Градиент температуры пробирного для определения тепловой предпочтения личинок дрозофилы

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол для определения предпочтительного окружающей температуры личинок дрозофилы , с помощью непрерывного тепловой градиент.

Аннотация

Многие животные, в том числе плодовой мушки Drosophila melanogaster, способны взыскательные мелкие различия в температуре окружающей среды, что позволяет им искать их предпочтительным тепловой ландшафта. Для определения температуры предпочтения личинок за определенный диапазон линейных, мы разработали assay с использованием градиента температуры. Создать один направленного градиент, два алюминиевых блоков цилиндров подключены к независимым водяные бани, каждый из которых контролирует температуру отдельных блоков. Два блока установки нижнего и верхнего пределов градиента. Градиент температуры устанавливается, поместив агарозы покрытием алюминиевой пластине двух блоков под контролем воды так, чтобы пластины охватывает расстояние между ними. Концы алюминиевой пластине, что находится на вершине блоков воды определяет минимальные и максимальные температуры, и промежуточных областей двух блоков образуют линейный градиент температуры. Градиента могут быть применены к личинок разных возрастов и может использоваться для идентификации мутантов, которые демонстрируют фенотипы, например с мутациями затрагивающих гены, кодирующие ГТО каналы и опсины, которые требуются для температуры дискриминации.

Введение

Чтобы выбрать среду с наиболее благоприятные условия^1,2,3мобильных животных работает терморегуляцию. Если Климат слишком горячей или холодной, такое поведение является жизненно важным для выживания. Кроме того многие животные чувствительны к очень небольшие различия в температуре в пределах удобной и искать окрестности с идеальной температуры. Это имеет особое значение для пойкилотермных организмов, таких как плодовых мух, которые сбалансировать температура их тела с окружающей средой. Анализы для мониторинга личиночной терморегуляцию сыграли важную роль в определении и уточнении роли молекулярных сенсоров например дрозофилы переходных потенциальных рецепторов (ГТО) каналы^4,5,6, хромопротеинам^7,8и ИОНОТРОПНЫХ рецепторов рецепторы (IRs)⁹, которые наделения этих животных с температурой чувствительности различных температурных диапазонах.

Двусторонний выбор тест предоставляет один из подходов к изучению тепловой предпочтения в личинки^6,7. Влечет за собой установления двух различных температурных зон и позволяет животных для выбора одной стороны над другой. Результаты тестов двусторонний выбор может быть надежной, особенно если большой разницы температур между двумя вариантами. Кроме того поскольку калибровочных предполагает табулированию только две группы, данные может быть выражено как простое предпочтение индекс. Легкость и простота двусторонний выбор анализов также поддаются генетических экраны. Однако главным недостатком является, что многие эксперименты, обязаны установить предпочтительный температуры одичал тип или мутанта животных.

Градиент пробирного предлагает возможность установить предпочтительный температуры в одном пробирного⁸. Кроме того в отличие от двусторонней выбор теста, он разрешает оценки распределения группы животных, когда они сталкиваются с непрерывный диапазон температур. Один из градиента использует чашку Петри и одиночные животные и хорошо подходит для квалификации поведением отдельных животных¹⁰. Однако поскольку Петри раунд, размеры температурных зон варьируются и постепенно меньше, в зависимости от расстояния от центра. Таким образом эта установка не является идеальным для контроля температуры выбор популяций животных.

Постоянной тепловой градиент аппарат, который хорошо подходит для оценки температуры предпочтения групп личинки использует прямоугольную Арена и описан здесь. Аппарат прост для построения и сборки. Кроме того градиент линейной и гибкие, как он может быть использован для оценки терморегуляцию в широком диапазоне температур от 10 ° C до 42 ° C. Быстрый и простой для выполнения и дает воспроизводимость данных. В дополнение к отчетности благоприятствования температура личинок, он раскрывает предпочтения населения животных над целиком диапазона линейной в одном эксперименте. Из-за этих преимуществ это отличный выбор для идентификации генов, необходимых для терморегуляцию.

Протокол

1. Оборудование для изготовления и монтажа аппарат для градиента анализов

1. Изготовление алюминиевых пластин пробирного для assay сингл направленного градиента.
   1. Обрезать и шлифуют каждого пробирного алюминиевой пластины (рис. 1A) из цельного куска алюминия с использованием ленточнопильных и резкое Вертикальная мельница со следующими размерами: наружный размер 140 х 100 х 9 мм и внутренний размер 130 x 90 x 8 мм (рис. 1B). Анодирования внутри каждого пробирного пластины с черной краской, чтобы сделать его проще для визуализации личинки и предотвращения коррозии.
      Примечание: Изготовление алюминиевых пластин пробирного сингл направленного градиента осуществляется механический цех. Анодирование осуществляется коммерческим поставщиком.
   2. Марк верхнего и нижнего колеса каждого пробирного пластины с 13 демаркации, разделенных 10 мм с помощью постоянного маркера. Место первого и последнего демаркации 5 мм от внутреннего края плит пробирного (рис. 1A, B).
2. Для изготовления пробирного алюминиевой пластине для двунаправленных градиента, вырезать из алюминиевой пластины с габаритами, используя ножницы листового металла: 250 x 220 x 2 мм. анодирования пробирного пластины с черной краской.
   Примечание: Изготовление алюминиевых пластин пробирного для двунаправленных градиентов осуществляется механический цех. Анодирование осуществляется коммерческим поставщиком.
3. Изготовление алюминиевых блоков цилиндров.
   Примечание: Два блока необходимо для одного направленного градиента и трех блоков необходимы для двунаправленных градиента.
   1. Вырезать из цельного куска алюминия с использованием ленточная пила (размеры 50 x 255 x 14 мм) алюминиевых блоков цилиндров (рис. 1 c) (рис. 1 c, D).
   2. Дрель канал воды внутри блока (7 мм в диаметре) с помощью Вертикальная мельница и поток канавки в открытые концы на одной стороне (рис. 1 d). Закройте желобчатых отверстия с болтами и поток печать ленты в форме U-образный водный канал (рис. 1 c, D).
      Примечание: Изготовление алюминиевых блоков цилиндров пробирного осуществляется механический цех.
   3. Исправьте соединителя в алюминиевый блок (рис. 1 d) с резьбой и поток запечатать ленту на одном конце. Другой конец с несколькими колкостями вписываются в силиконовой трубки (ID 1/4" x 3/8" OD х 1/16" стены).
4. Получите две бани циркулирующего охлажденных и отоплением.
5. Соберите температурного блоков для градиента пробирного системы.
   1. Сингл направленного градиента, для подключения каждого из двух алюминиевых блоков к отдельной водяной бане таким образом, чтобы температура каждого блока контролируется независимым воды, циркуляционные системы (рисунок 2A). Использование силиконовой трубки (ID 1/4" x 3/8" OD х 1/16" стена) для подключения к разъему на внутренней стороне алюминиевых блоков (рисунок 2A) на выходе из водяной бани. Кроме того использование труб для подключения внешней стороне разъема на алюминиевый блок к входу водяной ванны.
   2. Для двунаправленных градиента поместите два из трех блоков под левой и правой стороны пластины и подключите их к же водяная баня с трубки (рис. 2B). Подключите третий блок алюминия к второй водяной бане и место ниже центре пластины (рис. 2B).
      Примечание: Этот аппарат и пробирного необходимы только если личинки накапливаются в зоне на одной кромке или другой сингл направленного градиента. Если это так, то важно оценить ли есть эффект края. Чтобы проверить эту возможность, установить двунаправленный градиент, в котором температура зоны края, предпочитают личинки, с использованием градиента сингл направленного (например 18 ° C) — температура в середине плиты двунаправленный градиента (Рисунок 3E , F).

2. личиночной синхронизации

1. Питают мух, которые будут использоваться для откладки.
   1. Смесь дрожжей гранул и дистиллированной воды с пестиком, чтобы вставить дрожжей. Тщательно Измельчить и перемешать до консистенции пасты похож на арахисовое масло. Избегайте чрезмерно сухой пасты, которая может отслаиваться при передаче мух свежие ампул, или влажная паста, которая может поймать мух.
   2. С помощью пестика, добавьте дрожжи пасту недалеко от внутренней стены стандартных дрозофилы флаконов, чуть выше поверхности пищи.
   3. Фото 12-35 женщин и до половины как многие мужчины (но не более 10) на площадку CO₂ и добавить самок и самцов каждого флакона паста содержащие дрожжи.
   4. Чтобы сохранить лету пищи с влажной, дрожжи вставить в то время как кормить мух, объединить этих флаконов в лоток, который держит до 100 флаконов с 20 открытых флаконах, содержащих только дистиллированную воду. Поместите лоток в прозрачный пластиковый пакет и запечатать.
   5. Инкубируйте лоток в инкубаторе 25 ° C в течение 48 часов, так что женщины питаются адекватно, тем самым позволяя им заложить большое количество яиц.
2. Настройка флаконы для откладки.
   1. Перевести питается мух в новой пищи флаконы для сбора яиц путем выстукивать их над. Не используйте CO_2, что может привести к мухи откладывают яйца меньше за короткое время окно.
      Примечание: Стандартные дрозофилы пищи флаконы используются без дрожжей паста для сбора яиц.
   2. Разрешить мухи откладывают яйца на 3 ч при 25 ° C, таким образом, чтобы все яйца собраны над окном, сравнительно узких время.
      Примечание: Это позволит личинки синхронизируются на той же стадии развития.
   3. Место флаконы, содержащие яйца в лоток, содержащий воды флаконы и затяните мешок. Инкубировать при 25 ° C под 12 h свет: 12 h темные циклов.
   4. Возраста личинок для заданного числа часов после откладки (AEL) в зависимости от стадии личиночной желаемого.
      Примечание: Таблица 1 является оценка взаимосвязи между часов AEL и личиночной стадии, которая будет варьироваться в зависимости от покупать акции, питание, воспитание температуры и т.д. точные отношения между AEL и стадии развития должны быть проверяется каждый следователь, с использованием физических критериев, таких как морфология рот крючки и дыхальца¹¹.

3. Настройка градиента температуры

1. Подготовка одного направленного градиент
   1. Чтобы создать влажной окружающей среде во время анализов, поместите два алюминиевых блоков цилиндров, подключенных к двум водяные бани на влажных бумажных полотенец, разделенных 10 см (рис. 2A).
   2. Включите две водяные бани ~ 2 h до начала анализа достаточно времени для температуры алюминиевых блоков, чтобы сбалансировать.
      Примечание: Рекомендуется выполнить пробный эксперимент, чтобы определить температуру каждого водяной бане, которая необходима для достижения желаемого линейного градиента температуры. В таблице 2перечислены некоторые типичные температуры пар для установки ванны водой. Однако, обратите внимание, что температура поверхности зависят от температуры окружающей среды. Длина трубки также влияет температура как там охлаждения в трубах. Длина труб в нашей установки составляет 1,5 м.
   3. СВЧ 100 мл агарозы 1% на мощных параметр в 500 мл круглый широкий рот бутылку и залить 25 мл/пробирного пластины на уровне benchtop. Подготовьте два пробирного пластины, которые могут быть размещены на алюминиевых блоков цилиндров в то же время (рис. 2A).
   4. После агарозы затвердевшим (10-20 мин), мягко руб каждый агарозы поверхности стандартная кухня губкой или меламин губкой, чтобы сделать поверхность агарозы немного грубый, так что при распылении воды на геле агарозы, будет создаваться мембраной гладкой тонкой воды, и не капли воды будет.
   5. Полностью погрузите пластины в контейнере с дистиллированной водой до тех пор, пока assay готов быть выполнены, чтобы предотвратить получение сморщившимися пластины.
2. Подготовить двунаправленный градиент (опционально)
   1. Для создания влажной окружающей среде во время анализов, место три алюминиевых блоков 8 см друг от друга (рис. 2B) на влажные бумажные полотенца.
   2. Включите две водяные бани ~ 2 h до начала анализа достаточно времени для температуры алюминиевых блоков, чтобы сбалансировать.
      Примечание: Рекомендуется выполнить пробный эксперимент, чтобы определить температуру каждого водяной бане для двунаправленных градиента. В таблице 3перечислены некоторые типичные температуры пар для установки ванны водой. Однако, обратите внимание, что температура поверхности зависят от температуры окружающей среды. Длина трубки также влияет температура как там охлаждения в трубах. Длина труб в нашей установки составляет 1,5 м.
   3. Чтобы предотвратить разлив из плиты агарозы, оберните краями алюминиевой пластины с маркировки ленты сформировать 10 мм высотой стены (рис. 2B).
   4. С помощью параметра мощных, Микроволновая 200 мл агарозы 1% 500 мл раунд широкий рот бутылку и залить 120 мл на плите assay.
   5. После агарозы затвердевшим (~ 30 мин), аккуратно протрите поверхность каждого агарозы стандартная кухня губкой или меламин губкой, чтобы сделать поверхность агарозы немного грубый, так, что создается при распылении воды на геле агарозы, гладкой тонкой воды мембранные и без форма капли воды.
   6. Полностью погрузите пробирного пластины в контейнере с дистиллированной водой до тех пор, пока assay готов быть выполнены, чтобы предотвратить их от высыхания.
3. Настройка градиента сингл направленный
   1. Подготовка реагентов и предметы на скамейке рядом с градиента пробирного аппарата (см. Таблицу материалов).
   2. Для содействия передаче эффективных температур, заполните любые пробелы между алюминиевых блоков и плит пробирного путем распыления воды на стыке между блоки и плиты.
   3. С помощью перчатки, удалите пробирного пластины из воды контейнера. Если вода вторгается между геля агарозы и пластиной и вызывает неровности в виде на поверхности, удалите воду с P1000 микропипеткой.
   4. Поместите пластины для пробирного на алюминиевых блоков, так что демаркации, которые являются 2 см от края либо точно соответствуют края алюминиевых блоков цилиндров (рисунок 2A, C).
   5. Брызг воды на поверхность плиты (тонкий воды мембрану покрытие агарозы достаточно) для предотвращения высыхания геля агарозы. Убедитесь, что мембраны вода является непрерывной и бесплатно капли воды, так как личинки могут попасть в ловушку в капельки воды.
   6. Обложка градиента системы с картонной коробки для уменьшения испарения воды и помочь стабилизировать температуру поверхности геля. Подождите 5-10 мин разрешить температуру сбалансировать.
   7. Проверьте температуру поверхности в 12 точках на пластину (рис. 2 c). Возьмите два измерения в пределах каждой зоны, чтобы установить, является ли или не изменчивости в пределах зоны. Убедитесь, что температура в обеих точках в пределах ± 0,2 ° C желаемой температуры.
      Примечание: Изменчивости в пределах зоны обычно происходит потому, что точные расстояния двух точек к краю алюминиевых блоков цилиндров не идентичны. Отрегулируйте положение пластины на алюминиевых блоков, чтобы убедиться, что демаркации, которые являются 2 см от края либо точно соответствуют края алюминиевых блоков цилиндров.
   8. Если измеренные градиента температуры отклоняется от желаемого градиента, увеличить или уменьшить установки температуры воды ванна и еще раз проверьте температуру поверхности после того, как температура воды ванны stabilize(s).
   9. Обложка градиента системы с картонной коробки до начала анализа.
4. Настройка двунаправленной градиента (опционально)
   1. Подготовка реагентов и предметы на скамейке рядом с градиента пробирного аппарата (см. Таблицу материалов).
   2. Брызги воды на поверхности три алюминиевых блоков для содействия передаче эффективной температуры от алюминиевых блоков цилиндров на тарелки пробирного путем заполнения любых пробелов между поверхностями.
   3. Осторожно извлеките пробирного пластины из воды контейнера и поместите на алюминиевых блоков цилиндров. Если вода проникает между геля агарозы и плита, которая может вызвать шишки формы на поверхности, удалите воду с P1000 микропипеткой.
   4. Поместите пробирного пластину на алюминиевых блоков, так что midlines первый и последний зон от либо края точно соответствовать края двух боковых алюминиевых блоков (рис. 2B, D).
   5. Брызг воды на поверхность плиты (тонкий воды мембрану покрытие агарозы достаточно) для предотвращения высыхания геля агарозы. Убедитесь, что вода мембрана является непрерывной и свободной от капель воды, поскольку личинки могут попасть в ловушку в капельки воды.
   6. Обложка градиента системы с картонной коробки для уменьшения испарения воды и помочь стабилизировать температуру поверхности геля. Подождите 5-10 мин, чтобы позволить температуры сбалансировать.
   7. Проверьте температуру поверхности в двух точках вдоль средней линии каждого из 10 зон (Рисунок 2D). Возьмите два измерения в пределах каждой зоны, чтобы установить, является ли или не изменчивости в пределах зоны. Убедитесь, что температура в обеих точках в пределах ± 0,2 ° C желаемой температуры.
      Примечание: Изменчивости в пределах зоны обычно происходит потому, что точные расстояния двух точек к краю алюминиевых блоков цилиндров не идентичны. Отрегулируйте положение пластины на алюминиевых блоков, чтобы убедиться, что midlines первый и последний зон ближайшего каждого края точно соответствуют края двух боковых алюминиевых блоков.
   8. Если измеренные градиента температуры отклоняется от желаемого градиента, отрегулировать установки температуры воды ванна и еще раз проверьте температуру поверхности после того, как температура воды ванны stabilize(s).
   9. Крышки блоков с картонной коробки до начала анализа.

4. личиночной коллекции и мытья

1. Изолировать чистой личинки (вариант 1)
   1. ~ 40 мл 18% сахарозы решение добавьте 50 мл пробирку. Совок все личинки от пищи vial(s) с scoopula и передачи до 18% раствора сахарозы.
   2. Смесь тщательно, но осторожно, используя scoopula отделить личинок от остатков пищи. Подождите 30-60 s до личинки float в верхний слой трубки. Налить верхний слой, содержащий личинки (~ 10 мл) в другой 50 мл трубки и заполнить трубу с свежий раствор сахарозы 18%. Подождите 30-60 s до личинки float в верхний слой снова.
      Примечание: Частицы большой пищи иногда передачи вместе с личинки и может повлиять на личиночной терморегуляцию, если они не будут удалены. Если большие пищевые частицы остаются в верхнем слое, повторите шаги 4.1.1-4.1.2, или вручную удалить их с помощью scoopula.
   3. Верхний слой личинок (~ 10 мл) передать два других 50 мл трубки и заполнить две трубы с дистиллированной водой для уменьшения концентрации сахарозы, так что личинки быстро тонуть в воде. Подождите 30-60 сек, до тех пор, пока личинки опускаться на дно. Как можно предотвратить личинки от утопления быстрее выполняйте это и следующие шаги.
   4. Выбросите столько воды, как возможно, слегка наклоняя трубы. Объединить личинок в одну трубу, наливая личинки с остатки воды и заполнить трубу с дистиллированной водой.
   5. Ждать 30-60 сек, до тех пор, пока все личинки опуститься и удалить столько воды, как это возможно, слегка наклоняя трубы. Повторите этот шаг Стиральная 2 - 4 раза для полностью удалить сахарозы и все видимые пищи.
   6. Удалить столько воды, как можно и передать пустой 35 мм Петри личинки, переливание. Спрей трубки с водой и использовать небольшой кистью для переноса личинок.
   7. Удалите излишки воды из Петри с помощью P1000 микропипеткой. Оставьте ~0.5 мл воды, чтобы предотвратить обезвоживание личинок.
   8. Поместите крышку на блюдо для предотвращения побега личинки. Поверните крышку вниз, чтобы уменьшить способность личинок бежать через небольшой зазор между крышкой и блюдо. Разрешить личинки восстановить для 10-20 мин.
2. Изолировать чистой личинки (вариант 2)
   Примечание: Этот альтернативный метод для очистки личинки снижает возможность удушливой личинки во время стирки. Чтобы использовать этот метод, продолжите следующие шаги после выполнения выше шаги 4.1.1-4.1.2.
   1. Место ячейки сита (300 мкм, сохраняет личинки 72 h AEL или старше) на вершине 50 мл трубки.
   2. После подтверждения, что нет взрослых тел или остатки пищи, плавающей на поверхности раствора сахарозы, налейте верхний слой, содержащий личинки через сетчатый фильтр для улавливания всех личинок на экране сетки. Мыть личинки тщательно промыть дистиллированной водой, пока не будет заполнено Тюбик 50 мл.
   3. Удалите ячейку ситечко с личинки и утилизация использованной воды из трубки. Место сетчатый фильтр, содержащий личинки поверх пустых труб и мыть личинки снова с дистиллированной водой, пока не будет заполнено Тюбик 50 мл.
   4. Поверните фильтр вверх ногами над пустой 35 мм Петри и брызги воды из верхней части клетки ситечко для переноса личинок на Петри блюдо. Перенести оставшиеся личинки, с помощью небольшой кистью.
   5. Продолжать шаг 4.1.7 выше, прежде чем перейти к шагу 5.

5. анализ и расчет

1. Удалите картонную коробку и проверьте температуру поверхности гель непосредственно перед передачей личинки к пластине. Минимизируйте время, что картонная коробка открыта для предотвращения нарушения уравновешивания температуры. Если поверхность сухой, распыляйте небольшое количество воды на поверхности.
2. Распространять 150 ± 50 личинок в центре каждой пластины (между зонами 3 и 4 из 6 зон) для одного направленного градиента (релиз зоны; Рисунок 2 c).
   Примечание: Для двунаправленных градиента, распространять 200-400 личинки вдоль средней зоны каждой половины (Рисунок 2D).
3. Место Гонав крышка над каждой пластины пробирного чтобы предотвратить обход из личинки. Обложка установки с картонной коробки для предотвращения воздействия света, который может повлиять на выбор личинок на геле агарозы.
   Примечание: Для двунаправленных градиента, она не следует необходимо покрыть тарелка с крышкой, потому что плита больше, и предпочтительным температура личинок в средней зоне. Следовательно несколько личинок накапливаются на краях и имеют возможность выползти.
4. Разрешить assay перейти на 10-30 минут для одного направленного градиента и 15-35 мин для двунаправленных градиента, в зависимости от возраста личинок (Таблица 4).
5. Удалите картонную коробку и микроплиты крышкой. Фотография пластины сверху с помощью цифровой камеры. Возьмите две фотографии каждого пробирного пластины, так, что следователь может выбрать один с лучшей контрастности и яркости для анализа.
6. Удалите все личинки из плит пробирного и в любом месте за пределами пластин путем аспирации.
7. Очистите пробирного пластин, труб и ситечко клетки тщательно промыть дистиллированной водой. Повторное использование пробирного пластины, подготовленного в тот день, если повреждена поверхность агарозы.
8. Вычислите процентное распределение личинок в каждой зоне.
   1. Откройте фотографическое изображение результатов анализа с помощью любого программного обеспечения, которое позволяет добавлять маркировку на изображение. Чтобы указать пробирного зон, рисовать вертикальные линии, каждые 2 см на основе демаркации на табличке пробирного.
   2. Подсчитать количество личинок в каждой зоне и запись чисел. Личинки в регионах 0,5 см от любого из стен, не учитываются. Гель толще возле стены, и температура поверхности не являются линейными в этих регионах.
   3. Для одного направленного градиента Рассчитайте процентное распределение в каждой зоне следующим образом:
      (количество личинок в данной зоне 2-см) / (общее число личинок в 6 зон) x 100.
   4. Для двунаправленных градиента Рассчитайте процентное распределение в каждой зоне следующим образом:
      (количество личинок в данной зоне 2-см) / (общее число личинок в 5 зонах на каждой стороне градиента) x 100.

Результаты

Учредить 18 ° С - 28 ° C сингл направленного градиента, мы установить температуру две ванны водой до 16,8 ° C и 31 ° C. Мы получаем температур на 13 пунктов путем измерения температуры на 26 должностей в пределах верхней и нижней части всех 6 зон, линии границы между зонами и в крайних концах поверхности геля агарозы (рис. 2 c, 2E). Распределение температуры вдоль градиента был почти линейное (Y = 0.9672 * X + 16.19, R² = 0.9961) (...

Обсуждение

Для обеспечения успеха этого протокола, важно предпринять шаги для получения достаточного количества личинок для выполнения экспериментов. Они включают в себя предварительно кормления мух в дрожжей содержащие паста ампул для 2-3 d улучшить откладки. Флаконы должны быть помещены в лоток, содержащий воду флаконов и заключены в прозрачный пластиковый мешок, который сохраняет влагу пищи и способствует эффективное кормление личинки допуская воздействия обычных циклов свето тени. Однако вставить дрожжи не должно быть настолько...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
<сильно>Градиентный пробирный аппарат
PolyScience 9106, Охлаждающая/Нагреваемая 6-литровая циркуляционная ванна	Thomas Scientific	9106	Данная модель снята с производства. К обновленным моделям на замену относятся: 1186R00 и 1197U04 для 120 В, 60 Гц, или 1184L08 и 1197U04 для 240 В, 50 Гц.
Алюминиевая пробная пластина (для однонаправленного градиента)			Внешний размер: 14 x 10,1 x 0,9 см, внутренний размер: 12,9 x 8,7 x 0,8 см, черный анодированный.
Алюминиевая пластина (для двунаправленного градиента)			25 х 22 х 0,2 см, черная анодированная.
Внешний размер алюминиевого блока			: 25,5 х 5 х 1,4 см, параметры внутренних каналов показаны на рисунке 1D.
Соединитель для алюминиевых блоков и трубок	McMaster-Carr	91355K82
Tygon Санитарная силиконовая трубка	Tygon	57296	1/4" ID x 3/8" OD x 1/16" wall
Name	Company	Номер в каталоге	Комментарии
Элементы и реагенты для анализа
	Scientific	17361	Пестик для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5 мл
Термометр	Fluke	51II
Термопара	Fluke	типа K Универсальная
крышка для микропланшетов	Corning	6980A77
35 мм тарелка	Corning	9380D40
Маркировочная лента (для двунаправленного градиента)	Fisher Scientific	15-951	Маркировочная лента Fisherbrand 2 in x 14 ярдов
Agarose	Invitrogen	16500500	Приготовьте 1% раствор
Сахароза	Sigma	S0389-5KG	Приготовьте 18% раствор непосредственно перед началом анализа
Кисть для рисования	Fisher Scientific	11860
50 мл центрифужные пробирки	Denville	C1062-P
Scoopula	Fisher Scientific	14-357Q
500 мл круглая бутылка с широким горлышком	Pyrex	1395-500
Сетчатое фильтр для клеток (пора 300 мм)	PluriSelect	43-50300	Дополнительный элемент для мытья личинок
Картонная коробка (лоток для флакона)	Genesee Scientific	FS32-124
Название	Company	Номер в каталоге<	strong>Комментарии
>Drosophila food
Дистиллированная вода			22 400 мл
кукурузной муки, желтой (с очень мелкими ячейками, флокированная) 20 кг	LabScientific Inc.	NC0535320	1 609 г
Пивные дрожжи 100 фунтов	MP Biomedicals	ICN90331280	379 г
NutriSoy® Соевая мука (10 кг/единица)	Genesee Scientific	62-115	221 г
<ем>Дрозофила Агар, тип II (5 кг)	Genesee Scientific	66-103	190 г
Каро светлый кукурузный сироп	Каро		1,700 мл
Метил4-гидроксибензоат (суспендия в 200-градусном этаноле)	Sigma Aldrich	H5501-5KG	72 г/240 мл
Пропионовая кислота пурисс. в год,>99,5% (GC)	Sigma Aldrich	81910-1 л	108 мл
фосфорной кислоты  реагент ACS, ≥ 85 мас.% в H2O	Sigma Aldrich	438081-500 мл	8,5 мл