Методическая статья

Спектрофотометрические определение содержания Phycobiliprotein в цианобактерии Synechocystis

DOI:

10.3791/58076

⸱

11 сентября 2018 г.

 ,  ,  , 
1Department of Adaptive Biotechnologies, Global Change Research Institute, Czech Academy of Sciences, 2Department of Plant Physiology, Faculty of Science, Masaryk University, 3Laboratory of Intracellular Regulation, Institute of Plant Physiology, Russian Academy of Sciences

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы представляем протокол количественно определить содержание phycobiliprotein в цианобактерии Synechocystis спектрофотометрическим методом. Процедура извлечения также успешно применяется для других штаммов водорослей и цианобактерий; Однако из-за различий в спектрах поглощения пигмент, необходимо отдельно проверить спектрофотометрические уравнения для каждого штамма.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это простой протокол для количественного определения содержания phycobiliprotein в модели цианобактерии Synechocystis. Фикобилипротеинов являются наиболее важных компонентов phycobilisomes, основных светособирающего антенн в цианобактерий и несколько таксонов водорослей. Phycobilisomes Synechocystis содержат два фикобилипротеинов: фикоцианина и аллофикоцианин. Этот протокол описывает простой, эффективный и надежный метод количественного определения фикоцианина и аллофикоцианин в этой модели цианобактерии. Мы сравнили несколько методов добычи phycobiliprotein и спектрофотометрические количественной оценки. Процедура извлечения, как описано в настоящем протоколе был также успешно применяется для других штаммов цианобактерий например Arthrospira sp., Cyanothece sp., Synechococcuselongatus, спирулина sp., и Nostoc sp., а также относительно красных водорослей порфиридиума cruentum. Однако коэффициенты вымирания конкретных фикобилипротеинов из различных таксонов могут отличаться и таким образом, рекомендуется проверить метод спектрофотометрические квантификации для каждое одного штамма индивидуально. Протокол требует немного времени и могут быть выполнены в любой лаборатории стандартного науки о жизни, так как он требует только стандартное оборудование.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

fPhycobiliproteins являются водорастворимый пигмент белковых комплексов, которые представляют собой основные компоненты светособирающего антенн в прокариотических цианобактерий (синезеленых) и несколько эукариотические таксоны (Glaucophyta, Rhodophyta и криптофитов)1. Они возникают главным образом как супрамолекулярные комплексы, называется phycobilisomes, и обычно они прикреплены к поверхности фотосинтетических мембран на стороне стромы, за исключением криптофитов, где фикобилипротеинов локализованы в тилакоидов люмен2. Были определены четыре вида фикобилипротеинов до Дата: аллофикоцианин основных и периферийных фикоцианин, фикоэритрин и Фикоэритроцианин1. Как основной светособирающих комплексов phycobilisomes представляют собой один из важнейших факторов производительности массовой культуры водорослей и цианобактерий. Доказано, что phycobilisomes усечение может повысить накопления биомассы под сильный свет3. С другой стороны под скромным или низкой освещенности, антенна усечения привело темпы роста и биомассы накопления сокращение3,4. Фикобилипротеинов коммерчески используются красители пищевые, фармацевтических препаратов и пищевых добавок, в косметической промышленности, а также флуоресценции зондов с приложениями в проточной цитометрии, флуоресцентного иммуноанализа и микроскопии флуоресцирования5.

Этот протокол фокусируется на количественное определение фикобилипротеинов в модели цианобактерии Synechocystis. Цианобактерии являются ранние oxygenic фотосинтетических автотрофы; они формировании биосферы земли более 2,4 миллиарда лет6. Они играют решающую роль в глобальных биогеохимических циклах, азота, углерода, кислорода и других элементов. Среди цианобактерий, одноклеточные штамм Synechocystis получила уникальное положение, поскольку он был первым цианобактерии с весь геном последовательности7,8, это естественно трансформер экзогенной ДНК9, и Он выполняет стабильным и относительно быстрый рост10,11. В Synechocystis, основной компонент антенна, аллофикоцианин, ассоциируется с составной мембранных белков и прилагаемый фикоцианина расположен на периферии тилакоидной мембраны.

Несколько методов для извлечения phycobiliprotein и количественной оценки сравниваются в рамках настоящего Протокола. Процедура окончательного извлечения был успешно применен Synechocystis, а также другие цианобактерий штаммов, включая Arthrospira Cyanothece sp., Synechococcuselongatus, спирулина sp., СП.и Nostoc sp. и он был также успешно применяется для красных водорослей порфиридиума cruentum. Таким образом метод, разработанный в этом протоколе может рассматриваться как универсальный метод для извлечения phycobiliprotein. Даже несмотря на то, что некоторые из методов испытания извлечения привело к повышению урожайности общего белка, здесь описывается процедура извлечения условии высоким phycobiliprotein дает вместе с наименьшим содержанием остатков хлорофилла в Экстракт Phycobiliprotein. Для правильной фикоцианина и аллофикоцианин спектрофотометрические количественной оценки необходимо уменьшить содержание хлорофилла .

Спектры поглощения phycobiliprotein может значительно различаться между различными водоросли и цианобактерии видов12,13,14,,1516,17 и даже среди нескольких штаммов одного цианобактерий рода18. Таким образом конкретные длинах волн и поглощения коэффициенты, используемые для определения фикоцианина и аллофикоцианин в Synechocystis не применяются обычно для других штаммов. Кроме того Synechocystis не содержат фикоэритрин и Фикоэритроцианин, которые могут быть найдены в некоторых других водорослей и цианобактерий. Для целей определения фикобилипротеинов штаммов Synechocystisпомимо рекомендуется оценить спектрофотометрические уравнения для каждого штамма индивидуально.

Хотя протокол содержит два больше шагов (на ночь паром для лиофильной сушки сотовой окатышей и извлечения протеина 1 час), общее рабочее время для количественной оценки фикобилипротеинов не более 2 часов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. цианобактерий культивирование

  1. Культивируйте Synechocystis клеток в колбах Эрленмейер или в фотобиореакторах10,19 в буферизации BG11 средний20 для поддержания pH < 10 (например, с помощью 17 мм HEPES10).
    Примечание: Стандартные культивирования условия требуют контролируемой температуре (30 ° С, оптимальная температура обычно 35 ° C)21, освещения (как правило, белый свет интенсивности до 800 мкмоль [фотоны] / [m2·s])21и CO 2 поставка (в 400 мл photobioreactor плоских, роста, насыщая концентрации CO2 -1700 ppm)21.
  2. Для определения плотности культуры, измерения оптической плотности культуры спектрофотометрически на 730 Нм (OD730) с помощью кювета с светового луча от 1 см. Кроме того, граф клетки под микроскопом, используя Горяева или автоматизированные ячейки Счетчик.

2. образцы подготовка

  1. Работа при низкой освещенности для предотвращения деградации phycobiliprotein.
  2. Урожай 3 x 1 мл суспензии культуры до упора Сейф трубы. Используйте triplicates для оценки технических ошибок в измерении. Для выборки культуры в стерильных условиях, урожай клетки в ламинарных капюшоном и следуйте рекомендациям по работе и безопасности.
  3. Центрифуга клетки на 15000 x g при температуре лаборатории для 5 минут обращать внимание на ротор надлежащим образом сбалансированной центрифуги. После центрифугирования отбросить supernatants. Будьте уверены, чтобы не мешать гранулы.
  4. Поместите образцы в морозильную камеру. Для длительного хранения сохранить образцы в-80 ° C. Это необходимо для предотвращения деградации phycobiliprotein. Для краткосрочного хранения-20 ° C является достаточным.
  5. Freeze-Dry образцы на ночь. Для надлежащего процесса сушки Держите температуру замораживания сушилка конденсатора ниже-60 ° C и давление в камере замораживания сушилка вокруг 1 гПа.
  6. После окончания цикла Плаурайта, закройте трубку как можно скорее, чтобы предотвратить реабсорбции воды из воздуха.

3. сотовый гомогенизации и пигменты извлечения

  1. Добавление четырех штук стеклянных шариков (с диаметром 2 мм) для каждого образца трубки и закрыть трубы.
    Примечание: Когда крышку трубки Сейф lock используется для гомогенизации слишком тонкая, она может разорвать во время гомогенизации; Таким образом только Сейф замок трубы с сильным крышками рекомендуются для этого протокола.
  2. Однородный образцы с Стеклошарики для 15 s на гомогенизатор температуре лаборатории.
    Примечание: Образец надлежащим образом гомогенизированный распространяется всей внутренней поверхности трубы Сейф lock.
  3. Добавьте 1 mL PBS буфера (рН 7,4), охладить до 4 ° C, для пробы для того чтобы извлечь фикобилипротеинов.
    Примечание: От этого шага на Храните пробы на льду для предотвращения деградации извлечения белков. Это очень важно.
  4. Смешать образцы с PBS для 5 s на гомогенизатор температуре лаборатории.
    Примечание: После смешивания, образцы зеленоватый.
  5. После смешивания, храните пробы на льду на 60 мин Обложка ледяной ванне с крышкой для предотвращения деградации пигменты.
  6. После 60 мин phycobiliprotein добычи Центрифугуйте образцы на 15000 x g при 4 ° C за 5 мин обращать внимание на правильно сбалансировать ротора центрифуги.
    Примечание: После центрифугирования, супернатанта имеет голубой синий цвет.

4. Phycobiliprotein количественная оценка

  1. До спектрофотометрические измерения калибровки спектрофотометр базовой линии с помощью буфера PBS как пустой.
  2. Как только калиброванные спектрофотометра, отменить PBS от одного спектрофотометр кювет и Пипетка супернатант с извлеченными фикобилипротеинов вместо с буфера отбрасываются.
  3. Количественную оценку концентрации phycobiliprotein спектрофотометрически, используя щель шириной 0,5 Нм.
    1. Измерение поглощения phycocyanobilins фикоцианина и аллофикоцианин против PBS буфере пустыми в 615 Нм (615) и 652 Нм (652), соответственно, и измерения оптической плотности сотовой мусора на 720 Нм (720).
    2. Рассчитайте концентрацию фикоцианина и аллофикоцианин согласно уравнений (1) и (2) Беннетт и Богорад12:
      figure-protocol-1
      figure-protocol-2
      Примечание:615,652и720 должны соответствовать линейной оптической плотности спектр спектрофотометра. При необходимости разбавьте образца с PBS буфера.
  4. Пересчет концентрации пигмента в оригинальные образцы. Концентрации пигмента в примере соответствует непосредственно с результатами уравнений (1) и (2) когда 1 мл культуры и 1 мл буфера извлечения используются для анализа. В случае с использованием различных объемов цианобактерий образцы или PBS буфера, концентрации пигмента окончательный должен рассчитываться по формуле (3):
    figure-protocol-3(3)
    Примечание: В случае нормализации содержания phycobiliprotein на сухой массы клеток, концентрации пигмента окончательный должен рассчитываться по формуле (4)figure-protocol-4 (4)

5. Определение ячейки сухого веса (опционально)

  1. Весят три пустые трубы Сейф замок на аналитические весы.
    Предупреждение: Важно, что Сейф lock трубки сухим. В случае хранения труб в влажной среде, сухие трубы на несколько часов перед началом взвешивания их замораживания. Манипулировать трубы аккуратно и только с неопудренные перчатках, чтобы избежать любой контакт между материалом и исследователь пальцев. Держите все держатели и центрифуги чистой, чтобы избежать передачи любого материала трубы.
  2. Пример 1 x 15 мл суспензии культуры до 15 мл Конические трубки.
  3. Центрифуга культуры подвеска в 15 мл конические трубы на 4000 x g при температуре лаборатории для 10 min. баланс ротора центрифуги с трех дополнительных 15 мл конические трубы, каждый содержащий 15 мл воды. После центрифугирования отбросить 12 мл супернатант.
  4. Ресуспензируйте гранулы в оставшихся супернатант и передачи 3 x 1 мл смеси в три пробирки Сейф замок 1,5 мл с пипеткой. В случае, если некоторые остатки гранулы остаются в 15 мл Конические трубки, добавьте 1,5 мл деионизованной воды в конической трубки, вихревой или трясти трубки Ресуспензируйте оставшиеся Пелле и передачи 3 x 0.5 мл смеси в три пробирки Сейф lock 1,5 мл (уже containi нг 3 x 1 мл гранул) с пипеткой.
    Примечание: Деления Пелле за три трубки Сейф замок 1,5 мл позволит оценить любой технической ошибки измерения сухого веса.
  5. Центрифуга клетки в 1,5 мл Сейф замок трубы на 15000 x g при температуре лаборатории для 5 минут баланс ротора центрифуги с дополнительной 1,5 Сейф замок мл, содержащий в 1 мл воды. После центрифугирования отбросить supernatants.
  6. Поместите образцы в морозильную камеру. Для длительного хранения сохранить образцы в-80 ° C; для краткосрочного хранения,-20 ° C является достаточным.
  7. Freeze-Dry образцы на ночь. Для надлежащего процесса сушки Держите температуру замораживания сушки конденсатора ниже-90 ° C и давление в камере замораживания сушилка вокруг 1 гПа.
  8. После для, закройте трубы и взвесить образцы на аналитические весы.
    Примечание: Значение сухого веса, может использоваться для нормализации содержания phycobiliprotein на сухой массы клеток.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Для первоначального метода испытаний, Synechocystis культивировалось как пакетного культур в колбах Эрленмейер на шейкер в BG11 культивирование средний20 (ДОПОЛНЕНО 17 мм HEPES) при 25 ° C, под теплый белый свет интенсивности 50 мкмоль (фотонов) / (м 2·s) и с 1% CO2 в атмосфере культивирования. В ходе выращивания, культур были взяты пробы в Сейф замок трубы центрифугировали (15000 x g при температуре лаборатории 5 мин), супер...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает простой, быстрый и воспроизводимый метод количественного определения содержания phycobiliprotein в модели цианобактерии Synechocystis. Сравниваются несколько методов клеток гомогенизации, экстракции белков и фикоцианина и аллофикоцианин количественной оценки, и Заключительный протокол представляет собой сочетание оптимальных шагов каждый одной процедуры. Как репрезентативных данных содержание фикобилипротеинов был количественно в клетках Synechocystis под увеличение интенсивности...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол был принят от предыдущей публикации11. Т. з., Ch. ум и J. Č. были поддержаны министерства образования, молодежи и спорта Чешской Республики в рамках национальной программы устойчивого развития я (НПУ я), предоставить номер LO1415. J. Č. было также поддержано GA CR, номер гранта 18-24397S. Доступ к документам и другим объектам было поддержано чешский исследовательской инфраструктуры для систем биологии C4SYS (проект не LM2015055). М. а. с. была поддержана грантом от российского фонда науки [№ 14-14-00904].

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
PCC 6803Institut Pasteur, Paris, France6803Штамм цианобактерий
Roti-CELL PBSCarl Roth GmbH + Co. KG, Карлсруэ, Германия9143.1Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS), pH 7,4
Eppendorf safe-lock tubes Eppendorf, Hamburk, Германия30120086Safe-lock tubes 1,5 мл
VWR 80-Place Storage SystemVWR International, Radnor, Pennsylvania, США30128-282Держатель для пробирок с безопасным замком 
RAININ 100 &микро; л -1000 & микро; l Mettler-Toledo, Колумбус, Огайо, США 17014382Пипетка
GP-LTS-A-1000µ L-/F-768/8Mettler-Toledo, Колумбус, Огайо, США 30389272Наконечники для пипеток
Rotina 420RHettich, Kirchlengern, Германия4701Охлаждаемая центрифуга для пробирок с безопасным замком 1,5 мл и конических центрифужных пробирок 15 мл
LCexv 4010Liebherr, Булле, Швейцария9005382197172Холодильник и морозильная камера -20  ° C
Revco ExF -86° C Вертикальный сверхнизкотемпературный морозильникThermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, СШАEXF24086V Морозильная камера -80  ° C
CoolSafeLaboGene, Lillerø d, Дания7.001.000.615Сублимационная сушилка 
UV-2600Shimadzu, Киото, ЯпонияСпектрофотометр UV-2600 
Абсорбционные кюветы Hellma, полу MicroSigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАZ600288 полумикрокюветы VIS/UV-VIS 0,75-1,5 мл, спектральный диапазон 200-2500 нм;
Silamat S6Ivoclar Vivadent, Шаан, Лихтенштейн602286WUГомогенизатор 
Цельностеклянные бусиныSigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США Z273627Стеклянные бусины диаметром 2  mm
CPA225D-0CESartorius AG, Gö Тинген, ГерманияSECURA225D-1OBRАналитические весы
C-фикоцианин из Spirulina sp. Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАP2172Фикоцианин стандартный
АллофикоцианинSigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАA7472Аллофикоцианин стандартный
набор бицинхониновой кислоты Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАBCA1, B9643Полный набор для определения общих белков
AlgaeTron Photon System Instruments Ltd., Drá sov, Чешская РеспубликаAG 130-ECO Камера для выращивания колб E. с регулируемым светом и атмосферой
ФотобиореакторPhoton System Instruments Ltd., Drá sov, ЧехияFMT-150Оборудование для выращивания цианобактерий и водорослей с полностью контролируемой средой
Cellometer Nexcelom Bioscience, Лоуренс, Массачусетс, СШАAuto M10Cell counter
Corning 15 мл центрифужные пробиркиSigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАCLS430791 Центрифужная пробирка 15 мл для сухого взвешивания проб
Herasafe KSThermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США51024579Ламинарный колпак

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mimuro, M., Kikuchi, H. Antenna Systems and Energy Transfer in Cyanophyta and Rhodophyta. Light-Harvesting Antennas in Photosynthesis. Green, B. R., Parson, W. W. , Springer. Dordrecht, The Netherlands. 281-306 (2003).
  2. Spear-bernstein, L., Miller, K. R. Unique location of the phycobiliprotein light-harvesting pigment in the Cryptophyceae. Journal of Phycology. 25 (3), 412-419 (1989).
  3. Kirst, H., Formighieri, C., Melis, A. Maximizing photosynthetic efficiency and culture productivity in cyanobacteria upon minimizing the phycobilisome light-harvesting antenna size. Biochimica et Biophysica Acta - Bioenergetics. 1837 (10), 1653-1664 (2014).
  4. Page, L. E., Liberton, M., Pakrasi, H. B. Reduction of photoautotrophic productivity in the cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC 6803 by phycobilisome antenna truncation. Applied and Environmental Microbiology. 78 (17), 6349-6351 (2012).
  5. Sonani, R. R. Recent advances in production, purification and applications of phycobiliproteins. World Journal of Biological Chemistry. 7 (1), 100(2016).
  6. Bryant, D. A. The Molecular Biology of Cyanobacteria. , Springer Netherlands. Dordrecht, The Netherlands. (1994).
  7. Kaneko, T., et al. Sequence analysis of the genome of the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC6803. I. Sequence features in the 1 Mb region from map positions 64% to 92% of the genome. DNA Research. 2, 191-198 (1995).
  8. Kaneko, T., et al. Sequence analysis of the genome of the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC6803. II. Sequence determination of the entire genome and assignment of potential protein-coding regions. DNA Research. 3, 109-136 (1996).
  9. Grigorieva, G., Shestakov, S. Transformation in the cyanobacterium Synechocystis sp 6803. FEMS Microbiology Letters. 13 (4), 367-370 (1982).
  10. Zavřel, T., Sinetova, M. A., Búzová, D., Literáková, P., Červený, J. Characterization of a model cyanobacterium Synechocystis sp: PCC 6803 autotrophic growth in a flat-panel photobioreactor. Engineering in Life Sciences. 15 (1), (2015).
  11. Zavřel, T., Očenášová, P., Červený, J. Phenotypic characterization of Synechocystis sp. PCC 6803 substrains reveals differences in sensitivity to abiotic stress. PLoS One. 12 (12), e0189130(2017).
  12. Bennett, A., Bogorad, L. Complementary chromatic adaption in a filamentous blue-green alga. The Journal of Cell Biology. 58, 419-435 (1973).
  13. Lüder, U. H., Knoetzel, J., Wiencke, C. Acclimation of photosynthesis and pigments to seasonally changing light conditions in the endemic antarctic red macroalga Palmaria decipiens. Polar Biology. 24 (8), 598-603 (2001).
  14. Evans, L. V. The effects of spectral composition and irradiance level on pigment levels in seaweeds. Experimental Phycology: A Laboratory Manual. Lobban, C. S., Chapman, D. J., Kremer, B. P. , Cambridge University Press. Cambridge, New York, New Rochelle, Melbourne, Sydney. 123-133 (1988).
  15. Sampath-Wiley, P., Neefus, C. D. An improved method for estimating R-phycoerythrin and R-phycocyanin contents from crude aqueous extracts of Porphyra (Bangiales, Rhodophyta). Journal of Applied Phycology. 19 (2), 123-129 (2007).
  16. Chung, Y. H., Park, Y. M., Moon, Y. J., Lee, E. M., Choi, J. S. Photokinesis of Cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803. Journal of Photoscience. 11 (3), 89-94 (2004).
  17. Sun, L., et al. Phycobilisomes from Cyanobacteria. Handbook on Cyanobacteria: Biochemistry, Biotechnology and Applications. Gault, P. M., Marler, H. J. , Nova Science Publishers, Inc. New York, NY. 105-160 (2009).
  18. Six, C., et al. Diversity and evolution of phycobilisomes in marine Synechococcus spp.: A comparative genomics study. Genome Biology. 8 (12), (2007).
  19. Sinetova, M. A., Červený, J., Zavřel, T., Nedbal, L. On the dynamics and constraints of batch culture growth of the cyanobacterium Cyanothece sp. ATCC 51142. Journal of Biotechnology. 162 (1), (2012).
  20. Stanier, R. Y., Kunisawa, R., Mandel, M., Cohen-Bazire, G. Purification and properties of unicellular blue-green algae (order Chroococcales). Bacteriological Reviews. 35 (2), 171-205 (1971).
  21. Zavřel, T., Sinetova, M. A., Búzová, D., Literáková, P., Červený, J. Characterization of a model cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 autotrophic growth in a flat-panel photobioreactor. Engineering in Life Sciences. 15 (1), 122-132 (2015).
  22. Hemlata, G., Fareha, B. Studies on Anabaena sp. nccu-9 with special reference to phycocyanin. Journal of Algal Biomass Utilization. 2 (1), 30-51 (2011).
  23. Rito-Palomares, M., Nuez, L., Amador, D. Practical application of aqueous two-phase systems for the development of a prototype process for c-phycocyanin recovery from Spirulina maxima. Journal of Chemical Technology & Biotechnology. 76 (12), 1273-1280 (2001).
  24. Zhang, H., et al. Selenium-Containing Allophycocyanin Purified from Selenium-Enriched Spirulina platensis Attenuates AAPH-Induced Oxidative Stress in Human Erythrocytes through Inhibition of ROS Generation. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 59 (16), 8683-8690 (2011).
  25. Nedbal, L., Trtílek, M., Cervený, J., Komárek, O., Pakrasi, H. B. A photobioreactor system for precision cultivation of photoautotrophic microorganisms and for high-content analysis of suspension dynamics. Biotechnology and Bioengineering. 100 (5), 902-910 (2008).
  26. Zavřel, T., Knoop, H., Steuer, R., Jones, P. R., Červený, J., Trtílek, M. A quantitative evaluation of ethylene production in the recombinant cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 harboring the ethylene-forming enzyme by membrane inlet mass spectrometry. Bioresource Technology. 202, 142-151 (2016).
  27. Smith, P. K., et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Analytical Biochemistry. 150 (1), 76-85 (1985).
  28. Lawrenz, E., Fedewa, E. J., Richardson, T. L. Extraction protocols for the quantification of phycobilins in aqueous phytoplankton extracts. Journal of Applied Phycology. 23 (5), 865-871 (2011).
  29. Lea-Smith, D. J., et al. Phycobilisome-Deficient Strains of Synechocystis sp. PCC 6803 Have Reduced Size and Require Carbon-Limiting Conditions to Exhibit Enhanced Productivity. Plant Physiology. 165 (2), 705-714 (2014).
  30. Seo, Y. C., et al. Stable isolation of phycocyanin from Spirulina platensis associated with high-pressure extraction process. International Journal of Molecular Sciences. 14 (1), 1778-1787 (2013).
  31. Touloupakis, E., Cicchi, B., Torzillo, G. A bioenergetic assessment of photosynthetic growth of Synechocystis sp. PCC 6803 in continuous cultures. Biotechnology for Biofuels. 8 (1), 133(2015).
  32. Touloupakis, E., Cicchi, B., Benavides, A. M. S., Torzillo, G. Effect of high pH on growth of Synechocystis sp. PCC 6803 cultures and their contamination by golden algae (Poterioochromonas sp.). Applied Microbiology and Biotechnology. 100 (3), 1333-1341 (2016).
  33. Ishii, A., Hihara, Y. An AbrB-Like Transcriptional Regulator, Sll0822, Is Essential for the Activation of Nitrogen-Regulated Genes in Synechocystis sp. PCC 6803. Plant Physiology. 148 (1), 660-670 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

PBS15000 G615 652 720

Похожие статьи