки в увлажненные инкубатора (5% CO2, 37 ° C). Ежедневно контролировать клетки при фокусировке на морфологические изменения.
  10. Замените свежей подогретым культуры носителей, содержащих TGF-β2 после 48 часов лечения с TGF-β в долгосрочной перспективе культуры средств массовой информации.
  11. Перейти к течению анализы. Как правило Даунрегуляция эндотелиальной маркеров и upregulation мезенхимальных маркеров наблюдаются после 48-72 ч лечения с TGF-β, и реорганизации актина наблюдается после 24 часов лечения.

2. иммуноцитохимическое анализ

  1. Сохранить клетки MS-1 в стандартной культуры условиях.
  2. Плита MS-1 клетки на 4 хорошо клетки культуры палата слайды на 1,0 x 103 клеток / колодец (1,7 см2). Слайды предварительно покрытых с желатином. Использование 0,5 – 1,0 мл культуры средств массовой информации за хорошо.
  3. Стимулировать эндотелиальных клеток с TGF-β2 (конечная концентрация 1 нг/мл) после 24 ч. При анализе участия рок в EndMT, добавьте рок ингибитор Y-27632 (10 мкм) 1 h предварительного лечения TGF-β. При оценке воздействия сигналов торможения TGF-β, может использоваться ингибитора киназы рецепторов TGF-β.
  4. Культура клетки в увлажненные инкубатора (5% CO2, 37 ° C). Реорганизация актина наблюдается в MS-1 клеток после 24 ч лечения с TGF-β. Другие изменения становятся очевидными после 48-72 ч лечения. 72 h культуры замените свежим СМИ, содержащий TGF-β после 48 часов лечения с TGF-β СМИ.
  5. F-актина пятнать
    1. После 24 часов лечения TGF-β удалите СМИ, исправить клетки с параформальдегида 4% в однократном ПБС втечение 20 мин при комнатной температуре и промойте клетки с ПБС.
    2. Проинкубируйте с 0,2% Тритон X-100 5 минут при комнатной температуре.
    3. Промойте клетки три раза с ПБС.
    4. Проинкубируйте с Фаллоидин тетраметилродамина B Изотиоцианаты от бледная поганка, разбавленный 150-fold с блокирующий буфер за 1 ч при комнатной температуре.
    5. Промойте клетки три раза с ПБС.
    6. Пятно ядер с привязки нуклеиновой кислоты цианиновые красители для 5 мин при комнатной температуре.
    7. Промыть слайды и гора coverslips лицом вниз на слайде с помощью слайд монтаж средств массовой информации.
    8. Наблюдения с помощью конфокального микроскопа. Используйте для обнаружения флуоресценции Фаллоидин 543 Нм лазер и фильтр выбросов 560 – 615 Нм. Используйте 633 нм лазер и фильтра выбросов более чем 650 Нм для ядерных пятнать. После лечения с TGF-β будет соблюдаться формирования волокна толщиной стресс.
  6. VE-Кадгерины и пятнать α-SMA
    1. После 72 ч TGF-β лечения, удаления средств массовой информации, исправить клетки с холодной 50% метанола и 50% ацетона (0,5 – 1,0 мл в колодец) за 5 мин.
    2. Промойте клетки три раза с ПБС (0,5 – 1,0 мл в колодец).
    3. Проинкубируйте с первичных антител в блокирующем буфере на ночь при 4 ° C в темноте по данным производителя рекомендуемая концентрация. Использование VE-Кадгерины моноклональных антител (BV13, разведение 1: 100) и конъюгированных Cy3 α-SMA моноклональных антител (1A4, разведение 1: 200)20.
    4. Промойте клетки три раза с ПБС.
    5. Инкубируйте клетки с зеленый краситель конъюгированных вторичное антитело для VE-Кадгерины антитела в блокирующем буфере 1 ч при комнатной температуре в темноте по данным производителя рекомендуемая концентрация.
    6. Промойте клетки три раза с ПБС.
    7. Пятно ядер с привязки нуклеиновой кислоты цианиновые красители для 5 мин при комнатной температуре.
    8. Промыть слайды и гора coverslips лицом вниз на слайде с помощью слайд монтаж средств массовой информации.
    9. Наблюдения с помощью конфокального микроскопа. Используйте для обнаружения α-SMA (Cy3) 543 Нм лазер и фильтр выбросов 560 – 615 Нм. Используйте для обнаружения VE-Кадгерины 488 нм лазер и фильтр выбросов 505 – 550 Нм. Обычно, после обращения с TGF-β лечения, уменьшение VE-Кадгерины сигналов и будет наблюдаться увеличение α-SMA сигналов.

3. трехмерные коллаген гель сужением Assay

  1. Выполняют культуры клеток MS-1 с/без TGF-β за 72 ч до пробирного сужением гель коллагена.
  2. Подготовить тип я гель коллагена на льду. Смесь холодной коллагена раствор, 10 x сосредоточены MEM среднего и коллаген разрежения буфер, содержащий 0,05 N NaOH, 2,2% NaHCO3и 200 мм HEPES рН 7,4 на 8:1:1 соотношение.
  3. Смешайте 200 мл суспензии TGF-β-лечение эндотелиальных клеток (1.0 х 106 клеток/200 мкл) или управления и 800 мкл раствора гель коллагена. TGF-β обработанных образцов, добавить TGF-β2 (1 нг/мл) для суспензии клеток.
  4. Добавить 1,0 мл смеси в каждой скважине 12-ну культуры пластин и позволяют закрепить в инкубаторе при 37 ° C за 30-60 мин.
  5. После желатинизации наложение 1,0 мл MEM-α содержащий 10% FCS, 50 ед/мл пенициллина и стрептомицина 50 мкг/мл до плавать геля. TGF-β обработанных образцов, добавить TGF-β2 (1 нг/мл) в средствах массовой информации.
    Примечание: Для TGF-β обработанных образцов, добавить TGF-β гель и культуры средств массовой информации.
  6. Инкубируйте плавающей гели при 37 ° C в течение 48 часов.
  7. Сканирование изображений Гели от нижней части пластины с помощью сканера. Кроме того записи изображения с помощью цифровой камеры на фиксированном расстоянии выше Гели гели.
  8. Определить площадь поверхности геля на основе числа пикселей с помощью ImageJ. Выберите гель с помощью freehand selection или связанные выбор инструментов, или с использованием геля «изображение | Отрегулируйте | Цветовой порог» инструмент, а затем определить области применения геля «анализ | Мера» команда.

4. ингибирование Мирна мероприятий, основанных на Locked нуклеиновых кислот Мирна ингибиторы

  1. Сохранить клетки MS-1 в стандартной культуры условиях.
  2. Transfect к морю нуклеиновой кислоты (LNA) Мирна ингибиторы, искусственных микроРНК дуплексы или малые интерферирующие РНК (20 или 50 Нм) с использованием реагентов липофекция согласно инструкции производителя. В наших предыдущих докладах26,27были описаны детали и источники Мирна ингибиторы LNA, искусственных микроРНК дуплексы и малые интерферирующие РНК. В MS-1 клетки transfection стандартные процедуры, основанные на инструкции изготовителя хорошо работать для введения LNA Мирна ингибиторы, искусственных микроРНК дуплексы или малые интерферирующие РНК.
  3. После 16-48 h стимулировать эндотелиальных клеток с TGF-β2 (конечная концентрация 1 нг/мл).
  4. Перейти к различных течению анализов, включая анализ выражения (последовательности РНК (РНК seq) анализы и количественного RT-PCR) РНК, иммуноцитохимическое и assay репортера. Вниз по течению анализы были описаны в наших предыдущих докладах20,26,27.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

TGF-β является мощным индуктором EndMT в различных эндотелиальных клеток. После лечения в 24 ч с TGF-β в клетках МС-1 пятнать для F-актина показывает реорганизации актина стресс волокон (рис. 1A)20. Предварительной обработки с рок ингибитор Y-27632 подавляет всасывание актина реорганизации20. MS-1 эндотелиальных клеток меняются от классическая морфология булыжник как к мезенхимальных веретеновидной формы морфоло...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Сообщается, что активированные ран и TGF-β лечения для 24 h индуцированных EndMT в клетках МС-1, в то время как TGF-β только удалось побудить EndMT в этот короткий период21. Последовательно мы наблюдали, что TGF-β существенно индуцированных EndMT после длительного лечения (48-72 ч) в MS-1 клетки20. EndMT неоднократно наблюдалось после длительного лечения с TGF-β (2 – 6 дней) в различных эндотелиальных клеток, таких как человека пупочной вены эндотелиальных клеток (HUVEC), ч...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим Zea Борок и Kohei Miyazono за предложения по подготовке рукописи. H.I.S. и M.H. поддерживаются Уэхара Мемориальный фонд исследовательских стипендий, и H.I.S. поддерживается Осаму Hayaishi Мемориал стипендии для обучения за рубежом. Эта работа была поддержана грант от фонда науки Такеда (А.С).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Клетки MS-1Американская коллекция типовых культурCRL-2279
MEM-alphaThermo Fisher Scientific32571036
TGF-beta2R& D302-B2-002
4-луночный камерный слайд Lab-Tek IIThermo Fisher Scientific154526
Y-27632 Sigma-AldrichY0503
Blocking Onenacalai tesque03953-95
фаллоидин-тетраметилродамин B изотиоцианатSigma-AldrichP1951
TOTO-3 йодидThermo Fisher ScientificT3604
VE кадгерин моноклональное антитело (BV13)Thermo Fisher Scientific14-1441-82
альфа-СМА Cy3 моноклональное антитело (1A4)Sigma-AldrichC6198
Alexa Fluor 488 козий антимышиный IgG (H+L)Thermo Fisher ScientificA-11001
Cover slip ThermoFisher Scientific174934
Коллаген растворNitta желатин Inc.Cellmatrix I-P
Коллагеновый буфер для разбавленияNitta желатин Inc.Cellmatrix I-P
LNAEXIQON miRCURY LNAмикроРНК Ингибитор мощности (отрицательный контроль B и целевая микроРНК)
синтетический дуплекс микроРНКQiagen miScript miРНК Mimic
Lipofectamine RNAiMAXThermo Fisher Scientific13778030
Lipofectamine 2000Thermo Fisher Scientific11668027
Ингибитор микроРНК

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sanchez-Duffhues, G., Garcia de Vinuesa, A., Ten Dijke, P. Endothelial-to-mesenchymal transition in cardiovascular diseases: Developmental signaling pathways gone awry. Developmental Dynamics. , (2017).
  2. Markwald, R. R., Fitzharris, T. P., Smith, W. N. Structural analysis of endocardial cytodifferentiation. Developmental Biology. 42 (1), 160-180 (1975).
  3. Eisenberg, L. M., Markwald, R. R. Molecular regulation of atrioventricular valvuloseptal morphogenesis. Circulation Research. 77 (1), 1-6 (1995).
  4. Chen, Q., et al. Endothelial cells are progenitors of cardiac pericytes and vascular smooth muscle cells. Nature Communications. 7, 12422(2016).
  5. DeRuiter, M. C., et al. Embryonic endothelial cells transdifferentiate into mesenchymal cells expressing smooth muscle actins in vivo and in vitro. Circulation Research. 80 (4), 444-451 (1997).
  6. Arciniegas, E., Neves, C. Y., Carrillo, L. M., Zambrano, E. A., Ramirez, R. Endothelial-mesenchymal transition occurs during embryonic pulmonary artery development. Endothelium. 12 (4), 193-200 (2005).
  7. Welch-Reardon, K. M., Wu, N., Hughes, C. C. A role for partial endothelial-mesenchymal transitions in angiogenesis. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 35 (2), 303-308 (2015).
  8. Zeisberg, E. M., et al. Endothelial-to-mesenchymal transition contributes to cardiac fibrosis. Nature Medicine. 13 (8), 952-961 (2007).
  9. Chen, P. Y., et al. Endothelial-to-mesenchymal transition drives atherosclerosis progression. Journal of Clinical Investigation. 125 (12), 4514-4528 (2015).
  10. Bostrom, K. I., Yao, J., Guihard, P. J., Blazquez-Medela, A. M., Yao, Y. Endothelial-mesenchymal transition in atherosclerotic lesion calcification. Atherosclerosis. , 124-127 (2016).
  11. Qiao, L., et al. Endothelial fate mapping in mice with pulmonary hypertension. Circulation. 129 (6), 692-703 (2014).
  12. Ranchoux, B., et al. Endothelial-to-mesenchymal transition in pulmonary hypertension. Circulation. 131 (11), 1006-1018 (2015).
  13. Maddaluno, L., et al. EndMT contributes to the onset and progression of cerebral cavernous malformations. Nature. 498 (7455), 492-496 (2013).
  14. Krenning, G., Zeisberg, E. M., Kalluri, R. The origin of fibroblasts and mechanism of cardiac fibrosis. Journal of Cell Physiology. 225 (3), 631-637 (2010).
  15. Cooley, B. C., et al. TGF-beta signaling mediates endothelial-to-mesenchymal transition (EndMT) during vein graft remodeling. Science Translational Medicine. 6 (227), 227ra234(2014).
  16. Wang, Z., et al. Transforming Growth Factor-beta1 Induces Endothelial-to-Mesenchymal Transition via Akt Signaling Pathway in Renal Transplant Recipients with Chronic Allograft Dysfunction. Annals of Transplantation. 21, 775-783 (2016).
  17. Xu-Dubois, Y. C., et al. Markers of Endothelial-to-Mesenchymal Transition: Evidence for Antibody-Endothelium Interaction during Antibody-Mediated Rejection in Kidney Recipients. Journal of the American Society of Nephrology. 27 (1), 324-332 (2016).
  18. Zeisberg, E. M., Potenta, S., Xie, L., Zeisberg, M., Kalluri, R. Discovery of endothelial to mesenchymal transition as a source for carcinoma-associated fibroblasts. Cancer Research. 67 (21), 10123-10128 (2007).
  19. Pardali, E., Sanchez-Duffhues, G., Gomez-Puerto, M. C., Ten Dijke, P. TGF-beta-Induced Endothelial-Mesenchymal Transition in Fibrotic Diseases. International Journal of Molecular Sciences. 18 (10), (2017).
  20. Mihira, H., et al. TGF-beta-induced mesenchymal transition of MS-1 endothelial cells requires Smad-dependent cooperative activation of Rho signals and MRTF-A. Journal of Biochemistry. 151 (2), 145-156 (2012).
  21. Hashimoto, N., et al. Endothelial-mesenchymal transition in bleomycin-induced pulmonary fibrosis. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 43 (2), 161-172 (2010).
  22. Suzuki, H. I., Miyazono, K. Dynamics of microRNA biogenesis: crosstalk between p53 network and microRNA processing pathway. Journal of Molecular Medicine (Berl). 88 (11), 1085-1094 (2010).
  23. Suzuki, H. I., Miyazono, K. Emerging complexity of microRNA generation cascades. Journal of Biochemistry. 149 (1), 15-25 (2011).
  24. Nicoloso, M. S., Spizzo, R., Shimizu, M., Rossi, S., Calin, G. A. MicroRNAs--the micro steering wheel of tumour metastases. Nature Reviews Cancer. 9 (4), 293-302 (2009).
  25. Lagendijk, A. K., Goumans, M. J., Burkhard, S. B., Bakkers, J. MicroRNA-23 restricts cardiac valve formation by inhibiting Has2 and extracellular hyaluronic acid production. Circulation Research. 109 (6), 649-657 (2011).
  26. Katsura, A., et al. MicroRNA-31 is a positive modulator of endothelial-mesenchymal transition and associated secretory phenotype induced by TGF-beta. Genes Cells. 21 (1), 99-116 (2016).
  27. Suzuki, H. I., et al. Regulation of TGF-beta-mediated endothelial-mesenchymal transition by microRNA-27. Journal of Biochemistry. 161 (5), 417-420 (2017).
  28. Camenisch, T. D., et al. Temporal and distinct TGFbeta ligand requirements during mouse and avian endocardial cushion morphogenesis. Developmental Biology. 248 (1), 170-181 (2002).
  29. Krenning, G., Moonen, J. R., van Luyn, M. J., Harmsen, M. C. Vascular smooth muscle cells for use in vascular tissue engineering obtained by endothelial-to-mesenchymal transdifferentiation (EnMT) on collagen matrices. Biomaterials. 29 (27), 3703-3711 (2008).
  30. Medici, D., Potenta, S., Kalluri, R. Transforming growth factor-beta2 promotes Snail-mediated endothelial-mesenchymal transition through convergence of Smad-dependent and Smad-independent signalling. Biochemical Journal. 437 (3), 515-520 (2011).
  31. Krizbai, I. A., et al. Endothelial-mesenchymal transition of brain endothelial cells: possible role during metastatic extravasation. PLoS One. 10 (3), e0119655(2015).
  32. Arciniegas, E., Sutton, A. B., Allen, T. D., Schor, A. M. Transforming growth factor beta 1 promotes the differentiation of endothelial cells into smooth muscle-like cells in vitro. Journal of Cell Science. 103 (Pt 2), 521-529 (1992).
  33. Deissler, H., Deissler, H., Lang, G. K., Lang, G. E. TGFbeta induces transdifferentiation of iBREC to alphaSMA-expressing cells. International Journal of Molecular Medicine. 18 (4), 577-582 (2006).
  34. Paranya, G., et al. Aortic valve endothelial cells undergo transforming growth factor-beta-mediated and non-transforming growth factor-beta-mediated transdifferentiation in vitro. American Journal of Pathology. 159 (4), 1335-1343 (2001).
  35. Maleszewska, M., et al. IL-1beta and TGFbeta2 synergistically induce endothelial to mesenchymal transition in an NFkappaB-dependent manner. Immunobiology. 218 (4), 443-454 (2013).
  36. Ubil, E., et al. Mesenchymal-endothelial transition contributes to cardiac neovascularization. Nature. 514 (7524), 585-590 (2014).
  37. Xu, X., et al. Epigenetic balance of aberrant Rasal1 promoter methylation and hydroxymethylation regulates cardiac fibrosis. Cardiovasc Research. 105 (3), 279-291 (2015).
  38. Xiao, L., et al. Tumor Endothelial Cells with Distinct Patterns of TGFbeta-Driven Endothelial-to-Mesenchymal Transition. Cancer Research. 75 (7), 1244-1254 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

TGFMS 1VE

Похожие статьи