Методическая статья

Сверхнизкое ввода геном последовательность подготовки библиотеки от Tardigrade единичная

DOI:

10.3791/57615

⸱

15 июля 2018 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Institute for Advanced Biosciences, Keio University, 2Systems Biology Program, Graduate School of Media and Governance, Keio University, 3Faculty of Environment and Information Studies, Keio University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Большой проблемой остается загрязнение в ходе секвенирования геномных микроскопических организмов. Здесь мы покажем способ последовательности генома тихоходки от одного образца с всего лишь 50 pg геномной ДНК без усиления весь геном свести к минимуму риск загрязнения.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Тихоходки являются микроскопических животных, которые переходят в состояние ametabolic, называется anhydrobiosis, когда сталкиваются усыхание и может вернуться к их первоначальное состояние, когда вода поставляется. Геномные последовательности микроскопических животных, таких как тихоходок риски бактериального загрязнения, что иногда приводит к ошибочной интерпретации, например, о масштабах горизонтальный перенос генов в этих животных. Здесь мы предоставляем сверхнизких метод ввода последовательности генома тихоходки, Hypsibius dujardini, от одного образца. Применяя строгие мытья и загрязнения изоляции наряду с эффективной добычи 50 ~ 200 pg геномной ДНК от одного лица, мы построили библиотеку виртуализации с помощью инструмента секвенирования ДНК. Эти библиотеки были весьма воспроизводимые и объективной, и информатики анализ последовательного читает с других геномов H. dujardini показал минимальное количество загрязнения. Этот метод может быть применен к unculturable тихоходок, которые не могут быть виртуализации с помощью предыдущих методов.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Тихоходки являются микроскопических животных, которые могут вводить состояние ametabolic, называется anhydrobiosis, когда сталкиваются усыхания. Они восстановить путем поглощения воды1,2. В ametabolic состоянии тихоходки способны терпеть различных экстремальных средах, которые включают экстремальных температур3 и давления4,5, высокие дозы ультрафиолетового света6, рентгеновские и гамма-лучи 7 , 8и9космического пространства. Геномных данных является необходимой основой для изучения молекулярных механизмов anhydrobiosis.

Предыдущие попытки последовательности генома тихоходок показали признаки бактериального загрязнения10,11,12,,1314. Геномные последовательности от таких малых организмов требуется большое количество животных и подвержен бактериального загрязнения; Таким образом мы создали ранее последовательности протокол, с помощью сверхнизких метода ввода, начиная от единичная тихоходки, чтобы свести к минимуму риск загрязнений15. Используя эти данные, мы также провели ампликонов высокого качества и сборка генома H. dujardini16,17. Здесь мы подробно описать этот метод геномной последовательности от отдельного tardigrade ()рис. 1). Проверка этого метода секвенирования находится за пределами фокус этой бумаги и уже тщательно обсуждались в наших предыдущих доклада16.

Этот метод состоит из двух частей: изоляции одного тихоходки с самые низкие возможные загрязнения и извлечение высокое качество пиктограммы уровней ДНК. Тихоходки голодали и тщательно промыть водой, а также антибиотики и наблюдается под микроскопом с 500 кратном обеспечить устранение любых бактериального загрязнения. Предыдущие оценки и измерения показывают, что одного человека тихоходки содержит приблизительно 50-200 pg геномной ДНК16, который добывается путем крекинга хитин экзоскелет циклов замораживания оттаивания или ручной гомогенизации. Этот геномной ДНК представлен библиотеки строительных и виртуализации на инструменте секвенирования ДНК. Дополнительные информатики анализ показывает последовательность высокого качества, а также низкий уровень загрязнения по сравнению с предыдущими проектами tardigrade последовательности.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка

  1. Готовить 2% агарозном геле с помощью дистиллированной воды (DW) как растворитель в 90-мм пластиковая культуры блюдо и 10 мл 1% пенициллина/стрептомицина коктейль с DW. Гель может храниться на 2-3 недели в инкубаторе на 18 ° C.
    Примечание: Избегайте любой хранения геля ниже 10 ° C, для низкой температуры будет сжат геля агарозы, что приводит к незначительным разрыв между гель и стены культуры блюдо, в котором можно перехватить тихоходок.

2. Образец подготовки и загрязнения изоляции

  1. Собрать один тихоходки, поместите его на плите подготовленный агар и мыть его 2 x - 3 x с DW для удаления оставшихся частиц.
  2. Инкубируйте тихоходки 18-22 ° с в течение 24 h удалить любой избыток пищи из кишечника.
  3. Место голод тихоходки в антибиотики пенициллин/стрептомицина для 2-6 ч удалить любые бактериальное загрязнение и поместить дезактивированы животных на стакан чистой слайд с помощью пипетки P10.
  4. Соблюдать тихоходки под микроскопом на 500 кратном и подтверждают, что существует не оставшиеся бактерии.
    Примечание: Высокое увеличение с стереомикроскопом является оптимальной, но оптический микроскоп может быть использован в качестве альтернативы без применения coverslip.
  5. Собирать личности с помощью пипетки P10 с максимум 5 мкл жидкости, поместить его в трубку низким привязки полимеразной цепной реакции (ПЦР) и удалить, как много лишней жидкости как можно скорее.
    Примечание: Пробирок, ПЦР трубы и наконечники должны быть низкой привязки к минимуму потери ДНК.
    Примечание: Проводить гомогенизацию как можно скорее, для быстрой сушки или смерть животного может значительно повредить геномной ДНК.

3. гомогенизации и экстракции ДНК

  1. Однородный животное, чтобы получить его геномной ДНК (геномная ДНК) с одним из следующих методов.
    Примечание: Очень важно использовать указанный комплект, показано в Таблице материалы в следующих шагах экстракции ДНК, другие наборы (столбец и шарик на основе) не являются эффективными в этот чрезвычайно низкий входной. Геномный литического буфера представлялась с 0,5% бета меркаптоэтанол до использования.
    1. Однородный животное с18циклов замораживания и оттаивания.
      1. Сразу же после шаг 2.5, добавить 100 мкл буфера lysis ПЦР-пробирки, содержащие тихоходки.
      2. Поместите ПЦР-пробирку в жидком азоте за 10 мин и за 10 мин, переместите его в блок тепла нагревается до 37 ° C. Повторите этот шаг 2 x.
        Примечание: Этот шаг может быть повторен при гомогенизации недостаточно или могут быть выполнены после ручной дробления.
    2. Вручную раздавить животного.
      1. Сразу же после шаг 2.5, под стереомикроскопом, раздавить человека P10 кончиком пипетки, нажав животного к стенке трубки PCR и сразу же добавить 100 мкл буфера lysis.
        Примечание: Очень важно соблюдать эту процедуру под стереомикроскопом, потому что тихоходки можно легко ускользнуть, и неэффективные дробления приведет к невозможности извлечь геномная ДНК. Убедитесь, что tardigrade кутикулы нарушается, так что литического буфера может проникнуть в организм.
  2. Инкубируйте трубки для 30 мин при комнатной температуре для лизиса происходят.
    Примечание: Для эффективного лизис требуется минимум 30 мин, но инкубации может быть дольше.
  3. Передать полный объем (100 мкл) смеси лизис Микропробирка низким привязки чистой 1,5 мл.
  4. Добавить 100 мкл буфера lysis ПЦР-пробирку низкой привязки, которая была использована для гомогенизации и в настоящее время пуст и после дозирование смеси, передать его на низкий привязки Микропробирка 1.5 мл, на шаге 3.3. Повторите этот шаг 2 x.
  5. Как и шаг 3.4 300 мкл буфера lysis для ПЦР-пробирку низкой привязки, и после закупорить, переместить смесь 1,5 мл микропробирок низким привязки. Микропробирка 1.5 мл low привязки должен содержать 600 мкл смеси после этого шага.
    Примечание: Эти шаги, чтобы свести к минимуму потери геномная ДНК, привязан к стенке трубки PCR, путем промывания образец несколько раз.
  6. Добавить в общей сложности 600 мкл лизис смеси в столбец спин, помещены в коллекцию трубку и центрифуги на 10000 x г за 1 мин.
  7. Повторно применить через поток к столбцу и центрифуги на 10000 x г за 1 мин.
    Примечание: Этот шаг очень важен для обеспечения что большинство геномная ДНК привязан к столбцу.
  8. Добавить 500 мкл буфера мытья в столбце спин и центрифуги его на 10000 x g за 1 мин передачи столбце спина к чистой 1,5 мл микропробирок.
  9. Применить 20 мкл 10 мм трис-HCl, рН 8,5, в столбце спин, подождите 5 минут при комнатной температуре и центрифуги на 10000 x г за 1 мин.
    Примечание: Элюирующий буфер не должны содержать ЭДТА, ибо она мешает ферменты подготовка библиотеки.
  10. Повторно применить потока через колонку спина и после 5 минут инкубации при комнатной температуре, центрифуги за 1 мин на 10000 x g.
    Примечание: Этот шаг имеет решающее значение для обеспечения максимальной элюции геномная ДНК, привязанное к столбцу.

4. Библиотека строительство последовательности

  1. Фрагментация ДНК
    1. Передача 15 мкл геномная ДНК элюанта 15-мкл Микропробирка для фрагментацию ДНК и центрифуги трубки для 1 мин, используя tabletop microcentrifuge.
      Примечание: Указанный Микропробирка, показано в Таблице материалов является оптимальным для низких входных данных. Фрагментация с низким sonication имеет решающее значение, и это не может быть заменен ферментативные фрагментацию из-за крайне низкой концентрации ДНК.
    2. Фрагмент геномная ДНК до 550 bp.
      Примечание: 550 bp настройки, мы использовали заключаются в следующем: пик инцидента мощность = 30 Вт, коэффициент = 20%, циклов в пакетном = 50, время лечения = 23 s.
    3. После тщательно закупорить, передавать чистой низкой привязки ПЦР-пробирку 10 мкл фрагментированных смеси ДНК.
      Примечание: Эксперимент можно остановить здесь. Сохранения ДНК на 4 ° C или от-20 ° C.
  2. Библиотека строительство последовательности
    Примечание: Абсолютно важно использовать указанный набор в Таблицу материалы в следующих процедурах, из-за низкого количества ввода ДНК.
    1. Добавить 2 мкл буфера подготовки шаблона и 1 мкл фермента подготовки шаблона и тщательно перемешать их с пипеткой.
    2. Выполните шаблон подготовки реакции на тепловая велосипедист с соблюдением следующих условий: 22 ° C за 25 мин, 55 ° C за 20 мин, 4 ° C удержание и подогревом крышки на 101-105 ° C. После завершения реакции, переходите к следующему шагу.
    3. Добавьте 1 мкл буфера синтез библиотеки и 1 мкл библиотека синтез фермента продукт реакции подготовки шаблона и проинкубируйте смесь при 22 ° C 40 мин (с провести 4 ° C). После завершения реакции, переходите к следующему шагу.
    4. Добавьте 30 мкл библиотека усиления основной смеси (25 мкл буфера амплификации Библиотека, 1 мкл фермента амплификации библиотека и 4 мкл нуклеиназы свободной воды) и 5 мкл Реагента индексирования.
    5. Все тщательно перемешать с пипетки и центрифуги смесь кратко с настольной центрифуги.
    6. Выполните ПЦР с условиями, представлены в таблице 1.
ТемператураВремяЦиклы
72 ° C3 минуты
85 ° C2 минуты
98 ГРАДУСОВ2 минуты
98 ГРАДУСОВ20 секунд4 циклов
67 ГРАДУСОВ20 секунд
72 ° C40 секунд
98 ГРАДУСОВ20 секунд16 циклов
72 ° C50 секунд
4 ° CУдерживайте

Таблица 1: Условия PCR.

  1. Очистка продуктов ПЦР
    Примечание: Этот шаг может быть заменен с другими методами очистки. Если используется альтернативный метод, не забудьте проверить полученный чистоту ДНК с помощью спектрофотометра. Коэффициенты поглощения 260/280 и 260/230 оба должны быть выше 1.8.
    1. Добавьте 50 мкл магнитной бусины, Пипетка решение 10 x и центрифуги он кратко с настольная microcentrifuge.
    2. Инкубируйте решение для 2 мин при комнатной температуре.
    3. Инкубировать на магнитной подставкой для 5 минут или до тех пор, пока решение становится совершенно ясно и удалить супернатант.
    4. Добавить 200 мкл свежеприготовленные 80% этанола в ПЦР-пробирку низкой привязки на стенде магнит, подождите 30 s и удалить супернатант. Повторите этот шаг 2 x. Не беспокоить бисер.
    5. Кратко центрифуга низким привязки ПЦР-пробирку с настольной центрифуги и удалите любые излишки этанола на магнитную подставку. Просушите бисер, но избежать пересушивание.
    6. Ресуспензируйте бусины с 15 мкл 10 мм трис-HCl, рН 8,5, тщательно Пипетка решение так что однородно распределяются магнитные бусы, инкубировать трубки для 2 мин при комнатной температуре и после краткого центрифугирования, инкубировать на магнитную подставку для 2 мин до тех пор, пока раствор не станет прозрачным.
      Примечание: Элюирующий буфер не должен содержать ЭДТА, ибо она вмешивается в последовательности химии.
    7. Передача супернатанта, не нарушая Пелле, в новой низким привязки ПЦР-пробирку.
      Примечание: Эксперимент можно остановить здесь. Сохранения ДНК при температуре 4 ° C или при-20 ° C для длительного хранения.

5. качество проверить, количественной оценки и последовательность ДНК

Примечание: Перед этот шаг из-за низкого количества ДНК не проводится проверка качества.

  1. Проверка распределения по размерам библиотеки ДНК
    Примечание: Могут также использоваться другие системы высокочувствительные электрофорез с цифровой отчетности размер распределения.
    1. Возвращение реагент буфер электрофореза и гель картриджа (25-1000 bp в диапазоне) до комнатной температуры.
    2. 3 мкл Реагента буфер электрофореза с 1 мкл последовательности библиотеки и смешивать их тщательно за 1 мин с вихрь и кратко центрифуга их с настольной центрифуги.
    3. Провести электрофорез и проверить распределение по размерам библиотеки с сопутствующим. Пик основной фрагмент должен широко от около 300 до 1000 bp.
  2. Количественное определение ДНК
    Примечание: Другие методы, основанные на флуоресценции или количественного PCR может также использоваться, но спектрофотометрии следует избегать, так как он не является достаточно точным для количественного определения последовательности библиотек.
    1. Добавьте 796 мкл раствора буфера и 4 мкл реагента, флуоресцентные и тщательно перемешать. Обойтись 190 мкл рабочего раствора в две пробирки пробирного и 197 мкл до одной трубы пробирного.
    2. Добавьте 10 мкл стандартов с известной концентрации ДНК для каждого пробирного трубка, содержащая 190 мкл рабочего раствора и 3 мкл подготовленный библиотеки пробирного трубка, содержащая 197 мкл рабочего раствора.
    3. Вихревой трубы кратко и центрифуги их на настольные центрифуги. Количественного определения ДНК с помощью флюорометр с параметрами 3-мкл.
  3. Последовательности ДНК Библиотека
    Примечание: Виртуализации платформы должны быть совместимы с указанной библиотеки строительство kit.
    1. Подготовьте библиотеку последовательности на основе протокола производителя.
    2. Установите реагент кассету и потока ячейки в инструмент виртуализации и введите последовательность запуска информации производителя протокол.
    3. Запустите последовательность.
      Примечание: Мы провели два запуска последовательности: один образец/запуск, а также четыре образца, мультиплексируются в один проход.

6. Расчётные анализ

  1. База вызов и, при необходимости, использовать мультиплексирование читает.
  2. Проверка качества данных последовательности с FastQC19.
    Примечание: Для более углубленной проверки полученных данных, смотрите наш предыдущий доклад16.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изоляция загрязняющих веществ:

Этот протокол включает в себя тщательное мытье тихоходки и стерилизации с лечения антибиотиками для сведения к минимуму загрязнения. Она также включает в себя визуальный процесс проверки для обеспечения полноты этих процессов. Микроскоп изображения, сделанные в ходе проверки (шаг 2.4 протокол) показано на рисунке 2. Когда на 500 кратном, бактериальные ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Бактериальное загрязнение представляет собой угрозу для геномные последовательности микроскопических организмов. В то время как предыдущие исследования на tardigrade генома отфильтрованы загрязнения, используя обширные информатики методы12,20, мы последовательности генома от одного лица к минимуму риск загрязнения. Поскольку отдельные тихоходки содержит приблизительно 50-200 pg геномной ДНК16 и помещены в толстый слой хитин экзоскелет, иск...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы благодарят за их техническую поддержку в области секвенирования геномных Nozomi Абэ, Юки Такаи и Уэхаси Исии. Эта работа была поддержана субсидий для японского общества для поощрения науки (JSP) научный сотрудник, KAKENHI субсидий для молодых ученых (No.22681029) и KAKENHI субсидий для научных исследований (B), № 17 H 03620 от JSP-страницы, по Грант для основных научно исследовательских проектов от Sumitomo фонда (No.140340) и частично путем исследования средств от правительства префектуры Ямагата и город Цуруока, Япония. Chlorella vulgaris используется для корма тихоходок была предоставлена любезно хлореллы Industry Co. LTD.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Микроскоп SZ61OLYMPUS
BactoAgarDifco Laboratories214010
Пенициллин стрептомицин (10 000 Ед/мл)Gibco by life technologies15140-148
VHX-5000 СистемаKeyence
0,2 мл Пробирка с силиконовым покрытиемBio Medical ScienceBC-bmb20200
Quick-DNA Набор для микроподготовкиZYMO ResearchD3021Использование этого набора абсолютно необходимо; см. шаг 3.1
1,5 мл микропробиркаgreiner bio-one616-201см. 4.1.1
Высокоскоростная охлаждаемая микроцентрифугаTOMYMX-307
Covaris M220Covaris Inc.
Набор ThruPLEX DNA-SeqRubicon GenomicsCAT. No R400406Использование этого набора абсолютно критично; см. шаг 4.2
ТермоамплификаторBioer TechnologyTC-96GHbC
AMPure XP реагентBECKMAN COULTER Life ScienceA63881
ЭтанолWako054-027335
EB буферQIAGEN19086
2200 TapeStationAgilentG2965AA 
D1000 РеагентыAgilent5067-5583
D1000 ScreenTapeAgilent5067-5582
Кубит dsDNA BR Буфер/реагентThermoFisher ScientificQ32850
Cubee Мини-центрифугаRecenttecGenereachR5-AQBD01aqbd
MiSeq 600 cycle v3Illumina Inc.MS-102-3003
Секвенсор MiSeqIllumina Inc.SY-410-1003
4482277

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Crowe, J. H., Hoekstra, F. A., Crowe, L. M. Anhydrobiosis. Annual Review of Physiology. 54 (1), 579-599 (1992).
  2. Mobjerg, N., et al. Survival in extreme environments - on the current knowledge of adaptations in tardigrades. Acta Physiologica. 202 (3), 409-420 (2011).
  3. Becquerel, P. La suspension de la vieau dessous de 1/20 K absolu par demagnetization adiabatique de L'alun de fer dans le vide les plus eléve. Comptes Rendus de l'Académie des Sciences. 231, 261-264 (1950).
  4. Ono, F., et al. Effect of ultra-high pressure on small animals, tardigrades and Artemia. Cogent Physics. 3 (1), 1167575(2016).
  5. Horikawa, D. D., et al. Tolerance of anhydrobiotic eggs of the Tardigrade Ramazzottius varieornatus to extreme environments. Astrobiology. 12 (4), 283-289 (2012).
  6. Horikawa, D. D., et al. Analysis of DNA repair and protection in the Tardigrade Ramazzottius varieornatus and Hypsibius dujardini after exposure to UVC radiation. PLoS One. 8 (6), e64793(2013).
  7. Horikawa, D. D., et al. Radiation tolerance in the tardigrade Milnesium tardigradum. International Journal of Radiation Biology. 82 (12), 843-848 (2006).
  8. May, R. M., Maria, M., Gumard, J. Action différentielle des rayons x et ultraviolets sur le tardigrade Macrobiotus areolatus, a L'état actif et desséché. Bulletin Biologique de la France et de la Belgique. 98, 349-367 (1964).
  9. Jonsson, K. I., Harms-Ringdahl, M., Torudd, J. Radiation tolerance in the eutardigrade Richtersius coronifer. International Journal of Radiation Biology. 81 (9), 649-656 (2005).
  10. Bemm, F., Weiss, C. L., Schultz, J., Forster, F. Genome of a tardigrade: Horizontal gene transfer or bacterial contamination? Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (22), E3054-E3056 (2016).
  11. Delmont, T. O., Eren, A. M. Identifying contamination with advanced visualization and analysis practices: metagenomic approaches for eukaryotic genome assemblies. PeerJ. 4, e1839(2016).
  12. Koutsovoulos, G., et al. No evidence for extensive horizontal gene transfer in the genome of the tardigrade Hypsibius dujardini. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (18), 5053-5058 (2016).
  13. Boothby, T. C., Goldstein, B., et al. Reply to Bemm et al. and Arakawa: Identifying foreign genes in independent Hypsibius dujardini genome assemblies. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (22), E3058-E3061 (2016).
  14. Boothby, T. C., et al. Evidence for extensive horizontal gene transfer from the draft genome of a tardigrade. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (52), 15976-15981 (2015).
  15. Arakawa, K. No evidence for extensive horizontal gene transfer from the draft genome of a tardigrade. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (22), E3057(2016).
  16. Arakawa, K., Yoshida, Y., Tomita, M. Genome sequencing of a single tardigrade Hypsibius dujardini individual. Scientific Data. 3, 160063(2016).
  17. Yoshida, Y., et al. Comparative genomics of the tardigrades Hypsibius dujardini and Ramazzottius varieornatus. PLoS Biology. 15 (7), e2002266(2017).
  18. He, F. Total RNA Extraction from C. elegans. Bio-protocol. Bio101, e47(2011).
  19. Andrews, S. FastQC a quality-control tool for high-throughput sequence data. , http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/ (2015).
  20. Hashimoto, T., et al. Extremotolerant tardigrade genome and improved radiotolerance of human cultured cells by tardigrade-unique protein. Nature Communications. 7, 12808(2016).
  21. Zimin, A. V., et al. The MaSuRCA genome assembler. Bioinformatics. 29 (21), 2669-2677 (2013).
  22. Li, H., Durbin, R. Fast and accurate short read alignment with Burrows-Wheeler transform. Bioinformatics. 25 (14), 1754-1760 (2009).
  23. Okonechnikov, K., Conesa, A., Garcia-Alcalde, F. Qualimap 2: advanced multi-sample quality control for high-throughput sequencing data. Bioinformatics. 32 (2), 292-294 (2016).
  24. Horikawa, D. D., et al. Establishment of a rearing system of the extremotolerant tardigrade Ramazzottius varieornatus: a new model animal for astrobiology. Astrobiology. 8 (3), 549-556 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи