Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Влияние внутрисердечной нейронов на сердечной электрофизиологии и Arrhythmogenesis в системе Langendorff Ex Vivo

10.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57617

⸱

22 мая 2018 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology-Electrophysiology, cNEP (cardiac Neuro- and Electrophysiology research group), University Heart Center, University Hospital Hamburg-Eppendorf, 2DZHK (German Center for Cardiovascular Research), 3Institute of Experimental Cardiovascular Research, University Medical Center Hamburg-Eppendorf

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем собой протокол для модуляции внутрисердечной вегетативной нервной системы и оценки его влияния на основные электрофизиологии, arrhythmogenesis и лагеря динамика, с помощью программы Langendorff установки ex vivo .

Аннотация

С момента своего изобретения в конце 19-го века Langendorff система перфузии ex vivo сердце продолжает быть важным инструментом для изучения широкий спектр физиологических, биохимических, морфологические и фармакологические параметры в централизованно денервированных сердца. Здесь мы описываем установку для модуляции внутрисердечной вегетативной нервной системы и оценки его влияния на основные электрофизиологии, arrhythmogenesis и динамика циклический аденозинмонофосфат (лагерь). Внутрисердечной вегетативной нервной системы модулируется механических рассечение предсердий жира колодки в котором мышиных ганглии расположены главным образом — или путем использования как глобальных, так и целевых фармакологического вмешательства. Octapolar электрофизиологические катетер вводится в правого предсердия и правого желудочка, и эпикардиальной размещены массивы несколькими электродами (МПС) для сопоставления с высоким разрешением используются для определения сердечной электрофизиологии и arrhythmogenesis. Фёрстер передачи энергии резонанса (ЛАДА) изображений выполняется для реального времени наблюдения за лагеря уровнях в различных регионах сердца. Нейроморфологию изучается с помощью на основе антител окрашивание всей сердца с помощью нейронов маркеров для идентификации и модуляции конкретных целевых показателей внутрисердечной вегетативной нервной системы в проведенных исследованиях. Langendorff ex vivo установки позволяет большое количество воспроизводимых экспериментах в короткое время. Тем не менее, частично открытый характер установки (например., во время измерений МПС) затрудняет контроль постоянной температуры и должны быть сведены к минимуму. Этот описан метод позволяет анализировать и модулировать внутрисердечной вегетативной нервной системы в децентрализованных сердцах.

Введение

Langendorff система перфузии ex vivo сердце продолжает быть важным инструментом для выполнения широкий спектр физиологических, биохимических, морфологические и фармакологические исследования в центре денервированных сердца1,2 ,3,,45 с момента его изобретения в конце 19 века6тыс . На сегодняшний день, эта система до сих пор широко используется для различных темы (например., ишемии-реперфузии) или для изучения сердца фармакологические эффекты7,8и является основным инструментом в сердечно-сосудистых исследований. Долговечность данного метода приводит к от несколько преимуществ (например., измерения выполняются без влияние центральной нервной системы или других органов, кровообращения или циркулирующих гормонов). При необходимости, Фармацевтика можно добавлять контролируемым образом буфер перфузии или непосредственно применяться к конкретным структурам. Воспроизводимость экспериментов, и относительно большое количество экспериментов могут быть выполнены в течение короткого времени. (Частично) открытый характер настройки можно сделать трудно регулирование температуры и необходимо принимать во внимание. Хотя в более крупных видов9также используется Langendorff система, мелкие животные используются главным образом как экспериментальной установки является менее сложной и большей биологической вариативности (например., трансгенные мыши модели) могут быть использованы.

В экспериментальной установки настоящего Протокола является влияние внутрисердечной вегетативной нервной системы на основные электрофизиологические параметры, желудочковой arrhythmogenesis, эпикардиальной теплопроводности и циклический аденозинмонофосфат (лагерь) динамика оценены. Большое количество внутрисердечной ганглии, которые расположены в основном в предсердной жировых отложений и теперь хорошо известны для контроля сердечной электрофизиологии независимо от центральной нейронные управления, являются либо оставить нетронутыми или вручную удалены с тщательной механической рассечение. Фармакологических модуляции вегетативной нервной системы осуществляется глобально добавив Фармацевтика в буфер перфузии или локально путем целенаправленных модуляции предсердий ганглиев. После экспериментов сердца хорошо подходят для оценки иммуногистохимического как все клетки крови были удалены из-за непрерывного перфузии, который может увеличить качество окрашивания.

Общая цель описанных методов является предложить новые перспективы для подробного исследования относительно влияния вегетативной нервной системы на сердечной электрофизиологии и arrhythmogenesis в самом сердце мыши. Причина использовать эту технику, что это можно изучить и изменить вегетативной нервной системы без влияние центральной нервной системы. Одним из основных преимуществ является легко занятости фармакологические эксперименты, в которых потенциальные про - антиаритмические свойств или старых и новых агентов могут быть протестированы. Кроме того для изучения механизмов аритмии, сердечной недостаточности или метаболических заболеваний доступны трансгенных и нокаут мыши модели различных кардиологических заболеваний. Такой подход укрепил наше понимание как вегетативной нервной системы на уровне предсердий может влиять желудочков сердца электрофизиологии и индукции аритмий.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры с участием животных были утверждены местными властями государства Гамбурга, Гамбургский университет животных ухода и использования комитетов.

1. Подготовка аппарата Langendorff

Примечание: Коммерчески доступных Langendorff перфузии система используется.

  1. Подготовить измененный Кребса-Henseleit решение (119 мм хлорида натрия, бикарбонат натрия, 4,6 мм хлористого калия, 1,2 мм монокальций, Калия фосфат 1,1 мм магния сульфата, хлорида кальция, глюкозы 8.3 мм и 2 мм натрия 2,5 мм в 25 мм пируват). Добавьте смесь 95% двуокиси углерода в oxygen/5% перфузии решение для предотвращения кальция осадков. Фильтр буфер с размером пор 0,22 мкм.
  2. Добавление фармакологических агента в буфер расследовать его влияние на сердечной электрофизиологии и arrhythmogenesis при необходимости.
  3. Запустите ванну водой и поместите решение перфузии, включая смесь 95% двуокиси углерода в oxygen/5% в нем. Настройка температуры водяной бани, таким образом, чтобы температура раствора перфузии непосредственно перед канюлю ~ 37 градусов.
  4. Запустить насос ролик и заполняют раствором перфузии аппарат, как только температура не будет достигнута.
  5. Регулировать скорость насоса перед присоединением сердца, так, что нет пузырьков воздуха остаются в канюлю, когда крепления его к аппарату.

2. жесткий - и подготовка программного обеспечения

  1. Подключите систему сбора цифровых данных и соответствующего программного обеспечения к Langendorff аппарат для непрерывной записи перфузионного давления, скорости потока и частоты сердечных сокращений.
    1. Установите целевой перфузионного давления в общих настройках 80 мм рт..
    2. Начните запись.
  2. Используйте катетер электрофизиологии (Таблица материалов) с платиновыми электродами, поверхности электрода 0,5 х 0,5 мм и электрода расстояние 0,5 мм для записи данных и стимуляции с генератором назначенного цифровой стимул.
    1. Место катетера недалеко от района, где сердце будет располагаться после присоединения к аппарату.
    2. Подготовить стимуляции, выбрав 2 электроды из катетера и использовать цикл длиной 100 мс.

3. Подготовка сердца

  1. Добавьте холодной (~ 2-4 градусов) буфера перфузии (10-20 мл и 40-50 мл, так что весь блюдо покрыта) 2 Петри (диаметр 6 см и 10 см) и блюдо с канюлей и место их на льду, непосредственно следующий и под микроскопом. Подготовьте двойным узлом вокруг канюли.
  2. Быстро акцизных сердце после шейки матки дислокации, открыв грудную клетку, используя ножницы Майо и узкие шаблон щипцы. Затем сцепление аорты и полой выше диафрагмы, используя пинцет Лондон и акцизных легочное сердце блока путем разрезания всех сосудов и соединительной ткани рядом с корешком ножницами косоглазия.
  3. Легочное сердце блок в первое блюдо (6 см в диаметре), наполненный ледяной буфера передачи и тщательно удалить легких без повреждения сердца, используя ножницы косоглазия и Лондоне щипцами. Затем поместите сердце под микроскопом и тщательно удалить тимуса, трахеи и пищевода, используя ножницы весной и пинцет СС Дюмон.
  4. Используйте весной ножницы, чтобы вырезать отверстие 1,5-2 мм в верхней части правого предсердия для ввода катетера. Вырежьте отверстие в легочной артерии. Затем вырежьте аорты непосредственно под supraaortic ветвями и удаление ткани из аорты, так, что узел может быть легко.
  5. Держите предсердий жировых отложений, включая основные atrially находится ganglionated оргстекла, вокруг левого предсердия нетронутыми или полностью удалить их тщательное вскрытие.
  6. Передача сердце на блюдо с канюлю и поместите его под микроскопом. Натяните аорты канюлю с щипцами Дюмон СС и связать подготовленный узел плотно вокруг аорты. Убедитесь, что канюли находится не слишком глубоко в аорте, так что аортального клапана и коронарных сосудов, остаются бесплатно.
  7. Быстро прикрепите канюли Langendorff аппарата. Убедитесь, что нет пузырьков в канюлю.
  8. Переключатель перфузионного давления до 80 мм рт.ст., позволяя перфузии постоянное давление.
  9. Вставьте катетер тщательно правого предсердия и правого желудочка без прикосновения или повреждения сердца и закрепите катетер канюля с лентой.
  10. Запустите стимуляции с подготовленной цикл длиной 100 мс на период уравновешивания первоначальный 20 мин.
  11. Закройте камеру разрешить стабильную температуру.

4. Электрофизиологические параметры и Arrhythmogenesis

  1. Примените запрограммированных стимуляции через дистальной или проксимальной электроды катетера в два раза сокращение предсердий или желудочков стимуляции порог для оценки электрофизиологические параметры, как описано в следующих шагах.
    1. Определить время восстановления синусового узла как длина максимальный обратный цикл после 10 s фиксированного курса, ходить на S1S1 длину цикла 120 мс, 100 мс и 80 мс.
    2. Определить точку, Wenckebach как длинная длина цикла S1S1 (8 стимулы; S1S1: 100 мс; 2 мс поэтапного сокращения) с потерей 11 узловой AV проводимости. Определить предсердно узловой огнеупорных периодов как длинный S1S2 (12 стимулы; S1S1: 120 мс, 110 мс и МС; один короткий в сочетании с 2 мс поэтапного сокращения S1S2 extrastimulus) с потерей узловой AV проводимости.
    3. Определить предсердий и желудочков огнеупорных периодов как длинный S1S2 (12 стимулы; S1S1: 120 мс, 110 мс и МС; один короткий extrastimulus в сочетании с 2 мс поэтапного сокращения S1S2) отсутствует сокращение предсердий или желудочков ответ10,11.
  2. Выполнение запланированных extrastimulation (S1S1: 120 мс, 100 мс и 80 мс, а затем до 3 дополнительных ударов; 60-20 мс с 2 мс поэтапного сокращения) или взрыв, протоколы стимуляции (5 s в S1S1: 50-10 мс с 10 мс поэтапного сокращения) в соответствии с конвенций, Ламберт, Ева luate11,10,желудочковой arrhythmogenesis12.

5. эпикардиальной проведение измерения

Примечание: Запись однополярного эпикардиальной electrograms с помощью 128-канал, компьютерный запись системы с шагом дискретизации 25 кГц для сопоставления с высоким разрешением. Используйте массив 32 мульти электрода (МЭС; межэлектродный расстояние: 300 мкм; 1,8 х 1,8 мм). Обратите внимание, что данные были полосовой фильтрации (50 Гц) и оцифрованы с 12 бит и диапазон сигнала 20 МВ.

  1. Место МПС в области места для сердца и добавить заземление в другую часть сердца13,14,15.
  2. Место эпикардиальной стимуляции катетера недалеко от МПС и начать постоянной стимуляции.
  3. Начните запись после подтверждения хорошего контакта электродов, проверяя качество сигнала и амплитуды.
  4. Используйте автономный анализ для определения скорости распространения волн и дисперсии в направлении проводимости.

6. основанные на ладу передачи энергии Фёрстер резонанс циклический аденозинмонофосфат (лагерь) изображений

Примечание: Для измерений, основанных на ладу, урожай сердца из CAG-Epac1-лагеря трансгенных мышей16.

  1. Используйте систему самодельных изображений вокруг стереомикроскопом15,17.
  2. Место стереомикроскопом перед сердцем и настроить его для остроты зрения.
  3. Возбуждают лагеря датчик с источником света [например, использование одной длины волны света излучающих диодов (440 Нм)]. Разделение света выбросов в доноров и акцепторов каналы с использованием splitter луча (для пара голубой флуоресцентный белок/желтый флуоресцентный белок, использование 565dcxr дихроичное зеркало и фильтры выбросов D480/30 и D535/40).
  4. Обеспечить стабильную температуру, поставив пластиковые оберните вокруг камеры.
  5. Возьмите изображения с помощью камеры научных дополнительные металл оксид полупроводник (sCMOS). Координировать источник света и камеры образов с открытым исходным кодом программного обеспечения таких как микро-менеджер.
  6. Чтобы начать получение изображения, нажмите Multi-D Acq. кнопки и настроить промежуток времени, который приобретает изображение каждые 10 сек, с соответствующей экспозиции время, которое зависит от мощности флуоресцентного сигнала (около 100 мс).
  7. Используйте ранее описанных и доступны онлайн ладу и лад онлайн 2 плагины17 разделить изображение на два канала, выберите регионы интереса и контролировать соотношение трассировки.
  8. Во время приобретения perfuse сердце с модифицированных Кребса-Henseleit раствор, содержащий различные вещества, в зависимости от характера эксперимента.
  9. В конце эксперимента выключите приобретения, нажав кнопку остановить и сохранить стек изображений.
  10. Анализ данных ладу, автономно с помощью выделенного анализ программного обеспечения, которое можно разделить образы на двух идентичных секций для доноров и акцепторов каналов и может выполнять анализ лад в нескольких регионах интереса.
    Примечание: Выделенный плагин (ладу автономно) необходима, которая предоставляется в Шпренгер et al. 17.
    1. Запустите программное обеспечение. Откройте анализ, перейдя в меню плагинов , а затем нажмите на MicroManager, а затем на Открытых микро-менеджер файлов.
    2. Запустите ладу автономном режиме плагин для того, чтобы разделить два одинаковых изображения CFP и рекламы ЯФП каналов промежуток времени.
    3. Используйте средство Произвольной выборки для обозначения региона интерес рекламы ЯФП изображения. Нажмите кнопку Добавить , чтобы добавить выделение в окне Multi измерения .
    4. Выберите регион интерес в окне Multi измерения и нажмите Multi получить таблицу с средний серый значения для каждого кадра и региона. Скопируйте и вставьте все данные в листе Excel.
    5. Нажмите на Стек изображений СЛП. Выполните те же действия, что и в шаге 6.10.4 для стека CFP и вставьте значения среднего серого в тот же лист Excel.
  11. Исправьте необработанные данные автономно для фактор через кровь донора в акцепторной канал17.
    1. Используйте следующую формулу, где B — фактор кровотечение через:
      Коэффициент = (рекламы ЯФП - B-x CFP) / СЛП
    2. Определить фактор кровотечение через B изображения сердца, выражая CFP только и измерить процент доноров флуоресценции в канале рекламы ЯФП (B = рекламы ЯФП / CFP).

7. нейроморфологию

Примечание: Анализ внутрисердечной вегетативной нервной системы с помощью immunostainings целом гора нетронутыми мышиных сердец. Обратите внимание, что большинство внутрисердечной ганглиев локализованы в эпикардиальной жировой ткани рядом легочных вен.

  1. Использовать различные stainings изображением neurofilament (общая нейрональных структур; курица анти NF-H, 1:3, 000), тирозин-гидроксилазы (TH, симпатичная(ый) нейрональных структур; кролик α-й, 1:1, 000) и холин ацетилтрансфераза (чат, парасимпатической нейрональных структур; Коза α чат, 1:50).
  2. После перфузии в Langendorff аппарате исправить сердца мыши в 10 мл формалина за 24 часа и хранить их в фосфат амортизированное saline (PBS) на 4 градусов.
  3. Отбеливатель сердца в отбеливатель Дент (наименьшие метанола: перекиси водорода раствор 30% (w/w) в H2O: диметилсульфоксида (ДМСО)) за 1 неделю на 4 ° c и увлажняет их впоследствии в PBS в серии по убыванию метанола в PBS (100%, 75%, 50%, 25%; 1 h) 18.
  4. Выполните следующие инкубаций в формате 24-хорошо пластины с нежным агитации на 4 ° c:
    1. Разрушения сердца в 1% тритон-X-100/PBS (PBS-T) для 3 x 1 ч при комнатной температуре до блокировки их на ночь в блокирующем буфере [5% бычьим сывороточным альбумином (БСА) / PBS-T + азид натрия 0,2%].
    2. Разбавьте антитела следующим: Коза α чат (1:50), кролик α TH (1:1, 000), курица α neurofilament (1:3, 000); вторичные антитела для люминесцентные маркировки (1: 500; или согласно инструкциям производителя); биотинилированным вторичные антитела для маркировки Хромогенный (1: 200; или согласно инструкции производителя).
  5. Проинкубируйте образцы в первичных антител, разводят в блокирующем буфере 1 неделю на 4 градусов.
  6. Помыть сердца для 3 x 15 мин в PBS-T перед вторичное антитело инкубации в блокирующем буфере для 4 дней.
  7. Помыть сердца для 3 x 15 мин в PBS-T и хранить их в среде установки для флуоресцентной окраски за 3 ч при комнатной температуре или использовать авидин Биотин комплекс обнаружения kit согласно инструкциям производителя.
  8. Предварительно Инкубируйте сердца за 1 ч в коммерческих буфера для 3, 3'-диаминобензидин (DAB), до разработки их под визуальный контроль в буфере DAB-содержащих согласно инструкциям производителя.
  9. Храните образцы в двойной дистиллированной воды.
  10. Для парафиновых срезах обезвоживанию и внедрить сердца в парафин.
    1. Резать толстые секции 4-мкм и deparaffinize их по данным лаборатории рутинные процедуры. Ли и как антиген поиска необходимо выполнить должна быть создана для каждого индивидуальную настройку, поскольку она зависит от комбинации антител.
    2. Разрушения в разделах 10 мин в солевой раствор 0,2% Тритон X-100/трис буфере (TBS), следуют 3 x 5 мин моет в TBS.
    3. Блокировать их с 3% BSA/TBS 1 ч при комнатной температуре.
    4. Инкубировать их на ночь при 4 ° c [первичного антитела: Коза α чат (1:50), кролик α й (1: 500), курица α neurofilament (1:1, 000)] или 2 ч при комнатной температуре (помечены флуоресцентным вторичные антитела, 1: 500) в 1% BSA/TBS с 3 x 5 мин моет TBS между ними.
    5. Добавьте 1 мкг/мл bisbenzimide H33342 trihydrochloride вторичное антитело решение или использовать другой метод ядерной окрашивание.
    6. Смонтируйте слайды в среде установки для флуоресцентной окраски.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Рисунок 1 показывает изображение Langendorff установки, включая 2 несколькими электродами массивы (МЭС). До эксперимента внутрисердечного катетера расположен близко к канюля для содействия быстрой и легкой вставки в желудочке прямо атриум и обеспечить за короткий период времени до тех пор, пока уравновешивания можно начать. В нижней части камеры может быть повышена (см. стрелки на рис. 1) так что камера полностью закрыт и гаранти...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этой рукописи известный Langendorff ex vivo сердце перфузии системы представлен как инструмента для изучения влияния внутрисердечной нейронов на сердечной электрофизиологии и arrhythmogenesis с помощью различных карт и методы стимуляции включая эндокарда и эпикардиальной подходы.

Некоторые части протокола имеют решающее значение для установки. Во-первых важно использовать технику приготовления в котором предсердий жировых отложений остаются нетронутыми или быстро удаляются без ранив...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Hartwig Wieboldt за его прекрасную техническую помощь и УКЭ микроскопии изображений объекта (Umif) из университета медицинский центр Гамбург-Эппендорф для микроскопов и поддержки. Это исследование было финансируемых bythe Förderverein des Universitären Гамбург Herzzentrums е.в. и DZHK (Немецкий центр исследования сердечно-сосудистой системы) [FKZ 81Z4710141].

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Хлорид натрияSigma-AldrichS3014Модифицированный раствор Krebs-Henleit
Гидрокарбонат натрияSigma-Aldrich401676Модифицированный раствор Krebs-Henleit
Хлорид калияSigma-AldrichP5405Модифицированный раствор Krebs-Henleit
Одноосновной фосфат калияSigma-AldrichP5655Модифицированный Krebs-Henleit
раствор сульфата магния гептагидратSigma-AldrichM1880Модифицированный раствор Кребса-Хенлейта
Дигидрат хлорида кальцияSigma-AldrichC7902Модифицированный раствор Кребса-Хенлейта
ГлюкозаSigma-AldrichG5767Модифицированный раствор Кребса-Хенлейта
пируват натрия bioXtraSigma-AldrichP8574Модифицированный Кребс-Хенлейт раствор
Carbogen (95% O2 / 5% CO2)SOL-Group, TMG Technische und Medizinische Gas GmbH, Krefeld, Gersthofen, ГерманияМодифицированный раствор
Стерильный фильтр steritop-GP 0,22EMD MilliporeSCGPT05REМодифицированный раствор Krebs-Henleit
Атропина сульфатSigma-AldrichA0257Нейромодуляция
Гексаметония хлоридSigma-AldrichH2138Нейромодуляция
Безникотиновое основание 98-100%Sigma-AldrichN3876Нейромодуляция
Раствор формалина нейтральный буферный 10%Sigma-AldrichHT501128Окрашивание всего крепления
Трис(гидроксиметил)аминометанSigma-Aldrich252859Окрашивание всего крепления
МетанолSigma-Aldrich34860Окрашивание всего крепления
Раствор перекиси водорода 30% (масса) в H2OMerck, KGA, Дармштадт, ГерманияH1009Окрашивание всего крепления
ДиметилсульфоксидMerck, KGA, Дармштадт, ГерманияD8418Окрашивание всего монтирования
Фосфатно-солевые буферные таблеткиGibco / Invitrogen18912-014Окрашивание
всего крепленияTriton-x-100Sigma-AldrichT8787Окрашивание всего крепления
Альбумин бычья фракция VBiomol, Гамбург, Германия11924.03Окрашивание всего крепления
Курица антинейрофиламентEMD MilliporeAB5539Окрашивание всего крепления
Кролик антитирозингидроксилазаEMD MilliporeAB152Окрашивание всего крепления
Козий антихолин антихолин ацетилтрансферазаEMD MilliporeAP144PОкрашивание всего крепления
Ослик и альфа IgG Alexa 488Thermo Fisher ScientificA21206Окрашивание всего крепления
Ослик и альфа IgG Alexa 568Thermo Fisher ScientificA11057Целое окрашивание
Осла и альфа курицы IgY Alexa 647Merck, KGA, Дармштадт, ГерманияAP194SA6целиком монтирование окрашивание
биотин-сопряженного осла и альфа-кролика igGR& D SystemsAP182BЦельное окрашивание
биотин-конъюгированного осла и альфа-козы igGR& D SystemsAP192PЦельное окрашивание
биотин-конъюгированной козы и альфа-курицы igYR& D SystemsBAD010Средство для окрашивания всего крепления
Vectashield Векторныелаборатории, Берлингейм, Калифорния, СШАH-1000Иммуногистохимия
Vectastain ABC kitВекторные лаборатории, Берлингейм, Калифорния, СШАPK-4000Иммуногистохимия
Steady DAB/PlusAbcam plc, Кембридж, Великобританияab103723Окрашивание всего крепления
HistoClearDiaTec, Бамберг, ГерманияHS2002Иммуногистохимия
BisBenzimide H33342 тригидрохлорид (Hoechst)Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАB2261Иммуногистохимия
Vectashield HardSet монтажная средаVector laboratories, Берлингейм, Калифорния, СШАVEC-H-1400Иммуногистохимическая
перфузионная системаHUGO SACHS ELEKTRONIK - HARVARD APPARATUS GmbH, March-Hugstetten, Германия  73-4343Аппарат Лангендорфа
Система сбора данных и соответствующее программное обеспечение для катетера и физиологических параметровPowerlab 8/30 & Labchart, ADInstruments, Данидин, Новая ЗеландияPL3508 PowerLab 8/35Установка Лангендорфа
Октаполярный катетерCIB' ER Mouse, NuMed Inc., Хопкинтон, Нью-Йорк, СШАпользовательскаянастройка Генератора стимулов Langendorff
STG4002, Multi Channel Systems, Ройтлинген, ГерманияSTG4002-160&микро; AНастройка стимуляции
Программное обеспечение для стимуляцииMulti Channel Systems, Ройтлинген,Германия MC_Stimulus IIНастройка стимуляции
Система сбора данных и соответствующее программное обеспечение для эпикардиальных электрограммME128-FAI-MPA-System, Multi Channel Systems, Ройтлинген, ГерманияUSB-ME128-SystemMEA setup
Multielectrode arrayMEA, EcoFlexMEA36, Multi Channel Systems, Ройтлинген, Германия EcoFlexMEA36MEA Настройка
Многоэлектродная решетка Программное обеспечение для записиМногоканальные системы, Ройтлинген, ГерманияMC_RackMEA
Установка Пружинные ножницыFine Science Tools GmbH, Гейдельберг,Германия 15003-08Подготовка сердца
Косоглазие НожницыFine Science Tools GmbH, Гейдельберг, Германия14575-09Подготовка сердца
Майонез НожницыFine Science Tools GmbH, Гейдельберг, Германия14110-15Подготовка сердца
Dumont SS ЩипцыFine Science Tools GmbH, Гейдельберг, Германия11203-25Подготовка сердца
Лондонские щипцыFine Science Tools GmbH, Гейдельберг, Германия11080-02Подготовка сердца
Узконаправленные щипцыFine Science Tools GmbH, Гейдельберг, Германия11003-13Подготовка сердца
Пластиковая пленкаПарапленка M, Bemis NA, базируется в Neenah, WI, СШАРасходные материалы
СтереомикроскопLeica M165FC; Leica Microsystems GmbH, Вецлар, ГерманияFRET
LED CoolLED, Андовер, Великобритания<em>pE-100FRET
DualViewPhotometrics, Тусон, Аризона, СШАDV2-SYSFRET
Набор фильтровDualView Фотометрика, Тусон, Аризона, США05-EMFRET
optiMOS научная CMOS камераQimaging, Суррей, Британская Колумбия, Канада01-OPTIMOS-R-M-16-CFRET
 Микро-менеджер; Vale Lab, Калифорнийский университет в Сан-Франциско, Калифорния, США
Программное обеспечение для анализаImage J; Общественное достояние, NIH, СШАFRET
Krebs-Henleit Программное обеспечение для визуализации ладов

Ссылки

  1. Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: the Langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).
  2. Sutherland, F. J., Hearse, D. J. The isolated blood and perfusion fluid perfused heart. Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).
  3. Hearse, D. J., Sutherland, F. J. Experimental models for the study of cardiovascular function and disease. Pharmacological Research. 41 (6), 597-603 (2000).
  4. Valentin, J. P., Hoffmann, P., De Clerck, F., Hammond, T. G., Hondeghem, L. Review of the predictive value of the Langendorff heart model (Screenit system) in assessing the proarrhythmic potential of drugs. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 49 (3), 171-181 (2004).
  5. Skrzypiec-Spring, M., Grotthus, B., Szelag, A., Schulz, R. Isolated heart perfusion according to Langendorff-still viable in the new millennium. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 55 (2), 113-126 (2007).
  6. Langendorff, O. Investigation of the living mammalian heart. Pflügers Archiv. 61, 291-332 (1895).
  7. Matsumoto-Ida, M., Akao, M., Takeda, T., Kato, M., Kita, T. Real-time 2-photon imaging of mitochondrial function in perfused rat hearts subjected to ischemia/reperfusion. Circulation. 114 (14), 1497-1503 (2006).
  8. Rassaf, T., Totzeck, M., Hendgen-Cotta, U. B., Shiva, S., Heusch, G., Kelm, M. Circulating nitrite contributes to cardioprotection by remote ischemic preconditioning. Circulation Research. 114 (10), 1601-1610 (2014).
  9. Schechter, M. A., et al. An isolated working heart system for large animal models. Journal of Visualized Experiments. 88 (88), 51671(2014).
  10. Stockigt, F., et al. Total beta-adrenoceptor knockout slows conduction and reduces inducible arrhythmias in the mouse heart. PLoS One. 7 (11), e49203(2012).
  11. Berul, C. I. Electrophysiological phenotyping in genetically engineered mice. Physiological Genomics. 13 (3), 207-216 (2003).
  12. Curtis, M. J., et al. The Lambeth Conventions (II): guidelines for the study of animal and human ventricular and supraventricular arrhythmias. Pharmacology & Therapeutics. 139 (2), 213-248 (2013).
  13. Schrickel, J. W., et al. Enhanced heterogeneity of myocardial conduction and severe cardiac electrical instability in annexin A7-deficient mice. Cardiovascular Research. 76 (2), 257-268 (2007).
  14. Rudolph, V., et al. Myeloperoxidase acts as a profibrotic mediator of atrial fibrillation. Nature Medicine. 16 (4), 470-474 (2010).
  15. Jungen, C., et al. Disruption of cardiac cholinergic neurons enhances susceptibility to ventricular arrhythmias. Nature Communications. 8, 14155(2017).
  16. Calebiro, D., et al. Persistent cAMP-signals triggered by internalized G-protein-coupled receptors. PLoS Biology. 7 (8), e1000172(2009).
  17. Sprenger, J. U., Perera, R. K., Götz, K. R., Nikolaev, V. O. FRET microscopy for real-time monitoring of signaling events in live cells using unimolecular biosensors. Journal of Visualized Experiments. (66), e4081(2012).
  18. Alanentalo, T., et al. Tomographic molecular imaging and 3D quantification within adult mouse organs. Nature Methods. 4 (1), 31-33 (2007).
  19. Whittington, N. C., Wray, S. Suppression of red blood cell autofluorescence for immunocytochemistry on fixed embryonic mouse tissue. Current Protocols in Neuroscience. 81, 2.28.1-2.28.12 (2017).
  20. Fukuda, K., Kanazawa, H., Aizawa, Y., Ardell, J. L., Shivkumar, K. Cardiac innervation and sudden cardiac death. Circulation Research. 116 (12), 2005-2019 (2015).
  21. Wengrowski, A. M., Wang, X., Tapa, S., Posnack, N. G., Mendelowitz, D., Kay, M. W. Optogenetic release of norepinephrine from cardiac sympathetic neurons alters mechanical and electrical function. Cardiovascular Research. 105 (2), 143-150 (2015).
  22. Rivinius, R., et al. Control of cardiac chronotropic function in patients after heart transplantation: effects of ivabradine and metoprolol succinate on resting heart rate in the denervated heart. Clinical Research in Cardiology. , (2017).
  23. Ajijola, O. A., et al. Augmentation of cardiac sympathetic tone by percutaneous low-level stellate ganglion stimulation in humans: a feasibility study. Physiological Reports. 3 (3), e12328(2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Внутрисердечная автономная нервная системаоценка аритмогенезамониторинг динамики цАМФкартирование с помощью мультиэлектродного массиваметод FRET-визуализацииоктаполярный электрофизиологический катетермодуляция фармакологического вмешательстваиммуногистохимическое окрашивание целого препарата
Влияние внутрисердечной нейронов на сердечной электрофизиологии и Arrhythmogenesis в системе Langendorff Ex Vivo
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.